CKLF样MARVEL跨膜结构域超家族7基因在食管癌中的表达及其过表达对食管癌细胞增殖的影响

目的 探讨CKLF样MARVEL跨膜结构域超家族7(CMTM7)基因在食管癌中的表达情况及其过表达对食管癌细胞增殖的影响.方法 收集97例食管癌患者的手术标本,包括食管癌组织及癌旁正常组织,采用免疫组化法检测CMTM7在食管癌与癌旁组织组织中的表达情况.分别采用实时荧光聚合酶链式反应、Western Blot检测人食管癌细胞系CE81T和正常人食管鳞状上皮细胞Het-1A中CMTM7 mRNA及蛋白的表达情况.将食管癌细胞系CE81T分为两组,实验组加入转染过表达CMTM7的腺病毒表达载体(Ad-CMTM7),对照组加入空载体腺病毒,在培养24 h、48 h、72 h和96 h时,采用细胞活性检测法(CCK-8)检测两组细胞增殖情况.结果 免疫组化结果显示CMTM7在食管癌中低表达,在癌旁组织中高表达.正常食管上皮细胞Her-1A中的CMTM7 mRNA和蛋白表达水平明显高于食管癌细胞CE81T.CCK-8结果显示,各时间点CE81T细胞实验组的吸光值均低于对照组(P＜0.05).结论 食管癌的CMTM7表达水平下调,过表达CMTM7对食管癌细胞的增殖具有显著的抑制作用.     

中期因子在食管鳞状细胞癌中的表达及生物学功能研究

目的:探讨中期因子(midkine,MDK)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及其生物学功能.方法:收集本院胸外科行手术切除的食管鳞状细胞癌组织及对应癌旁组织60例,采用免疫组化染色方法检测肿瘤组织及对应癌旁组织中MDK的表达情况,统计分析MDK表达与肿瘤临床病理特征间的相关性;体外培养人食管鳞状细胞癌Eca-109细胞,利用siRNA特异性敲低细胞内MDK的表达水平,分别采用MTT及流式细胞仪检测Eca-109细胞增殖及凋亡能力的变化.结果:与癌旁组织相比,ESCC组织中MDK呈明显高表达趋势(P＜0.05);ESCC组织中MDK高表达与肿瘤体积增大(＞3 cm)、肿瘤淋巴结转移及高TNM分期(Ⅲ+Ⅳ期)相关(P＜0.05);在体外,敲低MDK表达可显著抑制Eca-109细胞增殖能力,并促进细胞凋亡的发生(P＜0.05).结论:中期因子与食管癌组织生长有关,特异性下调食管癌细胞内MDK的表达能够显著抑制食管癌细胞增殖并促进其凋亡的发生.     

脂肪酸合酶在原发性肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞增殖的影响

目的:探讨脂肪酸合酶(FAS)在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞增殖的影响。方法:应用RT-PCR、Western blot方法检测原发性肝癌组织细胞中脂肪酸合酶的表达情况,以及脂肪酸合酶对人高转移性肝癌细胞株的增殖影响作用。应用C75处理后观察FAS表达变化及细胞增殖情况。结果:脂肪酸合酶在原发性肝癌组织及人高转移性肝癌细胞株HCCLM3中异常高表达。随着C75浓度增加肝癌细胞中脂肪酸合酶表达量明显降低,细胞自身增殖下降。结论:脂肪酸合酶在肝癌细胞中异常高表达,且随着表达量的增高直接影响肝癌细胞的增殖和生长,此为原发性肝癌的治疗提供了相关靶点。     

miR-581在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌K30细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的检测miR-581在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况及对食管鳞癌细胞K30增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法收集33例食管鳞状细胞癌组织及其癌旁组织标本,应用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测miR-581的表达情况; 采用miR-581 mimic转染食管鳞癌细胞K30作为实验组,用阴性对照片段转染K30作为阴性对照组,qPCR检测miR-581的转染效率,CCK8检测细胞增殖能力的变化,Transwell实验检测迁移和侵袭能力的变化。结果与食管癌旁组织比较,癌组织中的miR-581表达下调; CCK8结果显示,过表达miR-581能抑[JP2]制食管癌细胞的增殖能力; Transwell迁移及侵袭实验结果显示,过表达miR-581能显著减少食管癌细胞穿膜细胞数。结论miR-581与食管鳞癌的进展相关,其机制有待进一步研究。     

食管癌癌变过程中的细胞凋亡及其与细胞增殖的关系

目的 定量检测食管癌癌变过程中细胞凋亡及细胞增殖状况，并分析两者在食管癌癌变过程中的相关性及生物学意义。材料与方法 食管癌标本７１例，分别作病理组织学诊断、ＴＵＮＥＬ检测凋亡、免疫组化检测Ｋｉ－６７的表达以观察细胞增殖状况。结果 食管癌癌变过程中细胞增殖指数及细胞凋亡系数均逐渐升高，两者呈正相关；在食管浸润癌中，随着癌分化程度的降低，细胞增殖指数继续增高，而细胞凋亡指数逐渐降低，两者呈负相关。结论     

食管癌癌变过程中的细胞凋亡及其与细胞增殖的关系

目的定量检测食管癌癌变过程中细胞凋亡及细胞增殖状况、井分析两者在食管癌癌变过程中的相关性及生物学意义。材料与方法食管癌标本７１例,分别作病理组织学诊断、ＴＵＮＥＬ检测凋亡、免疫组化检测Ｋｉ－６７的表达以观察细胞增殖状况。结果食管癌癌变过程中细胞增殖指数及细胞凋亡指数均逐渐升高．两者呈正相关;在食管浸润癌中,随着癌分化程度的降低,细胞增殖指数继续增高,而细胞凋亡指数逐渐降低,两者呈负相关。结论细胞凋亡贯穿了食管癌发生发展全过程,在食管癌癌变过程中,细胞凋亡与细胞增殖密切相关。     

食管癌癌细胞核CyclinD1和CyclinE表达的定量检测及分析

目的 观察CyclinD1、CyclinE在食管癌和癌周正常食管组织的表达,从量化角度阐明其在食管癌组织中表达的病理学意义.方法 常规石蜡包埋、HE切片确诊,用免疫组化MaxVision法检测CyclinD1,CyclinE在食管癌和癌周正常食管组织的表达,Image-pro plus图像分析软件对其表达强度进行定量分析,并用表达的阳性单位(positive unit,PU)反映其表达强度.结果 CyclinD1、CyclinE蛋白在食管癌和正常食管组织中的表达主要定位在细胞核;CyclinD1、CyclinE蛋白在食管鳞状细胞癌和腺鳞癌癌细胞棱中表达的PU值高于正常食管组织(P<0.001);CyclinD1、CyclinE蛋白表达的PU值与食管鳞状细胞癌分化程度有关(P<0.001);随着食管鳞状细胞癌分化程度的降低,CyclinD1蛋白表达量逐级增高;CyclinE蛋白在低分化鳞状细胞癌表达的PU值高于高分化及中分化鳞状细胞癌.CyclinD1与CyclinE在食管癌中表达具有相关性(r=0.652,P<0.01).结论 CyclinD1、CyclinE蛋白的表达与食管癌的发生、发展及食管鳞状细胞癌恶性程度有关,可能成为判断其指标之一.食管癌CyclinD1的表达与CyclinE的表达密切相关,CyclinD1和CyclinE可能在食管癌癌变过程中起协同作用.     

CD133在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究食管鳞状细胞癌组织中CD133的表达与肿瘤细胞增殖及侵袭转移的关系。方法:取40例食管鳞状细胞癌患者的组织石蜡标本,用免疫组化方法检测CD133的表达,同时检测Ki67的表达,分析探讨CD133表达与食管鳞状细胞癌临床病理因素的相关性。结果:肿瘤组织中CD133及Ki67的表达率均较癌旁组织高,且CD133的表达与肿瘤的侵润深度、淋巴结转移情况及分化程度呈正相关,同时CD133的表达与患者术后远期生存率具有相关性。但CD133与Ki67的表达情况无显著相关性。结论:食管鳞状细胞癌组织中,CD133的表达与肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移具有相关性,可以成为评价食管癌鳞状细胞癌肿瘤生物学特性及判断预后的的指标。     

细胞凋亡表达在食管鳞状上皮细胞癌的临床病理研究

目的 :探讨食管鳞状上皮细胞癌细胞凋亡临床病理意义。方法 :用TUNEL技术免疫组化染色 ,观察30例食管鳞状上皮细胞癌细胞凋亡情况 ,用 10例食管正常鳞状上皮细胞作为对照研究 ,分析它们与食管鳞状上皮细胞癌临床病理因素的关系。结果 :从食管正常鳞状上皮细胞、食管鳞状上皮细胞不典型增生及食管鳞状上皮细胞癌 ,细胞凋亡逐渐减少 ,食管鳞状上皮细胞癌和食管鳞状上皮细胞重度不典型增生的细胞凋亡与食管正常鳞状上皮细胞凋亡比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :细胞凋亡的异常在食管鳞状上皮细胞癌的发生发展过程中起重要作用 ,且检测细胞凋亡对早期食管癌的判断和食管鳞状上皮细胞癌的病理分级具有指导意义。     

Expression and clinical signifcance of tight junction proteins(occludin and ZO-1) in human esophageal squamous cell carcinoma

目的 探讨紧密连接蛋白occludin及ZO-1在食管鳞状细胞癌及手术切缘正常食管黏膜组织中的表达及其临床意义.方法 采用组织芯片和免疫组化法检测49例食管鳞状细胞癌患者的癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织(距肿瘤组织＞5 cm)中occludin和ZO-1的表达,分析食管鳞状细胞癌癌组织中occludin、ZO-1表达与肿瘤的增殖、侵袭和转移之间的关系.结果 食管鳞状细胞癌组织中occludin及ZO-1的阳性表达明显低于手术切缘正常食管粘膜组织 (P＜0.01),且癌组织中occludin、ZO-1的表达与其分化程度及淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 食管鳞状细胞癌的occludin和ZO-1的表达下调或缺失与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移有关,在食管癌的进展中起重要作用.     

敲减cGAS基因对人食管鳞癌细胞TE-1增殖、迁移和凋亡的影响

［摘要］目的: 探究环鸟苷酸腺苷酸合成酶（cyclic guanosine monophosphate adenosine monophosphate synthase,cGAS）蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其对人食管鳞癌TE-1细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法: 免疫组化分析60例食管鳞癌患者癌组织与癌旁组织中cGAS的表达。荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测正常食管上皮细胞与食管鳞癌细胞中cGAS的表达。使用慢病毒构建稳定敲减cGAS的细胞系（TE-1）,荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证敲减效率。CCK8和克隆形成实验检测cGAS敲减后TE-1细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果： 免疫组化结果显示cGAS在食管鳞癌组织中的表达明显高于癌旁组织;食管鳞癌细胞系TE-1、KYSE 150中cGAS的mRNA和蛋白表达明显高于食管正常上皮细胞Het 1A。荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,敲减cGAS后,TE-1细胞cGAS mRNA和蛋白水平的表达明显降低。CCK8、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验表明,敲减cGAS抑制食管鳞癌TE 1细胞增殖、迁移的能力,流式细胞分析显示敲减cGAS促进TE-1细胞凋亡。结论： 敲减cGAS在食管鳞癌细胞增殖、迁移中发挥抑制作用,有效促进细胞凋亡。     

RNA干扰阻断COX-2基因表达对食管鳞状上皮癌EC109细胞株增生和凋亡的影响

目的研究COX-2基因与食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的关系,观察阿司匹林对食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的影响,探索基因治疗和药物抑制肿瘤的机制。方法采用RNA干扰的方法,用荧光显微镜观察RNA干扰的转染效率,用Westernblot方法分析RNA干扰的效果,用噻唑兰法定量检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞增生的影响,用流式细胞仪检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞凋亡的影响。结果Westernblot方法证实,RNA干扰后EC109细胞COX-2表达下降至对照组的40%。MTT法检测结果显示,用COX-2基因干扰后,EC109细胞生长抑制作用增强,COX-2基因干扰和阿司匹林联合作用后,肿瘤细胞的生长抑制作用进一步增强。流式细胞仪检测结果显示,母本细胞组和RNA干扰的阴性对照组凋亡率较低,COX-2基因干扰后,促凋亡作用增加。COX-2基因干扰后再给予阿司匹林,促凋亡作用进一步增加。结论RNA干扰特异性抑制细胞COX-2蛋白的表达后,抑制食管鳞癌细胞株EC109的生长增生,增强凋亡作用,阿司匹林和RNA干扰对肿瘤细胞的增生和凋亡可产生协同效果。     

CDC25A、Smad3在食管鳞癌中的表达及其相互关系

目的探讨CDC25A、Smad3在食管鳞癌组织中表达的意义及CDC25A蛋白与Smad3蛋白、细胞增殖指数、细胞凋亡率的关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测CDC25A蛋白在52例食管鳞状细胞癌、24例正常黏膜中的表达。用流式细胞术检测其中30例食管鳞癌、5例正常黏膜的细胞凋亡率、增殖指数及CDC25A蛋白、Smad3蛋白的表达。结果CDC25A在癌组织中的阳性表达率为50％，明显高于正常黏膜（P〈0．05），CDC25A在高分化和中低分化组、浸润至纤维膜和未浸润至纤维膜组、有淋巴结转移和无淋巴结转移组中的差异显著（P〈0．05）。Smad3蛋白在癌组织中的表达低于正常黏膜（P〈0．05）。Smad3蛋白与CDC25A蛋白的表达呈负相关（r=-0．482，P=0．007）。核膜CDC25A蛋白阳性者的增殖指数高于核膜CDC25A蛋白阴性者（P〈0．05）；细胞质CDC25A蛋白表达阳性者的凋亡率低于细胞质CDC25A蛋白表达阴性者，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Smad3蛋白的下调可能与食管癌中CDC25A蛋白含量升高有关；细胞核中的CDC25A蛋白可能具有促增殖作用；CDC25A蛋白可能参与了食管癌的发生、发展。     

丹皮酚对食管癌细胞放射增敏作用及其机制

目的通过研究丹皮酚对食管鳞癌细胞株KYSE450、TE10放射敏感性的影响及探讨该作用的分子机制,为丹皮酚作为放射治疗增敏药物应用于食管鳞癌的综合治疗提供根据。方法稳定培养食管癌细胞株,经不同浓度的丹皮酚作用后,CCK8法检测细胞增殖。克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡相关蛋白的表达。Western blotting实验检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果丹皮酚剂量依赖性地抑制食管癌细胞的增殖（P < 0.05~P < 0.01）,并且抑制放射治疗后的肿瘤细胞克隆形成能力,增加肿瘤细胞的凋亡率（P < 0.01）;Western blotting实验表示放疗与丹皮酚联合处理可降低Bcl-2的表达,增加Bax、caspase-3、cleaved caspase-3、PARP的表达。结论丹皮酚联合放疗可通过下调Bcl-2表达,上调Bax、caspase-3、PARP、cleaved caspase-3表达,从而抑制体外食管癌细胞的生长,实现放疗增敏。     

SND1在食管鳞癌细胞中的表达及对食管癌细胞恶行生物学行为的影响

目的 研究葡萄球菌核酸酶结构域蛋白1（SND1）基因在人食管鳞状细胞癌(ESCC)中表达水平的表达及对食管癌细胞恶行生物学行为的影响。方法 qRT-PCR及Western blot检测SND1在ESCC细胞株中翻译和转录水平的改变。运用sh-SND1病毒载体构建出SND1稳定干扰的ESCC细胞株模型,利用克隆形成,Transwell小室及流式细胞术等细胞生物学手段研究SND1基因对ESCC细胞增殖和转移、凋亡的影响,运用动物实验研究SND1基因在体内对ESCC细胞的影响。结果 qRT-PCR和Western blot的实验结果表明SND1在ESCC细胞中的转录和翻译水平高于人正常食管上皮细胞（HEEC）;经过培养、染色、拍照和通过统计学分析细胞表型实验数据,结果显示干扰SND 基因表达可显著抑制ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力;干扰SND1的表达抑制体内食管癌细胞的增殖能力;化疗药物敏感实验结果显示SND1干扰组食管癌细胞对CPT的敏感性增加,细胞凋亡率明显升高。结论 SND1在食管癌细胞中表达上调及促进食管癌细胞恶性生物学行为     

FLCN在子宫颈鳞癌组织中的表达及其对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖及凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨folliculin (FLCN)基因在子宫颈鳞癌组织中的表达及其对子宫颈鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 采用qRT PCR和免疫组化法分别检测正常宫颈组织和子宫颈鳞癌组织中FLCN mRNA和蛋白的表达;在子宫颈鳞癌SiHa细胞中敲减或过表达FLCN后,qRT-PCR检测FLCN mRNA表达,采用CCK 8检测各组细胞增殖活力,采用TUNEL和磷酸化组蛋白H3(PH3)染色,观察各组细胞凋亡和增殖情况。结果： 与对照组相比,宫颈鳞癌组中FLCN mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05)。FLCN siRNA 沉默后细胞增殖活力增强、凋亡减弱,PH3蛋白阳性比例增加,TUNEL阳性细胞比例减少(P<0.05或0.01)。过表达FLCN细胞增殖活力减弱、凋亡增强,PH3蛋白阳性细胞比例减少,TUNEL阳性细胞比例增加(P均<0.01)。结论： FLCN基因在宫颈鳞癌组织中呈低表达,其可抑制SiHa细胞增殖并促进其凋亡。     

CAPZA1的3′UTR的高表达对食管癌细胞的增殖、侵袭的影响

目的 探究CAPZA1的3＇UTR的高表达对食管癌细胞的增殖和迁移的影响.方法 提取10株食管癌细胞系的总DNA及RNA,对CAPZA1的3＇UTR进行测序,并采用实时定量PCR方法检测其在10株食管癌细胞系中的表达量情况.将构建的高表达CAPZA1的3＇UTR的质粒和对照质粒瞬时转入KYSE180中,采用流式细胞检测高表达后对细胞凋亡的影响.采用MTS及克隆形成实验检测CAPZA1的3＇UTR高表达后对细胞增殖和生长的影响.利用Transwell实验检测高表达后对食管癌迁移、转移能力的影响.结果 测序结合real-time PCR结果选择KYSE180作为实验对象,之后实验证明CAPZA1的3＇UTR高表达后可以促进细胞生长和增殖并且可以促进细胞的侵袭.结论 CAPZA1的3＇UTR的高表达是具有促癌的作用的.     

食管鳞癌组织中胰岛素样生长因子-1受体的表达

目的:探讨食管鳞癌组织中胰岛素样生长因子 -1受体(IGF- 1R)的表达及其与食管鳞癌发生发展的关 系。方法:应用免疫组织化学SP技术,对54例食管鳞癌组织、22例癌旁不典型增生组织和54例正常组织中IGF -1R的表达情况进行检测分析。结果:食管鳞癌组织、癌旁不典型增生及正常组织中IGF- 1R的阳性表达率分别为 92.59%、59.09%和20.37%,3组间两两相比,差异均有统计学意义(P<0.01);3组的强阳性率分别为76.00%、 46.15%和9.09%,3组间两两相比,差异亦均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:IGF 1R在食管鳞癌组 织中高表达与食管鳞癌的发生发展有关。     

c-myc癌蛋白在食管鳞癌中的表达

目的 研究ｃ－ｍｙｃ癌蛋白在食管鳞癌中的表达及意义。方法 应用免疫组化Ｓ－Ｐ法检测了３４例食管癌及其相应病例的正常食管粘膜组织标本中ｃ－ｍｙｃ癌蛋白表达与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果 食管鳞癌组织阳性表达率为６１．７６％,正常食管组织阳性表达率为０。ｃ－ｍｙｃ癌蛋白表达与淋巴结转移有密切关系（Ｐ〈０．０５）。结论 ｃ－ｍｙｃ癌蛋白表达与食管鳞癌的生物学行为有一定相关性。     

HOXA1基因反义寡核苷酸对食管癌细胞生长的影响

  目的  探讨同源异形盒A1(HOXA1)基因反义寡核苷酸（ASODN）对食管癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。  方法  采用蛋白免疫印迹（Western blot）检测正常食管上皮细胞Het-1A和人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白的表达,筛选高表达的食管鳞癌细胞进行后续实验;设计合成HOXA1 ASODN链、正义寡核苷酸(SODN)链及无义寡核苷酸（N-ODN）链;将筛选出的高表达的食管鳞癌细胞分为HOXA1 ASODN组（5、10、15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞）、对照组（细胞常规培养,不进行细胞转染）、SODN组（细胞转染15 μmol/L的SODN）和N-ODN组（细胞转染15 μmol/L的N-ODN）。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell小室分别检测细胞活力、凋亡率及侵袭迁移能力;Western blot检测HOXA1、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）、细胞增殖核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、B细胞淋巴瘤-2蛋白（B-cell lymphoma 2,Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。  结果  与正常食管上皮细胞Het-1A比较,人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白表达均升高,差异有统计学意义（P<0.05）。HOXA1蛋白在Eca109细胞表达最高,因此选用Eca109细胞进行后续实验。转染HOXA1 ASODN的Eca109细胞HOXA1蛋白表达降低（P<0.05）。随着Eca109细胞转染HOXA1 ASODN浓度及时间增加,Eca109细胞活力降低,与对照、SODN、N-ODN组比较差异有统计学意义（P<0.05）。15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞后,与对照组比较,细胞侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT、PCNA和MMP-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高（P<0.05）。  结论  HOXA1基因反义寡核苷酸可抑制食管癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,并诱导凋亡,机制与抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/AKT信号通路可能有关。