中国源恒河猴Mamu-B＊17等位基因的筛查

目的对本场中国源恒河猴Mamu-B＊17等位基因的存在情况进行筛查,为艾滋病动物模型的制备和疫苗效果的评价提供帮助。方法随机筛选07年出生的恒河猴101只,股静脉采取抗凝血200μL,提取基因组。根据Mamu-B＊17等位基因的特异性序列设计引物,利用序列特异性引物PCR（sequence specific primers polymerasechain reaction,PCR-SSP）筛查这101只恒河猴B＊17等位基因的存在情况。结果没有筛查到Mamu-B＊17阳性的恒河猴,与印度源恒河猴12%的存在率有很大的差异。     

川西亚种恒河猴IL-2基因的克隆和序列分析

目的获得川西亚种恒河猴的IL-2基因,为常用实验猕猴IL-2的基因工程生产奠定基础。方法根据GenBank上公布的印度源恒河猴IL-2基因序列设计合成了1对特异性引物,从ConA刺激的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法 ,从总RNA中扩增出特异性条带。将该基因片段克隆入表达载体pMD18-T,并对重组质粒进行PCR、酶切鉴定和序列分析。结果该基因片段经序列分析证实为川西亚种恒河猴的IL-2基因,全长为465bp,与印度源恒河猴IL-2的同源性为99.78%,但氨基酸序列完全相同。与人及狒狒的IL-2相比,同源性分别为98.71%和99.36%。结论中国的川西亚种恒河猴与印度源恒河猴的IL-2完全相同。     

PCR检测实验恒河猴和食蟹猴群体中幽门螺杆菌和“猕猴螺杆菌”的感染

目的调查国内实验恒河猴和食蟹猴中幽门螺杆菌和"猕猴螺杆菌"的感染情况。方法参考文献中的螺杆菌属16S rRNA和幽门螺杆菌16S rRNA的引物序列,和新设计的"猕猴螺杆菌"16S rRNA特异性引物,在人工养殖的45只成年恒河猴和90只成年食蟹猴粪便样本中,通过q PCR或常规PCR检测来初步调查这两种猕猴中两种螺杆菌的感染情况。结果在恒河猴中幽门螺杆菌和"猕猴螺杆菌"的感染率均为100%,在食蟹猴中幽门螺杆菌和"猕猴螺杆菌"的感染率分别为100%和97.8%。结论证实我国人工繁育饲养的恒河猴和食蟹猴普遍存在"猕猴螺杆菌"感染。幽门螺杆菌和"猕猴螺杆菌"几乎同时存在于所有人工繁育的实验猴个体中,可能会对这两种猕猴的健康以及相关动物实验结果的准确性存在不利影响。     

藏、汉族人群HLA-DQA1、DQB1基因多态性

目的研究藏、汉族人群HLA-DQA1、DQB1等位基因频率分布及群体间的遗传距离。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR／SSP）和PCR产物的限制性片段长度多态性分析（PCR／RFLP）方法检测HLA-DQA1、DQB1各等位基因频率。结果结果显示,OQA1＊0501和DQB1＊0301为藏族常见等位基因,频率分别为23．2％和33．0％;而DQA1、＊0301和DQB1,＊0301为房山汉族常见等位基因,频率分别为25．O％和28．1％。藏族OQA,＊0201,DQB．＊0201,0601等位基因频率明显低于汉族人群,P值分别为〈0．005,〈0．025和〈0．01;相反,藏族DQA．＊0501和DQB．＊0402等位基因频率明显高于汉族人群,P值分别为〈0．005,〈0．025。结论藏族与北方汉族HLA-DQA1、DQB。位点某些等位基因频率分布存在差异,可能与地理环境及自然选择有关。     

宁夏回汉族白癜风患者HLA相关基因频率分布差异性研究

目的探讨宁夏回、汉族白癜风患者HLA—DRB1＊03、＊07、＊12、HLA—DQB1＊02等位基因的差异性。方法采用序列特异性引物-聚合酶链反应（PCR—SSP）方法对114例白癜风患者（汉族84例,回族30例）及对照组进行HLA上述四个等位基因检测。结果宁夏回、汉族正常对照组四个等位基因频率的比较示：回族HLA—DRB1＊12（15．00％比6．11％）等位基因频率较汉族增高（P〈0．05）,并且宁夏汉族患者组HLA—DRB1＊12（15．47％比6．11％）等位基因频率较正常组增高（P〈0．05）。结论宁夏汉族人群,HLA—DRB1＊12等位基因可能与白癜风的发病有关。     

山西汉族类风湿关节炎与HLA-DPB1基因相关性研究初探

目的：探讨山西汉族类风湿关节炎（RA）与HLA—DPB1基因相关性。方法：用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR—SSP）方法检测36例RA患者和36例健康人的HLA—DPB1基因型。结果：RA患者HIA—DPB1＊2201等位基因的频率显著高于正常对照组。结论：HLA—DPB1＊2201可能是山西汉族类风湿关节炎的易感基因。     

内蒙古地区急性淋巴细胞白血病病人HLA-A、B等位基因多态性的研究

目的：探讨人类白细胞抗原（human leucocyte antigen,HLA）HLA-A、B等位基因多态性与急性淋巴细胞白血病的相关性。方法：采用Luminex流式细胞术-序列特异性寡核苷酸探针（flow cytometry-sequence specific oligonucleotide probe,FLOW-SSOP）反向杂交方法对内蒙古地区48例急性淋巴细胞白血病病人HLA-A、B等位基因多态性进行分析,以北方地区健康群体资料作为正常对照。结杲：（1）在HLA-A等位基因中,急性淋巴细胞白血病A^＊31XX、A^＊6901等位基因频率高于对照组（1．955％、0．071％）,差异有统计学意义（P〈0．05）;A^＊33XX等位基因频率低于对照组（5．825％）,差异有统计意义（P〈0．05）;（2）在HLA-B等位基因中,急性淋巴细胞白血病B^＊07XX、^＊27XX、^＊38XX、^＊41XX、^＊49XX、^＊59XX等位基因频率高于对照组（2．069％、0．968％、0．702％、0．091％、0．051％、0．061％）,差异有统计学意义（P〈0．05）;其中HLA-B^＊59XX的相对风险度高（RR=35．156）,其它等位基因频率在两组之间无显著性差异。结论：HLA-A^＊31XX、A^＊6901;B^＊07XX、B^＊27XX、B^＊38XX、B^＊41XX、B^＊49XX、B^＊59XX等位基因与ALL相关联,有遗传易感作用。HLA-B^＊59XX等位基因携带者,可能患ALL的风险度增高（RR=35．156）。     

中国恒河猴Mamu-A*01基因筛查及其对抗原肽p11C的特异性CTL反应

目的 筛查中国恒河猴Mamu-A*01基因,比较中国恒河猴和印度恒河猴的Mamu-A*01基因序列和功能是否相同.方法 PCR方法检测128只中国恒河猴,用特异性引物扩增Mamu-A*01基因,将PCR扩增后的产物克隆测序后与印度恒河猴的Mamu-A*01基因进行同源比对;酶联免疫斑点检测 (ELISPOT) 方法分别检测5只Mamu-A*01基因阳性和5只阴性恒河猴针对SIV、SHIV抗原肽p11C的特异性CTL反应.结果 共筛查出5 只Mamu-A*01基因阳性恒河猴 (3.91%),经测序分析后与印度恒河猴的同源性可达99.1 %.这5只均为SIV/SHIV感染恒河猴,其中四只SIV感染的猴的ELISPOT结果显示针对p11C的高频CTL反应,斑点数在500-1400/106 PBMCs之间,而另1只SHIV感染的恒河猴及5只阴性猴没有斑点出现.结论 中国恒河猴含有Mamu-A*01基因,基因频率有区域性差异,中国恒河猴的Mamu-A*01可提呈特异性抗原肽p11C.     

HLA—DQBl基因多态性与湿热内蕴型免疫性不育症相关性研究

目的：探讨湿热内蕴型免疫性不育症与HLA—DQBl基因多态性的关系。方法：采用聚合酶链式反应序列特异性引物（PCR-SSP）技术,对70例抗精子抗体阳性的湿热内蕴型免疫性不育症患者和60例正常健康者的HLA—DQBl基因进行分型研究。结果：免疫性不育症组HLA—DQBl＊0601等位基因频率明显高于正常对照组（P〈0．05）。结论：HLA—DQBI＊0601等位基因可能是抗精子抗体阳性的湿热内蕴型免疫性不育症的易感基因。     

乙型肝炎e抗原阳性慢性乙型肝炎的遗传易感性与HLA—DRB1等位基因相关性研究

目的 探讨河南地区汉族人群乙型肝炎e抗原阳性慢性乙型肝炎遗传易感性与人类白细胞抗原DRB1等位基因多态性的关系。方法 应用聚合酶链反应-序列特异性引物技术，对河南汉族38例乙型肝炎e抗原阳性慢性乙型肝炎患者及42例正常健康人进行了HLA—DRB1^＊ 1201／1202、^＊1501／1502等位基因检测，应用统计学软件SPSS10．0对两组实验结果进行X^2检验。结果 两组的HLA—DRB1^＊1201／1202、^＊1501／1502等位基因频率差异无统计学意义。结论 HLA—nRR1^＊1201／1202、1501／1502等位基因与乙型肝炎e抗原阳性慢性乙型肝炎的形成无相关性。     

HLA-DRB1基因多态性与贵州地区汉族人群结核病的易感性分析

目的：探讨HLA-DRB1基因多态性与汉族人群结核病的遗传相关性。方法：用聚合酶链反应-序列多态性分析（PCR-SSP）技术分别对47例贵州地区汉族活动性结核病患者及53例汉族健康对照者进行HLA—DRB1等位基因分型。结果：在等位基因HLA—DRB1中,结核病患者的HLA—DRB1 16的基因频率明显高于正常对照组（P〈0．05）,而HLA—DRB1 11基因频率则低于正常对照组（P〈0．05）。结论：HLA—DRB116可能为贵州地区汉族人群结核病的易感基因,HLA—DRB1 11可能为汉族人群结核病的保护基因。     

猕猴胚胎干细胞的分离培养和鉴定

目的从体外培养成熟囊胚中分离并鉴定猕猴胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES cell).方法猕猴卵母细胞经体外成熟培养、体外受精和早期胚胎体外成熟培养后,获得猕猴囊胚.当囊胚由透明带自然孵出后,用细玻璃针剥离囊胚中的内细胞团(inner cell mass,ICM)并与饲养细胞进行共培养.由ICM分离,培养并鉴定胚胎干细胞集落.结果由4只FSH超排猕猴中共取得92个处于GV期的猕猴卵母细胞,选取其中的22个用HECM-10培养基培养后,获得6个高质量的囊胚,由此6个囊胚中分离得到3个内细胞团,并由此最终获得1株猕猴ES细胞,即RS5细胞.RS5细胞具高比例核/质比,核仁多,其细胞集落边缘平整,其内各单个细胞清晰.经约5个月的连续传代后,仍保持了正常二倍体的核型,其染色体数目为42条.碱性磷酸酶细胞组织化学染色为阳性,说明RS5细胞为未分化态的胚胎干细胞.经高密度和长时间培养后,RS5细胞可进一步分化为多种类型细胞.结论 RS5细胞株具有自我更新能力和多分化潜能,属于胚胎干细胞.     

猴泡沫病毒(SFV)RT-nestedPCR检测方法的建立及初步应用

目的建立实验猴群及相关生物制品猴泡沫病毒(SFV)的PCR检测方法。方法选择SFV-1、SFV-3、SFVCPZ前病毒序列的pol基因同源性较高的区域设计嵌套引物对SFV-1毒种进行RT-nestedPCR扩增并克隆测序,以确定其准确性,通过验证方法的特异性和敏感性,初步应用该方法对恒河猴外周血淋巴细胞(PBLs),常用猴肾传代细胞及猴源性生物制品进行检测。结果经RT-nestedPCR扩增出的片断与SFV-1 cDNA序列同源性达到99%,对10只恒河猴的检测结果为5只阳性,5只阴性,对常用猴肾传代细胞及脊髓灰质炎疫苗的检测结果均为阴性。结论所建立的SFV RT-nestedPCR检测方法能准确的检测出恒河猴SFV的感染情况,对控制实验猴群的质量具有重要意义。该方法可用于检测猴源性生物制品中SFV的污染情况,为保证生物制品应用的安全性提供一定依据。     

实验猕猴肺部CT影像断层初步观察

目的应用CT技术对成年实验猕猴胸部肺窗进行断层扫描观察,探讨CT技术对猕猴肺部疾病的临床诊断意义,建立正常猴肺部CT断层扫描图谱,为CT技术在猕猴解剖学的研究、疾病的临床诊断及科学实验方面的应用,提供影像学的基础资料。方法经过触诊、叩诊、听诊、体温、呼吸率、心率、呼吸运动、血液常规等检查,选择健康猴10只,雌雄各半,年龄分别为5～10岁,进行肺部CT断层扫描检测。试验猴全身麻醉后,置于CT诊断床上,取头前尾后仰卧位进行肺部扫描,获取肺窗扫描图像。对具有解剖意义的扫描图像的每个层面的主要结构(肺叶、气管、动脉血管、静脉血管等)进行标注。结果 (1)获得具有解剖意义的肺窗扫描图像13张。(2)在断层扫描的图像中,肺、气管、较大血管等组织器官界面清晰。肺为左右两侧,左肺分为上叶、中叶、下叶,右肺分为上叶、中叶、下叶、奇叶四部分。不同的断层面分别可见肺部左主支气管、右主支气管、支气管、血管等组织。(3)肺部较小或细小的血管、神经组织界面不清晰。结论 (1)应用CT获得的正常猕猴胸部肺窗断层扫描图像表明,正常健康猴双肺纹理清晰,走行自然,肺野透光度良好,双肺无异常实质病变影像。(2)获得了健康猕猴肺部的CT影像学资料,为猕猴肺部疾病的诊断,提供了一种安全、方便又准确的新依据,建立了成年健康猕猴肺部CT断层解剖研究的背景资料。     

中药髓复康对恒河猴脊髓损伤后神经再生的影响

目的髓复康对恒河猴脊髓损伤后神经再生的影响。方法成年雄性恒河猴14只,其中10只用于制备T12胸髓左侧半横断损伤模型,并将其随机分为髓复康组（S）和模型组（M）,每组5只,另外4只设为正常对照组（N）。通过改良Tarlov法评估恒河猴脊髓神经功能恢复情况;采用原位杂交法检测各组髓鞘相关生长抑制因子（Nogo-A）和生长相关蛋白（GAP-43）的表达量。结果给药30 d后,髓复康组患肢神经功能恢复优于模型组（P〈0.01）;脊髓损伤后各手术组Nogo-A mR-NA的阳性细胞数及阳性产物的OD值均明显升高,其中髓复康组Nogo-A mRNA的阳性细胞数和其阳性产物的OD值都明显低于模型组（P〈0.05）。各手术组GAP-43 mRNA的阳性细胞数及其阳性产物的OD值均明显高于正常组（P〈0.01）;其中髓复康组GAP-43 mRNA的阳性细胞数和其阳性产物的OD值最高,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论中药髓复康能够对脊髓损伤后恒河猴脊髓中Nogo-A的表达有一定的抑制作用,同时能够上调GAP-43的表达,促进了脊髓损伤后恒河猴运动神经功能的恢复。     

昆明地区恒河猴、食蟹猴种群繁殖规律和繁殖性能研究

目的探索昆明地区人工饲养恒河猴与食蟹猴种群的繁殖规律及繁殖性能,为恒河猴和食蟹猴繁育基地建设、生殖生物学研究及生物资源的保护提供数据参考。方法对昆明某规模化实验猕猴饲养基地饲养的150只恒河猴繁殖群(20只雄猴,130只雌猴)和900只食蟹猴繁殖群(120只雄猴,780只雌猴)全年12个月的繁殖规律及繁殖性能进行观察和统计分析。结果昆明地区恒河猴种群产仔具有明显的季节性变化,而食蟹猴种群产仔没有明显的季节性变化;恒河猴种群的妊娠率、繁殖率、仔猴成活率分别是76.15%、69.23%和90.70%;食蟹猴种群的妊娠率、繁殖率、仔猴成活率分别是78.98%、74.87%和94.81%;恒河猴的月经周期和妊娠期分别是(28.80±2.33)d和(165.87±7.52)d;食蟹猴的月经周期和妊娠期分别是(29.35±3.05)d和(157.93±5.42)d;恒河猴仔猴平均出生体重和幼猴平均断奶体重分别是(425.00±100.50)g和(1491.67±172.35)g;食蟹猴仔猴平均出生体重和幼猴平均断奶体重分别是(314.33±61.18)g和(1013.50±115.50)g。结论明确了昆明地区恒河猴和食蟹猴种群的繁殖规律,详实地报道了恒河猴和食蟹猴种群繁殖性能参考值,为昆明地区恒河猴和食蟹猴的繁殖及开展实验猴生殖生物学的科研活动提供了基础数据。     

猕猴自发性糖尿病动物模型的初步探讨

目的 为进一步克隆糖尿病基因、转基因和基因敲除进行基因治疗，以及应用自发性糖尿病猕猴模型开展糖尿病基因功能表达研究。方法 从正常饲养猕猴种群中，采用葡萄糖耐量试验和尿糖测试实验方法，筛选自发性糖尿病模型。结果和结论 从100只老龄猕猴群中筛选出了3只糖耐量异常和尿糖阳性的自发性糖尿病猕猴。     

Parasitological and pathological studies on rhesus monkeys infected with Chinese mainland strain of Schistosoma japonicum

The present study was undertaken to obtain fundamental data from rhesus monkey in the course of infection with Chinese mainland strain of Schistosoma japonicum under laboratory condition. 15 normal monkeys were infected by cutaneous exposure to 200 cercariae for each animal. The following items were observed: the dynamic distribution of schistosomulum in the skin; the average of worm recovery rate; the size of mature worms of both sexes; the size of mature eggs from the feces; the mean prepatent period; the duration of egg passage in the feces and the histopathological changes of the skin, liver and gastro-intestinal tract at different time intervals after infection. Our results showed that rhesus monkey is a permissive host for Chinese mainland strain of S. japonicum and a spontaneous recovery happened due to gradual disappearance of the worms at later stage.