分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞系的建立

目的:建立稳定的基因工程细胞系.方法:将含有人肿瘤坏死因子α(hTNFα)全长cDNA插入表达载体pSNAV2.0,产生重组质粒pSNAV2.0-TNFα,利用阳离子脂质体介导将其转染到人HEK-293细胞中,G418筛选阳性克隆hTNF/293,采用Western blot检测转染细胞上清中hTNF蛋白的表达.结果:通过Sal I和EcoR I双酶切、PCR及测序鉴定证明:在质粒pSNAV2.0中插入片段正确.采用RT-PCR和Western blot法检测表明HEK-293细胞培养上清中有hTNFct蛋白表达,分子量为17KDa.结论:成功构建重组质粒pSNAV2.0-TNFα,真核表达载体构建正确,转染HEK-293细胞后可有效分泌hTNFα蛋白,并能分泌到细胞外.     

分泌肿瘤坏死因子的基因工程细胞对HepG2细胞的抑制作用

目的自行建立分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞,将其与肝癌细胞共培养,观察体外培养中分泌肿瘤坏死因子hTNF/293基因细胞表达的情况及对人肝癌细胞的抑制作用。方法(1)建立可稳定分泌人肿瘤坏死因子α/293细胞;采用RT-PCR、Western blot、ELISA和流式细胞仪等技术检测人肿瘤坏死因子表达和分泌;(2)观察体外培养中分泌肿瘤坏死因子hTNF/293基因细胞对人肝癌细胞的抑制作用,于不同的时间点,用MTT法检测490 nm下的吸光度值。结果RT-PCR、Western blot和ELISA等技术检测表明hTNFα/293 细胞组和TNFα阳性组对共培养的HepG2细胞的增殖具有明显的抑制作用,且具有良好的量效关系。结论提示TNF-α/293基因细胞可有效分泌hTNFα蛋白,并能分泌到细胞外;体外培养的人肿瘤坏死因子基因的工程细胞,所分泌肿瘤坏死因子α对人肝癌细胞增殖有明显抑制效应,且呈现出良好的数量依赖关系。     

肿瘤坏死因子α和/或化疗药物联合应用对肝癌细胞系的协同细胞毒作用

本文采用体外细胞毒试验方法(MTT),检测了重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)和/或6种常用化疗药物包括阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)、顺铂(DDP)、卡铂(CBP)、足叶乙甙(VP-16)、异环磷酰胺(IFO).对肝癌细胞株SMMC-7721及BEL-7402的细胞毒效应.结果表明,rhTNF-α对两种肝癌细胞株的细胞毒作用有明显差异;两种肝癌细胞株对六种化疗药的敏感性不同,其中对ADM、DDP、MMC的敏感性较高.rhTNF-α与六种化疗药物联合应用的结果表明,rhTNF-α与ADM、DDP、VP-16有协同增强抗瘤效应,而rhTNF-α与MMC、CBP、IFO仅呈简单的叠加效应.体外细胞毒试验证明,rhTNF-α与某些化疗药物有协同作用,在临床肿瘤治疗中联合应用有可能提高疗效.     

三氧化二砷与肿瘤坏死因子联合对人肝癌细胞系HepG2抑制作用的研究

近年来，国内外对砷剂与肿瘤的研究发展很快。已有研究表明，三氧化二砷(As2O3)可在体外抑制肝癌细胞的增殖，且主要是通过其诱导凋亡作用实现的。但尚未有As2O3和TNF-α联合作用于肿瘤细胞的报道。为减弱砷剂毒性，并充分利用FNF-α的诱导凋亡作用。我们将二者联合应用，观察它们对肝癌细胞HepG2的影响及作用机制。     

重组人肿瘤坏死因子α衍生物治疗鼠脑胶质瘤

 目的　探讨重组人肿瘤坏死因子α衍生物 (rhTNF α)治疗鼠脑胶质瘤的有效性。方法　通过改造人肿瘤坏死因子α形成rhTNF α ,体外培养鼠脑胶质瘤细胞 ,加入不同浓度rhTNF α,MTT法测定细胞存活率 ,颅内立体定向种植C6细胞制成鼠脑胶质瘤模型 ,10天后MRI增强测量肿瘤大小 ,腹腔注射rhTNF α ,治疗后第 8天、15天、2 1天分别用MRI增强测量肿瘤大小。结果　体外实验 :加入rhTNF α 5天后 ,大部分C6细胞死亡 ,细胞存活率随rhTNF α的递增而降低。体内实验 ,治疗 8天后肿瘤即开始缩小 ,治疗 2 1天后 ,MRI未见明显肿瘤强化灶。结论　rhTNF α能有效治疗鼠脑胶质瘤。     

细胞同步化对肿瘤坏死因子诱导Hela细胞凋亡的影响

目的 研究细胞周期时相对肿瘤坏死因子（TNF）诱导Hela细胞凋亡的影响。方法 应用胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法将培养的Hela细胞同步化,采用MTT法、流式细胞术和荧光染色,分析同步化的Hela细胞和正常培养的Hela细胞对TNF（加放线菌酮增效）诱导凋亡的敏感性。结果 同步化Hela细胞较正常培养的Hela细胞对TNF诱导调亡的敏感性增强。结论 TNF诱导Hela细胞凋亡与细胞周期有关。     

新型基因工程人肿瘤坏死因子联合VP16治疗小鼠肺癌的实验研究

目的 探讨新型基因工程肿瘤坏死因子(nrhTNF)和足叶乙甙(VP16)的协同抗瘤作用,及nrhTNF的毒副作用。方法 以复制成功的Lewis肺癌(3LL)小鼠为模型。结果 显示nrhTNF或VP16瘤内注射均能使肿瘤生长及肺转移受到一定的抑制(抑瘤率分别为33.71％。30.46％,肺转移瘤数与对照组比较P<0.05),肿瘤出现一定程度坏死,而联合应用则显著抑制肿瘤生长及肺转移(抑瘤率65.77％,肺转移瘤数与对照组比较P<0.01),肿瘤出现广泛的出血坏死,同时观察到nrhTNF对实验小鼠无明显毒副作用。结论 本研究表明:nrhTNF和VP16联合应用,具有协同抗肿瘤作用。对于肺癌治疗具有进一步临床应用探讨价值。     

新型基因工程人肿瘤坏死因子联合VP16治疗小鼠肺癌的实验研究

目的探讨新型基因工程人肿瘤坏死因子（ｎｒｈＴＮＦ）联合足叶乙甙（ＶＰ(１６)）的协同抗肿瘤作用及ｎｒｈＴＮＦ的毒副作用、方法以复制成功的Ｌｅｗｉｓ肺癌（３ＬＬ）小鼠为模型局部用药,观察用药后移植瘤的坏死范围、抑瘤率、肺转移瘤数及ｎｒｈＴＮＦ的毒副作用。结果ｎｒｈＴＮＦ或ＶＰ(１６)瘤体内注射均能使肿瘤出现一定程度坏死,肿瘤生长及肺转移受到一定的抑制,抑瘤率分别为３３．７％、３０．４６％,肺转移瘤数与对照组比较Ｐ＜０．０５。而联合用药,肿瘤出现广泛的出血坏死,能显著抑制肿瘤生长及肺转移,抑瘤率为６５．７７％,大于理论抑瘤率５３．９１％,肺转移瘤数与对照组比较Ｐ＜０．０１。同时观察到ｎｒｈＴＮＦ对实验小鼠无明显毒副作用。结论ｎｒｈＴＮＦ和Ｖ／Ｐ(１６)联合用药,具有协同抗肿瘤作用,ｎｒｈＴＮＦ瘤体内用药,毒副反应少,安全性高。     

肿瘤坏死因子-α增强化疗机制的研究进展

研究认为肿瘤坏死因子-α增强化疗敏感性的机制:诱导耐药肿瘤细胞的细胞凋亡通路;下调抗凋亡基因p21的表达;抑制被激活的细胞核因子-κB进入细胞核;提高肿瘤组织内血管的通透性,提高化疗药物的抗肿瘤活性.     

肿瘤坏死因子-α诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的　探讨肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)对人胃癌细胞的作用及规律。方法　用不同浓度的TNF -α作用于胃癌细胞 ,48小时后 ,观察细胞生长和凋亡的情况。结果　加入不同浓度的TNF -α后 ,胃癌细胞的生长出现不同程度的抑制和凋亡 ,且TNF -α的浓度愈高 ,细胞相对抑制愈高。结论　TNF -α能诱导胃癌细胞凋亡 ,抑制细胞生长 ,并在一定的范围内存在剂量效应关系。     

肿瘤坏死因子α和干扰素α与丝裂霉素C在体外的协同细胞毒作用

为了观察肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素α(IFNα)对丝裂霉素C(MMC)体外杀伤胃癌细胞的影响,利用MTT法检测其对胃癌细胞系和原代胃癌细胞的细胞毒作用。TNFα和/或IFNα(各0～5000U/ml)只对10例细胞中的1例有杀伤力,并与剂量有关,且二者共同作用时杀伤力更强。在3例细胞的观察中,发现TNFα(30U/ml)或IFNα(100U/ml)能分别提高MMC对2例细胞的杀伤力。两种细胞因子联合应用时,可提高MMC对全部10例细胞的杀伤力。经统计学处理,发现TNFα与IFNα、TNFα和/或IFNα与MMC之间有协同作用,结果显示,TNFα和IFNα能协同提高MMC体外细胞毒作用,联合应用可能给临床肿瘤治疗带来益处。     

干扰素α和肿瘤坏死因子α逆转MCF7/ADR耐药性的研究

研究干扰素α(IFN-α)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对乳腺癌耐药细胞株MCF7/ADR耐药性的逆转作用,并探讨其对多药耐药基因mdrl和谷胱甘肽-S-转移酶(GSTπ)表达以及细胞内ADR积累的影响,我们应用细胞培养和MTT法,分析应用IFN-α和TNF-α(均为100 U/ml)处理前后,MCF7/ADR对ADR敏感性的变化,以ADR的半数抑制浓度(IC_(50))作为评价敏感性的指标.采用半定量RT-PCR和免疫组化染色法,观察药物处理后不同时间mdrl和GSTπ的mRNA和蛋白表达的变化规律;应用流式细胞技术检测MCF7/ADR细胞内ADR浓度的变化.结果发现,MCF7/ADR对ADR的IC_(50)为30     

重组人肿瘤坏死因子及其与阿霉素联合抗人肝癌的实验研究

本研究采用体外细胞毒方法（ＭＴＴ）检测了重组人肿瘤坏死因子（ｒＨＴＮＦ）和）（或）阿霉素（ＡＤＭ）对肝癌细胞株Ｓ ＭＭＣ－７７２１及Ｂ ＭＭＣ７７２１及Ｂｅｌ－７４０２的细胞毒效应。结果表明：ｒＨＴＮＦ＇ＡＤＭ对两肝癌细胞株的毒性有明显差异，ｒＨＴＮＦ与ＡＤＭ联合应用的体外细胞毒试验显示良好的协同增强效应，在此基础上，选用ＳＭＭＣ－７７２１细胞株进行棵鼠移植瘤试验，观察ｒＨＴＮＦ与ＡＤＭ联合应用的     

人肿瘤坏死因子-α基因转导绒癌耐药细胞系体外耐药逆转的研究

目的 将人肿瘤坏死因子-alpha(hTNF-α)基因导入已建立的绒癌耐药细胞系，观察hTNF-α基因转导后对绒癌细胞耐药性逆转的体外作用。方法 通过阳离子脂质体将hTNF-α基因转导绒癌耐药细胞系，用新霉素筛选含hTNF-α片段的单细胞克隆，用RT-PCR方法和细胞免疫组织化学方法，检测转导hTNF-α基因的耐药细胞中MDRl mRNA和MDRl蛋白(P-gp)表,达水平的改变。采用四甲基偶氮唑蓝比色法，检测转导hTNF-α基因的耐药细胞对足叶乙甙(VP-16)的耐药指数。结果 转导hTNF-α基因后，绒癌耐药细胞中检测出hTNF-α mRNA表达，转导hTNF-α基因在mRNA水平能一定程度的逆转绒癌耐药细胞的MDRl，而在P-gp蛋白水平几乎能完全逆转绒癌耐药细胞的MDRl。转导hTNF-α基因的细胞的耐药指数明显降低。结论 hTNF-α基因转导后，可通过调节MDRl的表达，来逆转绒癌耐药细胞系的耐药性。     

肿瘤坏死因子体外对宫颈癌细胞系细胞毒作用观察

本实验用非同位素细胞毒试验方法观察了肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）对宫颈来源的三个细胞系的体外杀伤作用，并比较重组人干扰素（ＩＦＮγ）对ＴＮＦα细胞毒性的协同作用。结果表明，单一ＴＮＦα对宫颈良、恶性肿瘤细胞均呈微弱的细胞毒作用，但ＩＦＮγ与ＴＮＦα共同作用则对宫颈癌来源的细胞系显示明显杀伤作用（Ｐ＜０．０１），对源于正常、良性肿瘤的细胞系无显著作用（Ｐ＞０．０５）。     

重组人肿瘤坏死因子治疗87例中晚期恶性肿瘤

目的：评价重组人肿瘤坏死因子(rnhTNF)对中晚期恶性肿瘤的临床疗效．观察rnhTNF的不良反应方法：随机分为联合组(A组)48例和单纯化疗组(B组)22例；另设单纯TNF组(C组)17例A组：化疗同时肌肉注射rnhTNF 400万U／m^2，第1-7天和第11～17天21天为一周期，连用两个周期。B组：仅给予化疗，剂量和化疗周期同A组。C组：仅肌肉注射rnhTNF治疗，剂量和给药方法同A组、结果：A组有效率(CR PR)为18．75％(9／48)，B组为0(0／22)，C组为0(0／17)；A组与B组治疗前、后KPS评分和治疗前、后KPS评分差值，均无明显变化，A组第1、2周期与TNF有关的不良反应发生率为87．50％(42／48)和91．70％(44／48)，C组与TNF有关的不良反应发生率为100％(17／17)，但两组差异无显著性。结论：rnhTNF联合化疗治疗肺癌、头颈部癌、消化道癌、泌尿系恶性肿瘤等有一定的疗效，无严重的不良反应。     

α-肿瘤坏死因子基因修饰人肝癌细胞经60Co辐射后细胞因子的持续分泌

α-肿瘤坏死因子(α-TNF)具有促肿瘤细胞自溶和增加肿瘤细胞的HLA抗原表达的作用,故将含信号肽的人α-TNFcDNA构建入可表达载体质粒pLXSN,体外包装成缺陷型逆转录病毒后感染人肝癌细胞株(HHCL),经筛选后得到HHCL-TNF细胞株。经不同强度的~(60)Co辐射后,测其24小时的TNF分泌量。观察~(60)Co辐射强度与TNF分泌量的关系及辐射后细胞存活期的差异。将上述辐射后细胞放入液氮冻存,复苏观察TNF分泌量的变化。经研究发现:(1)HHCL-TNF经过~(60)Co辐射后仍能持续分泌约四周,40～100G辐射强度间无显著差异;(2)HHCL-TNF细胞~(60)Co辐射后液氮冻存一段时间,复苏后仍能持续分泌TNF约三周。这些结果为进一步研究应用‘肿瘤疫苗’提供了一定的依据。     

骨肉瘤血清肿瘤坏死因子-α水平测定及临床意义

目的 探讨骨肉瘤患者治疗前血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平及其与预后的关系。方法 采用酶联免疫吸附法（ELISA）分别测定56例骨肉瘤患者治疗前和50例健康对照者血清中TNF-α水平,分析骨肉瘤患者血清中TNF-α水平与临床病理特征及预后的关系。结果 56例骨肉瘤患者治疗前血清TNF-α为（32.08±19.68） pg／ml,显著高于健康对照者的（18.00±19.88）pg／ml,差异有统计学意义（P=0.04）。骨肉瘤患者治疗前血清TNF-α水平与碱性磷酸酶水平（P=0.002）及肿瘤分期（P=0.026）有关。治疗前血清TNF-α升高患者（n=44）的中位生存时间为22.2个月,TNF-α水平正常者（n=12）为32.1个月,差异有统计学意义（P=0.037）。结论 骨肉瘤患者治疗前血清TNF-α水平明显升高,且与预后相关,该指标对判断预后及指导治疗具有一定的参考价值。