HPLC法测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B1、B2和B6含量

摘 要 目的:建立HPLC法测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B₁、维生素B₂和维生素B₆含量的方法。方法: 采用Insteril ODS-3色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相：0.01 mol·L^-1庚烷磺酸钠（含0.25%三乙胺,用冰醋酸调节pH至3.8)-甲醇（75∶25）,柱温30℃,检测波长为280 nm,流速：1.0 ml·min^-1。结果: 维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆分别在3.98～99.40 μg·ml^-1（r=0.999 7）、4.08～101.91μg·ml^-1（r=0.999 9）、2.08～52.00 μg·ml^-1（r=0.999 9）范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.18%、99.53%、99.27%,RSD分别为0.60%、0.67%、0.71%(n=9)。结论:本法简便、快速、准确,可用于复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B₁、维生素B₂和维生素B₆的含量测定     

HPLC法同时测定复方三维右旋泛酸钙糖浆中4中维生素的含量

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定复方三维右旋泛酸钙糖浆中维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆和烟酰胺的含量。方法 采用外标法进行测定,色谱柱为Thermo Betasil C₁₈ Analytical(4.6 mm×250 mm, 5 μm),流动相为乙腈-5 mmol·L^-1十二烷基硫酸钠（含0.05%甲酸）水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长260 nm,柱温30 ℃。分别测定10批复方三维右旋泛酸钙糖浆。结果 维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆、烟酰胺4种成分的线性范围分别为5.76~115.2 μg·mL^-1(r=0.999 9)、1.16~23.20 μg·mL^-1(r=0.999 9)、1.72~34.4 μg·mL^-1(r=0.999 6)和5.76~115.2 μg·mL^-1(r=0.999 9),平均加样回收率为96.2%~98.4%(RSD为2.14%~3.42%)。不同批次复方三维右旋泛酸钙糖浆中维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆、烟酰胺含量范围分别为0.133 7~0.155 9、0.027 86~0.030 71、0.039 05~0.047 7、0.138 7~0.148 2 mg·g^-1。结论 该方法为完善复方三维右旋泛酸钙糖浆的质量标准和加强质量控制提供了新的方法和依据。     

流动注射化学发光法测定维生素B2

目的建立一种简便、快速、灵敏度高的流动注射抑制化学发光测定维生素B₂的新方法。方法 以维生素B₂对luminol-K₃Fe(CN)₆化学发光体系的抑制作用为基础,在流动注射系统中用固定化试剂技术完成对试样的测定。结果测定的线性范围为0.01～1.0 μg·mL^-1,检测限为4.0 ng·mL^-1 (3σ),RSD小于3.0%(n=7)。并对药品和生物材料中的常见干扰物质进行了试验。结论维生素B₂化学发光传感器可连续使用450次以上,并成功地用于药物中维生素B₂的测定。     

HPLC法测定复方维生素B6凝胶剂中维生素B6与醋酸氟轻松的含量

摘 要 目的：建立复方维生素B₆凝胶剂中维生素B₆与醋酸氟轻松的含量测定方法。方法: 采用HPLC法,色谱柱：Lichrospher CNC₁₈柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）;流动相：庚烷磺酸钠溶液（称取6.8 g磷酸二氢钾和1.0 g庚烷磺酸钠,加水溶解并稀释至1 000 ml）-甲醇-三乙胺（35∶65∶0.2）,用磷酸调pH至3.2;检测波长：238 nm;柱温：25℃;进样量：20 μl。结果: 维生素B₆在15.0～300.0 μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好（r=1.0000）,平均回收率为99.65%,RSD为0.3%（n=9）;醋酸氟轻松在0.4～8.0 μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好（r=0.999 0）,平均回收率为99.35%,RSD为0.85%（n=9）。结论:该方法简便,重复性好,测定的结果准确,可用于复方维生素B₆凝胶剂的含量测定。     

斑蝥酸钠维生素B6 联合顺铂及白介素-2 胸腔内热灌注治疗肺癌恶性胸腔积液观察

摘 要探讨斑蝥酸钠维生素B₆ 联合顺铂和白介素 2（IL 2）胸腔内热灌注治疗肺癌恶性胸腔积液的疗效和安全性。方法：70例确诊肺癌并首次出现胸腔积液的患者随机分为试验组和对照组各35 例,均行胸腔置中心静脉管闭式引流,排尽胸腔积液。此后试验组胸腔内热灌注斑蝥酸钠维生素B₆ 注射液、顺铂及IL-2;对照组胸腔内普通灌注顺铂及IL-2。两组均每周治疗1次,共治疗4周。比较两组患者的疗效、生活质量（KPS评分）、药品不良反应和胸腔积液复发情况。 结果：试验组有效率为82.5%,显著高于对照组（P＜0.01) 。两组患者治疗后KPS评分均较前显著提高（P＜0.05), 但组间差异无统计学意义(P＞0.05)。两组药品不良反应差异无统计学意义(P＞0.05) 。试验组患者胸腔积液近期复发率降低,且复发时间显著推迟（P＜0.05)。结论：与传统胸腔灌注化疗比较,斑蝥酸钠维生素B₆ 注射液、顺铂及IL-2联合经胸腔热灌注治疗肺癌恶性胸腔积液疗效较好,能改善患者生存质量,不良反应无明显增加,值得临床推广。     

CO2超临界流体色谱法同时测定莪术油中3个倍半萜类成分的含量

目的 建立CO₂超临界流体色谱法测定莪术油中呋喃二烯、牻牛儿酮和莪术二酮含量的方法。方法 采用ACQUITY UPC² HSS C₁₈ SB色谱柱（3.0 mm×150 mm,1.8 μm）,以CO₂-乙腈为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min^-1;检测波长为216 nm,柱温为55℃,背压为2 000 psi。结果 呋喃二烯在2.67~1 337.26μg·mL^-1内线性关系良好（r=1.000）,加样回收率为97.94%（n=6,RSD=1.50%）。牻牛儿酮在2.77~1 386.00 μg·mL^-1内线性关系良好（r=1.000）,加样回收率为96.07%（n=6,RSD=1.68%）;莪术二酮在6.99~3 493.00 μg·mL^-1内线性关系良好（r=1.000）,加样回收率为99.33%（n=6,RSD=1.88%）。结论 本方法快捷准确、稳定且绿色环保,可用于莪术油中上述3个倍半萜类成分的质量控制。     

白头翁皂苷B4栓剂改善大鼠痛风药效学研究

目的 研究白头翁皂苷B₄栓剂抗痛风作用。方法 应用混合脂肪酸甘油酯制备白头翁皂苷B₄栓剂;使用尿酸钠诱导大鼠急性痛风性关节炎模型,观察白头翁皂苷 B₄栓剂（9、18、36 mg·kg^-1,直肠给药）对大鼠踝关节肿胀度的影响,试剂盒法检测血清炎症因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,HE染色后观察踝关节组织病理学变化;使用氧嗪酸钾诱导大鼠急性高尿酸血症,给予别嘌醇（阳性药,22 mg·kg^-1,ip给药）和白头翁皂苷 B₄栓剂低 、中 、高剂量（9、18、36 mg·kg^-1）,试剂盒法检测大鼠血清中尿酸、黄嘌呤氧化酶（XOD）、尿素氮（BUN）水平,检测肝脏组织中尿酸、BUN、肌酐（CRE）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）水平,HE染色后检测肾脏组织病理学变化;使用角叉菜胶诱导大鼠足肿胀建立炎症动物模型,足容积测量仪观察白头翁皂苷 B₄栓剂对肿胀率的影响;使用甲醛诱导小鼠致痛模型,观察白头翁皂苷 B₄栓剂（13、26、52 mg·kg^-1）对舔足次数的影响。结果 与模型组比较,白头翁皂苷 B₄栓剂能够显著抑制尿酸钠诱导急性痛风性关节炎大鼠的关节肿胀（P＜0.05、0.01、0.001）,降低血清炎症因子 MCP-1、TNF-α、IL-6、IL-1β水平（P＜0.05、0.01、0.001）;降低氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症大鼠血清尿酸、XOD、BUN水平,降低肝脏中尿酸、BUN、CRE和MDA水平,升高肝脏中GSH-Px、CAT水平（P＜0.05、0.01、0.001）,改善肾脏组织病理改变;显著抑制角叉菜胶诱导大鼠足肿胀（P＜0.05）;显著减少甲醛诱导小鼠致痛模型的舔足次数（P＜0.01）。结论 白头翁皂苷B₄栓剂具有抗痛风性关节炎、抗急性高尿酸血症及抗炎镇痛作用。     

维生素B2和B6的同步荧光分析法及其在维生素复合制剂中的应用

本文建立了维生素B₂和B₆的同步荧光分析法。以△λ=58nm进行同步扫描所得的两个同步荧光峰(以发射波长表示,分别位于526nm和389nm)可用以同时分别定量维生素B₂和B₆。方法快速、灵敏。维生素B₂和B₆的工作曲线线性范围分别为0～1μg/ml和0～1.5μg/ml,检出限分别为0.5ng/ml和1ng/ml。方法已应用于三种复合维生素B制剂中维生素B₂和B₆的分析。     

HPLC测定绞股蓝中七叶胆苷XLVI和人参皂苷Rb3含量

目的 建立HPLC测定绞股蓝中七叶胆苷XLVI和人参皂苷Rb₃含量的方法。方法 采用Ultimate XB-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈（A）-水（B）线性梯度洗脱，检测波长203 nm，流速1 mL·min^-1，柱温30℃。结果 七叶胆苷XLVI在3.30~39.62 μg·mL^-1范围内线性良好（r²=0.999 7），平均回收率为113%，RSD为1.84%；人参皂苷Rb₃在3.27~39.26 μg·mL^-1范围内线性良好（r²=0.999 7），平均回收率为102%，RSD为2.82%。结论 该方法有较好的分离效果，准确性、精密度和重复性良好，为绞股蓝的研究和质量控制提供了科学依据。     

白头翁皂苷B5及其衍生物对脂多糖诱导急性肾损伤小鼠药效学研究

目的 酶水解法制备白头翁皂苷B₅的C-28位脱糖衍生物,探究白头翁皂苷B₅及其衍生物对脂多糖（LPS）诱导的急性肾损伤小鼠的药效学作用。方法 通过α-L鼠李糖苷酶水解白头翁皂苷B₅,分离纯化后得到其衍生物,采用ip LPS致雄性BALB/c小鼠急性肾损伤模型。将70只小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松（DEX,阳性药,5 mg·kg^-1）和白头翁皂苷 B₅低、高剂量（20、40 mg·kg^-1）组及白头翁皂苷 B₅衍生物低、高剂量（20、40 mg·kg^-1）组,每组 10只,造模前 2 h和造模后6 h给药。末次给药后6 h摘眼球取血,全自动生化仪计数血液中的白细胞（WBC）和中性粒细胞（Neu）;试剂盒法测定血清中肌酐（CRE）和尿素氮（BUN）水平;ELISA法检测血清和肾组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平;苏木素-伊红（HE）检测肾组织病理变化。结果 与模型组相比,白头翁皂苷 B₅组及其衍生物组小鼠的血清 WBC、Neu、CRE、BUN水平及血清和肾组织中 TNF- α、 IL-6、 IL-1β水平均显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）,肾组织损伤明显减轻。与白头翁皂苷B₅组相比,相同剂量下,白头翁皂苷B₅衍生物组可显著降低WBC、Neu和BUN的数量（P＜0.05、0.01、0.001）;在低剂量下可明显抑制小鼠血清中CRE的水平（P＜0.001）和肾组织中IL-6、IL-1β的释放（P＜0.001）;在高剂量下显著改善肾脏病理损伤程度。结论 白头翁皂苷B₅及其衍生物可以减轻由LPS诱导的急性肾损伤小鼠的肾脏组织损伤程度,相同剂量下,白头翁皂苷B₅的C-28位脱糖衍生物药效优于白头翁皂苷B₅。     

HPLC法测定四维钙片中维生素C、B1、B2的含量

目的：建立高效液相色谱法测定四维钙片中维生素C、维生素B1和维生素B2含量的方法.方法：采用SHISEIDOC18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以0.05％磷酸溶液（含0.005 mol·L-1己烷磺酸钠）-乙腈（88：12）为流动相,流速：1.0ml· min-1,检测波长：244 nm,柱温：30℃,进样量：20μm.结果：维生素C、维生素B1和维生素B2的线性范围分别为7.52～90.24 μg· ml-1（r=1.000 0）,1.32 ～15.82 μg·ml-1（r=1.000 0）和1.27～15.24μg·ml-1 （r=1.000 0）;平均回收率分别为101.63％、99.77％和100.25％,RSD分别为1.51％、1.48％和1.84％（n=9）.结论：本法操作简便,结果准确、可靠,可用于四维钙片中维生素C、B1、B2的含量测定.     

注射用维生素B6细菌内毒素检查法的研究

目的建立注射用维生素B6的细菌内毒素检查方法。方法根据中国药典2010年版二部附录细菌内毒素检查法,采用2个不同厂家的鲎试剂对注射用维生素B6进行研究。结果注射用维生素B6细菌内毒素检查限值为0.30 EU.mg 1,其最大不干扰浓度为0.208 mg.mL 1,用灵敏度为0.06 EU.mL 1或更高灵敏度的鲎试剂可进行检验。结论细菌内毒素检查法可用于注射用维生素B6中内毒素的检查。     

UPLC法测定维生素B4片的含量

目的:建立UPLC法测定维生素B4片中维生素B4的含量的方法.方法:采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)色谱柱,流动相为0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液-甲醇(90:10)(加0.5%的三乙胺,用H3PO4调pH至为4.0),流速为0.3 ml·min-1,柱温为50℃,检测波长为262 nm.结果:维生素B4在2.79～139.50 μg· ml-1浓度范围内,线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为100.2%,RSD为0.3%(n=9).结论:本方法简便准确,重复性好,可用维生素B4片的质量控制.     

HPLC法测定异烟肼维B6片中两组份的含量

目的：建立HPLC法测定异烟肼维B6片中异烟肼、维生素B6含量的方法。方法：采用Agilent Eclipse Plus C18（250mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以0.1%三乙胺溶液（加入20 mg辛烷磺酸钠,用磷酸调节pH至3.0±0.05）-甲醇（70∶30）为流动相,进样量为10μl,检测波长为291nm,流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃。结果：异烟肼、维生素B6分别在2.535~50.70μg（r=1.000 0）、0.136 8~2.735μg（r=1.000 0）范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.57%（RSD=0.89%）、99.59%（RSD=0.43%）（n=9）。结论：本法专属性强、结果准确、灵敏、操作简便,可用于本品的质量控制。     

维生素B2片含量测定方法的改进

目的:快速测定维生素B2片的含量及含量均匀度.方法:以0.3%(V/V)氨溶液为溶剂,超声5min使维生素B2溶解,再用UV法测定.结果:维生素B2在1.5～24.3μg/ml的浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),高、中、低浓度的加样回收率分别为99.9%、99.8%、99.6%;RSD分别为0.2%、0.2%、0.6%(n=3).结论:本法简便、快速,有较好的精密度和准确度.     

高效液相色谱法测定赖氨肌醇维B12口服溶液中维生素B12及肌醇的含量

目的:建立赖氨肌醇维B12口服溶液中维生素B12和肌醇的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,紫外及示差折光检测器,ODS柱和氨基柱分别测定维生素B12和肌醇含量.流动相分别为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(13∶87)用磷酸调节pH至3.0,乙腈-水(70∶30);检测波长分别为 361 nm 和 210 nm;流量:1.0 mL·min-1;进样体积:20 μL.结果:维生素B12和肌醇浓度分别在1.52～6.08 μg·mL-1和5.02～20.06 mg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率(n=9)分别为99.5%(RSD=0.76%)和99.4%(RSD=1.39%).结论:本法专属性强,结果准确,重现性好,适用于赖氨肌醇维B12口服溶液中维生素B12和肌醇的含量测定.     

斑蝥酸钠维生素B6注射液辅助治疗晚期宫颈癌疗效观察

目的：探讨斑蝥酸钠维生素B6注射液辅助治疗晚期宫颈癌中的疗效。方法：60例晚期宫颈癌患者随机分为观察组和对照组,对照组采用常规放化疗,化疗方案为DP方案,观察组在对照组基础上加用斑蝥酸钠维生素B6注射液。6周后比较两组近期疗效、骨髓抑制不良反应、免疫功能和生活质量。结果：观察组近期疗效总有效率66.7%,显著高于对照组（40.00%,P〈0.05）;骨髓抑制不良反应程度显著低于对照组（P〈0.05）。治疗后两组CD8＋、NK细胞、CD8＋/CD4＋均较治疗前显著改善（P〈0.05）,且观察组改善优于对照组（P〈0.05）。观察组生活质量改善率明显高于对照组（P〈0.05）。结论：斑蝥酸钠维生素B6注射液辅助治疗可显著提高晚期宫颈癌患者的近期疗效和免疫功能,减少骨髓抑制,改善患者的生活质量。     

维生素B2片溶出度测定研究

目的 用《中国药典》方法测定249批次维生素B₂片的溶出度,同时,考察其中6个厂家样品在4种不同pH值溶出介质中的溶出曲线,并对溶出度紫外法与HPLC测定法进行比较,为全面评价药品质量提供依据。方法 采用转篮法,4种不同溶出介质各600 mL,转速为100 r/min,检测波长444 nm;HPLC测定溶出度参考《中国药典》2015年版维生素B₂原料的含量测定方法。结果 维生素B₂片总体溶出状况较好,不同厂家样品、同厂家不同批号样品均有相似的溶出行为;液相法与紫外法测定差异较大。结论 溶出度测定紫外法专属性不高,建议采用液相法测定;部分厂家产品质量不稳定,应改善生产工艺。     

Aflatoxin B1 and fumonisin B1 affect the oxidative status of bovine peripheral blood mononuclear cells

Mycotoxins are secondary metabolites having a high cytotoxic potential. They are produced by molds and released in food and feed. To date, the mechanisms underlying the mycotoxin-induced cytotoxicity have not been fully clarified. The induction of oxidative stress, as a possible mechanism, has been postulated. This in vitro study was focused on the effect of two widely occurring mycotoxins, aflatoxin B₁ (AFB₁) and fumonisin B₁ (FB₁), on the oxidative status of bovine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) incubated for 2 and 7 days at different levels of AFB₁ (0, 5 and 20 μg/ml) and FB₁ (0, 35 and 70 μg/ml). Reactive oxygen metabolites (ROM), intracellular thiols (SH), malondialdehyde (MDA) and gene expression of cytoplasmic superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSHPX-1) were measured on PBMC after incubation. The highest concentration of AFB₁ and all concentrations of FB₁ caused an increase (p < 0.05) of intracellular ROM without any time dependent effect. Intracellular SH decreased with 20 μgAFB₁/ml (p < 0.05) and the effect was particularly marked after 7 days of exposure. Intracellular SH were not affected by FB₁ even though a lower (p < 0.05) SH level after 2 days exposure than after 7 days was observed. MDA increased (p < 0.05) in AFB₁ or FB₁ treated PBMC. The exposure to FB₁ for 7 days increased MDA (p < 0.05) only in cells treated with 70 μg/ml. Exposure of PBMC to AFB₁ reduced SOD mRNA while FB₁ decreased both SOD and GSHPX-1 mRNA abundance. These results demonstrate that, even though by different mechanisms, AFB₁ and FB₁ may induce cytotoxicity through an impairment of the oxidative status of PBMC.