MAGE-A1、MAGE-A3基因在人舌鳞癌中的表达及其临床意义

目的从mRNA水平观察肿瘤特异性抗原MAGE（黑色素瘤抗原基因）-A1及MAGE-A3基因在人舌鳞癌组织中的表达情况，以评价MAGE-A1、MAGE-A3基因作为舌鳞癌的免疫学检测、免疫和基因治疗的分子标志物的可行性。方法提取38例舌鳞癌、10例牙龈瘤病变组织和10例癌旁口腔正常组织标本中的总RNA，逆转录合成cDNA，而后应用RT-PCR法扩增其中的MAGE-A1，MAGE-A3日的基因片段，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（G3PDH）基因作为内对照，经琼脂糖电泳确认。分别采用Mann-Whitney Test榆验和Fisher’s Exact Test检验对舌鳞癌不同病理分型、淋巴结转移与否的MAGE-A1，MAGE-A3的表达差异进行统计学分析。结果在38例舌鳞癌中MAGE-A1基因表达23例（60．5％）；MAGE-A3基因表达26例（68．4％）；两者均有表达13例（34．2％）。MAGE-A1和／或MAGE—A3基因表达共36例（94．7％），MAGE-A1、MAGE-A3基因均不表达2例（5．3％）。低分化鳞癌患者两种基因同时表达的阳性率（53.3％）明显高于高分化者（9．1％）。在10例牙龈瘤和10例癌旁正常组织中未见MAGE-A1、MAGE-A3基因表达。结论舌鳞癌组织中MAGE—A1，MAGE—A3基因均有较高表达。提示MAGE基因可以作为检测舌鳞癌的分子标志物，且具有免疫、基因治疗特异性靶位的潜在价值。     

黑色素瘤抗原基因在乳腺癌中的表达及临床意义

目的：研究乳腺癌组织中黑色素瘤抗原基因（MAGE）的表达情况，并探讨其临床意义。方法：采用荧光定量逆转录多聚酶链反应（fqRT-PCR）检测55例乳腺癌组织中MAGE基因的表达情况。结果：55例乳腺癌组织中有17例（30．9％）表达MAGE-0A1或／和MAGE-A3，9例（16．4％）MAGE-A1阳性，13例（23．6％）MAGE-A3阳性。结论：MAGE基因在乳腺癌中较高表达，推测MAGE抗原可以作为乳腺癌治疗的靶点。     

膀胱移行细胞癌组织中MAGE-A基因的表达

目的:研究膀胱移行细胞癌中黑色素瘤抗原(MAGE)基因mRNA的表达及其临床意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应技术检测35例膀胱移行细胞癌患者癌组织(新鲜标本)MAGE-A1、MAGE-A3及MAGE-A12基因mRNA表达。结果:35例膀胱膀胱移行细胞癌组织中全部(100%)至少表达1种MAGE-A基因,21例MAGE-A1阳性,19例MAGE-A3阳性,24例MAGE-A12阳性,三者均阳性17例。结论:MAGE基因在膀胱膀胱移行细胞癌中有较高表达,可望成为膀胱移行细胞癌免疫治疗的靶基因。     

巢式RT-PCR检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞的临床价值

目的:联合采用细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)及乳腺上皮黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)指标,探讨通过巢式RT-PCR(nested RT-PCR)方法检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)的临床价值?方法:采用MCF-7 RNA与健康志愿者外周血单核细胞(peripheral mononuclear cell,PMNC)RNA进行梯度混合后的反转录产物,检测优化后巢式RT-PCR体系的敏感性,再选择10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血检测其特异性后,对56例乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA及SBEM mRNA表达情况进行检测? 结果:优化后的检测体系能够在3 ml外周血PMNCs中检测到1个MCF-7细胞,10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血中未检测到CK19 mRNA与SBEM mRNA的表达;两者的表达与原发肿瘤大小,腋窝淋巴结状况及TNM分期相关(P < 0.05),而与原发肿瘤病理类型,激素受体以及C-erbB-2的表达无明显相关性(P > 0.05)? 结论:经过优化的巢式RT-PCR体系联合检测乳腺癌患者外周血CK19 mRNA及SBEM mRNA的表达敏感性和特异性较高,能用于检测外周血CTC,对进一步精确评估预后及指导治疗可能有较高的临床价值?     

肝癌患者围手术期外周血黑色素瘤抗原-1mRNA和甲胎蛋白mRNA检测与术后复发的关系

目的 探讨肝细胞癌患者围手术期外周血MAGE-1mRNA和甲胎蛋白(AFP)mRNA表达水平其与术后转移复发的关系。方法 通过巢式RT—PCR,在围手术期检测了45例肝细胞癌患者外周血MAGE-1mRNA和AFPmRNA,并进行平均11个月的随访。同时以22例肝炎后肝硬化、11例肝血管瘤、12例肝转移癌患者和20例健康志愿者外周血标本作为对照组进行了MAGE-1mRNA和AFP mRNA的对比检测。结果 MAGE-1mRNA在12例肝转移癌患者外周血中的检出率为33．3％(4／12);肝炎后肝硬化、肝血管瘤患者和健康志愿者中均未检出。AFP mRNA在肝炎后肝硬化患者外周血中的检出率为13．6％(3／22),在肝转移癌、肝血管瘤患者和健康志愿者中均未检出。45例肝细胞癌患者外周血中,MAGE-1mRNA／AFP mRNA的检出率分别是术前42．2％(19／45)／51．1％(23／45),术后7d20％(9／45)／24．4％(11／45),术后28d15．6％(7／45)／22．2％(10／45)。统计分析提示,术后28d肝细胞癌患者外周血检出MAGE-1 mRNA／AFPmRNA预示患者近期复发。并且双标志物联合检测较单标志物检测对预测复发具有更高的敏感性。结论采用巢式RT—PCR的方法联合检测肝细胞癌患者术后28d外周血中癌特异性的MAGE-1 mRNA和肝细胞特异性的AFP mRNA有助于预测肝细胞癌患者术后的转移复发。     

前列腺特异性膜抗原cDNA的克隆及用于临床前列腺癌的检测

目的获得前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因,应用巢式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测前列腺癌(PC)患者外周血中PSMA mRNA.方法从人前列腺癌细胞系LNCaP中提取总RNA,经RT-PCR扩增PSMA基因,克隆入pUC19质粒中,用全自动荧光测序仪测定其序列.根据PSMA cDNA序列设计合成引物,应用巢式RT-PCR方法检测36例PC患者和23例前列腺增生(BPH)患者外周血中PSMAmRNA,结果与巢式RT-PCR方法检测前列腺特异抗原(PSA)mRNA比较.结果获得了PSMA基因(由2 253 bp组成,可编码751个氨基酸),与已发表的PSMA cDNA序列一致.应用巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSMA mRNA灵敏度和特异度分别为66 7%和100.0%,与巢式RT-PCR方法检测PC患者外周血PSA mRNA(灵敏度和特异度分别为30.6%和87.0%)比较差异显著.结论成功地克隆了PSMA基因并应用于临床PC诊断,巢式RT-PCR方法检测患者外周血中PSMA mRNA在PC诊断中的真实性和可靠性明显优于PSA mRNA.     

MUC-1mRNA在大肠癌患者外周血中的表达及临床意义

目的探讨MUC-1 mRNA在大肠癌患者外周血中的表达及临床意义。方法应用巢式RT-PCR技术检测20例健康人、20例大肠腺瘤疾病患者和90例大肠癌患者外周血MUC-1 mRNA的表达。结果健康人、大肠良性腺瘤及大肠癌患者中MUC-1 mRNA均表达,差异不具有统计学意义(P>0.05),但大肠癌患者中MUC-1 mRNA表达率与肿瘤分期、瘤细胞的分化程度及肿瘤转移显著相关(均P<0.05)。结论 MUC-1 mRNA作为检测大肠癌患者外周血微转移的分子标记物敏感度和特异性需进一步探讨,但MUC-1 mRNA可作为判断大肠癌患者预后的指标。     

外周血人类斯钙素1基因表达与消化道恶性肿瘤微转移关系的研究

目的：探讨靶基因人类斯钙素1(hSTC—1)在消化道恶性肿瘤患者外周血中的表达以及与肿瘤微转移的关系。方法：采用RT—PCR方法检测69例消化道恶性肿瘤患者外周血中的人类斯钙素1(hSTC—1)mRNA，12例健康成人、4例妊娠期妇女、14例消化道炎症疾病患者，并检测12例消化道恶性肿瘤患者手术中新鲜组织标本中的hSTC—1 mRNA。结果：69例消化道恶性肿瘤患者外周血中，食管癌组hSTC—lmRNA的阳性率为52．9％(9／17例)，胃癌组的阳性率为57．7％(15／26例)，大肠癌组的阳性率为53．8％(14／26例)，消化道恶性肿瘤患者手术中新鲜组织标本的阳性率为100％(12／12例)；而健康成人、妊娠期妇女、消化道炎症疾病患者外周血中无1例出现阳性。将肿瘤患者hSTC-1 mRNA检测结果与临床病理结合分析发现：外周血中的hSTC-1m RNA的表达与肿瘤的浸润深度、临床病理分期、淋巴结转移有显著相关性。结论：应用RT—PCR方法检测消化道恶性肿瘤患者外周血中的hSTC—1m RNA具有较高的敏感性和特异性，可成为检测肿瘤外周血微转移的一个新指标。     

喉癌患者外周血CK19mRNA及CK20mRNA的表达

目的研究喉癌患者外周血CK19mRNA、CK20mRNA的表达,探讨其I临床意义。方法采用巢式RT-PCR技术检测喉癌患者术前外周血中CK19mRNA、CK20mRNA的表达。结果48例喉癌患者外周血中CK19mRNA阳性率为37．5％（18／48）,CK20mRNA阳性率45．8％（22／48）。10例肿瘤组织中CK19mRNA阳性率为100％（10／10）。CK20mRNA阳性率80％（8／10）;10例声带息肉患者外周血为阴性对照,CK19mRNA阳性率为10％（1／10）,CK20mRNA阳性率为0。结合临床病理资料,喉癌患者外周血CK19mRNA、CK20mRNA表达与喉癌T分期、临床分期及淋巴结转移存在相关性,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论采用巢式RT—PCR技术,对喉癌患者外周血单个核细胞CK19mRNA和,或CK20mRNA的检测,在分子生物学水平对喉癌细胞对周围组织的浸润及局部扩散提供了参考,有助于指导临床治疗。     

CK19、CK20 mRNA在上皮性恶性肿瘤患者外周血中的表达及其意义

目的：分析上皮性恶性肿瘤患者外周血中CK19、CK20mRNA的表达水平，探讨其临床病理意义。方法：随机选择和收集53例上皮性恶性肿瘤患者的外周血，应用巢式RT－PCR法联合检测其CK19、CK20mRNA表达情况，另取15例上皮性肿瘤组织的为阳性对照，15例非肿瘤患者外周血为阴性对照。结果：53例肿瘤患者外周血中CK19阳性率为35．8％（19／53，CK20阳性率41．5％（22／53），两者至少1项阳性者69．8％（31／53）。15例肿瘤组织中CK20阳性率为100％（15／15），CK19阳性率86％（13／15）；15例阴性对照CK19阳性2例，CK20阳性1例，结合肿瘤的临床病理资料分析，肿瘤患者外周血CK19、CK20mRNA阳性表达与肿瘤浸润深度，临床分期及淋巴结转移存在明显的相关性，而与肿瘤患者的年龄，性别，肿瘤分化程度无明显相关。结论：CK19、CK20mRNA可作为检测上皮性肿瘤外周血微转移的靶基因。联合检测肿瘤患者外周血CK19、CK20mRNA可增加外周血循环癌细胞的检测率。     

肿瘤抗原MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺癌中的表达及意义

目的:分析人黑色素瘤相关抗原MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺正常组织、乳腺良性瘤及乳腺癌组织中的表达趋势,为乳腺癌临床诊断和生物治疗探寻新靶点。方法:选取本院接受并行手术治疗的乳腺良性肿瘤和乳腺癌患者各33例,分别取病灶组织和病灶周边正常组织制备石蜡病理切片,以免疫组织化学实验检测MAGE-A9和MAGE-A11的表达水平,并分析其与乳腺癌病理特征的相关性。结果:MAGE-A9在正常组织中无表达,在乳腺良性瘤和乳腺癌的阳性表达率分别为15.2%和54.5%,差异有统计学意义(P<0.05);MAGE-A11在正常组织及良性瘤中均无表达,仅在乳腺癌中表达,阳性表达率达78.8%。MAGE-A9表达受组织学分级、ER、HER-2的影响,组织学Ⅲ级患者明显高于Ⅰ、Ⅱ级,ER、HER-2阳性高于阴性;MAGE-A11表达仅受到ER、HER-2的影响,ER、HER-2阳性高于阴性,差异有统计学意义(P<0.05)。线性回归分析结果显示MAGE-A9和MAGE-A11表达水平呈直线正相关性(y=0.798 1x+1.278;R2=0.694 8)。结论:MAGE-A9和MAGEA11可能与乳腺癌的发生发展有密切关系。     

CT、病理和MAGE基因在诊断非小细胞肺癌淋巴结转移的对照研究

目的:比较CT、病理和MAGE-1、-2、-3、-4基因在诊断非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结转移中的意义。方法:采用CT、病理和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测黑色素瘤抗原(MAGE)基因3种方法对53例患者的111组淋巴结分别进行癌转移的检测。结果:80组常规病理检查阴性淋巴结中4种MAGE基因至少有一种表达的淋巴结有19组,几率是23.8%(19/80)。31组常规病理检查阳性淋巴结标本中4种MAGE基因至少有一种表达的几率是87.1%(27/31)。非肺癌患者淋巴结4种MAGE基因表达均为0。应用常规病理检查和应用RT-PCR技术检测MAGE基因在淋巴结微转移阳性率分别为27.9%(31/111)和41.4%(46/111),差异统计学意义(P<0.05)。31组CT阳性淋巴结标本中4种MAGE基因至少有一种表达的几率是80.6%(25/31),80组CT阴性淋巴结中4种MAGE基因至少有一种表达的淋巴结有21组,几率是26.3%(21/80)。结论:应用RT-PCR检测MAGE基因可检出常规病理方法和CT未能检出的淋巴结微转移。     

肺癌外周血中EGFR mRNA、SP-D mRNA、LUNX mRNA表达的临床意义

目的:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肺癌患者肿瘤组织和外周血中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA的表达,探讨其作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。方法:应用RT-PCR技术检测40例非小细胞肺癌组织和15例肺良性病变组织中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA的表达;检测40例肺癌患者外周血中靶基因的表达,并以15例良性肺疾病患者和10名健康人外周血作为对照。结果:40例肺癌患者病理组织中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA的表达率为77.5%(31/40)、100%(40/40)、100%(40/40),外周血中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA表达阳性率分别为55.0%(22/40)、52.5%(21/40)和57.5%(23/40);对照组中15例肺良性病变患者病理组织中EGFRmRNA表达率为13.3%(2/15),无SP-DmRNA和LUNXmRNA表达,15例肺良性病变患者和10名健康人的外周血中无EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA表达。结论:EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA作为检测肺癌组织及肺癌外周血微转移的分子标志物具有良好的敏感度和特异性;三者表达与肺癌TNM分期、组织学类型和癌细胞分化程度关系密切。     

肾及膀胱肿瘤组织中MAGE基因及其产物的表达

目的:观察肿瘤特异性抗原MAGE-1、MAGE-3基因及MAGE-3抗原在肾及膀胱肿瘤组织中的表达状况,以评价这些基因或基因产物作为肾及膀胱肿瘤组织中的免疫学检测和免疫治疗、基因治疗分子标志物的可行性.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分别测定39例肾及膀胱肿瘤患者癌组织与10例相应的癌旁组织MAGE-1、MAGE-3基因.应用免疫组织化学方法测定121例肾及膀胱肿瘤患者癌组织与10例相应的癌旁组织MAGE-3抗原表达.结果:39例肾及膀胱肿瘤中有23例MAGE-1 mRNA呈阳性表达(59.0%),有22例MAGE-3mRNA呈阳性表达(56.4%),其中肾细胞癌14例中MAGE-1 mRNA及MAGE-3 mRNA阳性表达均为8例.肾盂与膀胱移行细胞癌25例中MAGE-1 mRNA及MAGE-3 mRNA阳性表达分别为15例及14例.同时表达MAGE-1及MAGE-3的肾及膀胱肿瘤为18例(46.2%),所有10例癌旁组织均不表达MAGE-1及MAGE-3.免疫组织化学检测121例肾及膀胱肿瘤中56例MAGE-3抗原表达阳性(46.3%),包括肾细胞癌13例,MAGE-3抗原表达率为30.8%;肾盂与膀胱移行细胞癌108例,MAGE-3抗原表达率为48.1%.10例相应的癌旁组织MAGE-3抗原均不表达.根据Logistic回归检验分析MAGE-3抗原的表达与患者的临床分期及病理分级无明显关系.结论:MAGE基因有可能作为肾及膀胱恶性肿瘤组织免疫学检测的分子标志物,并且具有作为免疫治疗、基因治疗特异性靶位的潜在价值.     

胰岛素样生长因子-1在乳腺癌外周血中的表达及意义

目的:探讨乳腺癌患者外周血中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达及其与乳腺癌发生发展的关系.方法:应用巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对70例乳腺癌患者的外周血胰岛素样生长因子-1的表达进行测定,以乳腺良性疾病患者及健康志愿者外周血测定作为对照.结果:IGF-1 mRNA在乳腺癌患者、乳腺良性疾病患者及...     

RASSFIA基因启动子甲基化与乳腺癌相关性研究

目的:研究抑癌基因RASSF1A在乳癌组织中的表达情况及与RASSF1A基因启动子甲基化的关系。方法:运用RT-PCR方法检测40例乳癌组织和6例乳腺良性肿瘤和5例正常乳腺组织中RASSF1A的表达,运用甲基化特异PCR方法检测这些组织中RASSF1A基因启动子的甲基化情况。结果:RASSF1A基因在40例乳腺癌组织中8例(20%)存在表达缺失,差异无统计学意义(P>0.05)。但其表达量明显低于正常乳腺组织(P<0.05)。乳腺癌组织的RASSF1A基因启动子甲基化频率(65%)明显高于正常乳腺组织(20%)和乳腺良性肿瘤(17%)(P<0.05)。结论:乳腺癌组织中RASSF1A基因启动子的高甲基化是引起RASSF1A基因表达下调的重要原因,在肿瘤的发生和发展中起重要的调控作用。