骨成形蛋白7拮抗转化生长因子β1致肾小管上皮细胞细胞外基质分泌的作用

目的:观察骨成形蛋白7(BMP-7)拮抗转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞外基质(ECM)分泌作用,并对相关信号通路进行研究,对BMP-7抗纤维化机制进行深入探讨。方法:将不同浓度BMP-7预处理HK-2细胞,随后予以5ng/mlTGF-β1刺激,利用荧光实时定量PCR和Western印迹检测ECM表达、利用Western印迹和凝胶迁移滞后实验(EMSA)检测相关信号通路蛋白表达。结果:荧光实时定量PCR和Western印迹结果表明,BMP-7可以浓度依赖方式下调TGF-β1刺激后HK-2细胞I型胶原,III型胶原,纤维连接蛋白在mRNA和蛋白水平表达。TGF-β1可促进HK-2细胞Smad2、Smad3磷酸化。但TGF-β1上调的Smad2、Smad3磷酸化可被BMP-7抑制,差异有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。EMSA结果表明,BMP-7则可抑制TGF-β1上调的NF-κB活性。结论:BMP-7可通过抑制Smad2/3磷酸化、抑制NF-κB的DNA结合活性达到阻断TGF-β1诱导HK-2分泌ECM的效应。     

人参皂甙Rg1对TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞增殖及细胞外基质的影响

目的为人参皂甙Rg1（G-Rg1）治疗肾纤维化提供依据。方法取对数生长期NRK52E细胞分为五组。对照组仅加入含血清的DMEM培养基;TGF-β1组及G-Rg1低、中、高剂量组均加入TGF-β1使终质量浓度为5ng/ml;G-Rg1低、中、高剂量组再分别加入G-Rg1使终质量浓度分别为10、20、40ng/ml。干预1、3、5天时MTT法测定各组细胞增殖率;干预5天时ELISA法测定细胞培养上清液中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN水平。结果与对照组比较,细胞培养上清液Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN水平明显升高（P〈0.05）;细胞增殖率明显降低（P〈0.05）;与TGF-β1组比较,各G-Rg1干预组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN水平均明显降低（P〈0.05）;细胞增殖率明显升高（P〈0.05）。结论 G-Rg1可抑制TGF-β1诱导肾小管上皮细胞增殖能力降低的作用,从而促进肾小管上皮细胞增殖,其机制可能与抑制Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN水平有关;G-Rg1可用于肾纤维化的治疗。     

MMPs／TIMPs、TGF—β1细胞外基质与糖尿病肾病

转化生长因子β1可刺激系膜细胞外基质(ECM)蛋白的合成，抑制基质金属蛋白酶的酶解活性，并增加其抑制剂组织型金属蛋白酶抑制剂的活性，从而促进ECM的沉积，在糖尿病肾病的发生发展中具有重要作用。     

转化生长因子-β1对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,同时观察TGF-β1对肾小管上皮细胞合成细胞外基质(ECM)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察TGF-β1诱导人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)合成CTGF、ECM、TIMP-1及α-SMA的情况.结果:在无TGF-β1刺激的情况下,HK-2细胞中有基础量的CTGF mRNA表达,TGF-β1以剂量和时间依赖的方式诱导HK-2细胞合成CTGF mRNA,其表达在24h时达高峰,同时TGF-β1可使HK-2细胞合成ECM、α-SMA增多,但在时相上均晚于CTGF.随着TGF-β1浓度的增加,HK-2细胞合成TIMP-1也随之增加,但较大剂量的TGF-β1(15ng/ml)方可使TIMP-1 mRNA的表达明显增加(P＜0.05).结论:TGF-β1可直接诱导体外培养的人近端肾小管上皮细胞表达CTGF,其表达转录水平要早于ECM、α-SMA的表达,提示CTGF可能介导了TGF-β1的促肾小管上皮细胞ECM合成和转分化的作用.     

2型糖尿病模型大鼠肾小管上皮细胞中TGF-β1的表达及与肾功能的关系

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在链脲佐菌素(STZ)介导2型糖尿病(T2DM)大鼠肾小管上皮细胞中表达的变化，揭示TGF-β1在糖尿病肾损伤中的作用及与肾功能的关系。方法 通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量STZ的方法，制作T2DM模型大鼠，应用免疫组化技术及流式细胞学技术检测12、24w肾小管上皮细胞中TGF-β1的表达。结果 免疫组化显示：糖尿病组肾小管上皮细胞胞浆中TGF-β1表达增强，并且呈时间依赖性。流式定量结果与免疫组化结果一致。结论 TGF-β1在T2DM大鼠肾小管上皮细胞中表达随时间延长逐渐增加并与肾功能呈正相关。     

肝素对糖尿病大鼠肾小球转化生长因子β1及细胞外基质表达的影响

糖尿病性肾小球硬化的实质是肾小球细胞外基质(ECM)的过度聚积。转化生长因子 β(TGF- β)对 ECM代谢起着重要的调节作用。有研究表明 ,肝素能抑制 ECM的生成 [1 ] 。为此我们运用免疫组化方法观察了糖尿病大鼠肾小球两种 ECM成分 ,层粘蛋白 (L N)、纤连蛋白 (FN )的表达与TGF- β1的关系 ,以及肝素对其表达的调控 ,以进一步了解糖尿病肾病的发生机制及肝素是否对糖尿病肾病具有一定的防治作用。一、对象和方法1.对象 :2月龄 Wistar雄性大鼠 (同济医学院实验动物中心提供 ) 30只 ,体重 15 0～ 2 0 0 g,随机分为正常对照组、糖尿病…     

结缔组织生长因子反义寡核苷酸抑制血管紧张素Ⅱ诱导人近曲肾小管上皮细胞肥大米

目的：进一步探讨结缔组织生长因子（connective tissue grnwth factor，CTGF）反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ（AngII）诱导的肾小管细胞肥大的影响。方法：采用体外培养的人肾近端小管上皮细胞株（HK2），分别采用考马斯亮蓝法、流式细胞分析技术及扫描电镜和透射电镜，观察CTGF反义寡核苷酸对AngII诱导的细胞内总蛋白含量、细胞周期分布改变及细胞直径和超微结构改变的影响。结果：AngⅡ干预HK2细胞48h后，细胞内总蛋白含量显著增加（P＜0．01）；这种作用可被CTGF反义寡核苷酸显著抑制，且呈时间和浓度依赖性。AngⅡ干预HK2细胞后，细胞大部分阻滞在G0-G1期（P＜0.01），而CTGF反义寡核苷酸可逆转这种周期阻滞现象（P＜0．05）。经AngⅡ干预的HK2细胞，细胞平均直径显著增加，细胞超微结构显示表面微绒毛减少、细胞内粗面内质网增多、线粒体减少、高尔基体增加，这些作用均可被CTGF反义寡核苷酸所抑制。结论：CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导HK2细胞肥大具有显著的抑制作用，提示CTGF可能介导了AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞肥大。     

大黄酸对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的:探讨大黄酸防治糖尿病肾病的机制.方法:60只雄性Wistar大鼠随机分为时照组(n=20只)和糖尿病模型组(n=40只),模型组大鼠给予腹腔内一次注射STZ 60 mg/kg诱导糖尿病模型,再随机分为糖尿病组和大黄酸组.大黄酸组给予大黄酸150 mg/(kg·d)灌胃.16周后测定大鼠24 h尿蛋白,光镜观察肾小管间质损害及纤维化,免疫组织化学法检测肾小管上皮细胞内肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA和间质细胞标志蛋白Vimentin的表达,并对结果进行半定量分析.结果:糖尿病组大鼠24 h尿蛋白排泄增加(P＜0.01),肾小管上皮细胞α-SMA和Vimentin阳性表达面积分别为(0.2763±0.0529)和(0.1388±0.0336);大黄酸组大鼠24 h尿蛋白排泄较糖尿病组减少,肾小管间质损伤和间质纤维化程度减轻,其肾小管上皮细胞α-SMA、Vimentin阳性表达面积分别为(0.1449±0.0447)和(0.822±0.0176),表达较糖尿病组显著下调(P＜0.01).结论:大黄酸能显著下调糖尿病大鼠肾小管上皮细胞α-SMA、Vimentin表达,阻抑肾小管上皮细胞的表型转化.     

ERK通路抑制剂对白蛋白诱导的人近端肾小管上皮细胞细胞外基质合成的影响

目的探讨血清白蛋白在肾小管间质纤维化（TIF）发生、发展中的作用。方法将体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞随机分为四组：A组不加刺激物;B组加入5mg／ml人血清白蛋白;C组加入10punol／L的PD98059;D组用10p,mol／LPD98059预处理HK-2细胞45min后再加入5mg／m1人血清白蛋白。RT—PCR法检测各组HK-2细胞在0、12、24、48h基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）和Ⅳ型胶原（col-Ⅳ）mRNA相对表达量。结果B组MMP-9mRNA表达先升高后下降,TIMP-1mRNA、col—ⅣmRNA表达均呈时间依赖性升高,TIMP-1／MMP-9值先下降后升高,D组MMP-9、TIMP-1和col-ⅣmRNA表达均明显低于B组,P均〈0．01;TIMP-1／MMP-9值的失衡得到部分纠正（P〈0．05或〈0．01）。结论人血清白蛋白可能通过ERK通路作用于HK-2细胞,促进ECM合成和抑制ECM降解、诱导ECM积聚而促进TIF发生、发展。     

TGFβ1信号与肝纤维化

肝星状细胞(HSC)是肝纤维化发生的关键细胞，转化生长因子β1(TGFβ1)是活化HSC、促进细胞外基质(ECM)分泌的重要细胞因子，其在肝纤维化的发生发展中有重要的调节作用，文章通过TGFβ1信号转导对HSC的作用来阐述TGFβ1信号与肝纤维化的关系。     

杏丁对H_2O_2诱导的肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用及机制

目的为杏丁注射液治疗肾脏应激性损伤提供理论依据。方法将对数生长期肾小管上皮NRK52E细胞随机分为八组。对照组不干预;H2O2组加入H2O2使终浓度为400μmol/L,杏丁1、2、3组分别加入杏丁注射液使终浓度分别为0.4、4、40μg/ml,H2O2＋杏丁1、2、3组分别加入H2O2（终浓度同前）及杏丁注射液（终浓度同前）。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR方法检测SurvivinmRNA表达。结果 H2O2组细胞凋亡率明显高于对照组及杏丁1、2、3组;H2O2＋杏丁2、3组凋亡率明显低于H2O2组;H2O2＋杏丁组SurvivinmRNA表达明显高于H2O2组。结论杏丁能显著抑制H2O2诱导的肾小管上皮细胞凋亡,其作用机制可能与其可增加Survivin表达有关;杏丁注射液可用于肾脏应激性损伤的治疗。     

葡萄籽提取物对缺血再灌注导致衰老大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用

目的 探讨葡萄籽提取物(Grape seed extract proanthocyanidin,GSPE)对缺血再灌注(I/R)导致衰老大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用.方法 分离培养24月龄Wistar雄性大鼠的原代肾小管上皮细胞,第3代后,将细胞分为对照组、10 μmol/L Antimycin A处理组、GSPE干预组以及Antimysin A+GSPE 组.Anexin V/PI染色,流式细胞仪检测肾小管上皮细胞凋亡情况,定量PCR和Western印迹法分别检测Caspase-3mRNA和蛋白表达水平,化学发光法检测细胞Capsase-3活性及过氧化物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性.激光共聚焦检测细胞内活性氧(ROS)的浓度.结果 (1)衰老大鼠肾小管细胞经Antimycin A处理后,凋亡率增高,Caspase-3,MDA,ROS明显增加,SOD下降;(2)经GSPE干预后,其凋亡情况明显好转,caspase-3、MDA、ROS明显降低.SOD含量部分恢复(P＜0.05).结论 老年大鼠肾小管细胞在I/R损伤时,ROS 堆积,线粒体损伤导致肾小管上皮细胞凋亡.GSPE可清除ROS从而达到抑制肾小管上皮细胞凋亡、减轻I/R损伤的作用.     

棓丙酯对高糖诱导人肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的 观察樯丙酯对高糖诱导人肾小管上皮细胞损伤的保护作用.方法 传代培养人肾小管上皮细胞（HK-2）,分为对照组、高渗组、高糖组、处理组1（桔丙酯浓度2μg/ml）和处理组2（棓丙酯浓度4μg/ml）,观察各组细胞增殖能力、凋亡率、活性氧（ROS）水平以及bcl-2和BaxmRNA的表达情况.结果 高糖刺激HK-2细胞后,细胞增殖能力下降、凋亡增加、ROS水平升高、bcl-2 mRNA表达减少、Bax mRNA表达增多.棓丙酯可以提高细胞增殖能力,减少凋亡,降低ROS水平,上调bcl-2 mRNA表达以及下调BaxmRNA表达;处理组2上述改变较处理组1明显（P均＜0.05）.结论 桔丙酯改善高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤,其机制可能与减轻氧化应激、上调bcl-2 mRNA表达以及下调Bax mRNA表达有关.     

Smad锚着蛋白在高糖诱导人肾小管上皮细胞细胞外基质沉积中的作用

目的:阐明Smad锚着蛋白(Smad anchor for receptor activation,SARA)在高葡萄糖诱导的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)细胞外基质(ECM)沉积中的作用及分子机制,探讨以SARA为靶点抑制高葡萄糖诱导的HK-2细胞ECM沉积的策略.方法:用高浓度葡萄糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激HK-2细胞,通过Western Blot及实时定量PCR( Real-time PCR)检测纤维连接蛋白(FN)和I型胶原(Col I),进而检测转化生长因子β1( TGF-β1)、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3的表达变化,通过细胞免疫荧光、Western Blot、Real-time PCR检测SARA的表达变化;分别转染全长SARA质粒[SARA(WT)]及敲除SBD结构域的SARA质粒[SARA(dSRD)],检测转染后高糖诱导HK-2细胞FN及Col I表达的变化.结果:Western Blot及Real-time PCR结果显示,30mmol/L D-葡萄糖刺激后,HK-2细胞Col I蛋白及mRNA表达呈时间依赖性升高.高糖可诱导TGF-β1、Smad3蛋白及其mRNA表达呈时间依赖性上调;Smad2 mRNA表达呈时间依赖性上调,而其蛋白表达呈时间依赖性下调;高糖可促进Smad2和Smad3磷酸化,但Smad3的活化时间更长.而SARA的蛋白及mRNA表达呈时间依赖性降低,细胞免疫荧光结果亦证实高糖刺激后SARA表达下降.与高糖组相比,转染SARA(WT)可使HK-2细胞FN和 Col I表达下调;转染SARA (dSBD)对高糖诱导的HK-2细胞FN和ColI表达无明显影响.结论:高糖诱导的HK-2细胞ECM沉积过程中,TGF-β1信号通路活化,SARA的表达下调;过表达SARA可能通过上调Smad2的蛋白表达,抑制TGF-β31信号传导,从而减少高糖诱导的HK-2细胞ECM分泌.     

抗霉素诱导肾小管上皮细胞铁死亡的实验研究

目的:观察抗霉素诱导肾小管上皮细胞发生铁死亡(ferroptosis)的现象,初步探讨铁死亡参与急性肾损伤的病理生理机制。方法:以1、2. 5、5、10μmol/L抗霉素A(antimycin A)干预人近曲小管上皮细胞(HK-2) 2、4、8、16、24h。MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶检测细胞活性,透射电镜检测细胞线粒体形态,Western blot检测凋亡关键蛋白(caspase3)活化,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)。结果:HK-2细胞存活率随着抗霉素作用剂量和时间的增加而下降(P 0. 01)。2. 5μmol/L抗霉素A干预HK-2细胞2h后,细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放明显增加(P 0. 01),电镜观察发现铁死亡特征性改变,细胞线粒体膜密度增加,线粒体嵴减少,细胞内ROS含量明显增加(P 0. 05)。与抗霉素模型组相比,铁螯合剂去铁胺(deferoxamine)、铁死亡特异性拮抗剂Ferrostatin-1预处理HK-2细胞能明显减少抗霉素A损伤后LDH的释放、线粒体损伤及ROS的产生(P 0. 05),且该过程不伴有caspase3活化。结论:在缺氧诱导肾小管上皮细胞损伤过程中,铁死亡可能是肾小管上皮细胞较早出现的损伤方式;抑制细胞铁死亡的发生可以减轻缺氧对肾小管上皮细胞的损害。     

二甲苯体外诱导肾小管上皮细胞损伤的表观遗传机制

目的:研究二甲苯诱导肾小管上皮细胞损伤的特点及表观遗传机制。方法:不同浓度的二甲苯分别作用于体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2),通过ELISA法检测肾小管上皮细胞培养上清中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)表达变化,流式技术检测肾小管上皮细胞凋亡,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性。采用人甲基化450K芯片和焦磷酸测序对二甲苯诱导损伤的肾小管上皮细胞DNA的CG位点进行甲基化筛选和验证。结果:二甲苯诱导刺激后HK-2细胞NGAL表达增加,呈现剂量和时间依赖性;1.4mmol/L二甲苯作用48h后培养上清中NGAL的值较对照组显著增加[(4.52±0.49)pg/ml vs(2.30±0.11)pg/ml,P0.01]。随加入二甲苯浓度的增加,HK-2细胞的凋亡比例和Caspase-3活性明显增加。甲基化芯片分析结果显示,二甲苯刺激后,HK-2细胞有243条探针甲基化出现显著差异,其中109条探针显示为甲基化水平增高,134条探针显示为甲基化水平降低,共涉及到138个基因。其中,细胞凋亡相关的基因(如Bax、FAF1等)出现了明显的甲基化改变,FAF1甲基化水平降低,Bax甲基化水平升高。焦磷酸测序的分析结果显示,二甲苯刺激后Bax基因(92%)的甲基化水平与对照组(85%)相比出现7%的甲基化改变;FAF1基因的甲基化水平比对照组降低6%,其甲基化改变的趋势与芯片结果相一致。结论:二甲苯刺激可引起HK-2细胞的损伤和凋亡增加,Bax、FAF1等凋亡相关基因的甲基化水平改变可能参与二甲苯对肾小管上皮细胞损伤,其机制有待进一步研究。     

BMP-7对油酸诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察骨形态发生蛋白（BMP）-7对油酸（OA）诱导的人肾小管上皮细胞转分化的拮抗作用。方法应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞株HK-2。分别用不同浓度BMP-7（0、1、5、10、50ng／ml）和一定浓度的OA（400μmol／L）共刺激体外培养的HK-2 48h,收集细胞,采用ELISA法和RT-PCR法检测转化生长因子（TGF）-β1蛋白、mRNA的水平和表达变化,采用RT-PCR法检测α-平滑肌动蛋白（SMA）mRNA的表达变化。结果BMP-7可以显著减少OA诱导的HK-2中TGF-β1和α—SMA mRNA的表达（P〈0．01）。结论BMP-7可以拮抗OA诱导的肾小管上皮细胞转分化。     

缺氧诱导因子1α在非离子造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用及其机制

目的：应用缺氧诱导因子1α（hypoxia—induciblefactor-1α，HIF-1d）诱导剂氯化钴上调HIF-1α水平，观察其对非离子造影剂碘必乐诱导的HK-2细胞凋亡的作用和机制。方法：体外培养的HK-2细胞，分为阴性对照组、碘必乐阳性对照组（296mgl／ml，12h）、不同剂量及作用时间的氯化钴预处理与碘必乐共同作用组（氯化钻浓度为5、25、50、100μmol／L，分别预处理0h、1h、2h、4h、6h、12h）。通过流式细胞仪测定细胞凋亡率，Hoechst33258染色观察细胞捌1’：的形态学变化，WesternBlot方法榆测HIF-1α、Caspase-3和凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平。结果：（1）流式细胞仪检测结果表明，50μmol／L氯化钴预处理4h、6h和12h点与阳性对照组相比细胞凋亡率明显降低（10．95％，8．65％，8．61％vs22．06％，P〈0．05），其中6h、12h点较4h点对细胞凋亡的抑制作用更强（P〈0．05），而6h和12h点之间差异无统计学意义（P〉0．05）。100μmol／L与50μmol／L氯化钴预处理相同时间（6h、12h）细胞凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）Hoechst33258染色结果发现，与阳性对照组相比，50μmol／L氯化钴预处理6h和12h凋亡细胞明显减少，其它时间点与阳性对照组差异无统计学意义。（3）WesternBlot检测方法表明，50μmol／L氯化钻预处理1h以上即可引起HIF-1α表达增高，6h点表达最高（0．373&#177;0．032），12h点较前下降（0．285&#177;0．048）。与阳性对照组相比，50μmol／L氯化钴预处理4h、6h、12h，细胞内Caspase-3水平明显降低（P〈0．05，0．346&#177;0．037，0．294&#177;0．062，0．179&#177;0．051vs0．501&#177;0．039）。Bel-2表达水平明显增加（P〈0．05，0．275&#177;0.052，0．324&#177;0．046，0．337&#177;0．039vs0．099&#177;0．025）。结论：HIF-1α对非离子造影剂碘必乐诱导的人近端肾小管卜皮细胞凋亡有明显的抑制作用，其作用机制可能与下调Caspase-3和上调抗凋亡蛋白Bcl-2有关。     

The role and mechanism of macrophage activation induced by exosomes from high glucosetreated renal tubular epithelial cells

正Objective To investigate the role and mechanism of macrophage activation induced by exosomes from high glucose-treated renal tubular epithelial cells. Methods(1) The supernatant of renal tubular epithelial cells which were cultured in normal glucose control group(5. 5 mmol/L D-glucose) or high glucose group (30. 0     

去甲斑蝥素不依赖钙调蛋白磷酸酶信号通路抑制高糖刺激肾小管上皮细胞细胞外基质的表达

目的:在证实去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)能减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾间质纤维化和抑制高糖刺激的肾小管上皮细胞细胞外基质表达的基础上,观察NCTD对高糖刺激的肾小管上皮细胞钙调蛋白磷酸酶(calcineurin,CaN)通路的影响,探讨NCTD抗DN肾小管间质纤维化与其抑制CaN的关系。方法:常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2),转染CaN siRNA,细胞分五组:(1)正常糖组(D-glucose5.5mmol/L);(2)高糖组(HG,D-glucose30mmol/L);(3)高糖+CaN siRNA组;(4)高糖+CaN siRNA+NCTD(5mg/L)组;(5)高糖+NCTD(5mg/L)组。采用Western-blot、免疫荧光和实时定量PCR,观察NCDT对HK-2细胞CaN/NFAT通路的影响,明确CaN siRNA的干扰效果。采用Western blot,检测NCTD对转染CaN siRNA后的HK-2细胞纤维连接蛋白(FN),胶原蛋白IV(Collagen IV,Col IV)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达的影响。结果:高糖可促进HK-2细胞CaNmRNA及蛋白的表达,NCTD可在基因及蛋白水平抑制CaN的表达(P0.05)。免疫荧光发现CaN下游活化T细胞核因子(NFATc)在正常对照组中存在于胞质,高糖刺激后细胞核内开始表达,高糖刺激30min后发生明显的核转位,NCTD能在一定程度上抑制核转位的发生,并能减少高糖刺激后核内NFATc蛋白的表达。转染CaN siRNA后,高糖刺激后HK-2细胞中CaN mRNA以及蛋白表达均降低,而FN,Col IV以及TGF-β1蛋白水平表达都明显增强(P0.05)。NCTD可抑制转染CaN siRNA后高糖刺激的HK-2细胞FN,Col IV和TGF-β1的表达。结论:NCTD能下调肾小管上皮细胞CaN表达,阻断CaN/NFATc信号通路;但NCTD抑制高糖刺激后肾小管上皮细胞细胞外基质的表达,与其阻断CaN/NFATc信号通路无关。