离体海马脑片CA1区锥体细胞缺氧期间电生理指标变化与N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂MK801干预后的变化

背景：海马CA1区锥体细胞是对缺血缺氧性损伤最为敏感的神经元，缺血缺氧后海马CA1区锥体细胞膜电位表现为缺氧早期细胞膜的超极化，随着缺氧时间的延长，细胞膜发生缓慢去极化及快速去极化，引起神经元不可逆性损伤。目的：应用细胞内记录技术，观察N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂MK801对离体海马脑片CA1区锥体细胞缺氧期间电生理指标的变化。设计：观察对比实验。单位：解放军第九七医院，徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室，Healthy-Science Center,State University of New York．材料：实验于2002—09／2003—02在美国纽约州立大学医学中心完成。选择成年雄性SD大鼠5只，预吸纯氧3min后以体积分数为0．02的异氟醚麻醉，快速断头取脑，制备离体海马脑片。方法：大鼠海马脑片随机分为单纯缺氧组和MK801组，每组10个。单纯缺氧组海马脑片给予10min缺氧；而MK801组的海马脑片在缺氧前10min及10min的缺氧期间分别应用100μmol／L的MK801。所有脑片均给予60min的复氧。应用细胞内记录技术记录海马CA1区神经元缓慢去极化及快速去极化的时间、快速去极化的幅度。在复氧末，应用细胞内注入电流及经Schaffer通路刺激，观察神经元对刺激的反应。主要观察指标：①两组海马CA1区锥体神经元缓慢去极化速率。②两组海马CA1区神经元的快速去极化时间。③两组海马CA1区神经元的快速去极化幅度。④MK801对海马CA1区神经元功能恢复的影响。结果：①海马CA1区锥体神经元缓慢去极化速率：单纯缺氧组显著高于MK801组[（0．20&;#177;0．05）mV／s，（0．08&;#177;0．03）mV／s，（P〈0．05）]。②海马CA1区神经元的快速去极化时间：MK801组显著高于单纯缺氧组[（537&;#177;139）s，（261&;#177;26）s，（P〈0．05）]。③海马CA1区神经元的快速去极化的幅度：MK801组显著小于单纯缺氧组[（4&;#177;13）mV，（53&;#177;7）mV，（P〈0．05）。④在复氧末期，MK801组的10个神经元中，9个神经元恢复对刺激的反应。结论：N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂MK801可以显著降低缺氧引起的神经元缓慢去极化速率，延缓神经元快速去极化的发生及降低快速去极化的幅度，说明N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂可显著减轻神经元的缺氧性损伤，促进复氧后神经元功能的恢复。     

疼痛与N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体

过去几十年来，在生物医学领域内，拮抗剂可谓是最热门的研究课题之一。1980年后期有研究指出，脊髓释放NMDA受体(N-methyl-D-aspartate receptor，NMDAR)拮抗剂可抑制刺激C纤维导致脊髓感受伤害神经元的过度兴奋。嗣后，数以百计的献强调组织损伤和炎症后NMDARS激活可促进以上导致过度兴奋的过程。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑海马中的远期表达

目的:观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后,海马发育过程中N-甲基-D-天冬氨酸受体的远期表达变化。方法:实验于2006-03/06在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。选用新生7日龄SD大鼠72只,按随机数字表法分为缺氧缺血性脑损伤组和假手术组,每组36只。各组又分为生后15d(n=6)、22d(n=6)、29d(n=6)、36d(n=12)及43d(n=6)5个时相点。①参照Rice法通过结扎7日龄大鼠左侧颈总动脉,吸入氧气体积分数为0.08的氮氧混合气,制成缺氧缺血性脑损伤模型,出现自发或夹尾左旋则证明模型制作成功。假手术组仅切开颈部皮肤,暴露左侧颈总动脉。②应用免疫组织化学法检测缺氧缺血后不同时点两组大鼠脑海马CA1区N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚单位的表达(n=6),测量平均灰度值,灰度值越低,蛋白表达越强;生后36d时相点大鼠(n=6)利用Morris水迷宫测定学习记忆能力;最后应用电镜观察生后36d大鼠海马突触结构。结果:72只大鼠,全部进入结果分析,无脱失。①生后22-43d缺氧缺血性脑损伤组大鼠(缺氧缺血后15-36d)脑海马CA1区NR1平均灰度值分别为167.69±6.48,174.57±4.81,179.30±5.92,176.50±5.93,均显著高于同日龄假手术组148.96±4.91,151.17±6.37,152.06±9.86,156.32±6.86(P均<0.01)。②Morris水迷宫实验中,缺氧缺血性脑损伤组大鼠逃避潜伏期显著长于假手术组(48.87±9.47)s,(11.97±2.20)s,(P<0.01);原平台象限游泳距离/总游泳距离的百分比显著低于假手术组(14.45±3.85)%,(62.20±8.74)%(P<0.01)。③生后36d(缺氧缺血后29d),透射电镜下缺氧缺血性脑损伤组大鼠患侧海马突触后膜致密物较假手术组明显减少。结论:新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后期存在海马N-甲基-D-天冬氨酸受体的表达下调,可能对大鼠远期空间学习记忆产生一定影响。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体与帕金森异动症关系研究进展

帕金森病(PD)的治疗一直受到国内外神经科的关注,一度成为研究热点,主要是治疗PD会出现许多副作用,比如运动并发症(包括异动症),精神障碍和认知功能下降等,而异动症的出现限制了PD的治疗,但是异动症的发病机制甚为复杂,尚未阐明,N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)与异动症的发生关系密切,因此阐明NMDAR与异动症的关系,寻找其潜在的靶点,很有可能代表一个有前途的治疗手段,本文就NMDAR与异动症的研究进展进行综述,为临床治疗提供参考。     

慢性复合应激对大鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基表达的影响

目的：观察慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响及应激后脑海马内N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基NR2A，NR2B表达的变化。方法：实验于2003-04在同济医学院组胚教研室第二实验室进行，取成年雄性Wistar大鼠39只，随机分为复合应激组（n=25）和对照组（n=14）。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原环境（睡眠剥夺、垂直旋转、噪音刺激和持续光照）中达6周，对照组动物不干预。用Morris水迷宫测试中的逃避潜伏期和Y迷宫作业测试中寻找安全区的正确率来评估其空间学习与记忆成绩。两组动物行为学测试后麻醉状态下处死，采用免疫组织化学和图像处理方法分析脑海马CA1，CA3、齿状回区NR2A。NR2B的表达。结果：37只大鼠进入结果分析。①Morris水迷宫逃避潜伏期：复合应激组大鼠明显短于对照组[（15．89&;#177;9．15），（27．30&;#177;12．51）s，t=3．199，P〈0．051。②Y迷宫中寻找安全区的正确率：复合应激组大鼠高于对照组[（79．01&;#177;1．23）％，（66．12&;#177;1．61）％，t=58．61，P〈0．01]。③NR2B表达水平：复合应激组大鼠CA1和CA3区明显高于对照组（0．562&;#177;0．292，0．321&;#177;0．257；0．572&;#177;0．283，0．312&;#177;0．242，P〈0．05）。④NR2A表达水平：两组比较无差异。结论：慢性复合应激可增强学习与记忆能力，N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基NR2B参与了慢性复合应激引起的学习与记忆增强的作用。     

高功率微波辐射后大鼠海马组织中N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的变化及其意义

目的观察高功率微波（HPM）辐射后大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体表达的变化及其意义。方法采用10mW／cm^2和100mW／cm^2 HPM辐射110只Wistar雄性大鼠，于辐射后6h、1d、7d、14d和28d活杀取海马组织，采用免疫组化、原位杂交和图像分析等技术分析海马组织中NMDA受体——NR1、NR2A和NR2B的蛋白及mRNA含量的变化。结果10mW／cm^2及100mW／cm^2 HPM辐射后，可见大鼠海马神经元固缩等病理变化，100mW／cm^2组的病变较10mW／cm^2组严重，且恢复迟。2个辐射组的NR1、NR2A及NR2B的表达均增强；10mW／cm^2组辐射后6h，NMDA受体表达始见增加，1d达高峰，28d基本恢复；100mW／cm^2组照后6h，NMDA受体表达始见增加，7d达高峰，28d基本恢复，且与10mW／cm^2组相比，100mW／cm^2组增高明显，恢复较迟。NR1mRNA变化规律与其蛋白表达类似。结论10mW／cm^2及100mW／cm^2 HPM辐射可造成大鼠海马神经元损伤，使NMDA受体表达上调，参与HPM致海马组织损伤的病理生理过程。     

运动康复对脑梗死大鼠学习记忆与海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体通道的影响

背景：学习和记忆的神经基础是中枢神经系统具有高度的可塑性，在中枢神经系统功能重组的过程中需要特定的康复训练。目的：观察康复训练对脑梗死大鼠分辨学习能力和一次性被动回避反应的记忆保持能力与健侧海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体通道动力学特性的关系。设计：随机对照动物实验。单位：泸州医学院附属医院康复医学科。材料：实验于2000—03／2002-02在泸州医学院中心实验室完成。选择Wistar雄性大鼠24只，将其随机分为脑梗死自由活动组（模型组）、脑梗死康复训练组（康复组）和正常组，每组8只。方法：①模型制备：康复组和模型组大鼠建立右侧大脑中动脉梗死模型，正常组不做处理。②康复训练：4d后对康复组大鼠进行4周的滚笼训练器、网屏训练器、平衡训练器训练，模型组和正常组不进行训练。③学习记忆测试：各组大鼠于术后第35天进行学习记忆行为学测试。Y-型谜官实验主要观察大鼠达到9／10正确反应（跑到暗臂）所需的训练次数；多功能条件反射箱实验主要观察大鼠在跳板上停留的时间（步入潜伏期）。④学习记忆测试完后采用细胞贴附式记录海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体的单通道电流。主要观察指标：①各组大鼠达到掌握迷宫结构标准所需的训练次数。②各组大鼠步人潜伏期。③各组大鼠N-甲基-D-天冬氨酸受体的单通道电流特性。结果：24只大鼠均进入分析。①康复组和正常组大鼠达到掌握标准所需次数分别为（68．02&;#177;11．67）次和（57．62&;#177;10．31）次，而模型组需要（107．07&;#177;16．32）次，与前两组比较，差异有显著性（P〈0．05）。正常组和康复组比较，差异无显著性（P均〉0．05）。②康复组和正常组电击前步人潜伏期中位数分别为286．7s和298．4s，而模型组电击前步人潜伏期中位数仅为126．7s，与前两组比较，差异有显著性（P〈0．05）。正常组和康复组比较，差异无显著性（P均〉0．05）。③康复组大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体以35ps通道短开放为主，开放概率0．099&;#177;0．007。20pS短开放和长开放通道以及35pS短开放时间和概率与正常组比较无显著意义（P〉0．05）；模型组以20pS通道开放为主，20pS短开放和长开放两个时间常数明显短于康复组同类通道，35ps通道短开放概率为0．036&;#177;0．04，低于康复组俨〈0．05），无35pS长开放通道。结论：康复训练促进脑梗死大鼠学习记忆能力的恢复是通过健侧海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体通道特性的改变而实现的。     

电磁脉冲对大鼠脑海马N-甲基-D-天冬氨酸受体活性的影响

背景电磁脉冲是一种高能非电离辐射,它涵盖的频谱极宽,对电子仪器具有极强的破坏力,并具有一定的生物损伤效应.本课题组前期实验发现,电磁脉冲可造成实验大鼠学习记忆能力的显著下降,并且影响其海马长时程增强效应的形成.目的观察电磁脉冲照射对大鼠海马组织中氨基酸类神经递质含量和N-甲基-D-天冬氨酸受体的影响.设计随机对照的实验,方差分析.单位军事医学科学院放射与辐射医学研究所.材料实验于2004-01/03在军事医学科学院放射与辐射医学研究所完成.实验选用雄性Wistar大鼠32只,随机分为电磁脉冲组26只和对照组6只.方法电磁脉冲组大鼠经电磁脉冲照射(6×104V/m,脉冲上升时间20ns,脉宽30μs,频率2.5脉冲/min,作用2 min)后即刻,3,6,24,48 h麻醉状态下断头取脑,剥离海马;用高效液相色谱法测定氨基酸含量,并以3H标记的谷氨酸为配基进行放射性配基-受体结合实验.对照组麻醉处死前不做任何处理.主要观察指标①各组大鼠海马组织兴奋性氨基酸和抑制性氨基酸含量的变化.②各组大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体的最大结合量和平衡解离常数的变化.结果32只大鼠全部进入结果分析.①电磁脉冲照射后即刻、3 h、6 h可见天冬氨酸的含量显著升高[峰值(17.25±1.63)μmol/L],明显高于对照组[(10.56±1.5)μmol/L,P＜0.05],谷氨酸含量也于上述3个时间点升高[峰值(13.67±0.95)μmol/L],显著高于对照组[(6.94±1.1)μmol/L,P＜0.05],两者含量均于照射后24 h渐趋恢复,48 h接近正常水平.3抑制性氨基酸(甘氨酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸)的含量也于电磁脉冲照射后不同时间点升高,并于48 h恢复.谷氨酸/γ-氨基丁酸比值于照后即刻明显升高(P＜0.05),照后24 h明显下降,48 h恢复至接近对照组.②电磁脉冲照射后即刻大鼠海马中N-甲基-D-天冬氨酸受体的平衡解离常数开始下降,照后3 h下降最显著(P＜0.05),6 h渐有恢复,48 h恢复至正常水平;受照大鼠海马中N-甲基-D-天冬氨酸受体的最大结合量于照后3 h和6 h显著下降(P＜0.05),24 h渐有恢复,照后48 h明显升高,超过正常组水平(P＜0.05).结论电磁脉冲照射导致大鼠海马组织中兴奋性氨基酸含量及谷氨酸/γ-氨基丁酸比值升高;同时N-甲基-D-天冬氨酸受体的亲和力升高及受体密度下降.提示实验动物认知障碍可能与兴奋性氨基酸的过度释放和N-甲基-D-天冬氨酸受体功能改变有关.     

电磁脉冲对大鼠脑海马N-甲基-D-天冬氨酸受体活性的影响

背景：电磁脉冲是一种高能非电离辐射，它涵盖的频谱极宽，对电子仪器具有极强的破坏力，并具有一定的生物损伤效应。本课题组前期实验发现，电磁脉冲可造成实验大鼠学习记忆能力的显著下降，并且影响其海马长时程增强效应的形成。目的：观察电磁脉冲照射对大鼠海马组织中氨基酸类神经递质含量和N-甲基-D-天冬氨酸受体的影响。设计：随机对照的实验，方差分析。单位：军事医学科学院放射与辐射医学研究所。材料：实验于2004-01／03在军事医学科学院放射与辐射医学研究所完成。实验选用雄性Wistar大鼠32只，随机分为电磁脉冲组26只和对照组6只。方法：电磁脉冲组大鼠经电磁脉冲照射（6&;#215;10^4V／m，脉冲上升时间20ns，脉宽30μs，频率2．5脉冲／min，作用2min）后即刻，3，6，24，48h麻醉状态下断头取脑，剥离海马；用高效液相色谱法测定氨基酸含量，并以3^H标记的谷氨酸为配基进行放射性配基一受体结合实验。对照组麻醉处死前不做任何处理。主要观察指标：①各组大鼠海马组织兴奋性氨基酸和抑制性氨基酸含量的变化。②各组大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体的最大结合量和平衡解离常数的变化。结果：32只大鼠全部进入结果分析。①电磁脉冲照射后即刻，3h、6h可见天冬氨酸的含量显著升高[峰值（17．25&;#177;1．63）μmol／L]，明显高于对照组[（10．56&;#177;1．5）μmol／L，P〈0．05]，谷氨酸含量也于上述3个时间点升高[峰值（13．67&;#177;O．95）μmol／L]，显著高于对照组[（6．94&;#177;1．1）μmol／L，P〈0．05]，两者含量均于照射后24h渐趋恢复，48h接近正常水平。3种抑制性氨基酸（甘氨酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸）的含量也于电磁脉冲照射后不同时间点升高，并于48h恢复。谷氨酸/γ-氨基丁酸比值于照后即刻明显升高（P〈O．05），照后24h明显下降，48h恢复至接近对照组。②电磁脉冲照射后即刻大鼠海马中N-甲基-D-天冬氨酸受体的平衡解离常数开始下降，照后3h下降最显著（P〈0．05），6h渐有恢复，48h恢复至正常水平；受照大鼠海马中N-甲基-D-天冬氨酸受体的最大结合量于照后3h和6h显著下降（P〈O．05），24h渐有恢复，照后48h明显升高，超过正常组水平（P〈0．05）。结论：电磁脉冲照射导致大鼠海马组织中兴奋性氨基酸含量及谷氨酸／γ-氨基丁酸比值升高；同时N-甲基-D-天冬氨酸受体的亲和力升高及受体密度下降。提示实验动物认知障碍可能与兴奋性氨基酸的过度释放和N-甲基-D-天冬氨酸受体功能改变有关。     

慢性复合应激对大鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基表达的影响

目的:观察慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响及应激后脑海马内N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基NR2A,NR2B表达的变化。方法:实验于2003-04在同济医学院组胚教研室第二实验室进行,取成年雄性Wistar大鼠39只,随机分为复合应激组(n=25)和对照组(n=14)。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原环境(睡眠剥夺、垂直旋转、噪音刺激和持续光照)中达6周,对照组动物不干预。用Morris水迷宫测试中的逃避潜伏期和Y迷宫作业测试中寻找安全区的正确率来评估其空间学习与记忆成绩。两组动物行为学测试后麻醉状态下处死,采用免疫组织化学和图像处理方法分析脑海马CA1,CA3、齿状回区NR2A,NR2B的表达。结果:37只大鼠进入结果分析。①Morris水迷宫逃避潜伏期:复合应激组大鼠明显短于对照组(15.89±9.15),(27.30±12.51)s,t=3.199,P<0.05。②Y迷宫中寻找安全区的正确率:复合应激组大鼠高于对照组(79.01±1.23)%,(66.12±1.61)%,t=58.61,P<0.01。③NR2B表达水平:复合应激组大鼠CA1和CA3区明显高于对照组(0.562±0.292,0.321±0.257;0.572±0.283,0.312±0.242,P<0.05)。④NR2A表达水平:两组比较无差异。结论:慢性复合应激可增强学习与记忆能力,N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基NR2B参与了慢性复合应激引起的学习与记忆增强的作用。     

Hyperexcitability of hippocampal CA1 neurons in brain slices of rats chronically administered clonazepam

The neuronal manifestations and mechanisms of sedative-anticonvulsant (benzodiazepine) drug withdrawal have been investigated in the CA1 region of hippocampal slices prepared from rats administered clonazepam for 1 month. Slices from clonazepam-treated rats exhibited epileptiform activity evidenced by multiple extracellular population spikes after orthodromic stimulation. These slices also demonstrated abnormally steep and variable stimulus intensity-population spike curves. Intracellular recordings showed spontaneous bursts and slow paroxysmal depolarizations. To investigate the neuronal activity before and immediately after drug withdrawal, slices from drug-naive and drug-exposed rats were maintained in solution containing the approximate concentration of clonazepam (20 nM) measured in the cerebrospinal fluid of clonazepam-treated rats. Compared to CA1 neurons in hippocampal slices from drug-naive animals, neurons from clonazepam-administered animals showed an increased tendency to fire in a bursting (i.e., epileptiform) pattern when the cell was depolarized by current injection, or by orthodromic or antidromic stimulation. Upon withdrawal of clonazepam from the perfusate, the frequency of spontaneous excitatory postsynaptic potentials and spiking activity increased in cells from clonazepam-treated animals and was associated with a shortening of the long-lasting postspike train after hyperpolarization. However, no change in the dendritic gamma-aminobutyric acid response was noted. This study indicates that abnormal epileptiform activity can be detected and studied in brain slices from animals chronically treated with clonazepam.     

高原低氧对胎鼠海马神经元N甲基-D天冬氨酸受体发育的影响

目的 观察高原低氧环境对胎鼠海马神经元 N 甲基-D 天(门)冬氨酸受体( N-methyl-D-aspartate receptor, NMDAR)数目和通道特性的影响 , 为防治高原低氧引起的脑损伤提供依据. 方法将孕 10 d SD大鼠置于低压氧舱内,采用原位杂交和膜片钳观察其所生子鼠海马 NMDA受体的数量和功能. 结果胎鼠高原低氧后, NMDA受体数量减少,通道开放概率由 0.150降为 0.012,通道开放时间常数б 1由 0.040± 0.010降为 0.020± 0.007(t=33.21,P< 0.05),б 2由 0.75± 0.23降为 0.49± 0.23(t=25.31,P< 0.05),通道关闭时间常数б 1由 0.14± 0.07升高为 14.25± 3.5(t=12.74,P< 0.01),б 2由 2.67± 1.12升高为 4832± 1809(t=8.44,P< 0.01). 结论高原低氧影响到胎鼠 NMDA受体的发育,提示高原低氧环境下大鼠的学习记忆可能受到影响.     

大鼠脑海马CA1区神经元诱发放电过程中催产素与阿片受体的参与和调制作用

背景中枢内催产素可作为一种神经递质或调质参与学习记忆、性行为、痛觉调节以及阿片耐受与依赖,海马内催产素能系统与阿片系统具有一定的相互作用.目的探讨侧脑室注射催产素对大鼠脑左背侧海马CA1区神经元诱发放电的影响以及催产素与阿片受体之间可能的相互作用.设计随机对照实验.单位广东医学院生理教研室,武汉大学医学院生理系,武汉大学医学院病理学教研室.材料实验于2002-09/2003-09在武汉大学医学院生理系完成,选用雄性SD大鼠36只.随机分为6组,生理盐水对照组、催产素处理组(0.2,2,20 mg/L)、催产素受体拮抗剂+催产素(2 mg/L)组、纳洛酮+催产素(2 mg/L)组,每组6只.方法脑海马CA1区细胞外记录采用玻璃微电极记录用微电极推进器将电极插入脑海马CA1区.神经元放电经微电极放大器放大后,显示在示波器上进行观察.记录到神经元放电后,经双极不锈钢电极每隔5 min刺激坐骨神经1次,共刺激50min 10次.催产素0.2,2,20mg/L处理组通过侧脑室给药管匀速而缓慢注入催产素0.2,2,20 mg/L 5 μL.催产素受体拮抗剂+催产素(2 mg/L)组侧脑室预先注射80 mg/L催产素受体拮抗剂2.5μL,然后再注射2 mg/L催产素2.5μL.纳洛酮+催产素(2 mg/L)组侧脑室预先注射400 mg/L纳洛酮2.5μL,然后再注射2 mg/L催产素2.5μL.以放电频率变化率为观察指标,检测不同剂量催产素对海马CA1区神经元诱发放电的影响及催产素受体拮抗剂、纳洛酮对催产素的作用.主要观察指标各组大鼠刺激前后脑海马CA1区神经元诱发放电频率的变化率.结果36只大鼠均进入结果分析.①侧脑室分别注射0.2,2,20 mg/L催产素5 μL使海马CA1神经元诱发放电频率明显降低,剂量依赖关系明显.②催产素(2 mg/L)对CA1神经元诱发放电的抑制作用可被侧脑室预先注射催产素受体拮抗剂(80 mg/L,2.5μL)所阻断.③侧脑室注射纳洛酮(400 mg/L,2.5μL)可明显减弱催产素(2 mg/L)的作用.结论催产素通过激活催产素受体可抑制海马CA1神经元对外周传入电信号的反应,中枢内阿片系统也参与催产素的抑制作用,当用纳洛酮阻断阿片受体后,催产素的抑制作用明显减弱.     

大鼠脑海马CA1区神经元诱发放电过程中催产素与阿片受体的参与和调制作用

背景：中枢内催产素可作为一种神经递质或调质参与学习记忆、性行为、痛觉调节以及阿片耐受与依赖，海马内催产素能系统与阿片系统具有一定的相互作用。 目的：探讨侧脑室注射催产素对大鼠脑左背侧海马CA1区神经元诱发放电的影响以及催产素与阿片受体之间可能的相互作用。 设计：随机对照实验。 单位：广东医学院生理教研室，武汉大学医学院生理系，武汉大学医学院病理学教研究。 材料：实验于2002-09／2003-09在武汉大学医学院生理系完成，选用雄性SD大鼠36只。随机分为6组，生理盐水对照组、催产素处理组（0．2，2，20mg／L）、催产素受体拮抗剂＋催产素（2mg／L）组、纳洛酮＋催产素（2mg／L）组，每组6只。 方法：脑海马CA1区细胞外记录采用玻璃微电极记录：用微电极推进器将电极插入脑海马CA1区。神经元放电经微电极放大器放大后，显示在示波器上进行观察。记录到神经元放电后，经双极不锈钢电极每隔5min刺激坐骨神经1次，共刺激50min 10次。催产素O．2，2，20mg／L处理组通过侧脑室给药管匀速而缓慢注入催产素O．2，2，20mg／L5μL。催产素受体拮抗剂＋催产素（2mg／L）组：侧脑室预先注射80mg／L催产素受体拮抗剂2．5μL，然后再注射2mg／L催产素2．5μL。纳洛酮＋催产素（2mg／L）组：侧脑室预先注射400mg／L纳洛酮2．5μL，然后再注射2mg／L催产素2．5μL。以放电频率变化率为观察指标，检测不同剂量催产素对海马CA1区神经元诱发放电的影响及催产素受体拮抗剂、纳洛酮对催产素的作用。主要观察指标：各组大鼠刺激前后脑海马CA1区神经元诱发放电频率的变化率。 结果：36只大鼠均进入结果分析。①侧脑室分别注射0．2，2，20mg／L催产素5μL使海马CA1神经元诱发放电频率明显降低，剂量依赖关系明显。②催产素（2mg／L）对CA1神经元诱发放电的抑制作用可被侧脑室预先注射催产素受体拮抗剂（80mg／L，2．5μL）所阻断。③侧脑室注射纳洛酮（400mg／L，2．5μL）可明显减弱催产素（2mg／L）的作用。 结论：催产素通过激活催产素受体可抑制海马CA1神经元对外周传入电信号的反应，中枢内阿片系统也参与催产素的抑制作用，当用纳洛酮阻断阿片受体后，催产素的抑制作用明显减弱。     

Effects of calcium channel agonist and antagonists on calcium-dependent events in CA1 hippocampal neurons

The effects of a variety of calcium channel modulators on different calcium-dependent events in CA1 pyramidal hippocampal neurons were analysed using intracellular recordings in an in vitro slice preparation. The following substances were tested: the dihydropyridine calcium agonist BAY K 8644, the dihydropyridine calcium antagonist nimodipine, the phenylalkylamine verapamil and the snail toxin omega-conotoxin GVIA (omega-CgTx). BAY K 8644 increased the repolarization time of the after hyperpolarization (AHP) following a spike burst. This effect was antagonized by nimodipine. BAY K 8644 also prolonged the calcium spike and, in some cases, increased the size of the synaptic events resulting from activation of the Schaffer collateral/commissural system. Nimodipine decreased the size of the AHP in some neurons but had no consistent effect on synaptic events. Verapamil at low concentrations (1-10 microM) had no significant effects on the calcium-dependent events in the hippocampus. Increasing the concentration (up to 100 microM) led to a progressive suppression of the AHP and of the slow inhibitory postsynaptic potential (IPSP), probably via an action on potassium conductances. In addition, the baclofen-induced hyperpolarization was blocked by verapamil. Interestingly, at this higher concentration, verapamil could suppress the AHP without depressing the calcium spike. omega-CgTx selectively blocked the synaptic events (especially the IPSPs) but had no effect on non-synaptic events. This last compound exhibits a high degree of selectivity, acting on N-type calcium channels which are involved in neurotransmitter release. Our results provide evidence that different classes of agents which act on calcium channels can be used to discriminate between different calcium-dependent responses in CA1 hippocampal neurons.     

慢性应激大鼠海马CA3区锥体细胞树突超微结构的改变

目的:观察慢性应激大鼠海马CA3区锥体细胞树突超微结构特别是微管形态的改变,探讨慢性应激后产生的学习记忆及情绪障碍的可能机制。方法:实验于2003-01在汕头大学医学院进行。取健康清洁级雄性SD大鼠30只,随机分为对照组15只,应激组15只。应激组完成强迫游泳4周,对照组在笼中饲养4周后,测定两组大鼠海马CA3区锥体细胞一级树突的长度及直径,观察海马CA3区锥体细胞树突的超微结构。结果:慢性应激大鼠海马CA3区锥体细胞树突纵切面微管断裂,平行微管间距离变宽;横切面微管环不完整,单体分布不均匀;线粒体嵴模糊,偶可见空泡样变性。应激组大鼠海马CA3区锥体细胞一级树突的长度及直径分别为(98.51±17.48),(6.41±0.94)μm,对照组为(125.35±18.69),(5.67±0.83)μm,两组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:慢性应激可导致大鼠海马CA3区锥体细胞树突骨架尤其是微管的损害,并直接导致一级树突变短、变粗。     

Differential GABAB Receptor Modulation of Ethanol Effects on GABA(A) synaptic activity in hippocampal CA1 neurons

We tested the hypothesis that differential sensitivity to ethanol of synaptic GABA(A) somatic and dendritic inhibitory postsynaptic currents (IPSCs) in hippocampal CA1 pyramidal neurons could be due to differences in the extent of GABA(B) receptor activity at GABAergic synapses in these two hippocampal subfields. Our present results show that dendritic (distally evoked) GABA IPSCs contain a larger GABA(B) IPSC component of the total GABA IPSC than the somatic (proximally evoked) subfield. The inhibition of GABA(B) receptors by pretreatment of hippocampal slices with CGP-52432 [3[[(3,4-dichlorophenyl)methyl]amino]propyl](diethoxymethyl) phosphinic acid], a selective GABA(B) receptor antagonist, changes the basal ethanol-insensitive, distally evoked GABA(A) IPSCs to become more sensitive to ethanol. In addition, paired-pulse stimulation of the proximal and distal subfields of hippocampal pyramidal neurons shows that ethanol alone increases the probability of GABA release at proximal but not distal regions. Changes by ethanol on the probability of GABA release are only seen at distal locations during GABA(B) blockade. Finally, when the modulation of presynaptic GABA(B) receptors is minimized by the local application of 10 mM GABA directly onto somatic or dendritic GABAergic synaptic regions, postsynaptic GABA(B) receptors seem to exert significant negative (inhibiting) influence on the effects of ethanol on GABA(A) IPSCs in the distal subfields of CA1 pyramidal neurons. Together, our data suggest that differences in both presynaptic and postsynaptic GABA(B) receptor activity at these GABAergic synapses may modulate the differential ethanol sensitivity of proximal and distal GABA IPSCs(A) in hippocampal CA1 pyramidal neurons.     

大鼠海马神经元模拟缺血时谷氨酸诱发电流改变

目的:观察大鼠海马神经元模拟缺血时谷氨酸诱发电流的改变,探讨脑缺血神经元损伤的兴奋毒性机制,为中枢神经损伤的康复提供理论依据。方法:以原代培养的大鼠海马神经元为标本,采用全细胞膜片钳方法观察原代培养大鼠海马神经元模拟缺血时谷氨酸诱发电流改变。结果:当钳制电压为-60mV时,100μmol/L的N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)、α-氨基-3羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)分别诱发一内向电流(INMDA,IAMPA),模拟缺血处理后的神经元INMDA、IAMPA明显增大。结论:升高的兴奋性氨基酸激活突触后膜的兴奋性氨基酸受体后引起神经细胞损伤。     

白细胞介素1 β、白细胞介素1受体拮抗剂对癫痫大鼠行为、海马超微结构及NMDAR活性的影响

目的探讨白细胞介素1β(IL-1β)及白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1ra)对癫痫的影响,揭示癫痫发作的免疫学机制.方法实验于2003-10/2004-06在哈尔滨医科大学第二临床医学院实验中心完成,侧脑室注射生理盐水,L-1β及IL-1ra 30 min后戊四氮致痫观察大鼠行为,分别于致痫后2,,24 h处死大鼠,通过放射配基结合实验测定NMDA受体(NMDAR)活性,取海马CA3区电镜下观察超微结构的变化.结果外源性IL-1β能够缩短癫痫发作的潜伏期,与生理盐水对照组相比差异有显著性意义(t=3.85,＜0.05),对癫痫发作强度的影响与对照组相比差异无显著性意义,观察到明显的神经元变性坏死,大鼠脑内NMDAR活性在致痫后个时间点均显著增强;IL-Ira对发作潜伏期的影响及发作强度的影响与对照组相比差异无显著性意义,但可明显减轻戊四氮致痫所导致的神经元损害,致痫大鼠脑内NMDAR活性各时间与对照组相比明显减低.结论IL-1 β通过提高NMDAR活性促进癫痫发生及发展,加重癫痫所导致的神经元损伤的程度,L-1ra可以通过抑制IL-1β的活性,减轻其上述作用.