X线辐射体外诱发大鼠肺成纤维细胞恶性转化

本文报告了X线辐射0.5、1.0、3.0及5.0Gy体外诱发WAL-F_1细胞系恶性转化的剂量-效应关系及其细胞生物学特征.细胞转化率(y,%)与剂量(D,Gy)有关,可用下式表达:?3.0Gy照射时转化率最高,为0.41×10~(-1)%.转化细胞生物学特性明显不同于对照细胞,(1)呈上皮样细胞形态;(2)具有持续增殖能力,没有衰老现象,复层生长;(3)染色体核型异常,出现异倍体或多倍体;(4)Con A凝集试验阳性;(5)在半固体琼脂培养基中形成集落;(6)接种于同种动物体内诱发肿瘤.本研究为肿瘤病因学、发病机理及防治研究提供一个良好的实验模型.     

吡非尼酮治疗特发性肺纤维化的临床研究

目的：研究吡非尼酮治疗特发性肺纤维化的临床效果。方法选取48例特发性肺纤维化患者,随机分成观察组和对照组,每组24例,对照组采用吸氧、N－乙酰半胱氨酸等常规对症治疗,观察组在常规治疗基础上,加用吡非尼酮治疗,对比两组患者的血气分析参数包括动脉血氧分压（ PaO2）、二氧化碳分压（ PaCO2）、PaO2／PaCO2;肺功能相关指标包括用力肺活量（FVC）、第一秒用力呼气容积（FEV1）、FEV1／FVC％、6 min步行实验。结果对照组患者肺功能无明显改善,观察组肺功能明显改善,差异有统计学意义,P＜0．05,详见表1。治疗后的血气指标情况,观察组和对照组患者差异无统计学意义,P＞0．05。结论吡非尼酮可改善特发性肺纤维化的肺功能,值得在临床上推广应用。     

巨噬细胞和MMP-9对肺成纤维细胞增生及合成Ⅳ型胶原的作用

目的探讨放射性肺纤维化早期启动的发生机制。方法灌洗收集经^60Coγ射线照射后的Wistar大鼠肺泡巨噬细胞制备条件培养液，刺激培养的人肺成纤维细胞增生，用MTT法检测细胞增生活力，Western blot检测细胞合成Ⅳ型胶原含量的改变，酶谱分析检测细胞基质金属蛋白酶-9的活性。结果经条件培养液刺激后，人肺成纤维细胞的增殖活力明显增加，在48～72h之内作用明显HLF合成Ⅳ型胶原增多，12h达高峰，随后有所下降；12h后基质金属蛋白酶．9活性开始增高，于48h达高峰，72h开始下降。结论20Gy^60Coγ射线能刺激AM分泌某些细胞因子促进肺间质成纤维细胞增生及合成Ⅳ型胶原，与此同时后者能激活基质金属蛋白酶-9，降解增多的Co Ⅳ，参与肺损伤早期的重建过程。     

238Puα粒子辐射体体外诱发大鼠肺成纤维细胞恶性转化

本文报告了²³⁸Puα粒子辐射体体外诱发成年Wistar大鼠肺成纤维细胞(WAL-F₁)转化的特征.初步结果表明,在0.01～1.0Gy剂量范围内,细胞的剂量-存活曲线符合单次击中单靶模型:S=e^-D/Do,Do=0.172Gy,没有肩峰剂量(D_q).高LETa粒子(5.25MeV)辐射后早期(第2代)细胞增殖能力明显受抑制,传至第11代后,增殖能力增强,并观察到细胞形态学和生物学的某些转化特征.转化后的细胞经免疫抑制的同种动物体内接种可形成肿瘤.²³⁸Puα粒子与X射线比较,以Do值为生物学终点,α粒子的相对生物效应(RBE)约1l～13.     

吡非尼酮对新西兰兔膝关节创伤后瘢痕挛缩的改善作用

 目的 探讨口服吡非尼酮(Pirfenidone,PFN)对海水浸泡膝关节创伤后瘢痕挛缩的影响。方法 按照随机数字表法,将20只新西兰兔随机分为4组(n=5):生理盐水对照组(NS组),无菌海水对照组(SW组),生理盐水+吡非尼酮治疗组(NS+PFN组),无菌海水+吡非尼酮治疗组(SW+PFN组)。吡非尼酮治疗组给予每日口服0.75 g吡非尼酮(混于饲料中),对照组仅给予饲料。4周后观察切口愈合情况,处死动物后采集瘢痕组织进行Masson染色,采集标本进行ELISA检测羟脯氨酸含量和转化生长因子β₁(TGF-β₁)含量。结果 术后各组动物切口愈合良好。吡非尼酮治疗后,Masson染色结果显示,切口瘢痕胶原纤维分布相对稀疏,大致呈平行排列,表现相对更为规则。检测结果显示,在SW组、NS组、SW+PFN组和NS+PFN组,羟脯氨酸分别为(114.20±14.54)ng/ml、(99.21±18.27)ng/ml、(87.91±12.02)ng/ml和(76.17±18.72)ng/ml。SW+PFN组羟脯氨酸水平明显低于SW组,差异具有统计学意义(P<0.05)。进一步检测显示,SW组和SW+PFN组TGF-β₁水平分别为(151.53±20.21)ng/ml和(106.53±12.86)ng/ml,SW+PFN组TGF-β₁水平明显低于SW组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 吡非尼酮可以缓解海水浸泡膝关节创伤后关节周围瘢痕性挛缩,改善关节功能障碍,其作用机制可能与抑制胶原蛋白合成及下调TGF-β₁水平有关。     

吡非尼酮抑制食管支架置入术后再狭窄的动物实验研究

目的:探究吡非尼酮在食管支架置入后再狭窄的预防疗效及相关机制。方法:将24只SD雄性大鼠行食管支架置入术后根据随机数字表法分成3组,每组8只,分别予安慰剂、150 mg/kg或300 mg/kg吡非尼酮灌胃给药治疗28 d。术后28 d取支架段食管组织进行组织学染色实验,以评估黏膜上皮细胞层数、黏膜下纤维结缔组织厚度、...     

直线加速器X线照射对人肺成纤维细胞经典Wnt通路中关键信号蛋白的影响

 目的 探讨直线加速器X线照射对人肺成纤维细胞经典Wnt通路中关键信号蛋白的影响。方法 人肺成纤维细胞分为照射组和正常对照组,照射组经直线加速器X线5 Gy照射24 h后,Western blot检测两组成纤维细胞胞核内β-catenin蛋白表达,Real time PCR检测成纤维细胞胞核内β-catenin mRNA表达,ELISA法检测细胞培养液中WISP-1蛋白表达。结果 照射组人肺成纤维细胞β-catenin蛋白表达和mRNA表达水平均高于对照组,WISP-1蛋白表达水平也显著升高,与对照组比较均有统计学意义[(637±88)vs(387±58),P<0.05]。结论 直线加速器X线照射可诱导人肺成纤维细胞经典Wnt通路活化,促进肺纤维化的形成,可能为放射性肺损伤的治疗提供新的靶点。     

成纤维细胞生长因子对关节软骨细胞转化生长因子β1作用的免疫组织化学观察

目的观察成纤维细胞生长因子对培养兔关节软骨细胞转化生长因子β１的表达。方法培养１月龄新西兰兔关节软骨细胞，在每次换液时加入成纤维细胞生长因子１００ｎｇ／ｍｌ，铺满后收集细胞，作关节软骨细胞转化生长因子β１常规及电镜免疫组织化学观察。结果光镜下实验组细胞明显呈棕色，电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒黏附。结论成纤维细胞生长因子能促进关节软骨细胞转化生长因子β１的表达。     

罗格列酮对成纤维细胞条件培养液诱导心肌肥大的作用及机制

目的探讨罗格列酮(RSG)对成纤维细胞无血清条件培养液(FCGM)诱导心肌肥大的作用及其机制。方法分离获取新生大鼠成纤维细胞,用含10g/L胰岛素+转铁蛋白+硒化钠复合物(ITS)的无血清高糖DMEM培养,分别于第3、5、79、天收集FCGM,ELISA法检测其中内皮素-1(ET-1)的浓度。采用FCGM培养新生大鼠心肌细胞,检测其蛋白含量和蛋白激酶C(PKC)活性,并观察白屈菜季氨碱(che)、RSG对FCGM诱导心肌蛋白质合成的影响。结果 FCGM中含有ET-1,且培养3d时的浓度最高。FCGM可促进心肌细胞蛋白质合成,而RSG和che可阻断FCGM促心肌细胞蛋白质合成的作用并抑制心肌细胞PKC的活性。结论 FCGM诱导心肌肥大与其中的ET-1有关,RSG抑制心肌肥大的作用与抑制ET-1和PKC的活性有关。     

人胚肺成纤维细胞中M受体的生化药理学特性

本文报告了人胚肺成纤维细胞(CCL137)中M受体的生化药理学特性.用放射配基结合实验证实了细胞中含有可饱和、高亲和力以及立体结构特异性的M受体.细胞膜上的M受体与腺苷酸环化酶呈负性偶联.用药理学和生物化学方法证实细胞中的M受体为M_2亚型.亲和标记后行电泳分析证实受体的分子量为72kDa.以上工作表明GCL137细胞中存在丰富的功能均一的M_2受体,其数量明显高于其它来源的人的培养细胞系,并同时含有糖皮质激素受体,是研究M_2受体及研究不同受体系统之间相互调控作用的良好细胞模型.     

CT analysis of the effect of pirfenidone in patients with idiopathic pulmonary fibrosis

Purpose

Pirfenidone is a new, anti-fibrotic drug used for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis (IPF). The aim of this study was to evaluate the utility of computed tomography (CT) in the imaging assessment of the response to pirfenidone therapy.

Materials and methods

Subjects were 78 patients with IPF who underwent CT on two occasions with one-year interval (38 consecutive patients treated with pirfenidone and 40 age-matched control). Changes in the fibrous lesion on sequential CTs were assessed as visual score by two radiologists. We measured the volume and change per year of fibrous pattern (F-pattern) quantitatively using a computer-aided system on sequential CTs.

Results

The baseline vital capacity (%pred VC) was 74.0 ± 14.0% in the pirfenidone group and 74.6 ± 16.6% in controls (p = NS). Deterioration of respiratory status was defined as 10% or greater decline in %pred VC value after 12-month treatment. A significantly larger proportion of pirfenidone-treated patients showed stable respiratory status (21 of 38, 65.6%) than the control (15 of 40, 37.5%). The change in fibrous lesion was significantly smaller in the pirfenidone group than the control in both of visual score (p = 0.006) and computer analysis (p < 0.001). The decline in VC correlated significantly with the increase in fibrotic lesion (p < 0.001).

Conclusion

CT can be used to assess pirfenidone-induced slowing of progression of pulmonary fibrosis.     

CTGF表达在大鼠放射性肺纤维化中的作用

目的本研究结合体内外实验探讨CTGF在放射性肺纤维化(RPF)发生过程中的作用及与α-SMA之间的相互关系。方法应用MTT比色法检测^60Coγ射线照射对人肺成纤维细胞(HLF)的促增殖作用，用Western blot法观察CTGF和α-SMA在HLF中的表达，苦味酸-天狼星红偏振光显微镜法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的增减变化，免疫组织化学图像分析观察CTGF和α-SMA在RPF过程中的表达变化。结果体外实验显示，5Gy^60Coγ射线照射能促进HLF增殖，并转化成肌成纤维细胞(MFb)；CTGF蛋白合成增加，12h达高峰；α-SMA蛋白合成增加，48h处于高峰状态。体内实验显示，照射后1-3个月大鼠肺组织有少量胶原产生，以Ⅲ型胶原为主；6个月肺组织大量胶原产生。以Ⅰ型胶原为主；CTGF于照后1周在增生的大鼠肺Fb中开始合成，随照后时间延长而逐渐增强．3个月时最明显。照后1周可见增生的MFb中有α-SMA表达，随照后时间延长逐渐增多，3个月时达高峰。结论照射能诱导CTGF表达增高，后者能促进肺Fb向MFb转化，增强合成和分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原的能力，参与了放射性肺纤维化的发生发展。     

细胞因子与放射性肺损伤

细胞因子作为分子水平的生物效应调节因子,在放射性肺损伤的发病及病理过程中的作用已引起广泛的重视。在研究细胞因子致病作用的同时,亦进一步探讨相关细胞因子在放射性肺损伤的预测、监控、预防和治疗方面的意义。     

MMP-12异常表达对放射性肺损伤大鼠肺内成纤维细胞转化的影响

目的 观察放射性肺损伤过程中基质金属蛋白酶12(MMP-12)过表达对肺成纤维细胞转化的作用.方法 32只雄性Wistar大鼠,体重250～280g,随机分为正常对照组(n=8)和照射组(n=24).照射组用20Gy60Co γ射线进行全胸照射,分别于照射后1、2、4周行肺组织取材,每时间点8只.应用明胶酶谱法检测MMP-12酶活性变化,组织特殊染色法观察肺泡壁弹力纤维降解情况,透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞与肺间质细胞间的"信号交流"(cross talking)现象,ELISA法检测肺组织中TGF-β1含量,免疫组化检测肺组织a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)表达情况.结果 MMP-12酶活性在照射后1周开始增高,至照射后4周时有所下降;肺泡壁基底膜弹力纤维照射后1周开始出现降解断裂,4周时最为严重;肺组织TGF-β1含量和a-SMA免疫组化阳性信号在1～4周内随照后时间延长而逐渐升高.电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞与肺间质细胞间出现"信号交流"现象.结论 照射后肺组织MMP-12酶活性增高,可能通过降解基底膜弹力纤维促进成纤维细胞转化,启动肺纤维化的发生.     

低氧对成年大鼠心脏成纤维细胞表型的影响

目的 研究低氧（2%氧）对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞表型的影响. 方法 分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用免疫细胞化学染色检测肌成纤维细胞的典型标记-α-平滑肌肌动蛋白,用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞胶原酶敏感的^3H-脯氨酸掺入率来观察细胞胶原蛋白合成变化,并检测3H-亮氨酸掺入率观察细胞总蛋白合成的变化. 结果 低氧24 h、48 h时,成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞的α-平滑肌肌动蛋白表达较常氧组显著增强;同时细胞胶原蛋白合成速率亦显著增加,在低氧第24 h、48 h胶原酶敏感的^3H-脯氨酸掺入率较常氧组分别增加132%（P〈0.05）和163%（P〈0.01）. 结论 低氧能够促进成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转换。     

肺挫伤致急性呼吸窘迫综合征在ICU中的救治分析

目的 探讨肺挫伤致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的发病机制及在加强监护病房(ICU)中的监护和救治.方法 回顾分析2002年1月～2006年12月ICU病房收治的45例肺挫伤致ARDS病人的临床资料.结果 所有病人均采取以机械通气为主的综合救治措施.45例中治愈32例(71.1%),死亡13例(28.9%).结论 肺挫伤致ARDS死亡率高,在ICU中严密监护,早期诊断,及时采取综合救治措施有利于改善预后.     

肺挫伤致急性呼吸窘迫综合征临床分析

目的　探讨肺挫伤致ARDS相关危险因素。方法　总结 1 2 6例肺挫伤的临床资料 ,并将住院时间 >2 4小时的 1 1 0例分为ARDS组和非ARDS组 ,对其致伤原因、伤情及治疗结果进行对比分析。结果　本组ARDS发生率 30 .2 % ,肺挫伤并严重多发伤ARDS发生率较单纯肺挫伤高 (P <0 .0 1 )。交通伤为肺挫伤最主要原因 ,ARDS组挤压伤多 ,坠落伤较少 (P <0 .0 1 ) ;ARDS组损伤严重 (ISS >2 5 ) ,ISS评分明显高于非ARDS组 (P <0 .0 1 ) ,其浮动胸壁、休克、多发伤发生率明显高于非ARDS组 (P <0 .0 1 )。结论　合并严重多发伤 (ISS >2 5 )、浮动胸壁、休克等是肺挫伤致ARDS重要危险因素 ,应针对其进行早期有效治疗     

γ-干扰素和地塞米松对成纤维细胞生长的影响

目的观察γ干扰素（ＩＦＮγ）和地塞米松（Ｄｅｘａ）对正常和ＩＬ１刺激的成纤维细胞生长的影响,旨在从细胞因子角度为抗纤维化有效措施的制定提供依据。方法用ＭＴＴ比色、ＡｇＮＯＲｓ银染和免疫组化技术,观察两种抑制剂对成纤维细胞增殖、ＡｇＮＯＲｓ合成和Ⅲ型胶原表达的影响。结果２５０×１０３Ｕ／Ｌ浓度的ＩＦＮγ和１００μｇ／Ｌ浓度的Ｄｅｘａ均能明显抑制正常和ＩＬ１刺激的成纤维细胞增殖、ＡｇＮＯＲｓ合成和Ⅲ型胶原表达。结论一定浓度的ＩＦＮγ和Ｄｅｘａ对正常和ＩＬ１刺激的成纤维细胞生长、增殖、ＡｇＮＯＲｓ合成和Ⅲ型胶原表达均显示出明显的抑制作用。     

犬急性骨水泥肺栓塞的实验研究

目的通过股静脉注入骨水泥建立犬急性肺栓塞模型,探讨一定剂量范围内不同量骨水泥肺栓塞引起的生理病理变化间的差异。方法 18只成年家犬随机分成A、B、C 3组,每组6只,麻醉后行胸部CT平扫,穿刺右股静脉、左股动脉并置入血管鞘,经静脉鞘注入聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)A组0.5 ml,B组1 ml,C组2 ml。于注入PMMA前和注入后即刻、30 min及1 h分别检测血气分析、平均肺动脉压;于注入PMMA前、后5 min行肺动脉造影。术后1h行胸部CT平扫+增强。术后2 h将犬处死,开胸解剖观察大体形态后,沿肺动脉分支方向随机取肺组织3块进行病理学检查。结果 18只实验犬经股静脉注入PMMA操作均成功,经CT及病理证实均成功建立急性骨水泥肺栓塞模型。各组实验犬动脉血氧分压、二氧化碳分压在骨水泥注入前后差异均无统计学意义(P>0.05)。仅C组骨水泥注入后即刻平均肺动脉压为(24.12±1.74)mmHg,注入后30 min为(23.84±1.25)mmHg,注入后1 h为(24.17±1.63)mmHg,均较注射前的(16.47±0.55)mmHg差异有统计学意义(P<0.05)。A组、B组平均肺动脉压在骨水泥注入前后差异均无统计学意义(P>0.05)。各组实验犬术后胸部CT平扫均可见两肺高密度影,下肺多见,C组尤为明显。部分实验犬平扫见条索状阴影及肺不张征象。C组部分实验犬胸部增强CT可见肺动脉小分支内部分充盈缺损。肺动脉造影仅C组部分实验犬出现肺内部分细小血管减少,血管纹理稀疏,未见肺动脉主干及分支的充盈缺损。病理学检查均发现肺动脉分支存在骨水泥栓子,未见继发血栓形成。结论≤2 ml的骨水泥致急性肺栓塞的严重程度与注入骨水泥剂量没有相关性。在心肺功能正常情况下,≤2 ml的急性骨水泥肺栓塞不会引起明显的呼吸功能障碍。