视网膜疾病基因治疗的现状

近年来,随着分子生物学技术的发展、各种视网膜疾病机制研究的不断深入以及大量视网膜疾病的动物模型的建立,基因治疗技术已广泛地应用于视网膜疾病的基础与临床研究之中。本对基因治疗的概念、策略、基因表达调控、基因转移的方法及其在常见视网膜疾病中的应用作一综述。     

视网膜疾病基因治疗现状与前景

基因治疗是通过向靶细胞或组织中引入外源基因片段来纠正疾病状态。基因治疗依赖所采用的载体系统使外源基因编码的蛋白在靶组织中高效、稳定的表达。视网膜疾病基因治疗中较为常用的载体是重组腺相关病毒载体、腺病毒载体、慢病毒载体等病毒类载体。通过将外源目的基因与促进子包装于病毒衣壳后制成病毒载体,再将载体注射入眼内。但最终将视网膜疾病基因治疗应用于临床尚有许多关键问题需要解决,如基因表达产物的调控、基因转移靶向性的控制、合适基因载体的选择、载体及导入物质引起的免疫反应等。随着对视网膜疾病分子遗传机制了解的不断深入及新技术和载体的发展,视网膜疾病基因治疗必将成为现实。     

视网膜变性疾病基因治疗的研究进展

分子生物学的进展为基因治疗视网膜变性疾病开拓了良好的应用前景,但目的基因的有效转染和长期表达等问题亟待解决,对有丝分裂后的视网膜感光细胞,解决这一问题就显得更为迫切。本文在阐述这些问题的研究现状的基础上对感光细胞的转基因营救及基因修饰的神经前体细胞回体移植的应用前景作一综述。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 268-270)     

糖尿病视网膜病变基因治疗的研究进展

糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）作为糖尿病的主要微血管并发症之一,严重影响患者的视力,并成为成人主要的致盲原因之一。目前,严格的血糖和血压控制、激光光凝、局部注射糖皮质激素、玻璃体切割、抗血管内皮生长因子成为治疗ＤＲ的主要措施。然而上述预防和治疗方法均有其局限性和副作用。基因治疗作为一种新生态的治疗手段,通过纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病以达到治疗的目的,从基因水平治疗有望成为治愈ＤＲ的有效方法,并且有望逐步运用到临床。     

CRISPR/Cas9系统在视网膜发育与遗传性视网膜疾病研究中的应用

CRISPR/Cas9系统作为第三代基因编辑工具的代表,操作简便、效率高、成本低,应用前景极其广阔.该系统能够对基因组中特定的核苷酸序列切割,尤其可用于纠正机体的异常基因突变.利用该系统不仅可阐述视网膜发育过程关键基因的调控功能,以及视网膜变性过程中相关信号通路改变的分子机制,更为重要的是运用该系统可修复异常的基因突变.本文主要论述CRISPR/Cas9系统在人类视网膜发育及遗传性视网膜变性疾病发病机制研究中的应用,以及在视网膜变性疾病患者个体化基因治疗方面的应用前景.     

基因组编辑技术在遗传性视网膜营养不良基因治疗和细胞治疗中的应用

遗传性视网膜营养不良(inherited retinal dystrophies,IRDs)是发展中国家青年人群视力障碍的主要原因,这些疾病呈现不可逆的视觉功能障碍和(或)神经视网膜细胞的丢失,显著影响患者生活质量。由于眼睛的解剖学可及性和免疫赦免特性,眼科研究一直处于创新的基因治疗和细胞治疗的前沿,这两种疗法均具有作为IRDs患者治疗方法的巨大潜力。群集规则间隔短回文重复序列(CRISPR)和CRISP相关蛋白(Cas)等基因组编辑技术为编辑人类基因组提供了准确和有效的方法,成为治疗IRDs的一个极具前景的替代方案。目前,基因组编辑和干细胞技术领域迅猛发展,可以联合为患者提供精确和个性化的治疗,但尚存在缺陷和不足,需进一步研究。     

基因编辑治疗视网膜疾病的研究进展

成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关核酸酶(Cas)系统和诱导Cas蛋白到达基因组预定区域的RNA基因编辑技术,在视网膜疾病的治疗中具有广大应用前景.迄今为止,已知有200多个基因可通过干扰视锥细胞、视杆细胞或视网膜色素上皮细胞的发育、功能和存活,从而导致遗传性视网膜营养不良(IRD).CRIS...     

视网膜母细胞瘤自杀基因疗法的研究进展

视网膜母细胞瘤（Rb)是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤,其发病率有逐渐升高的趋势。Rb的恶性程度高,发病早,可侵及单眼和双眼,对视功能的损害极大,甚至威胁生命,自杀基因疗法是目前肿瘤基因治疗中一种具有很大临床应用前景的治疗策略。但其用于视网膜母细胞瘤治疗的研究近年才刚刚起步,本综述从作用机制,旁观效应,设计策略及基础实验的疗效评估等方面介绍近年来视网膜母细胞瘤自杀基因疗法的研究进展。     

遗传性视网膜疾病腺相关病毒载体基因治疗新进展

腺相关病毒载体(AAV)是目前最重要的病毒工具,已在基因治疗领域得到广泛应用;因其具有体积小、无包膜、无致病性等特点,故而是治疗遗传性视网膜疾病的主要手段之一。目前针对原癌基因酪氨酸激酶基因治疗视网膜色素变性、ND4基因治疗Leber遗传性视神经病变以及Rab伴随蛋白-1基因治疗无脉络膜症的临床试验均发现约一半的患者视力改善。针对AAV基因治疗Leber先天性黑矇、X连锁视网膜劈裂症、全色盲以及老年性黄斑变性的临床试验也正在开展。而关于Stargardt病、Usher综合征、真性小眼球的AAV基因治疗尚在动物实验或理论阶段。目前AAV基因治疗主要用于隐性遗传性视网膜疾病,对于显性遗传性视网膜疾病需采用成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9技术等来干预。对于遗传性视网膜疾病的治疗,这将是一个重要且复杂的系统性工程,需投入更多人力物力共同参与和研究,期待在不久的将来能有大的突破。     

视网膜疾病基因治疗的现状

近年来 ,随着分子生物学技术的发展、各种视网膜疾病机制研究的不断深入以及大量视网膜疾病的动物模型的建立 ,基因治疗技术已广泛地应用于视网膜疾病的基础与临床研究之中。本文对基因治疗的概念、策略、基因表达调控、基因转移的方法及其在常见视网膜疾病中的应用作一综述。     

Nanoparticle applications in ocular gene therapy

The use of nanoparticles as carriers for the delivery of therapeutic materials to target tissues has became popular in recent years and has demonstrated great potentials for the treatments of a wide range of diseases. In this review, we summarize the advantages of nanotechnology as a common gene delivery strategy with emphasis on ocular therapy. Particular attention is paid to the CK30-PEG compacted DNA nanoparticles that have been successfully tested in the eye, lung, and brain. These particles resulted in higher transfection efficiency and longer duration of expression than other non-viral vectors without any toxicity or other side effects. They have been safely used clinically and are efficient for a broad range of gene therapy applications. The review also discusses mechanisms of nanoparticle uptake and internalization by cells, obstacles and limitations to the use of this technology, as well as novel methodologies to optimize nanoparticle driven gene expression.     

重视开展我国遗传性视网膜疾病的基因治疗研究

遗传性视网膜疾病是临床上常见且危害严重的眼科遗传性致盲疾病.我国拥有丰富的遗传性视网膜疾病人群资源,人类基因组计划的完成及相关遗传学技术的广泛应用为遗传性视网膜疾病基因研究提供了良好的平台.经过近年来的不断探索,我国对遗传性视网膜疾病的基因研究水平明显提高,部分成果已经接近国际先进水平,如常染色体显性遗传视网膜色素变性新基因的发现及功能研究,有的遗传性视网膜疾病正在从"不治之症"逐渐过渡到"可治之症"等.但就整体水平而言,不论是在遗传性视网膜疾病的基础研究还是临床研究方面与国外同类研究水平相比均存在着明显的差距.因此,我们应当抓住目前基因研究不断深入发展的机遇,集中全国眼科优势力量,创造和提供条件让更多的遗传性视网膜疾病患者尽早得到基因诊断,为早日在我国尝试进行多种遗传性视网膜疾病的基因治疗提供新的契机.     

内皮抑素基因转移抑制视网膜新生血管的实验研究

目的评价脂质体介导的内皮抑素(ES)基因转移抑制缺氧诱导的小鼠视网膜新生血管的效果。探讨基因转移抑制视网膜新生血管的可行性。方法制备阳离子脂质体及PCDNA3ES复合物。选1周龄C57Bl/6N小鼠置于氧浓度为(75±2)%的氧箱中5d。回到正常环境中诱导视网膜新生血管模型。在小鼠离开氧箱的当日,向ES注射组鼠玻璃体腔注射2μl脂质体PCDNA3ES复合物;载体对照组注射等量脂质体空白载体复合物;空白对照组小鼠注射等量PBS。采用ES抗体免疫组化方法检测ES蛋白在视网膜的表达;回到正常环境中后5d,采用荧光标记的右旋糖酐血管灌注下视网膜铺片方法观察视网膜新生血管的分布;组织学切片观察比较突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数量;透射电镜观察ES转移对视网膜超微结构的影响。结果免疫组化检查发现ES注射组小鼠玻璃体腔注射ES后24h开始有ES表达,主要位于视网膜神经纤维层细胞中,维持至少2周仍见表达;视网膜铺片观察可见空白对照组在无灌注区边缘均可见新生血管芽及荧光渗漏。ES注射组见新生血管芽明显减少;组织学检查ES注射组较其他两组突破视网膜内界膜的细胞数量减少,差异有统计学意义;ES转移后电镜下视网膜各层超微结构未见明显改变。结论采用玻璃体腔注射方法行脂质体介导的内皮抑素基因转移可以一定程度抑制缺氧诱导的小鼠视网膜新生血管生长,对视网膜无明显的毒副作用。应进一步优化转移条件以提高治疗效果。     

视网膜色素变性的分子遗传学研究进展与基因治疗

视网膜色素变性(RP)是遗传性致盲眼病,其患病率约为1／3500。该病目前尚无有效的预防和治愈方法。本文综述了RP分子遗传学的最新进展,着重对诊断和预后有价值的基因突变进行了总结,并归纳了RP基因治疗的新动向。（中华眼科杂志,2005,41：188-192)     

腺相关病毒载体介导视网膜疾病的基因治疗研究进展

视网膜疾病分子机制研究的不断深入,促进了视网膜疾病基因治疗的进展.腺相关病毒(AAV)的毒性和免疫原性均较低,外源基因表达稳定,可以转染多种分裂期和静止期细胞,因此成为治疗视网膜疾病的有效载体.在不同的动物模型和临床试验中,已有多项研究结果证实AAV作为载体治疗视网膜疾病的安全性和有效性.目前AAV在动物疾病模型中已经进行了介导抗血管生成蛋白、神经营养因子、抗凋亡因子的表达和基因替代治疗的研究,取得了令人满意的效果.但是,AAV也存在携带外源基因能力偏小的问题,需要进一步研究并解决之.     

Barriers for retinal gene therapy: separating fact from fiction

The majority of recent preclinical gene therapy studies targeting the retina have used adeno-associated virus (AAV) as the gene transfer vector. However, AAV has several limitations including the ability to generate innate inflammatory responses, the ability to cause insertional mutagenesis at a frequency of up to 56% in some tissues and a limited cloning capacity of 4.8Kb. Furthermore, AAV is known to generate limiting immune responses in humans despite the absence of similar immune responses in preclinical canine and murine studies. Three clinical trials to treat Leber's congenital amaurosis using AAV are under way. A clinical trial to treat Stargardt's using lentivirus vectors has also been recently announced. However, very limited evidence currently exists that lentivirus vectors can efficiently transduce photoreceptor cells. In contrast, very few preclinical ocular gene therapy studies have utilized adenovirus as the gene therapy vector. Nonetheless, the only two ocular gene therapy clinical trials performed to date have each used adenovirus as the vector and more significantly, in these published trials there has been no observed serious adverse event. These trials appear to be poised for Phase II/III status. Activation of cytotoxic T lymphocytes limits duration of transgene expression in the retina from first generation adenovirus vectors. However, an advanced class of adenovirus vectors referred to as Helper-dependent Adenovirus (Hd-Ad) have recently been shown to be capable of expressing transgenes in ocular tissues for more than one year. Hd-Ad vectors have many properties that potentially warrant their inclusion in the retinal gene therapy toolbox for the treatment of retinal degenerative diseases.     

综合治疗复杂性视网膜脱离

目的：用综合治疗的方法对Ⅲ级膜视网膜脱离的治疗效果进行评价,方法：选择本院Ⅲ级膜视网膜脱离36例,应用巩膜外冷凝、垫、环扎、压力空气作分离膜牵引的操作工具,塑形充填剂于Ⅲ级膜视网膜脱离的治疗。结果：30例治愈,治愈率为83％,未愈6例。结论：应用综合治疗方法治疗Ⅲ级膜视网脱离对于尚无配套内路手术条件的医院、或不能支付昂贵的手术费用贻误治疗的患者是可行的方法,可以使患者恢复部分有用视力,提高生活质量。     

Gene therapy for choroideremia: in vitro rescue mediated by recombinant adenovirus

Choroideremia (CHM) is an X-linked retinal degenerative disease resulting from a lack of functional Rab Escort Protein-1 (REP-1). As a first step in developing gene-based therapies for this disease, we evaluated the feasibility of delivering functional REP-1 to defective lymphocytes and fibroblasts isolated from individuals with CHM. A recombinant adenovirus delivering the full-length human cDNA encoding REP-1 under the control of a cytomegalovirus promoter was generated. Adenovirus-mediated delivery of REP-1 rescued the defective cells as assessed through protein and enzymatic assays. Ultimately, it may be possible to use virus-mediated delivery of REP-1 to evaluate disease intervention in vivo.     

眼部疾病的基因治疗进展

目前,全世界已有31项眼部疾病基因治疗临床试验被批准,多数仍处于研究阶段.Leber先天性黑朦(LCA)目前已开展Ⅲ期临床试验,随访时间最长6年;无脉络膜症多中心的临床试验也取得了积极效果;视网膜色素变性(RP)已开展基因治疗Ⅰ期临床试验;年龄相关性黄斑变性(AMD)基因治疗的Ⅰ期临床试验结果令人鼓舞;青光眼基因治疗中使用RNA干扰技术和优化的偶联表面活性磷脂纳米微粒也取得了良好效果.就LCA、RP、无脉络膜症、AMD和青光眼基因治疗的一些实验室及临床研究进展,包括眼部基因治疗方法、各种基因载体和常用的动物模型等进行综述.病毒载体已广泛应用于眼部疾病的基因治疗中,一些与免疫排斥和基因突变相关的潜在性风险以及个体反应的差异性促使人们去探索更安全、高效的方法.基因编辑技术的出现,必将对眼部疾病的基因治疗领域产生深远影响.