流式细胞仪检测清开灵注射液及其有效成分诱导HL-60细胞凋亡及其机理研究

我们通过流式细胞仪检测证明：清开灵注射液及其有效成分黄芩甙、猪去氧胆碱体外作用以诱导ＨＬ－６０细胞凋亡为主,体外作用６ｈ可诱导产生凋亡早期蛋白ＡｎｎｅｘｉｎＶ,并同时增加Ｆａｓ蛋白表达,降低ｂｃｌ－２蛋白表达（Ｐ〈０．０１）。牛黄胆酸可同时上调Ｆａｓ和ｂｃｌ－２表达,无明显诱导细胞凋亡作用。     

一叶秋碱的抗肿瘤作用及其机制研究

采用小鼠移植性肿瘤ＥＣ模型，观察－叶秋碱腹腔注射对荷瘤小鼠的抑瘤效应，并以人早幼粒细胞白血病细胞株ＨＬ６０为研究对象，采用ＭＴＴ法，ＤＮＡ电泳及荧光显微镜等实验手段，研究－叶秋碱抑瘤作用的可能机理，结果显示：一叶秋碱对ＥＣ有抑制作用，平均抑瘤率达２５．３％￣６２．２％；一叶秋碱处理后的ＨＬ６０细胞出现核固缩，核碎裂，ＤＮＡ电泳显示梯状条带，提示一叶秋碱具有抗肿瘤作用，诱导细胞凋亡可能是其作用机制之     

灵芝复方诱导HL-60白血病细胞凋亡的研究

应用体外集落与液体培养、细胞形态学观察、ＤＮＡ片段凝胶电泳及ＤＮＡ片百分率测定等方法观察灵芝复方对人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ生长及ＨＬ－６０细胞增殖和凋亡的作用。发现灵芝复方在一定浓度范围内对人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ生长有促进作用,而对白血病系ＨＬ－６０细胞集落生长则表现了剂量依赖性抑制;细胞形态学经为芝复方对ＨＬ－６０细胞凋亡具有剂量和时间依赖性诱导作用。８和１６ｍｇ／ｍｌ灵芝复方作用４８ｈ,可使ＨＬ－６０细     

榄香烯诱导肝癌腹水瘤细胞系Hca—F25／CL—16A3凋亡的实验研究

研究了榄香烯诱导肝癌腹水瘤细胞系ＨｃａＦ２５／ＣＬ１６Ａ３凋亡的作用。结果表明：凋亡抑制基因ｂｃｌ２在对照组呈高度表达，榄香烯作用后，可使强表达ｂｃｌ２细胞数显著减少（Ｐ＜０．０１）；ＤＮＡ凝胶电泳结果表明榄香烯可使ＨｃａＦ２５／ＣＬ１６Ａ３ＤＮＡ出现凋亡特征（呈慧星状或梯形条带）。提示榄香烯可能通过使ＤＮＡ断裂及抑制ｂｃｌ２表达而诱导该细胞株凋亡，榄香烯诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤作用机制的重要方面之一。     

黄芪总黄酮对缺血再灌注损伤模型中一氧化氮的作用及其影响

目的：研究黄芪总黄酮（ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｆａｓｔｒａｇａｌｕｓ，ＴＦＡ）对缺血再灌注损伤的防护作用。方法：应用家兔失血性休克／再灌注模型（ｓｈｏｃｋ／ｒｅｐｅｒｃｕｓｉｏｎ，Ｓ／Ｒ），观察损伤后血浆中一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘ ｉｄｅ，ＮＯ）代谢终产物亚硝酸盐（ＮＯ２）的变化及ＴＦＡ和磷脂酶Ａ２阻断剂氯喹（Ｃｈｌｑ）治疗对其的影响。结果：数据表明Ｓ／Ｒ后２４ｈ内血浆中ＮＯ２含量，与血ｐＨ值及二氧化碳总量（ＴＣＯ２）下降呈正相关；ＴＦＡ和Ｃｈｌｑ可在一定程度上阻断ＮＯ的减少，且对维持体内酸碱平衡有一定作用。结论：ＴＦＡ对缺血再灌注损伤具有防护作用。     

芦笋有效成分熊果酸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的：探讨芦笋有效成分熊果酸对ＨＬ－６０细胞增殖、凋亡的影响。方法：Ｅ和ＭＴＴ法、ＤＮＡ凝胶电泳、形态学方法等测定熊果酸对ＨＨＬ－６０细胞增殖、凋亡的影响。结果：熊果酸抑制ＨＬ－６０细胞增殖，对ＨＬ－６０细胞的半数生长的抑制剂量（ＩＣ５０）为８．２６μｍｏｌ／Ｌ，并能导其发生凋亡结论：熊果酸通过抑制ＨＬ－６０细胞增殖和诱导其凋亡发挥抗肿瘤作用。     

黄芪总黄酮对缺血再灌注损伤模型中一氧化氮的作用及其 …

目的：研究黄芪总黄酮（ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｏｆａｓｔｒａｇａｌｕｓ,ＴＦＡ）对缺血再灌注损伤的防护作用。方法：应用家兔失血性休克／再灌注模型（ｓｈｏｃｋ／ｒｅｐｅｒｃｕｓｓｉｏｎ,Ｓ／Ｒ）观察损伤后血浆中一氧化化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ,ＮＯ）代谢终产物亚硝酸盐（ＮＯ＾－２）的变化及ＴＦＡ和磷脂酶Ａ２阻断剂氯喹（Ｃｈｌｑ）治疗对其的影响。结果：数据表明Ｓ／Ｒ后２４ｈ内血浆中ＮＯ＾－２含     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导HL60细胞程序性死亡

目的：探讨儿茶素类化合物的抗癌作用机制。方法：以儿茶素的主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯（ＥＧＣＧ）为实验材料，使用噻唑蓝（ＭＴＴ）还原法，ＤＮＡ凝胶电泳，透射电镜技术，观察了ＥＧＣＧ对人急性早幼粒白血病细胞（ＨＬ６０）程序性死亡的影响。结果：０．５５×１０－３ｍｏｌ·Ｌ－１ＥＧＣＧ作用５ｈ后，琼脂糖凝胶电泳下，ＨＬ６０细胞呈现典型的ＤＮＡ条带，透射电镜观察到凋亡小体。结论：ＥＧＣＧ对ＨＬ６０细胞程序性死亡的诱导活性平行于它的细胞杀伤作用     

中华眼镜蛇蛇毒组分C诱导白血病细胞凋亡作用的研究

目的：研究眼镜蛇蛇毒组分Ｃ诱导白血病细胞凋亡的作用及机制。方法：应用光学显微镜透射电镜，脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）电泳，流式细胞仪，逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）等方法，观察白血病细胞经过眼镜蛇蛇毒组分Ｃ处理后，形态学，生物化学及Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ基因表达水平的变化。结果：眼镜蛇蛇毒组分Ｃ能诱导人粒细胞白血病细胞系（ＨＬ６０）发生凋亡形态学和生物化学变化；     

330砷作用于微管蛋白引起白血病粒细胞凋亡

砷对癌细胞具有特定的毒性。大剂量（＞５μＭ）时Ａｓ２Ｏ３可导致各细胞系急性坏死，而较小剂量（０．５￣５μＭ）则诱导粒细胞成熟，并诱导细胞凋亡。Ａｓ２Ｏ３处理的细胞既具有类似微管蛋白增强剂（紫杉醇）作用的特点，也具有微管蛋白抑制剂（秋水侧碱）作用的特点。用Ａｓ２Ｏ３预处理单体微管蛋白在体外可显著抑制ＧＴＰ诱导的聚合及微管形成，但不会影响ＧＴＰ诱导聚合后的微管的稳定。交叉抑制实验表明，Ａｓ２Ｏ３是ＧＴＰ与微管蛋白结合的非竞争性抑制剂。这些发现与β－微管蛋白的三维结构正好吻合，微管蛋白结构显示两个立体邻位半胱氨酸残基（Ｇｙｓ－１２和Ｃｙｓ－２１３）通过三介砷的交叉连接使ＧＴＰ结合位点失活。作者还发现外源性ＧＴＰ可阻止Ａｓ２Ｏ３诱导的有丝分裂停滞。     

Tetrandrine and arsenic trioxide synergistically inhibit proliferation of HCC1937 triple negative breast cancer cells

OBJECTIVE: To evaluate the effects of tetrandrine plus arsenic trioxide on HCC1937 cells, a triple negative breast cancer cell line, and to explore possible mechanisms.METHODS: The 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide method was used to compare the antiproliferative effects of tetrandrine,arsenic trioxide alone and tetrandrine plus arsenic trioxide on HCC1937 cells. The median-effect principle(Chou-Talalay combination index method) was used to examine the interaction between the two drugs. Flow cytometry was used to evaluate effects of treatment with tetrandrine, arsenic trioxide or the combination of both on HCC1937 cell apoptosis. Real-time polymerase chain reaction and western blotting were performed to evaluate changes in apoptosis-related gene expression and protein levels.RESULTS: Tetrandrine and arsenic trioxide each in-hibited HCC1937 cell proliferation in a dose-dependent manner. The cell inhibition rate of HCC1937 cells treated with a combination of tetrandrine and arsenic trioxide was significantly higher than with either compound alone. The two drugs produced a synergistic effect when the inhibition rate was20%-40%. Flow cytometry results showed that treatment with the two drugs increased the proportion of apoptotic cells. In the combination treated group, caspase-3 activation and PARP cleavage were significantly higher than in the other groups.Moreover, Bcl-2 and survivin expression were decreased, whereas that of both Bid and Bax was increased.CONCLUSION: These findings demonstrated that tetrandrine plus arsenic trioxide had synergistic efficacy on induction of apoptosis in HCC1937 cells.     

人参皂苷单体Rh_2促使人脑胶质瘤U251细胞凋亡的实验研究

目的:观察人参皂苷单体Rh2(GS-Rh2)诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡作用,进而探讨其对端粒酶活性的影响和人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的机制。方法:人脑胶质瘤U251细胞经GS-Rh2处理后,采用MTT法检测细胞抑制率,免疫荧光技术观察凋亡小体,流式细胞仪经Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性改变,通过RT-PCR技术检测hTERT基因的表达。结果:GS-Rh2对U251细胞具有抑制作用,呈明显的剂量依赖关系,免疫荧光技术观察到凋亡小体的出现,流式细胞仪检测GS-Rh2引起U251细胞凋亡并与药物浓度存在依赖关系,TRAP-ELISA法发现GS-Rh2可以降低端粒酶活性且呈剂量和时间依赖关系,RT-PCR证实GS-Rh2可降低hTERT基因的表达。结论:人参皂苷单体Rh2能够诱导人脑胶质瘤U25l细胞发生凋亡,并抑制和降低细胞端粒酶活性,经过RT-PCR证实GS-Rh2作用于胶质瘤的分子生物学机制可能与抑制胶质瘤细胞hTERT基因有关,进而诱导细胞发生凋亡。     

三氧化二砷（As2O3）治疗多发性骨髓瘤机理的研究进展

目的：分析三氧化二砷治疗多发性骨髓瘤的作用机理。方法：综合分析有关三氧化二砷治疗多发性骨髓瘤的文献。结果与结论：三氧化二砷治疗多发性骨髓瘤的机理主要包括：抑制多发性骨髓细胞的增殖,并促进其凋亡;改变多发性骨髓性细胞基因表达并抑制其新生血管;影响其基质细胞增殖和分泌。     

维生素K3增强三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨维生素K3对三氧化二砷(As2O3)诱导人多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI8226细胞凋亡的作用及生长抑制。方法:采用四甲基噻唑氮蓝比色法检测As2O3联合维生素K3对人多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI8226细胞生长抑制作用;流式细胞术检测As2O3联合维生素K3对RPMI8226细胞周期和凋亡率的影响。结果:单用As2O3对RPMI8226细胞的生长有抑制作用,其作用呈时间和剂量依赖性;与单用As2O3相比,As2O3联合维生素K3作用于RPMI8226细胞48h后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),G0/G1期细胞比例升高,S期减低,并有凋亡峰。结论:维生素K3可以增强As2O3对RPMI8226细胞诱导凋亡作用。     

三氧化二砷对人肝癌细胞黏附和侵袭影响的实验研究

目的探讨三氧化二砷(亚砷酸,As2O3)注射液是否具有抗肝癌细胞黏附和侵袭的作用及其相关机制。方法选用人类肝癌细胞株SMMC-7721细胞及裸鼠人类肝癌转移模型为研究对象,通过细胞运动迁移实验、细胞黏附实验和免疫组化方法观察As2O3对SMMC-7721细胞的运动迁移、与纤维粘连蛋白(FN)、内皮细胞黏附以及裸鼠人肝癌转移模型肝移植瘤表达CD44和MMP-2基因蛋白的影响。结果As2O3注射液可显著抑制SMMC-772l细胞在FN上的迁移运动和SMMC-7721细胞与FN、内皮细胞的黏附,并能降低裸鼠肝移植瘤CD44、MMP-2的表达。结论As2O3具有抗肝癌细胞黏附和侵袭的作用,其机制可能与As2O3能降低肝癌细胞表达CD44和MMP-2有关。     

南天竹总生物碱对三氧化二砷减毒作用及其LC-MS分析

目的:研究南天竹果实中总生物碱对三氧化二砷减毒的作用,并分析南天竹总生物碱部位的化学成分,为南天竹对三氧化二砷减毒的总生物碱有效部位研究提供研究基础。方法:采用三氧化二砷致急性损伤模型,依据生化指标及组织形态检测结果,比较三氧化二砷单用与总生物碱联用对实验鼠心、肝和肾功能的影响,进而评价南天竹总生物碱化学部位对三氧化二砷的减毒作用。采用Peakview(Version1. 2,AB SCIEX)软件对南天竹总生物碱部位质谱数据进行处理,依据化合物的相对分子质量(分子式),再结合二级碎片、色谱峰保留时间及文献信息等对总生物碱部位检测到的化合物进行确认。结果:单独给药组肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH),血清尿素氮(BUN),丙二醛(MDA),谷氨酸-丙酮酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)明显高于联合给药组和空白组,而其Na~+-K~+-三磷酸腺苷(ATP)酶,超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)和血肌酐(SCr)消除率明显低于联合给药组和空白组;相对南天竹组,总生物碱组的LDH值的降低更多,而Na~+-K~+-ATP酶活性提高明显。联合用药组心脏细胞水肿情况有所改善,肾脏及肝脏损伤减轻。从南天竹生物碱部位鉴别出25个生物碱,已知化合物18个,未知7个,包括3种结构类型,其中以阿朴吗啡类生物碱居多。结论:总生物碱联合给药在心脏、肾脏、肝脏损伤程度较三氧化二砷单独给药有较明显的改善,提取纯化的总生物碱部位对三氧化二砷毒性具有减毒作用。南天竹组对三氧化二砷减毒作用较总生碱组总体具优势,但无显著差异,而总生物碱组对三氧化二砷致毒的心脏保护作用较南天竹组更优。南天竹总生物碱中的阿朴吗啡类生物碱如南天宁碱、南天竹碱等具有含量相对高和专属性较强的特点,可作为该部位质量控制方法的指标性成分。     

冬凌草甲素对HL-60细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对白血病HL-60细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的HL-60细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA及FCM法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及P53蛋白表达水平的变化.结果:8 umol/L以上的冬凌草甲素对HL-60细胞具有显著的诱导凋亡及增殖抑制作用,并呈现出明显的量-效与时-效关系.药物作用48小时后细胞的凋亡率达高峰,在Hoechst染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变.在细胞凋亡过程中,端粒酶活性下降,同时P53蛋白的表达水平显著升高.结论:冬凌草甲素对HL-60细胞具有显著的诱导凋亡及增殖抑制作用,升高P53蛋白的表达水平及降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一;这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供了有力的试验依据.     

靶向抑制微小RNA-21提高白血病细胞对三氧化二砷的敏感性研究

目的 探讨以微小RNA 21(microRNA 21, miRNA 21)为靶标的反义核酸(AMO miR 21)提高白血病K562细胞对三氧化二砷（As2O3）的敏感性及可能的作用机制。方法 利用LipofectamineTM 2000将化学合成的反义核酸转染K562细胞。MTT法检测单独使用AMO-miR-21、As2O3以及两者联合使用对细胞增殖的抑制作用,并计算抑制率和IC50;PI单染检测细胞周期及凋亡;实时定量PCR检测miRNA-21表达水平的改变;免疫荧光法检测miRNA 21候选靶基因PDCD4蛋白表达的改变。结果 AMO-miR-21与As2O3联合使用后,IC50从2.10 μmol/L降低到1.23 μmol/L,敏感性提高到单用As2O3的1.78倍;AMO-miR-21联合As2O3组细胞凋亡明显增加（P<0.05）;单独转染AMO-miR-21可显著抑制K562细胞中miRNA-21的表达水平（P<0.01),同时抑癌基因PDCD4蛋白表达明显增加（P<0.05）。结论 AMO-miR-21与As2O3联合使用可提高K562细胞对As2O3的敏感性,为白血病的治疗提供了新的方法。AMO-miR-21通过靶向抑制miRNA-21,进而上调抑癌基因PDCD4的表达而发挥抗肿瘤作用。     

葛根总黄酮联合三氧化二砷体外诱导NB4-R1细胞凋亡的实验研究

目的:探讨葛根总黄酮联合三氧化二砷(As2O3)对维甲酸耐药细胞株NB4-R1增殖及凋亡的影响。方法:采用葛根总黄酮(0、10、30、50μg/mL)联合As2O3(1μmol/L)处理NB4-R1细胞24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态改变;流式细胞仪检测细胞周期变化;FITC-AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白表达。结果:(1)一定浓度葛根总黄酮对NB4-R1细胞生长有抑制效应,呈剂量和时间依赖性,相同条件下,葛根总黄酮联合1μmol/L As2O3对NB-R1细胞抗增殖作用强于单用葛根总黄酮,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)FITC-Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡结果发现葛根总黄酮(0、10、30、50μg/mL)及葛根总黄酮联合1μmol/L As2O3处理NB4-R1细胞48 h后,早期凋亡率呈浓度依赖,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)瑞氏染色,在光镜下观察到葛根总黄酮和葛根总黄酮+As2O3联用组呈现不同程度的细胞凋亡形态学特征,且联用组较单药组明显。(4)流式细胞术检测细胞周期变化发现葛根总黄酮和葛根总黄酮+As2O3联用可影响细胞进程,表现为S期细胞增多,葛根总黄酮+As2O3联用组比各单用葛根总黄酮组Sub-G1增加更为明显。(5)Western blottimg结果显示葛根总黄酮可上调NB4-R1细胞中JNK表达,下调ERK1/2表达。结论:低浓度葛根总黄酮体外对维甲酸耐药细胞株NB4-R1细胞具有增殖抑制作用,呈时间-浓度依赖性,与1μmol/L As2O3具有协同作用;其诱导凋亡作用机制可能为阻滞NB4-R1细胞周期进程,激活JNK途径,下调ERK通路。     

Homoharringtonine-induced apoptosis of human leukemia HL-60 cells is associated with down-regulation of telomerase

Homoharringtonine (HHT), first isolated from the Chinese evergreen Cephalotaxus Harringtonia, has been shown inhibiting activity in leukemia in initial studies in China and in later studies in the US, but the detailed mechanism of action is still unclear. The goal of the experiments shown here is to explore the effect of HHT on the telomerase activity and apoptosis of human leukemia HL-60 cells. The telomerase activity of HL-60 cells was examined by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP)--an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Apoptosis was analyzed by morphological observation, DNA agarose gel electrophoresis, flow cytometry (FCM), and TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL). After treatment with HHT at 5-500 microg/l for 48 hours, the level of telomerase activity in HL-60 cells decreased in a dose-and time-dependent manner. Simultaneously, HL-60 cells underwent apoptosis. In conclusion, our data suggest that HHT can inhibit the telomerase content of HL-60 cells effectively and induce apoptosis.