脑益康对阿尔茨海默病大鼠tau蛋白过度磷酸化及其相关酶类表达的影响

目的探讨脑益康对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化及其相关酶类表达的影响。方法采用β-淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）右侧海马注射制备AD大鼠模型,免疫组化法和Western blot法检测大鼠海马神经元tau蛋白在Ser404位点的磷酸化水平、蛋白磷酸酯酶2A（PP-2A）的表达情况,ELISA法检测糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）蛋白的水平。结果AD模型组大鼠海马组织p-tau（Ser404）、GSK-3β表达增加,PP-2A表达减少,与假手术组的差异有高度统计学意义（P〈0.01）;脑益康治疗组大鼠的p-tau（Ser404）、GSK-3β表达显著减少,PP-2A表达显著增加,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论脑益康可通过增加PP-2A的表达和抑制GSK-3β的表达减轻AD模型大鼠tau蛋白的过度磷酸化。     

吡格列酮对AD大鼠模型学习记忆及GSK-3β、p-tau蛋白的影响

目的观察吡格列酮对阿尔茨海默病（AD）大鼠模型学习记忆能力及海马糖原合成激酶3-β（GSK-3β）活性、tau蛋白异常磷酸化（p-tau）的影响,为临床防治AD提供一条新的思路。方法健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为4组,除对照组外其余组大鼠海马CA1区注射冈田酸（OA）制备AD模型;低、高吡格列酮组给予吡格列酮灌胃4周,其余组给生理盐水灌胃;通过水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力;免疫组化法观察各组大鼠海马GSK-3β活性、tau蛋白异常磷酸化。结果与对照组相比,模型组学习记忆能力明显下降（P〈0.05）,海马GSK-3β、tau蛋白磷酸化的表达明显增多（P〈0.05）;与模型组相比,低、高吡格列酮组学习记忆能力明显提高（P〈0.05）,海马GSK-3β、tau蛋白磷酸化的表达明显减少（P〈0.05）,而低、高吡格列酮组二者相比无明显差异（P〉0.05）。结论吡格列酮可改善AD大鼠模型学习记忆能力,可能与降低GSK-3β活性、减少tau蛋白过度磷酸化有关。     

天麻素对阿尔茨海默病小鼠的脑内氧化应激及tau蛋白磷酸化的影响

目的研究天麻素对AD模型小鼠脑内氧化应激及tau蛋白磷酸化水平的影响。方法实验分为正常对照组、AD模型组(tau转基因小鼠)和天麻素治疗组,治疗组小鼠选取tau转基因小鼠,隔日给予天麻素[5 mg/(kg·d)]灌胃处理3个月,对照组和模型组小鼠(tau转基因小鼠)则均给予生理盐水灌胃处理。通过分子生物学及形态学相关技术检测各组小鼠脑内p-tau202磷酸化水平及CHAT的表达;并考察氧化应激相关指标的变化。结果 Western blot及免疫荧光结果显示,模型组小鼠脑内p-tau202的表达高于对照组小鼠,而天麻素治疗组小鼠脑内p-tau202的表达水平较模型组小鼠降低;氧化应激结果显示,天麻素干预处理后,小鼠脑内的MDA含量降低,SOD活性明显升高;Western blot结果显示,与模型组小鼠相比较,天麻素治疗组小鼠脑内CHAT表达水平降低。结论天麻素能够通过减少氧化应激进而降低AD模型小鼠脑内tau蛋白的磷酸化水平,最终起到对神经元的保护作用。     

CIP2A 在阿尔茨海默病发病中的作用和机制研究

目的：阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是最常见的老年痴呆症,其特征性病变是过度磷酸化的tau 蛋白聚集形成的神经元纤维缠结（neurofi brillary tangles,NFT）和β淀粉样蛋白（β-amyloid protein,Aβ）沉积形成的老年斑（senile plaques,SP）。蛋白磷酸脂酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）在AD 脑中活性抑制并参与调节tau 蛋白和Aβ前体APP 磷酸化,从而促进tau 病变和淀粉样病变,但PP2A 抑制的上游机制未阐明。癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A) 是一种新发现的内源性PP2A 抑制子,其在脑中的功能和在AD 发病中的作用到目前为止无相关报道。本研究旨在阐明CIP2A 是否通过调节PP2A 参与AD 样病变及其机制,为AD 的防治提供新的分子靶点。方法：在人脑样本,用免疫印迹检测AD 病人和对照组CIP2A 的表达;在细胞水平,在HEK-tau,N2a-APP 和原代神经元过表达CIP2A,检测tau 病变、淀粉样病变和突触退变损伤;在整体水平,采用腺病毒注射感染C57 小鼠,检测认知功能、tau 病变、淀粉样病变和突触退变损伤情况。结果：CIP2A 在AD 脑内表达水平增高并与PP2A 活性负相关;在HEK-tau 细胞和原代神经元中过表达CIP2A 导致PP2A 活性下降,tau 蛋白过度磷酸化并在树突和树突棘中聚集,树突棘数目减少,突触功能障碍;在N2a-APP 细胞中过表达CIP2A 导致APP 磷酸化,Aβ产生和释放增加;整体动物海马注射AAV 过表达CIP2A 导致动物出现AD 样空间学习记忆能力障碍,脑中出现tau 病变,Aβ产生增加,神经元退变。结论：CIP2A 通过抑制PP2A 活性参与调节tau 蛋白和APP 磷酸化,从而促进AD 样tau 病变、淀粉样病变和神经退变。因此,抑制CIP2A 可能底物特异性活化PP2A 从而逆转AD 样病变。     

胡黄连苷Ⅱ通过增强自噬改善Aβ模型小鼠的学习和记忆功能

目的 探究胡黄连苷（picroside Ⅱ,PicrⅡ）对体内外阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）模型的学习和记忆功能及自噬相关机制。方法 通过Western blot检测在PicrⅡ（12.5~400 μmol/L）对AD细胞模型中β淀粉样前体蛋白（β-amyloid precursor protein,APP）、β-位点淀粉样前体蛋白切割酶1（β-site APP-cleaving enzyme 1,BACE1）、早老素蛋白1（presenilin 1,PS1）和APP羧基末端片段（carboxyl terminal fragment of β-amyloid precursor protein,CTF）蛋白表达影响,以及PicrⅡ和氯喹（Chloroquine,CQ）（50 μmol/L）或巴佛洛霉素（bafilomycin A1,BafA1）（10 μmol/L）共处理后对APP、BACE1、PS1、C99、螯合体1（sequestosome 1,p62）、微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein light chain 3,LC3）、泛素化蛋白的表达影响;利用免疫荧光分析自噬通量;后期构建β-淀粉蛋白（amyloid β,Aβ）模型小鼠,分为WT+PBS组、WT+PicrⅡ组、Aβ+PBS组和Aβ+PicrⅡ组（20 mg/kg）,通过Morris水迷宫实验验证小鼠学习和记忆功能,并检测小鼠海马蛋白中P62与LC3蛋白水平。结果 Western blot显示：与对照组相比,PicrⅡ（50 μmol/L）可显著降低APP（60.46±7.97,Ｐ=0.049）及相关代谢产物蛋白水平,并降低P62[（65.31±3.51）％,Ｐ=0.041]水平,增加LC3Ⅱ[（162.01±12.24）%,Ｐ<0.001]水平,并且在CQ作用下,PicrⅡ可降低P62[（147.24±10.69）%,Ｐ<0.001]及LC3水平[（826.23±39.18）%,Ｐ<0.001];自噬通量分析显示：与对照组相比,PicrⅡ增加总荧光数（23.24±1.50,Ｐ<0.001）和红色荧光数（3.52±0.33,Ｐ<0.001）;行为学结果显示：与WT+Aβ组相比,Aβ+PicrⅡ组学习（F=17.25,Ｐ<0.001）与记忆能力（F=6.627,Ｐ<0.001）提高,且小鼠海马蛋白中Aβ+PicrⅡ组P62降低[（176.66±11.47）%,Ｐ=0.023],LC3Ⅱ升高[（81.20±3.69）%,Ｐ<0.001]。结论 PicrⅡ可通过促进自噬体-溶酶体融合和提高自噬通量增强自噬,从而促进Aβ清除并改善其引起的学习和记忆障碍。     

微管相关蛋白tau转基因细胞和动物模型的建立及tau蛋白病变表征

目的 构建并表征tau及突变tau蛋白细胞和动物模型,检测模型tau蛋白及磷酸化tau蛋白表达情况及微管的形态,为tau蛋白及相关疾病的研究提供疾病模型。方法 将不同的质粒分别转染到HEK293细胞中,构建过表达野生型tau以及P301L/P301S突变tau的细胞模型。引进并繁育rTg4510小鼠（P301L突变tau转基因小鼠）以及PS19小鼠（P301S突变tau转基因小鼠）。通过Western blotting法检测总tau及磷酸化tau蛋白的表达,应用免疫组织化学的方法检测转基因小鼠脑内磷酸化tau蛋白的表达情况,应用免疫荧光的方法检测HEK293细胞微管形态的变化。结果 本研究成功构建过表达tau蛋白的细胞模型,繁育了两种tau转基因小鼠,在这些模型中tau蛋白表达及tau蛋白的磷酸化水平显著高于对照组。在不同突变类型的细胞和动物模型中,tau蛋白不同位点的磷酸化水平变化以及微管形态变化略有差异。结论 本研究成功构建了P301L/P301S突变tau蛋白的细胞和动物模型,这些模型均表现了显著的tau蛋白过度磷酸化的病变,并引起了细胞微管形态或tau蛋白病理的变化,进而为包括AD在内的tau蛋白病变提供了实验模型。     

维生素E对Alzheimer病模型大鼠海马过磷酸化tau蛋白含量的影响

目的:通过氧化应激途径,探讨维生素E(Vit E)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑内磷酸化tau蛋白的影响.方法:36只大鼠随机分为假手术组、AD模型组、AD模型治疗组,每组12只.以淀粉样a蛋白左侧杏仁核注射制备AD大鼠模型,假手术组仅注射等量的溶剂.模型治疗组以胃管注入VitE 10 mg/d.Y迷宫检测大鼠学习记忆功能;免疫组化方法测定大鼠海马Pser-262-tau的表达.结果:AD模型治疗组的记忆功能虽不如假手术组(P<0.01),但比AD模型组则有改善(P<0.01).Vit E减少AD模型大鼠海马磷酸化tau蛋白的含量(P<0.01).结论:Vit E能改善AD大鼠的学习记忆功能,且使AD大鼠的海马tau蛋白表达下降,提示Vit E对AD大鼠的tau蛋白过度磷酸化具有保护作用.     

脑胰岛素信号在阿尔兹海默症模型小鼠渐进过程中的改变

目的：探讨阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）形成过程中脑胰岛素信号及葡萄糖转运体（glucose transporters,GLUTs）表达的改变,为AD早期诊断提供依据。方法：借助APP/PS1转基因AD模型小鼠,运用Western blot检测该模型鼠皮层和海马区域胰岛素信号通路相关蛋白的表达。结果：与对照组相比,AD模型鼠在3月龄时,表现为脑胰岛素信号应激性激活,下游AKT/GSK3β等胰岛素信号分子磷酸化水平升高,而GLUTs此时表达变化不明显;5月龄时,该模型表现为脑胰岛素信号磷酸化水平显著下降,其下游AKT/GSK3β等信号分子磷酸化水平表达下调,同时观察到海马中GLUT3、GLUT4表达下调,AD病理性蛋白（APP）、Tau蛋白磷酸化水平显著增加。结论：胰岛素信号紊乱和葡萄糖转运体在AD形成过程中发生紊乱,且随年龄增长,具有紊乱加剧的趋势。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型诱导人成神经细胞瘤细胞SH-SY5Y表达β-淀粉样蛋白

目的 探讨单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）感染对人成神经细胞瘤细胞SH-SY5Y β-淀粉样蛋白（Aβ）表达的影响。方法 通过非洲绿猴肾细胞Vero扩增HSV-1,测定病毒滴度。取感染复数（MOI）为10的3.2×10⁸ PFU/mL HSV-1分别感染SH-SY5Y细胞12、24 h,显微镜下观察SH-SY5Y细胞的形态变化,使用PCR检测细胞中HSV-1 DNA的表达;双色免疫荧光检测SH-SY5Y细胞中Aβ和载脂蛋白E（ApoE）的表达;蛋白质印迹法检测淀粉样蛋白前体（APP）、黑素代谢酶（MME）、ApoE、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、磷酸化糖原合成酶激酶3β（p-GSK-3β）蛋白的表达。结果 HSV-1感染SH-SY5Y细胞12 h后,镜下可见细胞突触减少,突起回缩;感染24 h后细胞开始聚集,呈圆形,并有细胞脱落。与磷酸盐缓冲液（PBS）对照组相比,HSV-1感染12 h后细胞中Aβ表达增加（P<0.01）,ApoE蛋白表达无明显改变;感染24 h后,Aβ表达仍增加（P<0.05）,但弱于12 h时（P<0.01）,APOE蛋白表达增加（P<0.01）。蛋白质印迹分析结果显示,与PBS对照组比较,HSV-1感染12 h后细胞中APP蛋白的表达水平降低（P<0.05）,GSK-3β总蛋白的表达水平增加（P<0.05）且磷酸化活性增强（P<0.05）,MME蛋白的表达水平增加（P<0.05）;感染24 h时MME蛋白的表达水平降低（P<0.05）,ApoE蛋白的表达水平增加（P<0.05）。结论 HSV-1感染后可诱导SH-SY5Y细胞Aβ表达增加,在感染12 h时可能通过促进APP代谢、GSK-3β Ser9磷酸化诱导Aβ产生,而在24 h时主要是通过抑制Aβ降解促使Aβ表达增加。     

实验性阿尔茨海默病小鼠海马中磷酸酶及张力蛋白同源基因水平的变化

目的：探讨铝毒性拟阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）小鼠诱导发生发展过程中小鼠海马组织中磷酸酶与张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN）以及磷酸化PTEN水平的动态变化。方法：侧脑室注射（icv）0.5%AlCl3溶液（溶解在人工脑脊液中）2μL,每天1次,连续5 d,诱导实验性AD小鼠模型;末次icv后d 2、d 7采用避暗法,d 23~d 30天采用Morris水迷宫法检测小鼠学习记忆能力;Western Blotting法测定小鼠海马组织PTEN及磷酸化PTEN蛋白的水平。结果：模型组小鼠被动回避能力及空间学习记忆能力呈进行性障碍。在末次icv后d 2、d 7 2个时间点上,模型组小鼠脑内海马组织PTEN、磷酸化PTEN-Ser380蛋白水平与对照组比较均未见显著差异;而在d 30时间点上,模型组小鼠海马组织Ser380位点磷酸化PTEN蛋白水平显著低于对照组,但PTEN蛋白水平未有显著差异。结论：铝毒性拟AD小鼠模型发展后期其海马组织磷酸化PTEN蛋白水平显著降低。     

脑灵汤对阿尔茨海默病模型大鼠行为学 及海马CA3区域淀粉样前体蛋白表达的影响

目的：探讨脑灵汤对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马CA3区APP蛋白表达的影响,并揭示AD发病的部分机制和脑灵汤可能的作用机制。方法：选取40只SPF清洁级SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、AD组、脑灵汤组和脑复康组,每组8只,喂养1周后,采用Aβ1 42注射大鼠海马法制成大鼠模型,再喂养28 d,治疗后用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆行为能力, HE染色检测大鼠海马组织形态学变化,免疫组织化学法观察APP蛋白在大鼠海马CA3区中的表达。结果：Morris水迷宫实验结显示：AD大鼠组的隐匿平台逃避潜伏期延长（P＜0.05）,在探索实验中,AD大鼠存在记忆障碍（P＜0.05）,而脑灵汤治疗后可使AD大鼠的逃避潜伏期缩短（P＜0.05）,大鼠平均探索次数明显增多（P＜0.05）。AD组大鼠海马CA3区锥体细胞排列紊乱,有细胞缺失的现象,APP蛋白表达增多,脑灵汤治疗后可改善CA3区椎体细胞的病理改变以及降低APP蛋白的表达。结论：脑灵汤能明显改善AD模型大鼠低下的空间学习记忆能力,降低模型大鼠海马CA3区APP表达,对老年性痴呆大鼠学习记忆能力可能有提高作用。     

7月龄及16月龄APP/PS1/tau三转基因小鼠脑内突触相关蛋白的变化及山茱萸环烯醚萜苷的影响

目的 探讨不同月龄APP/PS1/tau三转基因（3×Tg）小鼠脑内突触相关蛋白及其影响因素的变化,为选择合适时程的3×Tg小鼠进行阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD）研究提供参考数据;并且研究山茱萸环烯醚萜苷（cornel iridoid glycoside,CIG）对模型小鼠脑内突触相关蛋白的影响,从而明确其对不同月龄的模型动物的作用特点,为阐明CIG改善AD样认知障碍机制提供实验依据。方法 7月龄小鼠3×Tg小鼠给予200 mg/kg CIG至9月龄,16月龄3×Tg小鼠给予100或200 mg·kg^-1·d^-1 CIG至18月龄;采用新物体识别实验检测CIG对学习记忆的影响;采用Western blotting方法检测突触相关蛋白synapsin-1、synaptophysin和synaptotagmin的表达,淀粉样前体蛋白（amyloid precurson protein,APP）及相关代谢酶α分泌酶（recombinant a disintegrin and metalloprotease 10,ADAM10）、β分泌酶（β-site APP-cleaving enzyme 1,BACE1）、早老素1（presenilin-1,PS1）、胰岛素降解酶（insulin degrading enzyme,IDE）的表达,tau蛋白在pSer404及pSer199/202位点的磷酸化水平。结果 7月龄3×Tg模型小鼠与对照组小鼠相比,物体识别分辨指数无明显变化,主要突触相关蛋白synapsin-1、synaptophysin和synaptotagmin的表达没有差异,CIG给药未对3×Tg模型小鼠分辨指数及脑内突触相关蛋白产生影响;16月龄3×Tg小鼠物体识别分辨指数明显降低,synapsin-1在脑内表达水平均相比对照组下降,而给予CIG治疗后不仅能够提高转基因小鼠的分辨指数,而且明显提升synapsin-1的表达。7月龄3×Tg小鼠模型与对照组全长APP、ADAM10、BACE1、PS1、IDE及tau蛋白磷酸化水平比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 突触相关蛋白在不同月龄3×Tg小鼠脑内表达差异较大,CIG对不同月龄3×Tg小鼠脑内突触相关蛋白的表达及认知功能存在不同作用特点。     

知母皂苷B对大鼠海马注射β-AP(25～35)致tau蛋白磷酸化的影响

目的 观察大鼠双侧海马注射β淀粉样肽[β-AP（25～35）]后,海马内p53、Wnt途径抑制剂DKK和磷酸化tau蛋白表达变化,并用此动物模型观察知母皂苷B的作用。方法 用RT-PCR法检测p53和DKK mRNA表达的变化,用免疫组化法检测磷酸化的tau蛋白。结果 AD模型组海马内神经元的tau蛋白过度磷酸化,而p53和DKK mRNA的表达与假手术对照组相比也显著增多：而知母皂苷B给药治疗组均可使这种现象得到明显改善。结论 知母皂苷B可通过抑制β—AP引起的p53及其后续的DKK的表达增加而有效改善AD大鼠脑内神经元的tau蛋白过度磷酸化。     

Exendin-4对AD样学习记忆减退的保护作用及其机制的研究

【立论依据】 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease AD)是一种慢性神经退行性疾病。异常过度磷酸化的细胞骨架蛋白Tau和神经丝(NFs)是早期病理改变,与胰岛素信号的失调存在密切关系。艾塞那肽Exendin-4是哺乳动物胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide 1, GLP-1)受体的有效激活剂,能够增加葡萄糖的利用和代谢,与脑内GLP-1R结合后有神经保护作用。 【设计思路】 采用胰岛素抵抗的AD动物模型,研究艾塞那肽对AD样认知、记忆减退和神经纤维退行性变的影响;检测动物的学习记忆能力、胰岛素信号分子、NF的糖基化和磷酸化、突触素的表达水平,进一步阐明胰岛素信号和神经纤维退行性变的关系和可能的机制。 【实验内容】 (1)实验分组:本实验采用PS1/APP/Tau三转基因鼠(3×Tg-AD)和c57BL6小鼠(野生鼠),每种小鼠分4组:①、②组高糖高脂饲料饲养8周,腹腔注射STZ一次建立Ⅱ型糖尿病模型;③、④组腹腔注射生理盐水。①、③组皮下注射Exendin-4,给药治疗8周,②、④组不给药,等量注射生理盐水8周。(2)Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力。(3) 处死小鼠,迅速取脑,左半脑置于10%中性甲醛固定,病理切片用于免疫组织化学荧光。右半脑组织裂解匀浆,蛋白质印迹技术检测小鼠脑组织相关蛋白的改变。 ELISA检测各组小鼠脑内Aβ40和42的沉积。 【材料】 动物:PS1/APP/Tau三转基因鼠(3×Tg-AD)、c57BL6小鼠(野生鼠);试剂:链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)、艾塞那肽(Exendin-4 ) 【可行性】 本团队前期Exendin-4对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护性实验,提示Exendin-4的保护作用,给我们后期动物实验打下的基础。 【创新性】 (1)本设计采用的Tau/APP/PS1三转基因小鼠,建立同时具有NFT和SP两种病理改变和学习记忆障碍的动物模型,能更好的模拟临床AD的发病过程和病理特征。(2)本设计建立胰岛素抵抗的AD模型,有利于阐明了胰岛素信号转导途径的失调在 AD的发病的重要作用。(3)本项目所要阐明的实验现象和机制,还没有相关的研究报告,有很好的创新性和前沿性。     

叶酸联合维生素B12对糖尿病大鼠记忆能力及Tau蛋白过度磷酸化影响

目的：研究糖尿病大鼠脑内各磷酸化位点的变化,探讨叶酸联合维生素B12对糖尿病模型大鼠学习记忆能力及脑内tau蛋白过度磷酸化的影响。方法：糖尿病大鼠用链脲佐菌素腹腔注射制备,实验组予以叶酸联合维生素B12干预。采用Morris水迷宫检测各组大鼠空间记忆及学习能力;用蛋白免疫印迹法观察各组大鼠额叶皮层脑组织总tau、tau部分位点磷酸化变化。结果：（1）Morris水迷宫结果：1型、2型糖尿病组大鼠逃避潜伏期较对照组及单纯药物干预组明显延长（P〈0.05）,使用叶酸联合维生素B12干预相应模型组后均能显著改善（P〈0.05）。（2）叶酸联合维生素B12对糖尿病大鼠脑内tau蛋白过度磷酸化影响：各组大鼠额叶皮层脑组织总tau蛋白含量比较差异无统计学意义（P〉0.05）;1型、2型糖尿病组大鼠额叶皮层脑组织tau蛋白在丝氨酸396/404位点、苏氨酸205位点、苏氨酸212位点的磷酸化水平较对照组及单纯药物干预组明显增高,差异有统计学意义（P〈0.05）,使用叶酸联合维生素B12干预后,以上位点磷酸化水平均有明显下降（P〈0.05）。结论：糖尿病大鼠脑组织内tau蛋白出现阿尔茨海默病样过度磷酸化;叶酸联合维生素B12干预后可逆转病变,发挥保护脑组织作用。     

蛋白激酶5与微管相关蛋白tau磷酸化的关系

阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD）是一种以进行性痴呆为特征的神经退行性疾病,以严重的记忆减退和认知障碍为主要临床表现。目前有关AD的发病机制尚不甚明了。过度磷酸化的tau蛋白组成的神经原纤维缠结（NNF）是AD的主要神经病理学特征之一。细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶5（cyclin-dependent kinase 5,edk 5）主要在神经系统中激活,是脑发育、神经定位、突触发生与传递的重要调节因子,参与了AD病人脑内tau蛋白的异常磷酸化,在AD的发病过程中可能发挥重要作用。本文简要介绍cdk5的结构及其分布部位,tau蛋白的结构与功能,对cdk5对微管相关蛋白tau磷酸化的关系进行了初步的探讨,为临床防治AD提供一些新的思路。     

Aβ杏仁核注射对大鼠异常磷酸化tau蛋白表达的影响

目的：观察AD对异常磷酸化tau蛋白表达的影响。方法：本研究采用Aβ5～35片段单侧杏仁核注射，建立SD大鼠痴呆及记忆障碍动物模型。通过Morris水迷宫试验、放射免疫法、免疫组化法等观测大鼠空间学习记忆能力、胆碱能系统、tau蛋白异常磷酸化的改变。结果：模型大鼠的空间学习记忆能力明显障碍；ChAT活性及M受体Rt值均显著降低；海马及额皮层异常磷酸化tau蛋白AT8表达显著增高。结论：Aβ杏仁核单侧注射可诱导大鼠空间学习记忆障碍及胆碱能系统功能损害，同时伴有皮层、海马部位tau蛋白的异常磷酸化。AB是AD发生、发展的关键因素。     

人参皂苷Rg1对冈田酸所致大鼠脑片tau蛋白磷酸化的影响

目的：观察人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病（Alzhei mer＇s disease,AD）样tau蛋白磷酸化大鼠脑片模型中磷酸化tau蛋白（phosphorylatedtau protein,P-tau）、蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）及tau蛋白表达的影响,以研究其对tau蛋白磷酸化的抑制作用机制。方法：将5周龄雄性Wistar大鼠脑片（含皮层和海马）随机分为空白对照组、模型组和低、中、高浓度人参皂苷Rg1组,每组10张脑片。脑片置于人工脑脊液中培养。人参皂苷Rg1组培养液中首先加入人参皂苷Rg1使其浓度分别为60、120和240μmol/L,作用2h。模型组和3个浓度人参皂苷Rg1组培养液中分别加入冈田酸（okadaic acid,OA）,使其浓度分别为1μmol/L,作用3h,空白对照组不加任何处理。采用免疫组织化学染色、图像分析技术等方法,检测皮层和海马P-tau、PP2A和tau蛋白的表达水平。结果：与空白对照组比较,模型组P-tau蛋白的表达增加（P〈0.01）,PP2A和tau蛋白的表达水平降低（P〈0.01,P〈0.05）;3个浓度人参皂苷Rg1组与模型组比较,P-tau蛋白的表达减少（P〈0.01）,PP2A和tau蛋白的表达增加（P〈0.01,P〈0.05）,其中以高浓度人参皂苷Rg1效果最佳。结论：人参皂苷Rg1可以上调AD样tau蛋白磷酸化大鼠脑片模型中PP2A的表达从而促进P-tau的去磷酸化,以此途径抑制tau蛋白磷酸化。     

以tau 为靶点的拟AD 模型及其在药理学研究中的应用

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是老年人中发病率最高的神经退行性疾病。目前临床缺乏治疗AD 的有效药物。以往以Aβ为靶点的药物研究均告失败,AD 患者另一典型病理变化- 微管相关蛋白tau 异常过度磷酸化,越来越引起研究者的关注。tau 蛋白磷酸化受蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）和蛋白磷酸激酶糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthasekinase-3β,GSK-3β）等的共同调节。开发PP2A 激活剂和GSK-3β抑制剂成为目前AD 药物研究的新策略。
目前国际较为认可的以tau 为靶点的拟AD 动物模型为P301L 突变转基因动物模型、P301S突变转基因动物模型和APP-PS1-P301L 三转基因动物模型。细胞模型包括：过表达tau40 的基因转染细胞、过表达P301L/P301S 的基因转染细胞、PP2A 抑制剂冈田酸或GSK-3β激活剂WT/GFX处理的细胞模型等。
山茱萸环烯醚萜苷（Cornel iridoid glycoside,CIG）是我室从山茱萸中提取的主要有效部位。我室前期研究发现,CIG 在冈田酸拟AD 细胞模型上能够抑制tau 蛋白过度磷酸化,但其作用机制尚不清楚。我课题组从GSK-3β通路和PP2A 通路两方面,研究CIG 抑制tau 蛋白过度磷酸化的作用机制,为研发治疗AD 的创新药物提供实验依据。
我们的研究发现：在tau 蛋白过度磷酸化的4 个细胞模型和3 个动物模型上,CIG 能够降低tau 蛋白在多个位点的过度磷酸化,其作用机制包括：CIG 可直接降低PP2A 催化亚基C 的去甲基化及磷酸化以提高PP2A 活性,从而促进tau 蛋白的去磷酸化;也可通过减少GSK-3β抑制GSK-3β活性,从而减低tau 蛋白的磷酸化。CIG 能够抑制神经细胞和动物脑内tau 蛋白过度磷酸化,具有治疗AD 的应用前景。     

调心方对杏仁核注射Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病模型大鼠的影响

目的 研究调心方(HBR)对杏仁核注射β淀粉样蛋白(Aβ25-35)致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠相关病理变化的作用。方法 单侧杏仁核注射Aβ25-35造成AD大鼠模型，采用Morris水迷宫法、放射免疫法、免疫组化法、RT—PCR法，以Aricept为对照，观察HBR对AD模型大鼠的空间学习记忆能力、胆碱能系统、Aβ1-40沉积、tau蛋白异常磷酸化及脑额叶皮层内APPmRNA表达的影响。结果 HBR可显著改善Aβ25-35诱导的AD大鼠空间学习记忆障碍，提高模型大鼠的胆碱乙酰化转移酶(ChAT)活性及M受体结合容量(Rt)值，减少APPmRNA的表达和Aβ1-40的沉积，抑制tau蛋白的异常磷酸化。结论 HBR对Aβ25-35诱导的AD大鼠空间学习记忆障碍及胆碱能系统损害具有显著改善作用，可以明显减轻Aβ1-40的沉积和tau蛋白的异常磷酸化。