CGRP对葡萄糖诱导血管内皮细胞凋亡保护作用的研究

目的观察降钙素基因相关肽(calcitonin-gene-related peptide；CGRP)对高浓度葡萄糖(高糖)诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的作用，初步探讨CGRP抑制高糖诱导细胞凋亡的机制。方法用MTT法检测细胞活力；Cell Death Detection ELISA评价细胞凋亡；半定量RT-PCR检测细胞内细胞外信号调节激酶2(ERK2)mRNA的表达水平。结果当CGRP浓度为10^-8mol／L时，高糖对细胞的损伤已明显得到保护。高糖组细胞活力为印％，而CGRP处理组细胞活力为80％。ELISA结果显示，CGRP处理组细胞凋亡率明显下降。CGRP明显上调ERK2 mRNA表达水平。结论CGRP通过激活ERK2的表达拮抗高糖诱导的内皮细胞凋亡。     

谷氧还蛋白1对高糖诱导的血管内皮细胞凋亡保护作用的研究

目的 观察谷氧还蛋白1(glutaredoxin1,Grx1)在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的保护作用.方法 在高糖环境中培养人脐静脉内皮细胞,制备人脐静脉内皮细胞损伤模型,细胞分为正常对照组、损伤组、Grx1预保护组.倒置显微镜下观察细胞形态、(MTT比色法)检测细胞活力以初步观察Grx1对细胞损伤的保护作用;利用Hoechst33258染色法荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;采用Annexin V-FITC/PI双染法,流式细胞仪检测Grx1对内皮细胞凋亡的影响.结果 光镜观察结果显示,Grx1预保护组与损伤组比较细胞状态明显改善;MTT法显示高糖环境下,Grx1可减轻高糖引起的细胞活性降低;Hoechst33258染色实验显示,Grx1可明显改善高糖所致的内皮细胞变形、皱缩等损伤表现.流式细胞术检测显示当Grx1存在时,细胞凋亡率明显下降.结论 Grx1对高糖诱导的血管内皮细胞凋亡具有明显的保护作用.     

二氢杨梅素激活磷酸腺苷活化蛋白激酶抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 探讨二氢杨梅素对高糖诱导血管内皮细胞凋亡的影响及其与磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的关系.方法 体外培养原代人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分为正常对照组(5.56 mmoL/L葡萄糖)、高糖处理组(33.36 mmol/L葡萄糖)、甘露醇高渗对照组(5.56 mmol/L葡萄糖+27.8 mmol/L甘露醇)、AMPK激动剂5-氨基咪唑4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷(5-Aminoimidazole-4-carboxamide-1-β-D-ribofuranoside,AICAR)(10 nmol/L)+高糖处理组、二氢杨梅素(1μmol/L)+高糖处理组、AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L) +AICAR+高糖处理组和AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L)+二氢杨梅素+高糖处理组.处理36 h后,CCK-8法检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACC)和p-ACC蛋白水平.结果 与正常对照组比较,高糖处理组细胞活力明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),p-AMPK、p-ACC水平显著降低(P＜0.05);二氢杨梅素或AICAR预处理均明显抑制高糖诱导的HUVECs细胞活力下降、细胞凋亡增加和p-AMPK、p-ACC水平降低(P＜0.05);Compound C预处理明显抑制AICAR和二氢杨梅素对高糖诱导HUVECs细胞凋亡的保护作用(P＜0.05).结论 二氢杨梅素通过促进AMPK活化抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡.     

肌肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨肌肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响.方法 体外培养细胞,通过高糖(25mmol/L)诱导细胞凋亡模型,并给予肌肽(20 mmol/L)建立高糖加肌肽组,同时设立正常糖对照组和正常糖加肌肽组.应用电镜观察细胞超微结构;AnnexinV/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况.结果 电镜显示25 mmol/L葡萄糖诱导细胞呈凋亡早期形态,流式细胞仪检测高糖组细胞凋亡率显著高于正常糖组(P<0.05),而高糖加20mmol/L肌肽组与高糖组相比,具有显著抑制细胞凋亡的作用(p<0.05).结论 肌肽能够抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡.     

氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,分别用10～50mmol/L终浓度的葡萄糖进行干预,MTT测定各组心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、脱氧核糖核酸转移酶原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术用于观察和检测心肌细胞凋亡;将心肌细胞分为3组:对照组、高糖组和抗氧化剂组,分别检测各组上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌细胞的氧化应激水平。结果:MTT结果显示高糖能浓度依赖性地抑制心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、TUNEL染色和流式细胞术均表明高糖能诱导心肌细胞凋亡;与对照组相比,高糖组LDH、MDA含量明显增高,SOD含量显著下降,与高糖组相比,抗氧化剂组LDH,MDA含量明显下降,SOD含量显著升高;流式细胞检测显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而抗氧化剂组细胞凋亡率较高糖组则显著下降。结论:氧化应激是高糖诱导心肌细胞凋亡的一个重要机制。     

TL1A抗体通过抑制活性氧产生阻止高糖诱导血管内皮细胞凋亡

目的:探讨TL1A抗体在高糖所致活性氧(ROS)增多及细胞凋亡中的作用。方法:将培养的人脐静脉内皮细胞分为正常对照组、正常糖+TL1A组、高糖对照组、高糖+SOD+CAT组、高糖+TL1A抗体组和高渗对照组。采用流式细胞术检测人脐静脉内皮细胞ROS生成量;Annexin V/PI荧光双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:与正常对照组相比,高糖对照组ROS生成量增加53%,细胞凋亡率达正常的5.8倍(P<0.01)。于正常糖培养液中加入外源性TL1A蛋白,活性氧的生成量及细胞凋亡率均明显增多,显著高于正常对照组和高糖对照组(P<0.01);在高糖培养液中加入9μg/ml TL1A抗体,活性氧生成量由(71.63±6.61)降至(50.63±4.05),细胞凋亡率由(23.70±3.20)%降至(5.07±0.47)%(P<0.01)。结论:TL1A抗体通过抑制ROS产生阻止高糖诱导血管内皮细胞凋亡。     

不同活性氧产生途径对高糖诱导内皮细胞活性氧生成及高糖对细胞凋亡的影响

目的探讨不同活性氧产生途径对高糖诱导的内皮细胞活性氧生成的影响以及高糖对内皮细胞凋亡的影响。方法本实验分为正常对照组、高糖处理组、DPI处理组、别嘌呤醇处理组、鱼藤酮处理组和吲哚美辛处理组。用流式细胞仪检测各组细胞内活性氧的浓度;流式细胞仪及Hochest染色检测细胞凋亡;Western blot法检测NADPH氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase)亚单位NOX2、NOX4、p22phox、p47phox、p67phox及rac的蛋白表达。结果与对照组相比,高糖组、别嘌呤醇处理组、鱼藤酮处理组和吲哚美辛处理组内皮细胞活性氧的生成明显增高,而DPI处理组内皮细胞活性氧的生成与对照组差异无统计学意义;与高糖组相比,DPI处理组内皮细胞活性氧的生成明显减少;而别嘌呤醇处理组、鱼藤酮处理组和吲哚美辛处理组与高糖组相比差异无统计学意义。与正常对照组相比,高糖处理组细胞NOX4蛋白表达显著增高,而NOX2、p47phox、p67phox、p22phox和Rac表达差异无统计学意义。与对照组相比,高糖处理组细胞凋亡比例显著增高。结论高糖可能通过增加活性氧的生成诱导内皮细胞的凋亡,其中NADPH氧化酶可能为内皮细胞活性氧产生的主要来源。     

杭白菊黄酮对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞的影响*

目的探讨杭白菊黄酮对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响,分析杭白菊黄酮对血管内皮细胞的保护作用。方法 HUVEC分正常对照组、高糖组(22mol/L)及低、中、高浓度杭白菊黄酮组(100、200、400mg/mL),作用24~72h后,显微镜观察细胞形态改变,MTT法检测细胞活力。结果不同浓度杭白菊黄酮组细胞存活率均显著高于高糖组(P0.05,P0.01),尤以400mg/mL高浓度杭白菊黄酮组作用最为显著(P0.01)。结论杭白菊黄酮对高糖诱导的HUVEC细胞凋亡有明显的抑制作用,且存在剂量依赖性,对血管内皮具有保护作用。     

氢气饱和生理盐水对高糖所致内皮细胞内活性氧生成和凋亡的影响

目的探讨氢气(H2)饱和生理盐水对高糖所致内皮细胞内活性氧(ROS)生成和凋亡的影响。方法细胞分为对照组、高糖组、高糖+H2饱和生理盐水组(H2组)3组,流式细胞仪检测细胞内ROS,Realtime PCP检测氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)mRNA,细胞凋亡ELISA试剂盒检测细胞凋亡。结果 H2组内皮细胞内ROS较高糖组明显减少(2.75±0.37vs 6.35±1.29,P<0.01),而SOD和GSH-Px mRNA水平明显增高(SOD:0.74±0.06vs 0.26±0.03,P<0.01;GSH-Px:0.68±0.05vs 0.31±0.04,P<0.01),细胞凋亡水平明显降低(0.38±0.02vs 0.89±0.05,P<0.01)。结论 H2饱和生理盐水可减少高糖诱导的内皮细胞内ROS增多和抗氧化酶的消耗,并减少高糖诱导的细胞凋亡。     

泛素在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的表达

目的检测高浓度葡萄糖对血管内皮细胞凋亡的影响和泛素表达的变化.方法ECV-304细胞在高糖(25 mmol/L)和正常糖浓度(5.5 mmol/L)DMEM培养液中分别培养24、48、72 h,用MTT法检测细胞活力,用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡特异性的DNA片段,并用Northern blot检测泛素mRNA的变化.结果高糖24、48、72 h组细胞OD值比正常浓度组均显著下降(P＜0.05);1.8%琼脂糖凝胶电泳在高糖48、72 h组检测到细胞凋亡特异性DNA片段;泛素mRNA在高糖24、48、72 h组分别增加25.37%、53.47%和63.93%(P＜0.05).结论高浓度葡萄糖可增加血管内皮细胞凋亡,泛素mRNA在高糖诱导的内皮细胞凋亡中表达上调,且发生在凋亡形态学改变之前,泛素参与调节高血糖诱导的细胞凋亡.     

大剂量葡萄糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡

目的 检验大剂量葡萄糖水平对培养的原代人视网膜毛细血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells，HRCEC)的直接影响。方法 HRCEC细胞从捐赠人眼中分离得到。细胞在含有5mmol／L或25mmol／L葡萄糖的培养基中培养6d。应用锥虫蓝染色测定细胞活力、流式细胞计数分析细胞周期、TUNEL分析细胞凋亡。结果 HRCEC细胞在25mmol／L葡萄糖中培养6d，细胞活力显著下降。通过流式细胞计数和TUNEL测定，凋亡细胞的数目在大剂量葡萄糖培养基中显著升高。结论 大剂量葡萄糖可诱导人视网膜毛细血管内皮细胞凋亡，这有可能是促进糖尿病性视网膜病发展的原因。     

三氧化二砷对血管内皮细胞增殖和周期的影响

目的:观察As2O3对血管内皮细胞增殖、凋亡和细胞周期的干扰,探讨As2O3对血管内皮细胞生长的直接影响。方法:血管内皮细胞EVC-304体外培养,As2O3干预。采用MTT测定细胞活性,流式细胞仪测定细胞周期、细胞凋亡。结果:ECV-304细胞经过As2O3干预,其存活率明显降低,并且呈剂量依赖性。As2O3干预后,进入S期的细胞减少,细胞周期被阻在G1期,细胞可能在G1期进入凋亡。As2O3诱导早期凋亡是对照组的2.88～5.1倍,并且呈剂量依赖性;其晚期凋亡是对照组的1.17～1.67倍。结论:As2O3可直接干扰血管内皮细胞的细胞周期,阻滞细胞在G1期,并诱导细胞凋亡,进而抑制血管内皮细胞的增殖。     

大剂量葡萄糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡的实验研究

目的检验大剂量葡萄糖水平对培养的原代人视网膜毛细血管内皮细胞(humanretinalcapillaryendothelialcells,HRCEC)的直接影响。方法HRCEC细胞从捐赠人眼中分离得到。细胞在含有5mmol/L或25mmol/L葡萄糖的培养基中培养6d。应用锥虫蓝染色测定细胞活力、流式细胞计数分析细胞周期、TUNEL分析细胞凋亡。结果HRCEC细胞在25mmol/L葡萄糖中培养6d,细胞活力显著下降。通过流式细胞计数和TUNEL测定,凋亡细胞的数目在大剂量葡萄糖培养基中显著升高。结论大剂量葡萄糖可诱导人视网膜毛细血管内皮细胞凋亡,这有可能是促进糖尿病性视网膜病发展的原因。     

降钙素基因相关肽基因体外转染人脐静脉内皮细胞

目的：观察逆转录病毒载体介导的降钙素基因相关肽（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）基因对人脐静脉内皮细胞的作用,探讨其应用于动脉粥样硬化和经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄基因治疗的可行性。方法：构建含有ＣＧＲＰｃＤＮＡ的逆转录病毒载体,体外转染人脐静脉内皮细胞。用ＲＴＰＣＲ及放射免疫法分析检测基因表达水平。应用细胞计数及流式细胞仪观察ＣＧＲＰ基因对内皮细胞生长的影响。结果：逆转录病毒载体能有效地将外源性基因导入血管内皮细胞并稳定表达。导入ＣＧＲＰ基因可以促进内皮细胞的分裂增殖,从而加速损伤内皮的修复。结论：ＣＧＲＰ基因有可能作为动脉粥样硬化及再狭窄基因治疗的有效候选基因     

降钙素基因相关肽对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对HaCaT 细胞增殖、凋亡的影响.方法 以不同浓度(10-7 ～10-4 mmol/L)CGRP作用于HaCaT 细胞,用MTT法检测其对细胞吸光度(A)及生长曲线的影响;流式细胞术分析其对细胞凋亡率的影响.结果 不同浓度CGRP组A值均较对照组升高(F=7.78,q=3.53～7.71,P<0.05).CGRP浓度在10-7 ～10-5 mmol/L时HaCaT 细胞吸光度随浓度增加而升高,但差异无统计学意义(P>0.05),在10-4 mmol/L时A值较10-5 mmol/L时反而降低(q=4.18,P<0.05).细胞凋亡率随CGRP浓度升高下降,与对照组比较,差异有显著性(χ2=85.75～374.24,P<0.01).结论 CGRP可以促进HaCaT 细胞增殖,抑制其凋亡,且作用强度与浓度有关.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对PM2.5染毒血管内皮细胞的保护作用

目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对PM2.5引起的血管内皮细胞EA.hy926损伤的保护作用.方法 取对数生长期EA.hy926细胞分为对照组、100 μg/mL PM2.5组及STS干预组(先给予12.5、25、50 μg/mL STS干预后再加入100 μg/mL PM2.5).24 h后CCK8法测定细胞的存活率,荧光标记法检测细胞内氧自由基生成情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡蛋白酶Caspase-9和Caspase-3的表达变化.结果 PM2.5对EA.hy926细胞有明显的毒性,可以导致细胞内氧自由基生成增多,并引起Caspase-9和Caspase-3活化造成细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义;STS可以抑制PM2.5对EA.hy926细胞的毒性,降低胞内活性氧(ROS)生成及Caspase-9和Caspase-3的活化,减少细胞凋亡数目,与PM2.5组比较差异有统计学意义.结论 丹参酮ⅡA磺酸钠可以减少PM2.5引起的血管内皮细胞凋亡,其保护作用可能与抑制氧自由基生成有关.     

降糖药二甲双胍对甲状腺未分化癌细胞增殖及凋亡的作用

目的:研究二甲双胍对甲状腺未分化癌细胞增殖及凋亡的作用,初步探讨其作用机制?方法:以不同浓度二甲双胍作用于未分化癌SW1736细胞,MTT法检测其增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况?结果:二甲双胍可显著抑制SW1736细胞增殖,其抑制作用呈剂量依赖性,并随着作用时间的延长抑制作用逐渐增强,于72 h达到最大抑制效果?流式细胞检测结果显示二甲双胍可阻滞未分化癌细胞周期至G0/G1期;并可促进肿瘤细胞凋亡,随着二甲双胍作用浓度的递增,肿瘤细胞的凋亡率逐渐增加,20 mmol/L二甲双胍作用48 h后,可使SW1736细胞凋亡率从8.3%增加至13.3%,与对照组相比,有显著统计学差异?结论:二甲双胍可抑制甲状腺未分化癌细胞的增殖活性,阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡,为甲状腺未分化癌的治疗研究提供了新的方向?     

氧自由基对血管内皮细胞周期及其凋亡水平的影响

目的　观察氧自由基对内皮细胞增殖周期和凋亡水平的影响。方法　以黄嘌呤氧化酶作用于黄嘌呤而产生氧自由基 ,经流式细胞仪观察它对培养的内皮细胞细胞周期及凋亡水平的影响。结果　氧自由基作用后 ,内皮细胞增殖 S期比率降低 ,而 G2 - M期比率升高 ,同时诱导了内皮细胞的凋亡。结论　氧自由基在缺血缺氧的病理生理过程中可损伤血管内皮 ,影响内皮细胞的增殖和修复     

冬凌草甲素诱导C6脑胶质瘤细胞凋亡的初步研究

目的:研究冬凌草甲素对大鼠C6脑胶质瘤细胞的抑制增殖及诱导凋亡的作用。方法:不同浓度的冬凌草甲素在不同的时间间隔内作用于C6脑胶质瘤细胞,用冬凌草甲素浓度时间生存曲线来测试冬凌草甲素对C6脑胶质瘤细胞的作用。用流式细胞技术来分析细胞周期的分布情况及凋亡细胞的百分数。结果:生存曲线结果证实冬凌草甲素诱导增殖抑制呈浓度依赖和时间依赖。Hochest 33258斑点染色及流式细胞技术揭示冬凌草甲素诱导C6脑胶质瘤细胞凋亡及抑制其进入细胞周期的G2/M相。结论:冬凌草甲素能够抑制C6脑胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。