应用多重引物PCR技术检测O157∶H7毒力基因

目的 对江苏省６个不同地区不同宿主动物中分离的Ｏ１５７：Ｈ７菌株进行毒力基因的检测分析。方法 应用肠出血性大肠杆菌（ＥＨＥＣ）的多重引物聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法,以志贺祥毒素（ＳＬＴ２和ＳＬＴ１）基因、“粘附抹平”因子ｅａｅＡ基因和溶血素（ｈｌｙ）基因为靶基因进行检测。结果 江苏省分离的Ｏ１５７：Ｈ７菌株毒力基因携带率为５６．５％,不同地区的分离株携带率有所不同,个别地区高达９０％以上,有的地区     

肠聚集性大肠杆菌的流行病学研究

用Ｈｅｌａ细胞粘附试验或肠聚集性大肠杆菌（Ｅ（Ａｇｇ）ＥＣ）探针对Ｅ（Ａｇｇ）ＥＣ进行鉴定，ＤＮＡ探针的敏感度为４１％，特异度为９１％；用Ｅ（Ａｇｇ）ＥＣ探针鉴定艾希氏大肠杆菌（Ｅ·Ｃｏｌｉ）的感染率，广州病例组为２４％，对照组为３１％（Ｐ＝０．１８７），泰国病例组为１１％，对照组为４％（Ｐ＝０．０１４）。Ｈｅｌａ细胞试验鉴定的Ｅ（Ａｇｇ）ＥＣ感染率，广州病例组为１１％，对照组为１０％（Ｐ＝０．９８３），曼谷病例组为５％，对照组９％。聚集性模式中粘附Ｈｅｌａ细胞和用Ｅ（Ａｇｇ）ＥＣ探针杂交的Ｅ·Ｃｏｌｉ，有２７个Ｏ：Ｈ血清型及无血清型与腹泻有关。用Ｈｅｌａ细胞试验或用Ｅ（Ａｇｇ）ＥＣ探针杂交作鉴定的Ｅ（Ａｇｇ）ＥＣ与广州儿童的腹泻病无关。腹泻儿童中在未发现其他肠道病原菌的情况下，Ｅ（Ａｇｇ）ＥＣ可引起腹泻。     

多种肿瘤标记物用于甲状腺癌的诊断

多种肿瘤标记物用甲状腺癌测定的资料尚不多见，我们选择三种分布较广的肿瘤标记物ＣＥＡ、Ｆｅ－Ｐ、ＬＤＨ．Ｒ对１１０甲状腺癌患者进行联合连续测定，测定ＣＥＡ、Ｆｅ－Ｐ用ＥＬＩＳＡ法，ＬＤＨ．Ｒ用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，结果其阳性率ＣＥＡ５５．４％，Ｆｅ－Ｐ５０９％，ＬＤＨ．Ｒ４６．３％，综合阳性率８０８９％，ＬＤＨ中３４％患者血清电泳图谱中出现一条异常区带（ＬＤＨ－Ｘ），经有效治疗，ＣＥＡ、Ｆｅ－Ｐ下降，ＬＤＨ．Ｒ回升。本实验经ＣＥＡ、Ｆｅ－Ｐ、ＬＤＨ．Ｒ联合测定，提高其检测率，能提示预后，可作为β２微球蛋白甲状腺癌血清学协同的诊断，提高其诊断率     

福建省非典型肠致病性大肠埃希菌的分子特征研究

摘要：目的　研究福建省非典型肠致病性大肠埃希菌（ａＥＰＥＣ）菌株的毒力基因特征和菌株间的遗传相似
度;结合菌株的背景资料分析不同的分子特征对ａＥＰＥＣ 流行的影响。方法　运用ＰＣＲ 技术进行系列的相
关毒力基因扩增;同时运用脉冲场凝胶电泳分子分型技术,对福建省２０１０－２０１２年分离的ａＥＰＥＣ 菌株进
行脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）分子分型。结果　分离３０株实验菌株毒力基因的检测呈阳性的分别为：犫１１２１
５３．３％ （１６）,狔犻犪犃３６．７％ （１１）,狊犲狋／犲狀狋、狀犾犲犅、狀犾犲犈均为３０％ （９）,犾狆犳犃犚１４１２３．３％ （７）,犲犳犪／犾犻犳犃
２０％ （６）,犲犺狓犃３．３３％ （１）;其余毒力基因均未检出;９３．３％ （２８）菌株不同程度地携带有相关的毒力因
子。２９株菌按照１００％的相似度分为１５个ＰＦＧＥ 型别（Ｐ１ Ｐ１５）;其中存在４组不同的ＰＦＧＥ 簇（Ｉ Ⅳ）,
相同ＰＦＧＥ 簇的病例在发病的时间和地区上有聚集性,同时相同簇内菌株的毒力基因谱也表现相同。结论
　犫１１２１、狔犻犪犃和ＥＨＥＣ 毒力岛ＯＩ １２２ 相关基因（犲犳犪１／犾犻犳犃,狀犾犲犅,狀犾犲犈,狊犲狋／犲狀狋） 在福建省ａＥＰＥＣ 菌
株中携带率较高。非典型肠致病性大肠埃希菌的毒力谱表现为多样性, 基因组也呈现遗传多态性;同时
ＰＦＧＥ 分析发现福建省存在由ａＥＰＥＣ 新发病原菌引起的聚集性病例。
关键词：非典型肠致病性大肠埃希菌;毒力基因;ＰＦＧＥ
中图分类号：Ｒ３７８　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０３ ０２１６ ０５
犕狅犾犲犮狌犾犪狉犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犪狋狔狆犻犮犪犾犲狀狋犲狉狅狆犪狋犺狅犵犲狀犻犮     

磷氧氮丙啶诱发CHO细胞HGPRT基因位点正向突变的分子特征

ＭＡＰＯ诱发的ＣＨＯ细胞ＨＧＰＲＴ基因位点突变克隆ＤＮＡ，经ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ酶切消化后，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法，与ＨＧＰＲＴ基因探针杂交。从杂交图谱可见，正常ＣＨＯ细胞基因组ＤＮＡ经ＰｓｔＩ酶切后杂交可显出６条杂交带，其中８３ｋｂ，７６ｋｂ，６０ｋｂ，和３２ｋｂ带为Ｘ染色体连锁的ＨＧＰＲＴ基因所有，分别代表外显子２，６８，４和３，其余两条带为假基因。而经ＥｃｏＲＩ酶切后，正常ＣＨＯ细胞基因组ＤＮＡ有１７５ｋｂ和１１３ｋｂ两条ＨＧＰＲＴ基因杂交带，分别代表了外显子６９和２４。而从ＭＡＰＯ所诱发的ＨＧＰＲＴ基因突变细胞杂交图谱可见，其主要改变是ＨＧＰＲＴ基因全部缺失或部分缺失，同时出现了新的杂交带。ＰｓｔＩ酶切的７个突变克隆均显出基因缺失或新的杂交带型，而ＥｃｏＲＩ酶切８个突变克隆中，有３个无ＨＧＰＲＴ基因改变。由此可见，ＭＡＰＯ诱发ＨＧＰＲＴ基因位点突变的分子机理主要是由于基因缺失或重排。     

我国不同人群及各型肝炎病人庚型肝炎感染检测分析

应用酶联免疫试验（ＥＩＡ）检测抗ＨＧＶ、ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ、抗ＨＢｃ和抗ＨＣＶ，对抗ＨＧＶ阳性的部分标本进一步用逆转录套式聚合酶链反应法（ＲＴｎＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果各类人群及肝炎病人抗ＨＧＶ阳性率分别是：一般人群１０％（４／３９５），献全血员３６％（１０／２７８），某单采浆点人群１２９％（７０／５４１），静脉毒瘾者１３５％（２２／１６２），血透析病人２１４％（１２／５６），ＨＢｓＡｇ携带者１２０％（３／２５），慢性乙型肝炎病人２６２％（１１／４０），慢性丙型肝炎病人１２５％（１７／１３６），肝硬化病人３６４％（４／１１），慢性非甲戊型肝炎病人１８８％（３／１６）。提示献血员、静脉毒瘾者、血透析病人及ＨＢＶ或ＨＣＶ感染者是ＨＧＶ感染的高危人群；ＨＧＶ常与ＨＢＶ或ＨＣＶ重叠／联合感染，也可单独感染；ＨＧＶ是非甲戊型肝炎的致病因子之一。抗ＨＧＶ阳性者中ＨＧＶＲＮＡ检出率为６６％（６４／９７），提示抗ＨＧＶＥＩＡ可用于ＨＧＶ感染的检测。     

甲型肝炎减毒活疫苗（H2株）人体免疫观察

选择１３８ 名抗 Ｈ Ａ Ｖ 及 Ａ Ｌ Ｔ 阴性、无禁忌症的４ ～６岁幼儿,分接种组７２ 名、对照组６６ 名进行甲肝减毒活疫苗（ Ｈ２株） 的人体免疫观察。结果免后６ 周接种组抗 Ｈ Ａ Ｖ 阳转率为９８６１ ％ ,９ 周对照组抗 Ｈ Ａ Ｖ 无阳转,两组 Ａ Ｌ Ｔ 均为正常;观察期间（１９９７ 年９ ～１２ 月） 未发生接种副反应和甲型肝炎;接种组大便用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法直接检出 Ｈ Ａ Ａｇ,排毒率达９４１２ ％ ,对照组粪便排毒 用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法直检和细胞培养分离,分离率达６５５６ ％ ,排毒率７４２４ ％ 。提示 Ｈ２ 株甲肝活疫苗在人体内增殖活跃,毒力平稳,此观察未发现毒力返祖。     

CPB-ST融合基因的构建及表达研究

用限制性核酸内切酶ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ双酶切含有大肠杆菌耐热性肠毒素ＳＴ１前体蛋白基因的质粒ｐＸＳＴ１，回收３２５ｂｐ的ＳＴ基因片段，然后，通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的带有产气荚膜梭菌β－毒素基因（ＣＰＢ）的重组质粒ｐＥＣＢ２中ＣＰＢ基因的下降，转化受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ酶切反应鉴定重组质粒，得到了理想重组质粒ｐＥＣＢ－ＳＴ１。重组菌株Ｂｌ２１（ＤＥ３）（ｐＥＣＢ－ＳＴ１）经ＩＰＴＧ诱导后，其表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ及ＥＬＩＳＡ检测，结果表明重组菌株可以表达ＣＰＢ－ＳＴ融合蛋白，而且该融合蛋白无天然β－毒素和ＳＴ１的生物毒性。     

糖尿病患者的血液一氧化氮和氧化及脂质过氧化指标

检测１１４例糖尿病患者和１００例健康人血浆中的一氧化氮（ Ｐ Ｎ Ｏ）、维生素 Ｃ（ Ｐ Ｖ Ｃ）、维生素 Ｅ（ Ｐ Ｖ Ｅ）、β 胡萝卜素（ Ｐ β Ｃ Ａ Ｒ）、过氧化脂质（ Ｐ Ｌ Ｐ Ｏ）含量及红细胞中的超氧化物歧化酶（ Ｅ Ｓ Ｏ Ｄ）、过氧化氢酶（ Ｅ Ｃ Ａ Ｔ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ Ｅ Ｇ Ｓ Ｈ Ｐｘ）活性和过氧化脂质（ Ｅ Ｌ Ｐ Ｏ）含量以探讨与糖尿病的关系。结果表明,糖尿病组及Ⅰ型、Ⅱ型糖尿病组的 Ｐ Ｎ Ｏ、 Ｐ Ｌ Ｐ Ｏ、 Ｅ Ｌ Ｐ Ｏ 均显著高于对照组（ Ｐ＜ ００１）, Ｐ Ｖ Ｃ、 Ｐ Ｖ Ｅ、 Ｐ β Ｃ Ａ Ｒ、 Ｅ Ｓ Ｏ Ｄ、 Ｅ Ｃ Ａ Ｔ、 Ｅ Ｇ Ｓ Ｈ Ｐｘ 均显著低于对照组（ Ｐ＜ ００１）;并随着病程的延长而逐渐升高或降低。逐步回归分析结果提示患者病程与 Ｐ Ｎ Ｏ、 Ｐ Ｖ Ｃ、 Ｅ Ｓ Ｏ Ｄ、 Ｅ Ｇ Ｓ Ｈ Ｐｘ、 Ｅ Ｌ Ｐ Ｏ 值密切相关。认为糖尿病患者 Ｎ Ｏ 代谢异常,抗氧化、抗过氧化和抗脂质过氧化作用受损。     

矽肺患者血中一氧化氮和脂质过氧化水平的变化

目的探讨一氧化氮、氧化、脂质过氧化与矽肺的关系。方法检测７３例矽肺患者和６０例健康对照者血浆中一氧化氮（ＰＮＯ）、维生素Ｃ（ＰＶＣ）、维生素Ｅ（ＰＶＥ）、β－胡萝卜素（ＰβＣＡＲ）、过氧化脂质（ＰＬＰＯ）及红细胞中超氧化物歧化酶（ＥＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＥＣＡＴ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＥＧＳＨＰｘ）、过氧化脂质（ＥＬＰＯ）值。结果与对照组比较，不同病情、不同肺功能状态患者组的ＰＶＣ、ＰＶＥ、ＰβＣＡＲ、ＥＳＯＤ、ＥＣＡＴ、ＥＧＳＨＰｘ平均值均显著降低，ＰＮＯ、ＰＬＰＯ、ＥＬＰＯ平均值均显著升高；各检测值与患病年限均有直线相关；逐步回归表明，病情、肺功能状态与ＰＮＯ、ＰＶＥ、ＥＳＯＤ、ＥＬＰＯ值相关最为密切。结论矽肺患者体内一氧化氮代谢异常，氧化、抗氧化平衡严重失调，氧化和脂质过氧化反应病理性加剧     

Escherichia coli diarrhoea

In recent years it has become clear that three types of Escherichia coli—enterotoxigenic, enteropathogenic, and enteroinvasive—play important roles in the etiology of acute diarrhoea. This report reviews the available knowledge on the epidemiology, clinical features, and pathophysiology of acute diarrhoea caused by these three types of E. coli, summarizes information on their laboratory diagnosis, and outlines priorities for further research. Particular attention is paid to important aspects of the relationship between enterotoxigenic E. coli diarrhoea in young animals and in man, and to recent advances in the development of E. coli vaccines for use in animals and their potential relevance to the development of an E. coli vaccine for use in man.     

Extraintestinal pathogenic Escherichia coli

Extraintestinal pathogenic Escherichia coli (ExPEC) possesses virulence traits that allow it to invade, colonize, and induce disease in bodily sites outside of the gastrointestinal tract. Human diseases caused by ExPEC include urinary tract infections, neonatal meningitis, sepsis, pneumonia, surgical site infections, as well as infections in other extraintestinal locations. ExPEC-induced diseases represent a large burden in terms of medical costs and productivity losses. In addition to human illnesses, ExPEC strains also cause extraintestinal infections in domestic animals and pets. A commonality of virulence factors has been demonstrated between human and animal ExPEC, suggesting that the organisms are zoonotic pathogens. ExPEC strains have been isolated from food products, in particular from raw meats and poultry, indicating that these organisms potentially represent a new class of foodborne pathogens. This review discusses various aspects of ExPEC, including its presence in food products, in animals used for food or as companion pets; the diseases ExPEC can cause; and the virulence factors and virulence mechanisms that cause disease.