蛋白激酶C在人绒毛膜癌JAR细胞中作用的研究

研究蛋白激酶C对人绒毛膜癌JAR细胞分泌人绒毛膜促性腺激素 (hCG)的影响 ,探讨PKC在调控JAR细胞hCG分泌中的作用。不同浓度的PKC激动剂 phorbol 12 -myristrate 13 -acetate(PMA )急性和慢性刺激、PKC抑制剂chelerythrinechlorine(CHEL)分别作用JAR细胞 ,测定hCG分泌量变化和细胞内磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶 (mitogen -activatedproteinkinase ,MAPK)的改变。结果显示不同浓度PMA急性刺激时 ,抑制JAR细胞hCG分泌 ,在 2 0 0nmol/L时 ,其抑制作用最强 ;PMA慢性刺激时 ,JAR细胞hCG分泌量增加 ,在 2 0 0nmol/L时 ,其作用最强。CHEL作用JAR细胞时 ,hCG分泌量升高 ,在 60 0nmol/L时 ,其作用最强。对照组及各实验组都有活性的MAPK的表达 ,与对照组相比 ,PMA慢性刺激组、CHEL组MAPK磷酸化水平升高 ;PMA急性刺激组MAPK磷酸化水平降低。PKC参与调节JAR细胞hCG的分泌 ,活性升高时 ,下调MAPK磷酸化 ,使JAR细胞hCG分泌减少 ,而活性降低时 ,增强MAPK磷酸化 ,JAR细胞hCG分泌量增加     

马鞭草醇C部位抗人绒毛膜癌JAR细胞作用机制的研究

应用MTT法及3H -TdR同位素标记细胞增殖抑制实验 ,在马鞭草醇提液中筛出其中一个活性部位 ,命名为C部位。一定浓度的马鞭草C部位能明显抑制JAR细胞的增殖 ,加药后 48h细胞增殖仅为相应对照组的 3 0 0 5 % ;EGFR的表达为对照组的2 7 0 4% ;见明显的凋亡小体 ;琼脂糖凝胶电泳可见典型的“阶梯状”条带 ,流式细胞术出现凋亡峰。马鞭草C部位已确定对绒癌细胞具有明显的促凋亡作用 ,故而该药有望能成为治疗绒毛膜癌或逆转多药耐药的有效药物     

马鞭草C部位对人绒毛膜癌JAR细胞体外抑制作用的研究

目的 探讨马鞭草提取液C部位对人绒毛膜癌JAR细胞体外抑制作用。方法 MTT法测定不同浓度C部位在不同时段对JAR细胞的增殖抑制率；HCG单克隆酶免定量法检测马鞭草C部位对JAR细胞分泌HCG的影响；透射电镜观察细胞超微结构变化。结果 JAR细胞经马鞭草C部位作用后，细胞增殖抑制率随着时间的延长和浓度的增加逐渐增大，72h的40g／L剂量组抑制最明显，抑制率为65％；HCG分泌受到明显抑制，呈剂量和作用时间依赖性；马鞭草C部位可引起细胞数目减少并萎缩；电镜下见到明显的凋亡小体。结论 马鞭草提取液C部位对人绒毛膜癌JAR细胞增殖及分泌HCG有明显抑制作用，并可诱导JAR细胞凋亡。     

马鞭草提取液C部位对人绒毛膜癌JAR细胞增殖的影响

目的：探讨马鞭草(Verbena officinalis)提取液C部位对人绒毛膜癌JAR细胞增殖的影响。方法：通过相差显微镜观察活细胞贴壁程度、细胞形态改变；MTT法测定不同浓度C部位在不同时段对JAR细胞的增殖抑制率，结果用方差分析进行统计学检验：流式细胞仪检测细胞阻滞周期。结果：马鞭草C部位可引起细胞数目减少并萎缩；细胞增殖抑制率随着时间的延长和浓度的增加逐渐增大．72h的40mg／ml剂量组抑制最明显，抑制率为65％；流式细胞仪检测结果显示阻滞周期在GJM期之间。结论：马鞭草提取液C部位对人绒毛膜癌JAR细胞增殖有明显抑制作用，其作用机制有待进一步探索。     

马鞭草C部位对人绒癌JAR细胞hCG分泌的影响和作用机制

目的:研究马鞭草C部位对绒毛膜癌JAR细胞绒毛膜促性腺激素(hCG)分泌的影响及其作用机制.方法:不同浓度马鞭草C部位(马鞭草C部位终浓度:10,2040 mg/ml)作用于体外培养的JAR细胞,分别于第12,24,48,72 h取上清液,采用β-hCG单克隆抗体酶免定量法检测hCG含量;琼脂糖凝胶电泳观察用药后细胞DNA断裂情况;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率;透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果:马鞭草C部位对绒毛膜癌JAR细胞分泌hCG产生明显的抑制作用,呈时间和剂量相关性.在该药物作用下,细胞DNA琼脂糖凝胶电泳出现\     

hCG-β反义寡脱氧核苷酸对人绒癌JAR细胞hCG分泌作用的研究

目的 :探讨人绒毛膜促性腺激素 -β反义寡脱氧核苷酸 (h CG-β AS-ODN)抑制 JAR绒癌细胞株 h CG的分泌。方法 :设计 h CG-β m RNA的 AS-ODN,作用于体外培养的 JAR绒癌细胞株 ,细胞浓度为 1× 1 0 5/个。ODN的浓度分别为 5 μmol/ L、1 0 μmol/ L、2 0 μmol/ L 与 JAR细胞共培养在96孔培养板中 ,2 4h、48h、72 h和 96 h,取上清测 h CG-β含量。结果 :1 0μmol/ L浓度的 h CG-βAS-ODN对 JAR细胞在体外作用 2 4h,h CG-β分泌呈下降趋势 ,48h下降达 5 7% ,此后 ,抑制作用略有减弱 ,而 2 0 μmol/ L的正义和随机的 ODN,分泌也受抑制。结论 :5～ 1 0 μmol/ L 的 AS-ODN明显抑制体外培养的 h CG分泌细胞 h CG蛋白的分泌 ,且该 AS-ODN有希望作为 h CG分泌抑制物应用。     

马鞭草醇提液对绒毛膜癌JAR细胞增殖的影响

目的　探讨马鞭草醇提液 (ae Vo)对绒毛膜癌 JAR细胞株的影响。方法　 JAR细胞株与人肝癌 SMMC- 772 1细胞株及人胚肺 2倍体成纤维细胞株 (2 BS)体外培养比较 ,应用溴化甲噻唑基四唑 (MTT)法、荧光法测得细胞相对生长曲线及增殖抑制率。结果　 ae Vo对 JAR细胞有明显抑制作用 ,于加药后 4 8h,增殖抑制率为 (71.9± 4 .0 ) %及 (69.6± 2 .0 ) % ,MTT法及荧光法所测结果无明显差异 (P>0 .0 5 )。 ae Vo对 SMMC- 772 1细胞及 2 BS细胞无明显影响。结论　 ae Vo具有抗绒癌作用 ,且作用具有特异性 ,有关机制需进一步研究     

马鞍草醇提液对绒毛膜癌JAR细胞增殖的影响

目的 探讨马鞍草醇提液（ａｅＶｏ）对绒毛膜癌ＪＡＲ细胞株的影响。方法 ＪＡＲ细胞株与人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞株及人胚胎２倍体成纤维细胞株（２ＢＳ）体外培养比较,应用溴化甲噻唑基四唑（ＭＴＴ）法、荧光法测得细胞相对生长曲线及增殖抑制率。结果 ａｅＶｏ对ＪＡＲ细胞有抑制作用,于加药后４８ｈ,增殖抑制率为（７１．９±４．０）％及（６９．６±２．）％,ＭＴＴ法及荧光法所测结果无明显差异（Ｐ〉０．０５）     

deprenyl促进丝裂原激活的蛋白激酶和蛋白激酶C激活的实验研究

deprenyl作为一种神经保护剂而被用来延缓阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的病情进展。现在认为，淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein，APP）代谢异常是AD发病的中心环节，丝裂原激活的蛋白激酶（mitotgen activated protein kinase，MAPK）和蛋白激酶C（protein kinse C，PKC）是调节APP代谢的重要信号转导分子。前期研究表明，deprenyl作用于PC12和SK—N—SH细胞后，能使细胞外可溶性的APPα（souble APPα，sAPPα）分泌增加，这种作用能被MAPK的抑制剂U0126和PKC的抑制剂星形菌孢素（staurosporine）所抑制。本研究利用PC12细胞观察deprenyl对MAPK和PKC的作用，研究其是否参与了对APP代谢的影响。     

丝裂原活化蛋白激酶在大黄素收缩大鼠胃平滑肌细胞中的作用

[目的]研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在大黄素对大鼠胃平滑肌细胞收缩信号转导途径中的作用机制。[方法]酶解法分离的大鼠胃平滑肌细胞经过培养后分为3个实验组:空白对照组、大黄素组、蛋白激酶C(PKC)抑制剂组(Calphostin C 大黄素)。通过Western blotring方法分析p44／42 MAPK在不同实验组中的表达量变化。[结果]磷酸化p44／42 MAPK的表达量在对照组最少,大黄素组最多,抑制剂组表达量较大黄素组少;三组表达量的差别具有显著性(P值均<0．01)。[结论]磷酸化p44／42 MAPK的表达量变化说明,在相同实验条件下,PKC受抑制后,磷酸化p44／42 MAPK的表达明显低于未受抑制的试验组。本实验结果提示, PKC到p44／42 MAPK信号转导通路参与了大黄素对大鼠胃平滑肌细胞收缩活动的调节。     

马鞭草醇提液对绒毛膜癌JAR细胞增殖及表皮生长因子受体？…

用溶剂蒸馏法制备了马鞭草醇提液(EV),分别作用于体外培养的绒毛膜癌JAR细胞、人肝癌SMMC-7721细胞及人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)。MTT法及荧光法检测结果表明,EV对JAR细胞增殖有明显抑制作用,两种方法测得抑制率分别为71．9％±4．0％和69．6％±2．0％;同时还测得EV对JAR细胞质中表皮生长因子受体(EGFR)的表达也有明显抑制作用,含25mg／ml和50mg／mlEV的培养液对其抑制率分别为36．7％和80．6％。而EV对SMMC-7721细胞及2BS细胞则无明显影响。EV对体外培养的绒毛膜癌JAR细胞有明显抑制作用,且具有特异性,这一作用可能与抑制EGFR的表达有关。     

12-脂氧化酶影响胃癌细胞株AGS蛋白激酶C活性

目的 研究胃癌细胞中蛋白激酶C(PKC)活化与12-脂氧化酶(12-LOX)的关系.方法 胃癌细胞株AGS于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中常规培养,AGS细胞培养24 h至对数生长期改用无血清RPMI 1640培养基培养24 h加入干预药物.PKC活性采用非同位素标记法测定.分别采用12-LOX催化合成产物12-羟基廿碳四烯酸(12-HETE)及12-LOX特异性抑制剂--黄芩素干预AGS细胞,测定其PKC活性变化.结果 AGS细胞经12-HETE干预后PKC活性明显增高,而经黄芩素干预后PKC活性明显下降,且呈时间、剂量依赖性.结论 12-LOX对PKC活性具有调节作用;PKC参与了12-LOX影响胃癌细胞增殖凋亡的信号传导.     

马鞭草C部位使人绒癌JAR细胞阻滞于G2/M期并诱导细胞凋亡

目的：观察马鞭草C部位(Verbena officinalis C)对人绒癌JAR细胞周期分布和凋亡的影响．探讨其诱导凋亡机制。方法：采用MTT比色法测定马鞭草C部位对JAR细胞增殖的影响;流式细胞仪检测其对JAR细胞周期分布和细胞凋广的影响：RT—PCR检测药物作用前后Bax和Bcl—2 mRNA表达变化。结果：马鞭草C部位抑制绒癌JAR细胞增殖,并呈明显时间和剂量效应关系。流式细胞仪结果显示,与对照组比较．40g/L马鞭草C部位处理48h后,使JAR细胞G2／M期增加154.3％,S期比例降低41．6％;JAR细胞凋亡率增加6．74倍。不同剂量马鞭草C部位处理JAR细胞48h后．BaX表达水平增加,Bcl—2表达水平下降．并呈剂量依赖性。结论：马鞭草C部位阻滞绒癌JAR细胞于G2／M期．通过改变Bax和Bcl—2表达,诱导JAR细胞凋亡。     

TNF-α或mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI-1的影响及其机制

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)或弱氧化修饰低密度脂蛋白(mmLDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)PAI-1活性和mRNA表达的影响及其分子机制。方法用发色底物法测定HUVECs培养液中PAI-1的活性。用Northern印迹分析法检测PAI-1基因mRNA的表达情况,并分别用蛋白激酶C穴PKC雪或促分裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK)抑制剂干预上述诱导实验。结果TNF-α或mmLDL作用HUVEC后,PAI-1活性和mRNA基因表达均明显增加。促分裂原活化蛋白激酶-激酶穴MAPKK雪的抑制剂PD98059(60μmol/L)能明显阻断TNF-α穴100U/ml雪或mmLDL穴50μg/ml雪对PAI-1活性和mRNA的诱导,但PKC的抑制剂Staurosporine(10nmol/L)和H7(15μmol/L)无显著阻断作用。结论(1)TNF-α或mmLDL能增强血管内皮细胞PAI-1活性与mRNA表达;穴2雪PAI-1活性提高与其mRNA表达增加有关;(3)MAPK途径可能在TNF-α或mmLDL诱导血管内皮细胞PAI-1表达中起重要作用。     

F10基因沉默及过表达对绒癌细胞系JAR细胞周期的影响

目的探讨F10基因功能与部分细胞周期蛋白表达的关系。方法选择已建立并筛选的F10基因沉默、稳定过表达绒癌细 胞系JAR,以未处理JAR细胞为对照组,采用流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting及免疫荧光细胞化学技术检测细胞周 期蛋白（cyclin）和细胞周期蛋白依赖激酶（CDKs）的表达水平差异。结果流式细胞仪检测细胞周期显示,F10过表达组的JAR 细胞细胞周期较沉默组及未处理组缩短。Western blotting检测结果显示,在F10沉默组、未处理组及F10过表达组的JAR细胞 中cyclinA2、cyclinB1、cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK6、CDK7表达递增,过表达组及沉默组的蛋白表达水平与未处理组相比较 差异有统计学意义（P<0.05）,CDK4除外。免疫荧光细胞技术实验结果与Western-Blot检测结果基本一致。结论F10基因通过 上调细胞周期蛋白cyclinA2、cyclinB1、cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK6、CDK7的表达,加快细胞周期进程,促进细胞增殖,从而 参与调节绒癌细胞的侵袭与转移。     

分化诱导剂对人肝癌细胞亚细胞组分酪氨酸蛋白激酶的早期影响

研究双丁酰环磷酸腺苷（ｄｂｃＡＭＰ）和全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）两种分化诱导剂对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１亚细胞组分中酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）的早期（２４ｈ内）效应。方法用超离心等法制备胞液（ｃ）,胞核（ｎ）和膜性（ｍ）ＴＰＫ酶液,以聚谷氨酸∶酪氨酸（ｐｏ１ｙＥ．Ｙ）４∶ｌ及γ－３２Ｐ－ＡＴＰ为底物测定ＴＰＫ活力。结果对照和ｄｂｃＡＭＰ处理１ｈ使ｃＴＰＫ和ｎＴＰＫ升高,以后对照降至原有水平,而ｄｂｃＡＭＰ处理细胞的ｎＴＰＫ在１２～２４ｈ略低于对照细胞,但ｍＴＰＫ在１ｈ反而降低,在３ｈ（对照）或６ｈ（ｄｂｃＡＭＰ）升至高峰,１２ｈ后ｄｂｃＡＭＰ使ｍＴＰＫ活力低于对照。ＡＴＲＡ作用于ＳＭＭＣ－７７２１细胞后,１ｈ可使三类ＴＰＫ活力均升至高峰,１２ｈ后ｃＴＰＫ和ｎＴＰＫ活力低于对照细胞,但ｍＴＰＫ活力在２４ｈ才低于对照。结论ｄｂｃＡＭＰ和ＡＴＲＡ对不同亚细胞组分ＴＰＫ有不同的时相效应。一般说来,早期（１～６ｈ）有升高作用,而在１２～２４ｈ则有一下降作用,呈现双相效应     

双歧杆菌DNA对巨噬细胞MAPK和PKG以及NF-kB的影响

目的 以信号分子MAPK家系、PKC家族和NF-kB为线索探索青春型双歧杆菌的DNA激活巨噬细胞的途径.方法 以激光共聚焦显微镜定量测定小鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2、JNK、p38、PKCα、PKCβⅠ、PKCβⅡ、PKCγ、PKC ε和PKCζ的含量.以细胞免疫化学方法检测巨噬细胞NF-kB的阳性细胞密度.结果 双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2、PKCα和PKCβH的平均荧光强度明显高于对照组(P＜0.01),而JNK、p38、PKCβⅠ、PKCγ、PKC ε和PKCζ的平均荧光强度在两组间则差异无显著性(P＞0.05).双歧杆菌DNA注射组巨噬细胞NF-kB的阳性细胞密度显著高于对照组(P＜0.01).结论 青春型双歧杆菌的DNA可通过活化ERK1/2、PKC α、PKC βⅡ和NF-kB来激活巨噬细胞.     

锦鸡丙素对两株人肺癌细胞株蛋白激酶和同工酶活性的影响

目的　研究锦鸡丙素对两种人肺癌细胞株中不同组分的蛋白激酶C(PKC)活性及其同工酶分布的影响 ,探讨两种细胞株对锦鸡丙素的细胞生长抑制作用表现出敏感性差异的原因。方法　梯度离心法、32 P掺入法及蛋白印迹法。结果　①A5 4 9及HCI H4 46细胞所有组分中的PKC活性均可被锦鸡丙素所抑制 ,两种细胞胞质及颗粒组分中PKC活性完全受抑所需时间相同 ,A5 4 9细胞全细胞组分及核组分所需时间均长于NCI H4 46细胞 ;②A5 4 9细胞胞质组分中PKC的活性不可逆转 ,而HCI H4 46细胞为核组分 ;③ 5 4 9细胞中主要表达PKC α、ε和ζ ,胞质中三者都存在 ,颗粒组分中只检测到α且锦鸡丙素处理后α消失 ,而胞质及全细胞组分中的α含量增加 ;NCI H4 46细胞胞质中主要存在PKC ζ和ε,颗粒组分中仅检测到PKC ζ且锦鸡丙素处理后胞质中 ζ增加而颗粒组分中则减少。结论　锦鸡丙素体内外均可抑制PKC的活性并可降低PKC α在颗粒组分中的含量使其膜转位受阻 ,但这种抑制作用与肿瘤细胞生长的抑制之间并没有直接的联系 ;PKC α可能是A5 4 9细胞信号传导系统中最主要的PKC同工酶形式 ,锦鸡丙素抑制其活性并阻碍其膜转位将可能影响A5 4 9肺癌细胞的增殖并与A5 4 9细胞对锦鸡丙素敏感性较高有着密切的关系。