恶性肿瘤转移相关基因改变的起源

经典的肿瘤转移理论认为，转移是肿瘤细胞克隆选择的结果，在肿瘤内部仅有少数肿瘤细胞具有转移潜能，且转移发生在肿瘤进展的晚期。然而随着基因芯片技术的应用，通过对不同转移潜能的乳腺癌细胞亚群进行基因表达谱分析发现，不同转移潜能的细胞亚群表达出不同临床预后的基因表达标志。高转移潜能乳腺癌细胞亚群的“差预后（poor prognosis signature）”基因表达标志可预测乳腺癌患者的高转移潜能和低生存率；而“好预后（good prognosis signature）”的基因表达标志则预测相反的结果。肿瘤细胞的这种转移潜能在肿瘤形成的早期已经存在，且原发肿瘤中的大部分细胞均具有相应的转移能力。在乳腺癌患者，通过对临床标本的研究表明好预后和差预后的基因表达标志能较准确地预测预后。在不同类型肿瘤的原发病灶和转移瘤之间的基因表达谱基本相同，而伴有和不伴有转移的相同类型原发瘤之间的基因表达谱有明显差异，这也说明肿瘤转移相关基因改变发生在肿瘤形成的早期。当然，和所有新理论的出现一样，这一理论尚需通过相关的实验进一步验证。     

胃肠癌多原发癌的及时诊断和治疗

在１１４１例胃肠癌中发现多原发癌３１例（占２．７２％），其中同时型９例，异时型２２例，双重癌２６例、三重癌４例，四重癌１例，发病年龄２１岁－８１岁，中位间隔时间２年９个月，重视高危人群手术前的全面检查，术中仔细探寻，正规操作，必要时行术中纤维镜检查，以及术后定期作胃肠镜检查是提高胃肠多原发癌检出率的重要因素，对于胃肠多原发癌应力求根治，以利提高疗效。     

凋亡相关基因在喉鳞癌中的表达概况

目的了解凋亡相关基因在喉鳞状细胞癌中的表达概况，探寻其在喉鳞癌及正常喉组织中的表达差异及意义。方法提取喉鳞癌及癌旁正常喉组织的总RNA，采用Ampolablaleing—LRP方法，分别将上述提取的RNA合成生物素标记的cDNA探针。将合成的探针与细胞凋亡GEArray Q芯片膜（96个凋亡相关基因）进行杂交。采用化学发光方法，并用X感光片记录喉鳞癌标本和对照标本的基因信号表达强弱。将X光片感光点转化成TIFF图形文件，使用ScanAlyze和GEArray Analyzer软件进行资料分析。结果利用基因芯片杂交筛选的方法，在所分析的与凋亡相关的96个基因中，survivin、bcl-2、TNF-β／Lta、TNF-α等23个基因在喉鳞癌组织中表达上调；hak、hax、hik、p53等22个基因表达下调。结论通过细胞凋亡GEArray Q芯片膜杂交筛查的方法发现，在喉鳞癌中抑制凋亡的基因表达上调，促进凋亡的基因表达下调，这些基因改变组成了喉鳞癌特异的与凋亡相关的基因表达谱，为全面系统地研究喉鳞癌中与凋亡相关基因表达情况，及探讨喉鳞癌的发病机制提供了有益的线索。     

宫颈癌细胞中HMAT1基因的功能预测及其干扰小RNA的筛选

目的预测宫颈癌细胞中人类与鼠同源乳腺转化基因(HMATI)的功能及筛选出能有效沉默该基因的干扰小RNA.方法采用细胞原癌基因、抑癌基因分类芯片对原发性宫颈癌标本进行筛选,通过生物信息学分析HMAT1基因,针对HMAT1基因设计了三条特异性干扰小RNA,分别与pRNAU 6.1-Hygro重组后,与含有该基因的重组体瞬时共转染B16F0细胞,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测对HMAT1基因的干扰效果.结果细胞原癌基因、抑癌基因分类芯片筛选出表达量明显上调的基因共四条.对其中上调明显的HMAT1基因,通过生物信息学预测其为一个调节细胞生长的看家基因,其编码的蛋白质为一个Ⅰ型跨膜蛋白,且其酪氨酸蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点可能与HMAT1蛋白功能活化有关.半定量检测结果表明其中第一条特异性干扰小RNA有显著性抑制效果(P＜0.05).结论初步预测HMAT1基因很可能是与宫颈癌相关的癌基因,其编码的蛋白质可能参与细胞的信号转导,设计出针对该基因的干扰小RNA可以有效沉默HMAT1基因.     

Hp感染与胃癌患者外周血中CK19和CK20表达的相关性研究

目的探究幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌微转移的相关性。方法选取2011年10月至2012年12月间甘肃省人民医院收治的64例胃癌患者和10例胃溃疡等良性病变患者,检测所有患者Hp,依结果分为Hp(+)组与Hp(-)组。采集患者外周血,使用流式细胞仪测定细胞因子CK19和CK20表达水平,并比较胃癌和胃溃疡等良性病变患者Hp(+)组与Hp(-)组外周血中CK19和CK20的表达水平。结果良性病变患者外周血中均未检出CK19和CK20。Hp(+)胃癌患者外周血中CK19阳性表达率为54.3%,CK20阳性表达率为51.4%,Hp(-)胃癌患者外周血中CK19阳性表达率为27.6%,CK20阳性表达率为34.5%,Hp(+)胃癌患者CK19和CK20表达均高于Hp(-)胃癌患者,但前者差异有统计学意义(P<0.05),后者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Hp感染使胃癌患者外周血中细胞因子高表达,可能促进胃癌微转移的发生。     

乙型肝炎病毒X蛋白羧基端30个氨基酸缺失突变体转染Huh7细胞的基因表达谱和蛋白质组差异分析

目的:本课题组既往研究显示乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)羧基端30个氨基酸的缺失突变雄(△HBx)具有明显不同于野生型HBx(wtHBx)的细胞生物学效应,因此,本研究进一步探讨△HBx和wtHBx导致Huh7细胞差异生物学效应的分子基础。方法:采用cDNA芯片和双向凝胶电泳方法,从基因和蛋白质组水平,对分别转染了△HBx和wtHBx的Huh7细胞进行检测。结果:cDNA芯片检测结果显示,对比wtHBx组,△HBx组存在193个基因(0．95％)的显著性改变,154和39个基因分别显示表达上调和下调。双向凝胶电泳结果显示,对比wtHBx组,△HBx组存在147个蛋白差异点。基因表达谱和质谱分析结果显示,△HBx组差异表达的基因和蛋白主要涉及宿主细胞的基因转录、细胞连接、信号转导和代谢、免疫应答等过程及癌基因和抑癌基因。结论:HBx缺失突变体对细胞基因和蛋白质的影响是广泛的,涉及肝组织特异性的代谢基因的变化。这些差异表达的基因和蛋白质在HBx突变致癌过程中是否发挥了重要的作用,需要进一步的研究证实。     

p53和nm23杂合性缺失及表达异常在晚期胃肠癌转移中的作用

目的：研究原发胃肠肿瘤及其淋巴结转移癌和肝转移癌中p53和nm23基因的杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)及其表达情况,探讨基因杂合性缺失和蛋白表达异常在肿瘤细胞转移中的作用,验证转移进展模型的可信性。方法：用多聚酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)银染法和免疫组织化学方法分析21例原发癌、16例淋巴结转移癌和21例肝转移癌中p53和nm23基因的杂合性缺失及其表达状况。结果：原发灶、淋巴结转移组织和肝脏转移组织中,p53位点的LOH发生率分别为37.5%、50.0%和68.8%(P＞0.05)．nm23的LOH发生率分别为26.7%、36.4%和40.0%(P＞0.05)；突变型p53蛋白表达率依次为85.7%、87.5%和90.5%(P＞0.05),nm23蛋白表达率分别为76.2%、50.0%和42.9%(肝转移与原发灶相比,P＜0.05)。结论：肿瘤发展过程中,遗传学异常逐步积累,最终转移发生,本研究结果符合转移进展模型理论；p53和nm23的异常改变促进胃肠癌的发展和转移,是肿瘤发展后期的重要分子事件。     

联合检测端粒酶和CK20诊断大肠癌外周血微转移的研究

目的：联合检测细胞角蛋白20（cytokeratin 20，CK20）表达和端粒酶的活性，初步探讨它们在检测大肠癌微转移中的意义。方法：用RT-PCR法，检测52例大肠癌患者术前和术后不同时间外周血中的CK20的表达。用端粒重复片段扩增方法检测相应患者外周血中的端粒酶的活性。结果：52例患者外周血中检出CK20表达及端粒酶活性检测阳性率按不同时间段分别为61．9％与57．7％（术前），69．1％与72．1％（术后24h），34．6％与30．9％（术后早期化疗结束后）。两者的阳性表达均与患者Duke’S分期存在显著性相关。结论：端粒酶和CK20均可作为标志物来检测大肠癌患者外周血中微转移。     

hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值

目的:评价hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值.方法:采用RT-PCR检测早期乳腺癌患者CK19、hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞.结果:hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞阳性率(52.0%)均高于良性乳腺疾病患者(16.7%)和健康体检者(5.0%), P值分别为0.004和0.000;阳性率与癌组织HER-2过表达相关,P=0.049.联合检测的敏感度为57.5%,特异度为88.6%.26例联合检测阳性患者,13例随访期出现转移复发,P=0.001;中位无瘤生存期明显降低,P=0.000.结论:hMAM和CK19 mRNA是一组敏感度和特异度较好的诊断早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞的基因标志,可能作为早期乳腺癌术后监测转移复发辅助指标.     

细胞角蛋白20检测对判断大肠癌淋巴结微转移的临床意义

目的研究细胞角蛋白20（CK20）的表达对判定大肠癌淋巴结微转移的意义。方法对47例大肠癌根治术患者的331枚淋巴结进行CK20免疫组织化学染色检查,判定是否有微转移的存在,并对所有患者进行随访。结果CK20免疫组织化学染色与普通病理染色对大肠癌淋巴结转移的检出率差异有统计学意义（P〈0．01）。前哨淋巴结及同组患者未进行前哨淋巴结定位的淋巴结两组微转移的检出率差异有统计学意义（P〈0．05）。有淋巴结微转移的患者术后3年死亡率明显高于无淋巴结微转移者（P〈0．05）。结论大肠癌淋巴结微转移是影响患者预后的独立危险因素。CK20免疫组织化学染色可作为临床判断大肠癌淋巴结微转移的有效方法。     

CK15及CK19在表皮及皮肤附属器肿瘤中的表达及其诊断价值

目的:检测表皮干细胞标记物细胞角蛋白15(CK15)及细胞角蛋白19(CK19)在表皮肿瘤及皮肤附属器肿瘤中的表达强度.方法:选择155例东营市人民医院病理科确诊的皮肤肿瘤,进行免疫组织化学检测,观察并记录CK15和CK19的表达强度.结果:155例皮肤肿瘤组织中CK15和CK19的表达强度不同.CK15毛分化肿瘤均显...     

肺癌患者三种微转移标志物临床意义的比较研究

目的评价肺癌患者外周血LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA诊断微转移的特异性、敏感性,探索肺癌患者微转移的早期诊断.方法以肺部良性疾病30例、健康人10例的外周血为对照,以LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA的表达为指标,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测48例肺癌患者外周血、手术切除区域44个淋巴结的微转移,并根据淋巴结病理切片、临床分期、随访过程中复发转移率评价微转移的临床意义.结果①LUNX mRNA、CK19 mRNA、CEA mRNA在肺癌组织的表达率均为100%(35/35).②48例肺癌患者外周血中LUNX mRNA阳性30例(62.5%),CK19 mRNA阳性24例(50.0%),CEA mRNA阳性32例(66.7%);44枚肺癌患者手术切除的区域淋巴结,LUNX mRNA阳性16枚(36.4%),CK19 mRNA阳性12枚(27.3%),CEA mRNA阳性18枚(40.9%).③30例肺部良性疾病患者外周血中,CK19 mRNA表达阳性2例(6.7%),LUNX mRNA或CEA mRNA表达均阴性;10例健康人外周血和11枚取自肺良性疾病患者的淋巴结,3个指标检测结果均为阴性.④44枚肺癌区域淋巴结中,普通病理组织学检出6枚(13.6%)有癌转移,阳性率明显低于RT-PCR检测结果(P<0.05).⑤3种微转移指标的阳性率均随TNM分期的增加而升高(P=0.01).⑥随访发现外周血微转移阳性患者的复发率高于阴性患者.结论 LUNX mRNA、CK19 mRNA 、CEA mRNA有可能成为监测肺癌微转移的分子标志.     

具有转移能力鼻咽癌细胞株候选抗药与多药耐药相关基因的筛选

目的 筛选具有转移能力的鼻咽癌细胞株中候选抗药与多药耐药相关基因.方法 利用8000点的基因芯片比较5-8F和6-10B细胞株之间的差异表达基因,并利用在线MILANO程序分析,筛选抗药与多药耐药相关基因.半定量RT-PCR验证差异表达基因.结果 分析5-8F和6-10B细胞株之间基因表达谱后,共找到283个差异表达基因,其中表达上调基因185个,下调基因98个.MILANO程序分析后,在5-8F细胞株中找到4个可能与抗药和多药耐药相关的高表达基因:UGT1A9(15.85倍)、MVP(6.77倍)、CAV1(2.49倍)和HIF1A(2.67倍).半定量RT-PCR验证4个基因筛选结果的可靠性.结论 经在线MILANO程序分析鉴定的鼻咽癌5-8F和6-10B细胞株之间的差异表达基因可能与具有转移能力鼻咽癌细胞株的抗药和多药耐药有关.     

多排螺旋CT在检测早期胃癌淋巴结转移中的临床价值评估

目的评估多排螺旋CT在检测早期胃癌术前淋巴结转移中的临床价值。方法使用多排螺旋CT评估77例早期胃癌患者的淋巴结转移情况,其中24例患者采用的多排螺旋CT层厚为2.5～5.0 mm,53例患者采用的层厚为7.5～10.0 mm。结果多排螺旋CT检测淋巴结转移的准确率为74.0%,而手术评估的准确率为54.5%。采用2.5～5.0 mm层厚的多排螺旋CT对淋巴结转移诊断的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为75.0%、65.0%、30.0%和92.9%;采用7.5～10.0 mm层厚的多排螺旋CT对淋巴结转移诊断的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为62.5%、82.2%、38.5%和92.5%;而相应手术的评估值分别为45.5%、63.6%、17.2%和87.2%。结论MDCT对淋巴结转移诊断的准确率较高,对早期胃癌淋巴结转移的检测有一定的临床价值。     

肝细胞癌细胞诱导和体外培养的大鼠肝星状细胞基因差异表达

目的 从基因水平了解肝细胞癌(HCC)内的星状细胞(HSC)与正常肝HSC的异同.方法 密度梯度离心分离HSC,用大鼠HCC细胞株CSF的条件培养基诱导HSC活化.cDNA微阵列比较静止、体外培养活化和诱导活化HSC之间22 012个基因的表达,并通过实时逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)和Western blot检测进行验证.结果 与静止HSC相比,体外培养HSC共有1672个基因差异表达,包括促炎症因子、细胞表面受体、黏附分子、信号转导分子、免疫因子等,其中1012个基因上调,660个基因下调.肿瘤诱导活化HSC有711个基因差异表达,其中420个基因上调,291个基因下调,有一部分基因表达与体外培养相同,部分基因如Raf1、Rac2、Adam17、Wnt6、MMP-9和TNF等,呈特异性表达.real-time RT-PCR和Western blot检测结果与cDNA微阵列检测结果相符.结论 HCC细胞可特异性驱动HSC的活化,诱导活化的HSC在HCC细胞的浸润和转移中可能起重要作用.瘤内活化的HSC应作为研究HSC生物学功能的标准.     

肺癌高转移和低转移细胞株中差异基因的分析

目的:以人肺癌低转移细胞株SPC-A-1为对照,分析人肺癌高转移细胞株SPC-A-1sci的分子转移机制及其相关的信号通路,寻找肺癌转移的关键基因.方法:应用芯片技术检测人肺癌低转移细胞株SPC-A-1和高转移细胞株SPC-A-1sci的差异基因.采用显著性通路分析和构建信号转导网络等生物信息学分析方法寻找肿瘤转移相关的潜在关键基因和信号通路.结果:与SPC-A-1细胞比较,SPC-A-1sci细胞共有上调表达的差异基因2 892个,下调表达的差异基因3 248个;上调差异基因参与的显著性信号转导通路共有48条,下调差异基因参与的显著性信号转导通路共65条.网络中的关键基因主要是丝裂原活化蛋白激酶1、表皮生长因子受体、AKT1、AKT3、PIK3CD( phosphoinositide-3-kinase,catalytic,delta polypeptide)、PIK 3R1 [phosphoinositide-3-kinase 3,regulatory subunit 1 (alpha)]、PIK 3R3、KRAS和胰岛素样生长因子1受体等.结论:人肺癌高转移细胞株SPC-A-1sci的基因芯片检测和生物信息学分析为肺癌转移的基础研究和临床防治提供了依据.     

鼻咽癌343例放射性核素骨显像的临床分析

目的 通过分析鼻咽癌初治患者放射性核素骨显像资料,了解骨转移发生情况及其预后.方法 对343例鼻咽癌初治患者均行常规放射性核素骨显像检查,对其进行单因素及多因素分析,并在治疗后1、2、3年进行随访.结果 343例患者初诊时骨转移发生率为32.9%,其中男性37.5%,女性17.7%,多因素分析结果显示不同性别、年龄、病期间差异有统计学意义.总体累计生存率为:1年92.1%,2年83.9%,3年78.8%.结论 鼻咽癌放射性核素骨显像灵敏度较高,对鼻咽癌的诊断、分期、治疗及预后判断有重要作用,应作为鼻咽癌患者的常规检查.