结核分支杆菌IS6110探针的克隆化

目的 制备克隆化结构分支杆菌ＩＳ６１１０探针。方法 将ＩＳ６１１０的ＰＣＲ扩增片段克隆至质粒载体ｐＣＲ２．１中。结果 得到了含有ＩＳ６１１０克隆化探针的质粒菌株。结论 结核分支杆菌克隆化的探针易操作具一致性较好。     

结核分支杆菌DNA指纹技术及其应用研究

目的：探讨北京及其周围地区结核分杆菌的分布特征。方法：构建以IS6110为基础的结构分支杆菌DNA指纹图谱,应用Microbiology Information Numeral Taxonomy System软件进行处理,并且x2检验比较不同组别结核病人临床分离菌株成族（clustering)率的差别,结果：H37Rv,BCG两个标准菌株和62例临床分离菌株IS6110DNA指纹结果与国外同类报道一致,其中70％（44／62）的临床分离菌株IS6110DNA指纹相似值在1－065之间;分组统计结果显示;男性组与女性组成族率之间存在显著性差异（P＜0．05）。结论：北京及周围地区结核分支杆菌临床分离菌株多数遗传关系较近,在基因水平上相关程度较强。结核分支杆菌在男性人群中的传播频率可能较女性更高。     

结核分支杆菌基因组DNA指纹技术在结核病流行病学中的应用

结核分支杆菌基因组ＤＮＡ指纹技术 ,可以在种、株水平对结核分支杆菌进行鉴定 ,因此在结核病学的多个领域 ,尤其是流行病学中有很大的应用价值。一、结核分支杆菌基因组ＤＮＡ指纹技术及标准方法的确立将结核分支杆菌的基因组ＤＮＡ采用特殊的技术切割成大小不同的片段 ,电泳分离 ,就可以清楚地看到像人的皮肤指纹一样具有特征性的条带。这就是结核分支杆菌的ＤＮＡ指纹。建立结核分支杆菌ＤＮＡ指纹的主要技术有 :限制性片段长度多态性 (ＲＦＬＰ)方法和聚合酶链反应 (ＰＣＲ)方法。ＲＦＬＰ方法为 :针对结核分支杆菌基因组ＤＮＡ上的特征…     

以PCR为基础的结核分支杆菌DNA分型技术及其应用

1998年结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组测序工作宣告完成，这就为建立分子生物学方法鉴定结核分枝杆菌并对其分型提供了更有力的依据。H37Rv整个基因组由4，411，529对碱基组成，含有约4000个基因，整个基因组内有56个区与插入序列(ISs)同源。在结核分枝杆菌基因组插入序列     

结核病患者外周血结核分支杆菌DNA、HBV-DNA检测及临床意义

编者按近年来，本刊和国内其他一些杂志相继发表了有关应用ＰＣＲ扩增技术于肺结核和肺外结核患者外周血单个核细胞以及血清中高比率检出结核分支杆菌核酸的报告，受到不少读者和有关专家的关注。以往认为，现行的培养法未能证明肺结核患者外周血中广泛存在结核分支杆菌。...     

结核分支杆菌与非结核分支杆菌快速鉴别的实验研究

目的 探讨提供一种从菌种水平快速检测和鉴别分支杆菌的方法。方法 应用三对分别对应于分支杆菌(分子量65000)表面抗原、结核分支杆菌插入序列IS6110及人类β-珠蛋白基因的部分序列的特异性寡核苷酸引物对受试菌种及临床标本中的DNA进行多重PCR扩增，其扩增产物分别为439bp、268bp及123bp，并对439bp进行BstE Ⅱ和Hae Ⅲ两种限制性内切酶消化，同时，将135例临床标本进行培养、涂片，和多重PCR联合限制性片段长度多态性分析(mPCR-RFLP)检测。结果 mPCR-RFLP方法可将12种受试的标准菌种分别区分到种及亚种水平。本方法在临床实验中亦体现出较高的灵敏性及特异性。结论 mPCR-RFLP分析是对结核分支杆菌与非结核分支杆菌进行菌种分类鉴定的一种快速有效的方法。     

临床标本结核分支杆菌检测

迄今为止,对结核病的病原体快速诊断的方法仍很有限,涂片镜检结核分支杆菌的方法虽简便快速,但阳性率低。细菌培养结果右面靠,但需时3～8周。因此多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法^[1,2]。我们应用抗酸染色、细菌培养、荧光染色、PCR、PCR反向探针膜杂交法检测临床标本中的结构分支杆菌,并作比较分析报告如下。     

DNA固定技术对结核分枝杆菌PCR产物杂交结果影响的研究

目的 比较各种ＤＮＡ固定方法对结核杆蓖ＰＣＲ产物杂交结果的影响。方法 选取结核杆菌ＰＣＲ扩增产物并点样于尼龙膜上，用紫外线，加热和碱液三种方法固定ＤＮＡ，然后以结核杆菌ＰＣＲ产物作探针用增强化学发光标记剂进行标记，并对三种不同方法固定的ＰＣＲ产物杂交分析，结果结核杆菌ＤＮＡ固定方法对结核杆菌ＰＣＲ扩增产物的检测结果具有较大的影响，碱液固定具有较好的敏感性和重复性。     

不同年龄组结核分支杆菌耐药性的研究

目的 了解近阶段不同年龄组结核分支杆菌耐药情况,探讨当前耐药发展趋势。方法 根据年龄将1948例肺结核患者分为青年组（18－39岁）,中年组（40－59岁）和老年组（≥60岁）;采用绝对浓度法进行抗结核药物耐药性测定。结果 青年组、中年组、老年组原发耐药率分别为36．1％、46．8％和40．2％,各组间差异无显著性（P＞0．05）。青年组、中年组、老年组获得性而药率分另为81．3％、70．1％和62．1％,青年组和老年组差异有显著性（P＝0．0916）。原发耐药频度各年龄组从高到低均依次为H、E、S、P,中年组耐R最高达10．6％。获得性耐药顺序青、中年组为H、R、S、E,老年组为H、S、R、E,其中青年组耐R率最高达63．3％。原发耐多药率以中年组最高为5．3％,显著高于青年组（P＝0．0112）和老年组（P＝0．0085）。获得性耐多药率青年组最高达55．2％,显著高于中年组（P＝0．0319）和老年组（P＜0．001）。既往用1－3个月者耐药58．7％,显著高于未用药者（P＜0．001）和用药＜1月者（P＝0．0472）,而未用药和有药＜1月者耐药率差异无显著性（P＝0．02929）。此外,在各年龄组中青年组发生耐药的速度最快。结论 不同年龄组无论原发耐药还是获得性耐药均有所不同,建议应重视不同年龄组耐药率的监测,为修订国家结核病规划提供依据。     

鉴别死活结核分支杆菌的染色方法

在结核病细菌学诊断中，常规的抗酸染色和荧光染色，都不能应用于结核分支杆菌的死，活菌鉴别，本文报导采用吖啶橙，金胺荧光色素对结核分支杆菌进行了染色，使死菌染为红色，半死菌染为黄色，活菌染为绿色，并通过活菌计数加以验证，从而建立了死，活菌鉴别染色方法，它将对改进目前常规的卡介苗活菌计数，药物敏感性试验及药物 效观察等方面起到重要作用。     

TaqMan聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌DNA及其临？…

目的 探讨ＴａｑＭａｎ聚合酶链反应（ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ）技术在肺结构诊断中的价值。方法 对１６８例活动性肺结核、５７例肺癌患者的痰和外周血及３４－例健康对照外周血,同时应用ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ、ＰＣＲ检测,并与痰涂片法、ＢＡＣＴＥＣ法及改良罗氏培养法结果进行比较。结果 ＴａｑＭａｎ－ＰＣＲ检测痰和外周血总的阳性率分别为５３．０％和６１．３％,显著高于ＰＣＲ、痰涂片法、ＢＡＴＣＴＥＣ法及改良罗氏培     

噬菌体在结核分支杆菌研究中的应用

从 1 947年第一个分支杆菌噬菌体被分离到现在 ,陆续发现的分支杆菌噬菌体超过 2 50种。分支杆菌噬菌体是一种ＤＮＡ病毒 ,因对分支杆菌有特异性而得名。 1 947年 ,Ｇａｒｄｎｅｒ首次分离并命名了分支杆菌噬菌体。之后 ,不同种分支杆菌噬菌体陆续被分离 ,迄今为止 ,从不同来源的标本中分离的分支杆菌噬菌体已超过 2 50种。随着人类对噬菌体结构和功能的不断了解 ,噬菌体作为一种研究工具的功能正逐步被开发 ,一些相关机制正逐步被阐明。分支杆菌噬菌体Ｌ5、Ｄ2 9的全基因序列已被阐明 ,必将对噬菌体研究领域产生重要影响[1 ] 。分支杆菌噬…     

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值

目的　评价聚合酶链反应(PCR)荧光探针杂交技术(TaqMan技术)检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养)及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本,53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36.1%,TaqMan法阳性率为61.7%,高于细菌学检测法,经统计学处理,两者有显著性差异(P<0.05),用TaqMan法检测临床标本特异性为96.2%。结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

应用多重聚合酶链反应法检测并鉴别结核分支杆菌与非结核分支杆菌DNA

OBJECTIVE: To improve the specificity and sensitivity of polymerase chain reaction (PCR) technique for detecting and identification of DNA of M. tuberculosis and M. nontuberculosis. METHOD: Three pairs of oligonucleotide primer were used in triplex-PCR. A 383 bp DNA fragment encoding part of the 65,000 mycobacterial surface antigen, a 123 bp fragment corresponding to a specific M. tuberculosis complex sequence which was the insertion sequence 6110 (IS 6110) and a 268 bp fragment for human beta-globin were amplified by triplex-PCR respectively. RESULT: The sensitivity of the triplex-PCR-electrophoresis for the DNA of mycobacterium was 0.6 pg. The specific bands of 383 bp and 123 bp among the amplified DNA from M. hominis, M. bovis, BCG and M. simiae were present in the agarose gel. By contrast, only a band of 383 bp was found among the M. nontuberculosis which contained M. avium, M. chelonae, M. scrofulaceum, M. xenopi, M. kansasii, M. intracellulare and M. smegmatis. Compared with the standard strains, there was an additional 268 bp band in simulated clinical samples infected by Mycobacterium. The above 3 specific bands were found neither in other 15 bacterial species tested nor in Mycoplasma pneumoniae. 182 clinical samples were examined by culture, smear and triplex-PCR. 72 nontuberculous clinical samples were all negative. In 110 tuberculosis clinical samples, the positive rates were 2.7%, 13.6% and 32.7%, respectively. CONCLUSION: The triplex-PCR possesses a high specificity and sensitivity. This method could detect and identify the DNA of M. tuberculosis and M. nontuberculosis except M. simiae. It is a valuable tool for early diagnosis and differentiation for infection of M. tuberculosis and M. nontuberculosis.