河北省食品中大肠杆菌O157∶H7分布及毒力研究

目的:掌握河北省食品中大肠杆菌O157∶H7分布状况及菌株的毒力研究.方法:运用免疫磁珠富集进行分离培养,并用PCR进行毒力基因分析.结果:共采集食品530份,检出O157∶H7大肠杆菌5株,总检出率为0.9%.其中,以生牛、羊肉检出率较高,分别为6.7%和4.4%.5株O157∶H7菌株中,4株带有SLT2、eae和Hly 3种毒力基因,1株带有SLT1、SLT2、eae和Hly 4种毒力基因.结论:掌握食品中O157∶H7分布及生物学特性对预防食源性疾病暴发有重要意义.     

广东省食品中O157:H7大肠杆菌分离株的生化特征、毒力因子与耐药性的探讨

目的:了解广东省食品中O157:H7大肠杆菌分离株中生化特征、毒力因子的携带与耐药情况。方法:采用免疫磁珠富集法进行O157:H7大肠杆菌分离,对O157:H7大肠杆菌分离株进行生化、噬菌体、血清学鉴定后,应用PCR技术检测其毒力因子,应用纸片法(K-B法)进行药敏试验。结果:从277份样品中分离出2株O157:H7大肠杆菌,总检出率为0.72%;对这2株O157:H7大肠杆菌分离株进行PCR毒力因子的测定,其中1株为携带eaeA、H ly和SLT2毒力因子的强毒株,而另1株分离株未检出毒力因子。药敏试验结果显示,这两个O157:H7大肠杆菌分离株对青霉素类、四环素类、磺胺类、喹诺酮类、大环内酯类5大类的部分抗生素有多重耐药性。结论:广东省食品中存在O157:H7大肠杆菌强毒株的污染。O157:H7大肠杆菌多重耐药株的出现,提示应关注我国畜牧养殖业抗生素的使用情况。     

龙岩市1999～2005年O157大肠杆菌监测研究

[目的]为了解龙岩市O157大肠杆菌人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况.[方法]1999～2005年采集腹泻病人粪便、动物粪便以及各类食品、苍蝇、养殖场污水等标本,mEC增菌后用SMAC进行分离,纯化菌株经生化鉴定、血清分型、毒力及特征基因检测等.[结果]共检测2212份标本,检出O157大肠杆菌29株,阳性率为1.31%.其中猪粪为3.42%,牛粪为2.62%,牛肉为2.33%,鸡肉为2.06%,养殖场污水为2.27%.其余标本均未检出目的菌.O157:H718株,O157:NM 6株,O157:H?5株.对12株O157:H7,进行了rfbO157和fliCH7基因的测定,结果rfbO157均为阳性,而fliCH7均为阴性.对18株(O157:H7 14株、O157:NM 3株、O157:H?1株),进行了SIT2、SLT1、eaeA、hly4种毒力基因检测,结果仅2株O157:H7 eaeA hly阳性,1株O157:H7 hly阳性,其余菌株均为阴性.检出菌株对环丙沙星、氟嗪酸、丁胺卡那、庆大霉素敏感.检出ESBLs 2株.[结论]我市畜、禽中存在O157大肠杆菌,未检出含有SLT2、SLT1毒素的菌株,未发现O157大肠杆菌病例和食物中毒患者,应加强宿主动物O157大肠杆菌监测.     

安徽省肠出血性大肠杆菌O157:H7宿主动物监测研究

目的了解安徽省肠出血性大肠杆菌O157:H7在宿主动物中的分布及其毒力基因携带状况,为控制O157:H7感染提供依据。方法用免疫磁珠分离法(IMS)对安徽省3个监测点的宿主动物粪便标本进行0157:H7的分离培养,并用多重引物PCR方法(MPCR)检测分离菌株的毒力基因。结果采集宿主动物粪便标本5 560份,检出O157:H737株,阳性率为0.7%,其中牛的阳性率最高,为1.1%。106株O157:H7菌株经过毒力基因测定,65.1%的菌株携带SLT、hly基因。O157:H7感染性腹泻的发病与家禽家畜的带菌正相关(R=0.87,P=0.01)。结论安徽省宿主动物中能检出肠出血性大肠杆菌O157:H7,且菌株携带毒力基因。提示要加强对宿主动物进行O157:H7的流行病学调查和监测工作。     

福建省食品污染物监测O157∶H7大肠杆菌的调查与分析

目的:对福建省食品中O157∶H7大肠杆菌进行分离调查,并对分离菌株的O157抗原编码基因(rfbO157)和H7抗原编码基因(flicH7)以及毒力基因(志贺毒素基因stx、粘附抹平因子基因eaeA、溶血素基因hlyA)进行检测。方法:按照《全国食品污染物检测相关实验室操作手册(食源性致病菌部分)》的要求,用EC肉汤增菌,快诊金卡筛选,接种CHROM agar O157显色平板,血清和生化系列证实。结果:1 380件食品中分离到O157∶H7大肠杆菌4株,分别为福州的生猪肉和水产品蚶中各1株、尤溪的冻鸡肉2株,检出率0.29%。结论:福建省食品中存在O157∶H7大肠杆菌的污染,虽检出率较低,这可能与福建不是O157∶H7大肠杆菌的流行地区有关,但监测是一项长期的工作,防患于未然,同时福建省也将O157∶H7大肠杆菌列入了食品安全预警系统的一部分。     

广东省食品中0157:H7大肠杆菌分离株的生化特征、毒力因子与耐药性的探讨

目的了解广东省食品中O157H7大肠杆菌分离株中生化特征、毒力因子的携带与耐药情况.方法采用免疫磁珠富集法进行O157H7大肠杆菌分离,对O157H7大肠杆菌分离株进行生化、噬菌体、血清学鉴定后,应用PCR技术检测其毒力因子,应用纸片法(K-B法)进行药敏试验.结果从277份样品中分离出2株O157H7大肠杆菌,总检出率为0.72%;对这2株O157H7大肠杆菌分离株进行PCR毒力因子的测定,其中1株为携带eaeA、Hly和SLT2毒力因子的强毒株,而另1株分离株未检出毒力因子.药敏试验结果显示,这两个O157H7大肠杆菌分离株对青霉素类、四环素类、磺胺类、喹诺酮类、大环内酯类5大类的部分抗生素有多重耐药性.结论广东省食品中存在O157H7大肠杆菌强毒株的污染.O157H7大肠杆菌多重耐药株的出现,提示应关注我国畜牧养殖业抗生素的使用情况.     

2007年浙江省衢州地区动物中产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7感染状况

目的:了解2007年浙江省衢州地区产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7在动物中的分布情况及其耐药性、PFGE分型及毒力基因携带状况。方法:按全国O157:H7监测方案于5~10月份肠道传染病高发季节,在衢州地区采集各种动物粪便/肛拭,用免疫磁珠富集后进行O157:H7分离培养、鉴定,可疑菌株以PCR法检测O、H抗原及志贺样毒素(SLT1和SLT2)、粘附抹平因子(eaeA)及溶血素(hly)4种毒力基因。用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行同源性分析,同时选择14种抗生素进行药敏试验,分析分离所得菌株的耐药状况。结果:共监测动物粪便标本300份,分离得产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7菌株16株,分离率为5.33%。16株O157:H7菌株,毒力基因Hly、eaeA、SLT2均阳性,SLT1均阴性。脉冲场凝胶电泳分型显示,16株O157:H7菌株可分2个PFGE基因型,型间差异较小。耐药性分析显示这些菌株对红霉素、利福平的耐药率最高,达100.0%,对其他受试抗生素均敏感。结论:该地区动物中产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7带菌率较高,所分离菌株主要携带SLT2基因,因此推测该地区存在发生产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7感染暴发或流行的潜在危险,需增加对动物源性O157:H7的监测力度。     

大肠埃希菌O157血清型分离株的脉冲场凝胶电泳分型

目的了解杭州地区分离的产志贺毒素和不产志贺毒素大肠埃希菌O157菌株的分子流行病学特征。方法对杭州地区于1997～2005年间自散发腹泻患者和动物中分离的10株大肠埃希菌O157血清型菌株,PCR检测毒力基因stx1、stx2、eae和ehxA,eae阳性者进行eae基因分型;按标准化的脉冲场凝胶电泳法(pulsefieldgelelectrophoresis,PFGE)进行分子分型,并与国内其他省份分离的产志贺毒素大肠埃希菌(Shigatoxin_producingEscherichiacoli,STEC)O157∶H7菌株进行比较。结果杭州分离菌株HZ1_11携带毒力基因stx2、γ型eae和ehxA,为浙江省检获的首株STECO157∶H7;3株杭州O157∶NM分离菌株(2_1、26_1和SR05株)仅携带β型eae基因;其他6株杭州O157∶H?分离菌株中,均未检出毒力基因。PFGE揭示,在杭州人源O157菌株中,STECO157∶H7HZ1_11株与近年江苏和安徽分离STECO157∶H7菌株密切近缘,且其图谱与江苏菌株几乎完全相同;3株eae阳性的O157∶NM分离菌株聚类成与STECO157∶H7菌株较远的一簇,杭州1株stx阴性的O157∶H?(1_68株)则处于另一独立的一簇。5株杭州O157∶H?动物分离菌株与其他人源菌株图谱差异极大。结论浙江省首株STECO157∶H7可能是源自近年在江苏流行的STECO157∶H7菌株。β型eae阳性的大肠埃希菌O157∶NM菌株可能具有引起散发腹泻的能力。     

郑州市2005年肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染状况调查

目的：了解郑州市肠出血性大肠杆菌O157∶H7在腹泻病人中的检出情况和宿主动物带菌及毒力基因情况.方法：对采集的宿主动物和腹泻病人粪便及食品应用免疫磁珠富集分离法进行大肠杆菌O157∶H7分离和鉴定.结果：郑州市内共发现3例肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染病例,首次从腹泻病人中检出产毒O157∶H7菌株,采集5种以上动物粪便标本共计475份,从牛粪（247份）中分离到16株O157∶H7,检出率为6.48%,从羊粪（33份）中分离到3株O157∶H7,检出率为9.10%,并检出3株产毒O157∶H7菌株.采集5类市售食品共146份,未分离到O157∶H7.结论：郑州市存在发生肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染暴发或流行的潜在危险.     

福建省食品污染物监测O157:H7大肠杆菌的调查与分析

目的对福建省食品中O157H7大肠杆菌进行分离调查,并对分离菌株的O157抗原编码基因(rfbnO157)和H7抗原编码基因(flicH7)以及毒力基因(志贺毒素基因stx、粘附抹平因子基因eaeA、溶血素基因hlyA)进行检测.方法按照<全国食品污染物检测相关实验室操作手册(食源性致病菌部分)>的要求,用EC肉汤增菌,快诊金卡筛选,接种CHROMagar O157显色平板,血清和生化系列证实.结果1 380件食品中分离到O157H7大肠杆菌4株,分别为福州的生猪肉和水产品蚶中各1株、尤溪的冻鸡肉2株,检出率0.29%.结论福建省食品中存在O157H7大肠杆菌的污染,虽检出率较低,这可能与福建不是O157H7大肠杆菌的流行地区有关,但监测是一项长期的工作,防患于未然,同时福建省也将O157H7大肠杆菌列入了食品安全预警系统的一部分.     

江苏省1999年大肠埃希菌O157：H7宿主动物带菌情况调查

目的 了解江苏省不同地区大肠埃希菌O157：H7宿主动物带菌情况及其毒力基因阳性率。方法 在不同流行强度的地区分别设立监测点，采集猪、鸡，羊，牛等家畜家禽粪便标本，用免疫磁珠法进行病原菌分离培养，并用多重引物聚合酶链反应进行毒力基因分析。结果 6个监测点共采集猪、鸡、羊、牛等家禽粪便标本1767份，共检出大肠埃希菌O157：H7170株，总带菌率为9.62%。其中，以牛、羊带菌率较高，分别为19.05%和12.01%。对85株菌进行SLT1、SLT2、eaeA和hly4种毒力基因的检测，56.47%的菌株毒力基因阳性，且以同时带有SLT2、eaeA和hly3种毒力基因最为常见，占带毒菌株的79.17%。结论 宿 主动物带菌率与当地疾病流行强度有关，即有确诊病人的地区宿主动物带菌率及菌株毒力基因阳性率最高，其次为仅有零星病例的地区，而无相关病例的地区最低，提示加强宿主动物大朦胧怕埃希菌O157：H7监测，对疫情的分析和疫情预测具有重要意义。     

2001年中国食源性致病菌及其耐药性主动监测研究

目的　旨在监测中国食源性致病菌及其耐药性。方法　中国疾病预防控制中心营养与食品安全所建立的全国食品污染物监测网的食源性致病菌监测部分 ,2 0 0 1年在全国 11个省市设点采样并检测了七大类 (生肉、熟肉、生奶、冰激淋、酸奶、水产品和蔬菜 )共 4 0 34份样品。结果　沙门氏菌、大肠杆菌O15 7∶H7和单核细胞增生李斯特氏菌 ,总阳性率 5 5 0 %。其中沙门氏菌 3 32 % ,单核细胞增生李斯特氏菌 1 2 9% ,大肠杆菌O15 7∶H70 82 %。生肉的污染情况最为严重 ,阳性率 12 96 %。共分离出沙门氏菌 137株 ,德比沙门氏菌、阿贡纳沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、里定沙门氏菌、鸭沙门氏菌、明斯特沙门氏菌及鼠伤寒沙门氏菌 7种血清型占 80 %。结论　沙门氏菌的血清型分布和耐药性各个省不同。自生、熟肉中分离到O15 7∶H7的强毒株。对分离的沙门氏菌、大肠杆菌检测了 14种抗生素的耐药性 ,结果表明沙门氏菌和大肠杆菌中都有多重耐药株。     

食品样品中大肠杆菌O157:H7复合PCR检测方法的研究

根据大肠杆菌O15 7:H7特异性基因fliC ,rfbE ,SLTI与SLTII设计四对引物 ,建立了复合PCR方法 ,扩增产物长度分别为为 5 6 0bp ,6 78bp ,2 10bp与 4 84bp。该方法可以一步检测出O15 7与H7特异性抗原基因 ,并可同时检测该菌产生SLT毒素的类型 ,与 71株试验菌株的基因型完全配合 ,是一种特异、高效的检测方法。该方法适用于牛奶样品中大肠杆菌O15 7:H7的检测 ,经过增菌步骤检测限可达 0 1cfu ml     

Sequence heterogeneity of the eae gene and detection of verotoxin-producing Escherichia coli using serotype-specific primers.

The distribution of the Escherichia coli attaching and effacing (eae) gene in strains of verotoxin-producing E. coli (VTEC) isolated from cattle and humans was studied. The majority of strains isolated from humans with bloody diarrhoea or HUS and cattle with severe diarrhoea were eae positive (82 and 83% respectively). In contrast, 59% of VTEC isolated from asymptomatic cattle were eae negative and of the remaining 41% that were eae positive, the majority were serotype O157. H7. The nucleotide sequence of the 3'' end of the eae gene of enteropathogenic E. coli (EPEC) of serotype O55. H7 was found to be almost identical to that of serotype O157. H7. Specific primers are described which detect the eae sequences of VTEC serotypes O157. H7, O157. H-, and EPEC serotypes O55. H7 and O55. H-. The nucleotide sequence of the 3'' end of the eae gene of serotype O111. H8 differed significantly from that of O157. H7. Primers were developed to specifically identify the eae sequences of VTEC serotypes O111. H- and O111. H8. We conclude that whereas the majority of VTEC associated with disease in cattle and humans possess the eae gene, the gene itself may not be necessary to produce haemorrhagic colitis and HUS. Sequence heterogeneity in the 3'' end of eae alleles of VTEC permits specific identification of subsets of these organisms.     

衢州市2000-2009年肠出血性大肠埃希菌O157∶H7监测

目的了解浙江省衢州市肠出血性大肠埃希菌O157∶H7人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况。方法在流行季节采集腹泻患者、动物粪便以及各类食品、苍蝇等样本,MEC肉汤增菌后,用特异性免疫磁珠集菌,以科玛嘉显色平板分离,纯化的菌株进行生化鉴定、血清分型及毒力基因检测。结果 2000-2009年,共检测样本12 292份,检出EHEC O157∶H7 19株,总检出率为0.15%。其中4种宿主动物粪便样本中检出18株,检出率分别为羊2.14%、牛1.29%、猪0.45%、鸭0.19%;食品中从生猪肉中检出1株,检出率0.17%;腹泻患者和苍蝇样本中均未检出。经毒力基因检测,其中16株stx2+hly+eaeA阳性,1株hly+eaeA阳性,其余2株不带毒力基因,带毒率89.47%。结论浙江省衢州市部分动物中产毒的EHEC O157∶H7带菌率较高,表明该地区存在暴发或流行的潜在危险,应加强综合监测。     

Polymerase chain reaction screening for Salmonella and enterohemorrhagic Escherichia coli on beef products in processing establishments

Pathogenic Escherichia coli strains on raw or insufficiently cooked foods are of public health concern as serious disease may result from their ingestion. Therefore, many commercial producers of beef products screen for E. coli O157:H7 before shipment. While Salmonella is not considered an adulterant on raw beef products, it is used as an indication of process control. To detect these microorganisms, rapid screening methods are often used to provide results within 8-24 hours after sampling. During 2005-2008, about 971,389 samples from several commercial beef production plants were tested using a rapid screening method based on the polymerase chain reaction to determine if they were presumptively positive for bacterial cells carrying Salmonella or Shiga toxin-producing E. coli-specific genes. Of the product lots sampled (trim, ground beef, and variety meats), 15% were positive for the stx(1) and/or stx(2) (Shiga toxin genes), 9.1% for the eae gene (the attaching and effacing gene [eae] encoding intimin), 3.0% for an rfb gene region (encoding the O157-specific O side chain polysaccharide), and 1.67% for Salmonella by the polymerase chain reaction assay. In general, lots of ground beef showed the lowest frequency of contamination, and variety meats (by-products of carcass evisceration), the highest. Overall, 4.6%, 4.6%, and 0.8% samples were screen-positive for enteropathogenic E. coli, enterohemorrhagic E. coli, and E. coli O157, respectively. Of the E. coli O157-positive samples, 14% were also Salmonella positive. The frequency of screen-positive samples increases during the summer months, probably because of the prevalence of climatic conditions more conducive to microbial growth. The presence of fecal organisms in beef products suggests a failure of sanitary controls during processing and the more prevalent relatives of E. coli O157, Shiga toxin-producing Escherichia coli, enteropathogenic E. coli, and enterohemorrhagic E. coli, serve as more sensitive indicators of contamination than O157 strains alone.     

大肠埃希菌O157:H7分离鉴定过程中赫尔曼埃希菌的鉴别

目的：鉴别大肠埃希菌O157：H7和赫尔曼埃希菌。方法：观察菌株在山梨醇麦康凯，营养琼脂及Chromagar O157培养基上菌落形态。生化试验检测菌株的生化特性，血清凝集试验检测菌株的O157和H7抗原，聚合酶链反应法检测O157和H7特异性基因。结果：在营养琼脂培养基上，5株赫尔曼埃希菌均产黄色色素，2株O157：H7菌不产色素；在Chromagar O157培养基上，2株O157：H7菌株呈紫红色，2株赫尔曼埃希菌株呈蓝色，其余3株赫尔曼埃希菌株呈黄绿色。O157：H7菌株KCN试验均为阴性，而赫尔曼埃希菌阳性。O157和H7抗血清坡片凝集试验，7析均为强凝集。O157：H7菌株与O157单克隆抗血清玻片凝集试验均为强凝集，而赫尔曼埃希菌均不凝集。O157：H7菌株O157和H7特异性基因均为阳性，赫尔曼埃希菌均为阴性。结论：赫尔曼埃希菌与O157多克隆抗血清有交叉反应，但单克隆抗血清能区分O157：H7和赫尔曼埃希菌。KCN试验和特异性基因检测亦能鉴别这两种菌。在营养琼脂和Chromagar O157培养基上的菌落形成也有助于两菌的区分。     

Prevalence and characteristics of Escherichia coli serotype O157:H7 and other verotoxin-producing E. coli in healthy cattle.

From February to July of 1994, 328 faecal samples from 32 herds were collected and verotoxin-producing Escherichia coli (VTEC) found on 84% of the farms. The proportion of animals infected varied from 0-63%. VTEC were recovered from 52 (20%) of 257 cows and from 16 (23%) of 71 calves. Although the VTEC belonged to 25 different serogroups, 7 (O8, O20, O22, O77, O113, O126 and O162) accounted for 46% of strains. Nearly 45% of the strains. Nearly 45% of the 83 bovine VTEC strains belonged to serogroups associated with haemorrhagic colitis and haemolytic uraemic syndrome in humans. However, only 2 (2%) of 83 VTEC strains isolated from cattle belonged to enterohaemorrhagic E. coli (EHEC) serotypes (O26:H11 and O157:H7), and only 8 (10%) were positive for the attaching and effacing E. coli (eae) gene sequence. Polymerase chain reaction (PCR) showed that 17 (20%) of VTEC strains carried VT1 genes, 43 (52%) possessed VT2 genes, and 23 (28%) carried both VT1 and VT2 genes. Characterization of VTEC isolates revelated a heterogeneous population in terms of serogroup and toxin type in the positive herds. This study confirms that healthy cattle are a reservoir of VTEC, but, the absence of eae genes in most bovine VTEC strains suggests that they may be less virulent for humans than eae-positive EHEC.     

浙江省肠出血性大肠杆菌O_(157)∶H_7动物宿主带菌情况调查

目的了解浙江省肠出血性大肠杆菌O157∶H7在动物宿主中的带菌情况。方法采集浙江省2006-2008年监测点的动物粪便进行病原菌培养和毒力基因及耐药性检测。结果共采集动物粪便3915份,检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7阳性20份,带菌率为0.51%,其中以羊和牛的带菌率最高,分别为1.46%和1.43%,散养动物带菌率高于圈养动物(χ2=5.771,P=0.016)。阳性菌株stx2、hly和eaeA3种毒力基因均呈阳性,stxl均呈阴性。对红霉素和利福平耐药,耐药率达90%以上,对其他受试抗生素敏感。结论浙江省动物宿主有一定的带菌率,且菌株具有毒力基因,散养动物的带菌率高于圈养动物,应进一步加强监测,防止O157∶H7引起人群的爆发流行。