表皮生长因子对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠卵母细胞体外成熟及受精的作用.方法 在体外成熟液中分别添加0、0.1、1、5、10ng/Mlegf,12h后检查成熟率,并观察EGF对体外受精的影响.结果 添加5ng/Ml和10ng/Mlegf组卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),并且5ng/Ml组的效果显著高于其他各组(P<0.05);比较培养液中添加以上浓度EGF对体外受精胚发育的影响,结果发现添加5ng/Ml EGF虽不能显著提高囊胚发育率(P>0.05),但可显著提高其通过二细胞阻滞率和囊胚孵化率(P<0.01).结论 EGF对小鼠卵母细胞体外成熟及受精有促进作用,可提高体外成熟率及囊胚孵化率,还可促进受精卵通过二细胞阻滞.     

表皮生长因子与卵母细胞、胚胎的体外发育

表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)是StanloyCohen于 196 2年从成年雄鼠颌下腺分离提纯出的一种单链多肽。EGF作为一种局部调节因子 ,广泛存在于人体的体液和组织中 ,具有多种生物学效应。近年研究表明 ,EGF在卵母细胞体外成熟、受精及早期胚胎发育等方面有重要意义。1     

人未成熟卵母细胞体外成熟的影响因素

人未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)技术已广泛应用于临床,为多囊卵巢综合征(PCOS)患者开辟了一条有效的治疗途径,成为生殖医学领域日益关注的研究热点.     

卵母细胞成熟调控及体外成熟影响因素的研究

自 1993年以来 ,有关未成熟卵母细胞体外成熟培养的研究成为生殖医学领域的又一热点。女性不孕症的主要病因之一是由患顽固性多囊卵巢综合症等因素造成的卵子成熟障碍 ,这种病因即使采用体外授精技术也无法受孕 ;在进行体外授精 胚胎移植(IVF ET)治疗时 ,药物超促排卵可使妇女在同一周期产生多个卵子 ,有成熟和未成熟的 ,其卵子的成熟度直接关系到卵子的受精效率、卵裂效率和妊娠效率。所谓理论指导实践 ,因此深入研究卵子发生发育的机理 ,了解卵母细胞成熟的调控及影响因素至关重要。1　卵母细胞成熟的机制目前 ,人们对哺乳动物卵母细胞…     

人类未成熟卵母细胞体外成熟技术的研究进展

随着辅助生殖技术的发展,人类未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)技术成为治疗不孕症的新途径．具有广阔的应用前景,是目前生殖医学领域的研究热点。本文就近年来IVM技术的研究进展综述如下.     

三种不同来源人未成熟卵母细胞的体外成熟

目的：探讨三种不同来源的人未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）的差异。方法：共获得未成熟卵母细胞1055枚,包括卵丘复合物（OCC）613枚和裸卵（DO）442枚。其中OCC分为自然周期组、孕晚期组和IVM纽;DO分为自然周期组、孕晚期组和超促排卵纽。所有未成熟卵母细胞在IVM培养体系体外培养成熟后,卵母细胞胞浆内单精子注射（ICSI）受精序贯培养,除IVM组行第2或第3天胚胎移植外,其余均培养至囊胚阶段。分别比较OCC和DO各组未成熟卵母细胞的成熟率、成熟卵母细胞的受精率、卵裂率;自然周期组和孕晚期组的囊胚形成率。结果：OCC：自然周期组、孕晚期组及IVM组的未成熟卵母细胞体外成熟率分别为79．5％、74．3％和82．2％,孕晚期组与IVM周期组相比具有统计学差异;3组成熟卵母细胞受精率、卵裂率及自然周期组和孕晚期组的囊胚形成率相比无统计学差异,IVM组的移植周期妊娠率为20％。DO：自然周期组、孕晚期组及超促排卵组未成熟卵母细胞体外成熟率超促排卵组最高（86．0％）,明显高于自然周期组（74．5％）和孕晚期组（72．7％）,（P〈0．05和〈0．01）。3组未成熟卵母细胞的成熟率、成熟卵母细胞的受精率、卵裂率、囊胚形成率相比未见统计学差异。结论：孕晚期来源的未成熟卵母细胞在体外同样具有发育潜能;孕晚期的卵母细胞可作为一种供卵来源。     

未成熟卵母细胞体外成熟培养技术研究进展

<正>1935年,Pincus和Enzmanz[1]观察到兔的未成熟卵母细胞在体外培养条件下可以自发完成卵母细胞的成熟过程,自此在生殖领域引入了一个新的概念即卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)。自1991年Cha[2]等报道IVM技术取得第1例妊娠以来,IVM技术已应用于治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的不孕,预     

HCG刺激对未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响

目的:探讨获取未成熟卵母细胞之前使用人绒毛膜促性腺激素（Humanchorionicgonadotropin,HCG）能否改善未成熟卵母细胞在体外培养条件下成熟的时间、体外受精率、2细胞、4细胞发生率。方法:将HCG刺激后或未刺激所获得的小鼠生殖泡（Germinalreside,GV）期卵丘-卵母细胞复合物在培养液中进行体外培养,观察未成熟卵母细胞减数分裂的恢复、核成熟、受精率以及胚胎的发育。结果:体外培养后16hG-PR组生殖泡破裂（Germinalvesiclebreakdown,GVBD）发生率显著高于G-UPR组（P<0.01）。体外培养后20hG-PR组GVBD发生率明显高于G-UPR组（P<0.05）。体外培养后24hG-PR组PBI发生率显著高于G-UPR组（P<0.01）。G-PR组受精率明显高于G-UPR组（P<0.05）。结论:HCG加快了卵母细胞的体外成熟进程,同时也增加了卵母细胞的体外受精率。     

孕晚期人未成熟卵母细胞的体外成熟:一种新的卵母细胞来源

目的 探讨来源于孕晚期、自然周期及Gn刺激周期(包括超促排周期及IVM周期)的人未成熟卵母细胞体外成熟的差异及颗粒细胞对孕晚期卵母细胞体外成熟的影响.方法 共获得未成熟卵母细胞1076枚,包括OCC 633枚和DO 453枚.其中OCC分为孕晚期组、自然周期组和IVM周期组;DO分为孕晚期组、自然周期组和超促排卵周期组;孕晚期来源的未成熟卵母细胞分为OCC组和DO组.所有未成熟卵母细胞体外成熟后,ICSI受精序贯培养,除IVM周期组行胚胎移植外,其余均培养至囊胚阶段.分别比较OCC和DO各组未成熟卵母细胞的成熟率、受精率、卵裂率和孕晚期组、自然周期组和超促排卵周期组的囊胚形成率,统计IVM周期组的移植周期妊娠率;比较孕晚期OCC组与DO组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率.结果 OCC:孕晚期组、自然周期组及IVM周期组的体外成熟率分别为74.3%、76.9%和82.2%,孕晚期组与IVM周期组相比具有统计学差异;三组受精率、卵裂率相比,孕晚期组和自然周期组囊胚形成率相比均未见统计学差异,IVM周期组移植周期妊娠率为20%.DO:超促排卵周期组体外成熟率最高(86.0%),明显高于自然周期组(72.5%)和孕晚期组(72.7%),P<0.01;孕晚期组受精率、卵裂率、囊胚形成率分别为65.0%、83.3%和38.5%,与其他两组相比均亦未见统计学差异.孕晚期OCC组与DO组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率无差别.结论 孕晚期来源的未成熟卵母细胞在体外具有同样的发育潜能,孕晚期捐献的卵母细胞可作为一种供卵来源:有无颗粒细胞并不影响孕晚期卵母细胞的发育能力.

Abstract：

Objective To investigate the in vitro maturation of human oocytes (IVM)from pregnant late term,natural cycles and Gn stimulating cycles and the effect of granulose cells on IVM from pregnant late term.Methods A total of 1086 immature oocytes were obtained including 633 oocyte-cumulus complexes(OCCs)and 453 denuded oocytes(DOs).OCCs were divided into pregnant late term group,natural cycle group and IVM group,and DOs were divided into pregnant late term group,natural cycle group and controlled ovarian hyperstimulation(COH) group.All the oocytes were matured in IVM culture system and fertilized by ICSI.The embyos were cultured to blastcyst stage except that those in IVM group were transferred into the utems.The main outcomes were assessed including maturation rate(MR), fertilization rate(FR),cleaverage rate(CR),and blastulation rate(BR)(natural cycle group,pregnant late term group and COH group)and pregnancy rate per transfer cycle(PR) of IVM group.ReslIIts MR of OCCs in pregnant late term group,natural cycle group and COH group was 74.3%,76.9%and 82.2%,respectively,showing statistical difference between pregnant late term cycle group and IVM group.No statistical difference was observed in FR,CR or BR between the three groups.For IVM cycle group,clinical pregnancy rate of 20%per aspiration was achieved.For DOs,MR of COH group(86.0%)was significantly higher than that of the natural cycle group(72.5%)and pregnant late term group(72.7%) (P<0.01).FR,CR and BR showed no statistical difference among the 3 groups.No difference was found in MR,FR,CR and BR between OCCs group and DOs group from pregnant late term.Conclusions The oocytes from pregnant late term have the same development potential as those from natural cycles or Gn stimulating cycles in vitro,and provide a new source of donor oocytes.Granulose ceils do not affect the IVM from pregnant late term.     

排卵前成熟卵泡液对卵母细胞体外成熟的影响

目的 :探讨成熟卵泡液、促性腺激素对人类生殖泡期 (germinalvesicle,GV)不成熟卵母细胞体外成熟 (invitromaturation ,IVM)的影响。方法 :在基本培养液中加入 5 0 %成熟卵泡液 (folliclefluids ,FF) (Ⅰ组 )、或促性腺激素 (gonadotrophin ,Gn) (Ⅱ组 )或单用基本培养液即对照组 (Ⅲ组 )用于GV期卵母细胞的体外培养 ,观察成熟率及进一步发育能力。结果 :三组之间GVBD(生殖泡期破裂 )率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,MⅡ期率和受精率 ,Ⅰ、Ⅱ组明显高于Ⅲ组 (P <0 .0 1)、Ⅰ组与Ⅱ组之间无差异 (P >0 .0 5 ) ;Ⅰ组卵裂至 8细胞的比例为 6 2 .5 % ,明显高于Ⅱ组的33.3% (P <0 .0 1)。结论 :GV期卵母细胞尽管在基本培养液中可完成核成熟 ,但胞质不成熟 ,加入 5 0 %FF或Gn均能促卵母细胞的成熟 ,两者相比 5 0 %FF效果更好。     

卵母细胞体外成熟技术在体外受精-胚胎移植中的补救应用

目的对未成熟卵的体外成熟(IVM)技术在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的补救性应用进行总结,探讨影响其治疗结果的因素。方法在IVF-ET治疗中,对卵巢反应不良、卵泡发育迟缓和卵泡过多生长有发生过度刺激可能需要取消治疗周期的患者,在B超引导下经阴道卵泡穿刺术取卵后,对未成熟卵进行体外培养成熟后进行IVF或卵胞浆内单精子显微注射,良好胚胎进行移植。结果取卵周期33个,共获未成熟卵214个,进行体外培养后126个成熟;32个周期进行常规胚胎移植,8例临床妊娠,移植周期临床妊娠率为25.00%(8/32);7例分娩8个健康婴儿。结论未成熟卵IVM技术是IVF-ET治疗不孕不育中有效的补充方法,可以补救未成熟的卵,减少患者取消IVF-ET治疗周期的发生。     

促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养中的应用

目的 评价卵泡刺激素和人绒毛膜促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养过程中的应用价值。方法 收集控制性超促排卵周期行单精子显微注射(ICSI)过程中得到的未成熟卵母细胞(MⅠ期和GV期), 随机分为加促性腺激素培养组和不加促性腺激素培养组, 培养24~28 h后成熟卵母细胞进行ICSI授精, 并观察胚胎发育情况, 记录成熟率、受精率、卵裂率和优胚率。结果 对于MⅠ期卵母细胞, 是否使用促性腺激素不影响其24 h成熟率、受精率、分裂率和优胚率(P>0.05)。对于GV期卵母细胞, 培养液中加入促性腺激素能提高优质胚胎率(31.3% vs 4.2%, P<0.05), 但两组的成熟率、受精率和卵裂率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 控制性超促排卵中获得的未成熟卵母细胞进一步体外培养, 无论是否添加促性腺激素都可自然成熟, 在GV期卵母细胞的体外培养过程加入促性腺激素可获得更高的优胚率。     

人类卵母细胞及体外受精发育阻滞胚胎中的组蛋白乙酰化水平的检测

目的 探讨人类不同成熟阶段的卵母细胞及体外受精发育阻滞胚胎中的组蛋白乙酰化水平的变化规律.方法 收集接受卵胞浆内单精子注射技术(ICsI)治疗的患者废弃的卵母细胞生发泡(GV)期、第一次减数分裂中期(MⅠ期)和经体外成熟培养发育至第二次减数分裂中期(MⅡ期)的卵母细胞,采用间接免疫荧光染色方法对人类不同成熟阶段的卵母细胞及体外受精阻滞胚胎中的组蛋白的(H4K12和H3K9)乙酰化水平进行检测.结果 人类GV期卵母细胞中组蛋白H4K12和H3K9均强表达.74.1%的MⅠ期卵母细胞中H4K12和H3K9的乙酰化水平显著降低.79.2%的MⅡ期卵母细胞中组蛋白H4K12乙酰化呈微弱表达或不表达,而来源于高龄妇女的MⅡ期卵母细胞仍维持较高的H4K12乙酰化水平.在MⅡ期卵母细胞中几乎检测不到H3K9的乙酰化表达.83.3%的发育阻滞胚胎中组蛋白H4K12和H3K9的乙酰化水平较高.结论 人类卵母细胞的成熟经历了一个组蛋白乙酰化到去乙酰化的动态修饰过程,体外受精后又重新建立新的组蛋白乙酰化修饰.     

Effect of vitrification at the germinal vesicle stage on the global methylation status in mouse oocytes subsequently matured in vitro

Background It is still unclear whether the vitrification procedure itself is associated with the incidence of abnormal DNA methylation during oocytes vitrification.The purpose of this study was to evaluate the epigenetic profile of mouse oocytes,which went through vitrification either at a mature stage or at an immature stage following in vitro maturation （IVM） by analyzing the global DNA methylation.Methods Metaphase Ⅱ （M Ⅱ） stage and germinal vesicle （GV） stage oocytes were collected from adult female mice and were vitrified respectively.The M Ⅱ oocytes were assessed for cryo-survival and global DNA methylation.The GV oocytes were assessed for cryo-survival and only the surviving GV oocytes were cultured in vitro for subsequent assessment of global DNA methylation in mature oocytes.In vivo matured fresh M Ⅱ oocytes without undergoing vitrification were used as control.The level of global DNA methylation in the M Ⅱ oocytes was then examined by immunofluorescence using an anti-5-methylcytosine （anti-5-MeC） monoclonal antibody and fluorescein isothiocyanate （FITC）-conjugated goat anti-mouse IgG under a laser scanning confocal microscope.Results In terms of the effect of vitrification on global DNA methylation status in matured oocytes,in the M Ⅱ-v group,all the examined oocytes （90/90） were found with hypermethylation,including 63.3％ （57/90） of them displaying DNA methylation of a very high level,25.6％ （23/90） with a high level,and 11.1％ （10/90） with an intermediate level,whereas in the GV-v group,all the matured oocytes （129/129） were also examined with hypermethylation,including 67.4％ （87/129） of them displaying DNA methylation of a very high level,23.3％ （30/129） with a high level,and 9.3％ （12/129） with an intermediate level.Statistically,it was similar between both groups,which were similar to the control：68.6％ （83/121） of fresh M Ⅱ oocytes displayed DNA methylation of a very high level,21.5％ （26/121） with a high level,a     

The role of brain-derived neurotrophic factor in mouse oocyte maturation <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

Brain-derived neurotrophic factor (BDNF) can promote developmental competence in mammalian oocytes during in vitro maturation (IVM),but the role of BDNF in oocyte maturation at cellular level is not still clear.In this study,mouse cumulus-enclosed oocytes subjected to IVM were fertilized and cultured to blastocyst stage.Meiotic spindle configuration and cortical granules distribution during oocyte maturation in vitro were assessed by using immunofluorescence and laser confocal microscopy.The results showed that BDNF contributed to the complete preimplantation development of mouse oocytes compared to the control oocytes (13.78% vs.5.92%;P<0.05).Further,BDNF did not accelerate nuclear maturation of IVM oocytes.For the BDNF-treated oocytes at meiosis Ⅰ,Meiotic spindle areas were significantly smaller and the number of cytoplasmic microtubule organizing centers was greater than that in the control,and the percentages of oocytes showed spindles positioned near the oolemma and a well-formed cortical granule-free domain were significantly higher than that of the control.These morphological characteristics of the BDNF-treated oocytes were much closer to the oocytes matured in vivo than those of the control oocytes.In conclusion,BDNF can promote the developmental competence of mouse IVM oocytes,by improving the meiotic spindle configuration and location and cortical granules distribution at meiosis Ⅰ.     

Beagle犬卵母细胞体外成熟研究进展

国内实验Beagle犬种质资源保存利用及制备基因修饰人类疾病动物模型,要求有充足的Beagle犬胚胎。目前诱导排卵技术在犬上效果不明显,体内获取犬成熟卵母细胞有困难。同时,尽管科研人员对犬卵母细胞体外成熟培养进行了多方面的尝试,但尚未获得突破,成熟率低,严重制约了其在种质资源保存、基因修饰模型制备及生物医学研究中的应用。本文梳理了不同犬龄及生殖周期、卵母细胞形态与体积及脂滴在Beagle犬卵母细胞体外成熟中的影响,以为其体外成熟寻找新的突破口。     

未成熟卵母细胞体外培养治疗不孕症的临床研究

目的:评价未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)治疗不孕症的临床价值.方法:40例不孕患者接受54个IVM周期治疗,包括26例难治性多囊卵巢综合征(PCOS)和14例月经周期正常但经其他辅助生育技术失败的患者.测定卵泡早期的性激素、抑制素-A(INH-A)、抑制素-B(INH-B).未经任何药物刺激,于月经周期的9～12 d在超声引导下经阴道对两侧卵巢内的小卵泡进行穿刺获卵.体外培养24～48 h,进行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI),18 h后观察受精情况,继续培养24～48 h,直至胚胎移植,移植前行激光辅助孵化.结果:7个周期取消,取消率为13%(7/54).1例生化妊娠,19例临床妊娠,每取卵周期的临床妊娠率为35.2%(19/54),每移植周期的临床妊娠率为40.4%(19/47).47个移植周期共获得未成熟卵母细胞857个,平均每周期18.2个,体外培养48 h后总成熟率为73.7%(632/857),正常受精率为75.3%(476/632),卵裂率为91.2%.妊娠组的获卵数显著多于非妊娠组[(22.4±16.2)个vs(15.2±7.1)个,P＜0.05],取卵日和胚胎移植日的子宫内膜厚度显著大于非妊娠组[(8.0±1.5)cm vs(6.8±0.9)cm;(9.5±1.6)cm vs(8.3±1.3)cm,P＜0.05],但两组患者的年龄、不孕年限、体重指数、基础性激素、INH-A、INH-B各参数相比均无显著性差异.结论:未经药物刺激的IVM技术是治疗不孕症的一种有效方法,获卵数和子宫内膜厚度与成功率有关.     

表皮生长因子对小鼠早期胚胎体外发育影响的研究

目的：探讨表皮生长因子对小鼠植入前胚胎体外发育的影响。方法：用添加不同浓度EGF(epidermal growth factor)的CZB培养液对小鼠早胚进行体外培养,观察囊胚发育率和胚胎细胞数的变化。结果：HCG(human chorionic gonadotropin)注射后138h,0．1ng／ml EGF添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率显著高于其他各组。100．0ng／ml EGF添加组扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其余各组,且囊胚细胞死亡较多。结论：EGF通过刺激囊胚期细胞分化而促进胚胎体外发育。但高浓度EGF抑制胚胎体外发育并使早期胚胎受损。     

卵母细胞体外成熟在卵巢低反应患者中的临床应用

目的 探讨体外受精(in vitro fertilization,IVF)周期控制性卵巢刺激(controlled oocyte stimulation,COS)过程中的卵巢低反应(poor ovarian response,POR)患者,及时补救性应用未成熟卵母细胞体外培养技术(in vitro maturation,IVM)的有效性及安全性.方法 对16例卵巢低反应患者补救性应用IVM技术.结果 共取卵子225枚,其中未成熟卵子196枚,体外培养24 h后成熟100枚,受精69枚,卵裂65枚,移植胚胎27枚.同时获取成熟卵子36枚,受精29枚,卵裂26枚,移植胚胎8枚.移植周期14例,放弃周期2例;妊娠7例,其中宫外孕1例,流产1例,分娩5例,出生胎儿7名(2男、5女),均健康.结论 对于POR患者补救性应用IVM技术可以获得较好的临床结局.