阿托伐他汀对高葡萄糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究阿托伐他汀对醛糖还原酶(AR)和核因子NF-κB的表达及血管平滑肌细胞增殖的影响,探讨阿托伐他汀抗细胞增殖的可能机制。方法用高浓度葡萄糖诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)AR基因表达,然后加入不同浓度的阿托伐他汀,培养3d后用台盼蓝染色行细胞计数。并采用RT-PCR、免疫组化、原位杂交等方法,观察阿托伐他汀对NF-κB和AR基因表达及VSMC增殖的影响。结果1)随着阿托伐他汀浓度的提高,VSMC计数逐渐减少。2)正常浓度葡萄糖(5·6mmol/L)时,NF-κB表达不明显,高浓度葡萄糖(22·5mmol/L)时,NF-κB表达强阳性,阿托伐他汀则可明显抑制这一表达,0·1μmol/L阿托伐他汀时,NF-κB表达即有降低,10μmol/L阿托伐他汀几乎完全抑制NF-κB的表达。3)高浓度葡萄糖可明显诱导AR基因的表达,阿托伐他汀对其表达有抑制作用,且呈剂量依赖性。与高浓度葡萄糖组相比,阿托伐他汀0·1、1、10μmol/L分别使VSMC的ARmRNA下调12%、45%和80%(P均<0·05)。结论1)阿托伐他汀可抑制VSMC增殖。2)阿托伐他汀可抑制AR及NF-κB的表达。3)阿托伐他汀可能是通过抑制AR及NF-κB的表达继而抑制VSMC的增殖。     

依帕司他对醛糖还原酶和核转录因子-κB表达及血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究依帕司他对醛糖还原酶(AR)、核转录因子(NF)-κB表达及血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,探讨依帕司他抗细胞增殖的可能机制。方法取大鼠胸主动脉段行VSMC培养,用高浓度葡萄糖(22.5mmol/L)诱导AR基因表达,然后加入不同浓度的依帕司他,培养3d后行VSMC计数,并用免疫组化、RT-PCR及原位杂交的方法检测NF-κB及AR的表达。结果①随依帕司他浓度的增加,VSMC计数逐渐减少。②高浓度葡萄糖时NF-κB表达强阳性,加入不同浓度的依帕司他后,NF-κB表达逐渐减弱。③高浓度葡萄糖可明显诱导AR基因表达,依帕司他对其表达有抑制作用,且呈剂量依赖性。结论①高浓度葡萄糖可促进VSMC增殖,依帕司他可抑制这一增殖作用,且具有剂量依赖性。②依帕司他可抑制AR及NF-κB的表达。③依帕司他可能是通过抑制AR及NF-κB的表达继而抑制VSMC的增殖。     

阿托伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞迁移和组织蛋白酶S表达的影响

目的 观察阿托伐他汀对白细胞介素1β诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移及组织蛋白酶S和核因子κB表达的影响.方法 取SD大鼠胸主动脉进行血管平滑肌细胞培养,采用Boyden小室实验评价不同浓度阿托伐他汀对白细胞介素1β诱导大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响,用细胞免疫化学和逆转录聚合酶链反应法检测各组组织蛋白酶S和核因子κB表达的变化.结果 与正常对照组相比,白细胞介素1β组血管平滑肌细胞迁移增多,核因子κB和组织蛋白酶s表达明显增加(P<0.01).1 μmol/L和10 μmol/L阿托伐他汀组可呈剂量依赖性地抑制白细胞介素1β所致的细胞迁移以及组织蛋白酶S和核因子κB表达(P<0.01).结论 阿托伐他汀可能通过抑制核因子κB使组织蛋白酶S表达减少,从而抑制血管平滑肌细胞迁移.     

HDL和阿托伐他汀对oxLDL刺激下脂肪细胞炎症反应的影响

目的 观察高密度脂蛋白（HDL）及阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）刺激下3T3-L1脂肪细胞肿瘤坏死因子-α（TNFα）分泌及mRNA表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 3T3-L1脂肪细胞促分化成熟后,oxLDL刺激脂肪细胞,给予不同浓度的HDL（10～100 μg/mL）和阿托伐他汀（0.1～10 μM）,及H-89（10 μM）＋HDL（100 μg/mL）干预,收集细胞,测定脂肪细胞TNFα水平、TNFα mRNA表达水平、核因子-κB（NF-κB）活性及NF-κB抑制单位（IκB）蛋白浓度.结果 oxLDL刺激使3T3-L1脂肪细胞TNFα分泌、mRNA表达水平及NF-κB活性明显增强.阿托伐他汀浓度依赖性降低TNFα 分泌及mRNA表达,抑制NF-κB活化.10 μM阿托伐他汀使oxLDL诱导的脂肪细胞TNFα mRNA表达降低56.5%,NF-κB活性减少41.2%.HDL也呈浓度依赖性抑制TNFα分泌及mRNA表达,降低NF-κB活性,减少IκB降解.与oxLDL刺激组比较,100 μg/ml HDL使TNFα mRNA表达降低64.5%,NF-κB活性减少49%,并明显增加IκB蛋白水平.HDL的这些抗炎效应能被蛋白激酶A（PKA）抑制剂（应放在H89第一次出现之处）H-89部分抑制.结论 HDL能抑制oxLDL诱导的3T3-L1脂肪细胞TNFα分泌和mRNA表达,PKA-IκB-NF-κB信号通路可能是其中作用途径之一,该效应不需要HDL与oxLDL的直接接触作用.阿托伐他汀亦通过NF-κB途径抑制oxLDL诱导的3T3-L1脂肪细胞TNFα分泌和mRNA表达.HDL的抗炎作用强度与阿托伐他汀相似.     

罗格列酮对高糖诱导大鼠血管平滑肌细胞炎症和增殖的影响

目的 探讨罗格列酮(RSG)对高浓度葡萄糖孵育下的血管平滑肌细胞(VSMCs)炎症和凋亡的影响及其可能的分子机制.方法 以不同浓度的葡萄糖和罗格列酮单独或联合孵育大鼠胸主动脉平滑肌细胞,ELISA方法检测培养基中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平;采用流式细胞术检测VSMCs细胞凋亡率及Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达;Western印迹检测胞浆中VSMCs Bcl-xl蛋白表达及NF-κBp65和IκBα的表达.结果 高葡萄糖浓度(11.2、22.5 mmol/L)培养可明显增加上清中MCP-1的浓度,促进VSMCs增殖,抑制其凋亡,上调Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达,同时使NF-κB p65表达增加,IκBα表达下降;30及100 μmol/L RSG以浓度依赖形式减少VSMCs对MCP-1的分泌,抑制高葡萄糖培养下(11.2、22.5 mmol/L)VSMCs Bcl-xl、Bcl-2表达,促进其凋亡;下调NF-κBp65表达,促进IκBα表达.RSG拮抗剂GW9662(10 μmol/L)预处理可部分拮抗RSG的作用.结论 RSG可能通过对NF-κB通路的调控,减少炎症因子MCP-1分泌,下调Bcl-xl、Bcl-2表达,从而抑制高糖葡萄糖培养下的VSMCs炎症反应并促进其凋亡,从而在2型糖尿病大血管病变的防治中发挥重要作用.     

阿托伐他汀抑制C反应蛋白对肺动脉平滑肌细胞的增殖作用研究

目的近年的研究显示,炎症参与肺动脉高压的发生和发展。作为炎症的重要指标,C反应蛋白(CRP)是肺动脉高压的独立预测因子。本文通过观察CRP和阿托伐他汀对培养的肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)增殖的影响,探讨CRP和阿托伐他汀对肺血管疾病的可能作用。方法体外培养hPASMCs,以不同浓度的CRP(5-200μg/ml)刺激24h,或先加阿托伐他汀(0.1-10μmol/l)处理2h。核因子κB(NF-κB)的活性以非变性凝胶电泳迁移率(EMSA)方法进行分析。细胞增殖水平以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrDU)掺入法和ELISA方法进行检测。结果 CRP刺激hPASMCs的增殖程度呈浓度依赖性,随着CRP浓度的增加,细胞增殖倍数逐渐上升,在CRP200μg/ml组,其增殖倍数为对照组的1.84±0.12(P<0.001)。CRP显著诱导NF-κB在hPASMCs中的激活。阿托伐他汀则通过抑制NF-κB的激活而减轻hPASMCs的增殖。结论 CRP促进肺动脉平滑肌细胞的增殖,具有浓度依赖性,这一作用是通过对NF-κB的核内转位激活而介导的。提示CRP在肺动脉高压的发病中有重要作用,阿托伐他汀可能对肺血管疾病有保护作用。     

氧化低密度脂蛋白对人单核细胞组织因子和基质金属蛋白酶-9活性的影响以及阿托伐他汀的干预作用

目的:探讨他汀类降脂药阿托伐他汀潜在的降脂外机制。方法:人单核细胞来源的巨噬细胞,加入50mg/L氧化低密度脂蛋白(oxLDL)共培养10d,加或不加入不同浓度的阿托伐他汀(浓度范围0.01~0.5μmol/L);酶谱学分析基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性;一期凝固法测定组织因子(TF)的促凝活性。结果:阿托伐他汀可抑制单核-巨噬细胞的增殖,呈现一定的剂量依赖关系(P<0.05),加入100μmol/L羟甲戊酸后,这种抑制作用消失;0.1μmol/L的阿托伐他汀可显著抑制单核-巨噬细胞表达MMP-9的活性;阿托伐他汀可呈剂量依赖性抑制TF的促凝活性(P<0.05)。结论:阿托伐他汀不仅可抑制单核-巨噬细胞的增殖,而且可抑制单核巨噬细胞活化下表达的MMP-9的活性以及TF的促凝活性。     

阿托伐他汀抑制C反应蛋白对肺动脉平滑肌细胞的促炎作用研究

目的观察C反应蛋白(CRP)和阿托伐他汀对人肺动脉平滑肌细胞(hPASMCs)炎性因子分泌的影响。方法体外培养hPASMCs,培养液只加FBS为对照组,培养液中加5、10、20、50、100、200 mg/L CRP依次分为CRP5组、CRP10组、CRP20组、CRP50组、CRP100组、CRP200组;加入0.1、1.0、10μmo1/L阿托伐他汀依次为阿托0.1组、阿托1.0组、阿托10组,另用CRP100 mg/L刺激不同时间,以非变性凝胶电泳迁移率方法分析NF-κB的激活。以RT-PCR和ELISA方法对白细胞介素6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA和蛋白水平检测。结果CRP以浓度和时间依赖的方式促进IL6和MCP-1 mRNA表达和蛋白的合成。与对照组比较,除CRP5组外,CRP各浓度组IL-6和MCP-1蛋白和mRNA均显著增加(P<0.05,P<0.01),阿托伐他汀各浓度组无显著差异(P>0.05)。CRP显著诱导NF-κB的激活,阿托伐他汀抑制NF-κB激活。结论CRP促进hPASMCs对IL-6和MCP-1的表达,阿托伐他汀可能通过抑制NF-κB的激活而显著降低CRP对hPASMCs IL-6和MCP-1合成,起到对肺血管疾病的保护作用。     

阿托伐他汀对HMGB1诱导血管内皮细胞激活的影响

目的探讨阿托伐他汀能否抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)诱导的血管内皮细胞激活,阐明其潜在的分子机制。方法体外培养大鼠胸主动脉内皮细胞,分别用不同浓度的阿托伐他汀、HMGB1、TLR4特异性抑制剂CLI-095预处理内皮细胞,荧光定量分析中性粒细胞与内皮细胞的黏附活力;实时定量RT-PCR与Western blot分别检测TLR4、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和E-选择素mRNA和蛋白的表达水平;电泳迁移率实验(EMSA)测定核因子κB(NF-κB)p65的DNA结合活性。结果阿托伐他汀(0.1～10μmol/L)呈剂量依赖性地抑制HMGB1诱导的血管内皮细胞活化。阿托伐他汀预处理能明显下调HMGB1诱导的TLR4 mRNA和蛋白表达水平(P均0.05);阿托伐他汀、CLI-095均能有效抑制HMGB1诱导的NF-κB p65的DNA结合活性以及ICAM-1和E选择素的表达水平(P均0.05)。结论阿托伐他汀可通过调节黏附分子(ICAM-1和E-选择素)的表达而显著抑制HMGB1诱导的血管内皮细胞活化效应,其机制可能与它抑制TLR4的表达及NF-κB激活有关。     

辛伐他汀对过氧化氢促兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨辛伐他汀（SIM）对过氧化氢（H202）诱导的兔血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法10、50μmol／LSIM，与H202共同作用后24、48、72h采用CCK-8法检测VSMC增殖情况；TBA法检测培养基中丙二醛（MDA）含量，实验终点免疫组化法检测核因子-κB（NF-κB）表达。结果H202组与对照组相比，A450上升、MDA含量、NF-κB表达增加（P〈0．01）；SIM预处理30min，与H202共同作用48h后，50μmol／LSIM显著抑制VSMC增殖，且培养液中MDA水平降低（P〈0．01）；作用72h后，10、50μmol／LSIM均可抑制VSMC增殖及NF-κB的表达，培养液中MDA含量低于48h的检测结果，50μmol／L组作用大于10μmoL／L组（P〈0.05）。结论一定浓度的SIM可抑制H202促使的VSMC增殖及NF-κB的表达．减少培养基中MDA含量，且与时间和剂量有关。     

姜黄素对血管平滑肌细胞增殖及cyclinD1和p21wafl/cipl蛋白表达的影响

目的 观察姜黄素(curcumin)抑制大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导细胞周期停滞的作用,以及对细胞周期蛋白cyclinDl,p21wafl/cipl表达的影响.方法 采用组织贴块法体外培养大鼠VSMC,MTT法测定姜黄素对VSMC增殖的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期分布,Western印迹法检测cyclinDl,p21wafl/cipl蛋白的变化.结果 MTT示不同浓度姜黄素(7.5～120 μmol/L)在24～72 h范围内,浓度和时间依赖性抑制VSMC增殖;30 μmol/L以上浓度姜黄素显著抑制增殖的VSMC细胞周期进程,使S及G2/M期减少(P<0.05),G0/G1期增加(P<0.05);30 μmol/L的姜黄素可抑制cyclinDl表达,促进p21wafl/cipl蛋白表达.结论 姜黄素具有明确的抑制VSMC增殖和细胞周期停滞的作用,其与cyclinDl,p21wafl/cipl蛋白变化有关.     

阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物诱导的人内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达影响及其机制的实验研究

目的 观察阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)诱导的人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,并探讨其作用机制.方法 实验分组:(1)空白对照组.(2)牛血清白蛋白(BSA)对照组.(3)AGE诱导组:不同作用浓度的AGE(10-4、10-3、10-2及10-1g/L)与细胞共同培养24 h.(4) AGE+阿托伐他汀组:用不同作用浓度的阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)分别与细胞培养1 h,而后加入10-1 g/L AGE[根据(3)实验结果选取最佳浓度]与细胞共孵育24 h.(5)PPAR-γ激动剂(15 d-PGJ2)组:15 d-PGJ2( 10 μmol/L)与细胞孵育1 h后加入10-1 g/L AGE再与细胞共孵育24 h.(6)PPAR-γ抑制剂(GW9662)组:GW9662(5000 g/L)与细胞孵育1 h后加入AGE(10-1 g/L)和阿托伐他汀(1 μmol/L)[根据(4)实验结果选取最佳浓度]再与细胞共孵育24 h.胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞.逆转录聚合酶链反应法分析细胞MCP-1和过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPAR-γ)基因的表达.蛋白免疫印迹法测定细胞核因子-κB(NF-κB )p65表达水平.结果 (1)AGE(10-4、10-3、10-2及10-1 g/L)呈浓度依赖性提高人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达水平,分别是空白对照组的1.53倍、2.12倍、2.56倍及4.71倍;AGE浓度为10-4 g/L时,细胞MCP-1 mRNA表达明显高于空白对照组(0.26±0.02比0.17±0.04,P<0.01).(2)与AGE组比,阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)呈浓度依赖性抑制AGE诱导的人内皮细胞MCP-1 mRNA的表达;阿托伐他汀浓度为1 μmol/L时,细胞MCP-1 mRNA表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.63±0.11比1.03±0.07,P<0.01).(3)AGE(10-1 g/L)组人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA的表达水平显著低于空白对照组(0.22±0.08比0.69±0.09,P<0.01),磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著高于空白对照组(0.78±0.06比0.31±0.01和1.61±0.16 比0.59±0.14,P均<0.01).(4)阿托伐他汀(1、10 μmol/L)组人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA表达水平显著高于AGE(10-1 g/L)组(0.59±0.02和0.61±0.06比0.22±0.08,P均<0.01);阿托伐他汀(1 μmol/L)组磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.40±0.03比0.78±0.06和0.65±0.12比1.61±0.16,P均<0.01).(5)PPAR-γ激动剂(15 d-PGJ2)组细胞磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组 (0.21±0.01比0.78±0.06和0.67±0.14比1.61±0.16,P均<0.01),MCP-1 mRNA表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.17±0.02比0.93±0.12,P<0.01).(6)PPAR-γ抑制剂(GW9662)组细胞磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著高于AGE(10-1g/L)+阿托伐他汀(1 μmol/L)组(0.53±0.02比0.40±0.03和1.38±0.18比0.65±0.12,P均<0.01),MCP-1 mRNA表达水平显著高于AGE(10-1g/L)+阿托伐他汀(1 μmol/L)组(0.62±0.05比0.30±0.07,P<0.01).结论 阿托伐他汀可通过提高AGE诱导的人脐静脉内皮细胞对PPAR-γ表达抑制细胞NF-κB信号途径,进而抑制AGE诱导的人脐静脉内皮细胞的炎性反应.

Abstract：

Objective To investigate the effects of atorvastatin on advanced glycation end products (AGE) induced monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1) expression in human umbilical vein endothelial cells(HUVECs)and whether this effect could be linked to peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPAR-γ) and nuclear factor-κB(NF-κB).Methods Grouping: (1)Blank control group;(2)BSA group;(3)AGE group:cells were incubated with different concentrations of AGE(10-4,10-3, 10-2 and 10-1g/L)for 24 hours; (4)AGE+Atorvastatin group: cells were incubated with different concentrations of atorvastatin(0.1,1,10 μmol/L)for 1 hour,then incubated with AGE (10-1 g/L) for 24 hours; (5)PPAR-γ agonist(15 d-PGJ2)group: cells were incubated with 15 d-PGJ2(10 μmol/L)for 1 hour,then incubated with AGE (10-1g/L) for 24 hours;(6)PPAR-γ inhibitor(GW9662)group:cells were incubated with GW9662(5000 nmol/L)for 1 hour,then incubated with atorvastatin (1 μmol/L)and AGE (10-1g/L) for 24 hours. Collagenase was used to isolate the endothelial cell from human umbilical vein;RT-PCR was performed to examine the mRNA expression of MCP-1 and PPAR-γ;Western blot was performed to detect NF-κB p65 protein.Results (1) The expression of MCP-1 mRNA was increased in proportion with increasing concentrations of AGEs which could be blocked by atorvastatin in a dose-dependent manner. (2) AGE(10-1g/L)significantly downregulated the expression of PPAR-γ mRNA(0.22±0.08 vs. 0.69±0.09, P<0.01) while upregulated the expression of phospho-NF-κB p65 protein (0.78±0.06 vs. 0.31±0.01,P<0.01) and nonphospho-NF-κB p65 protein (1.61±0.16 vs. 0.59±0.14,P<0.01) comparaed with the control group which could be significantly attenuated by atorvastatin. (3) PPAR-γ agonist decreased the expression of phospho-NF-κB p65 protein (0.21±0.01 vs. 0.78±0.06, P<0.01),nonphospho-NF-κB p65 protein (0.67±0.14 vs. 1.61±0.16,P<0.01)and MCP-1 mRNA (0.17±0.02 vs. 0.93±0.12, P<0.01)compared with AGE(10-1g/L)group. (4) PPAR-γ inhibitor antagonized the effect of atorvastatin on the expression of phospho-NF-κB p65 protein, nonphospho-NF-κB p65 protein and MCP-1 mRNA stimulated by AGE in HUVECs(P<0.01).Conclusion The anti-inflammatory properties of atorvastatin in AGE stimulated HUVECs may partly be attributed to the effect on upregulation of PPAR-γ and downregulation of NF-κB signaling pathway.     

阿托伐他汀通过调节Bcl-2/Bax蛋白表达抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的研究阿托伐他汀对高浓度葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响以及其分子机制。方法将培养的人脐静脉内皮细胞与不同浓度的葡萄糖(5.6 mmol/L、17.6 mmol/L、33.3 mmol/L)及阿托伐他汀(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)作用24 h后用吖啶橙/溴化已啶荧光染色观察凋亡细胞形态,四甲基偶氮唑蓝比色法测定人脐静脉内皮细胞增殖率,流式细胞仪和W estern Blotting分别检测细胞早期凋亡率及Bcl-2/Bax蛋白表达。结果随着葡萄糖浓度的增加,人脐静脉内皮细胞增殖率逐渐降低(P0.05),细胞早期凋亡率逐渐升高(P0.05)。人脐静脉内皮细胞Bcl-2蛋白表达逐渐减弱,Bax蛋白表达逐渐增强。用不同浓度的阿托伐他汀干预后,人脐静脉内皮细胞的增殖率逐渐升高(P0.05),而凋亡率逐渐降低(P0.05);人脐静脉内皮细胞Bcl-2蛋白表达逐渐增强,Bax蛋白表达逐渐减弱。其中,与高糖组比较,10μmol/L阿托伐他汀干预组能提高Bcl-2蛋白表达(P0.05),抑制Bax蛋白表达(P0.05)。结论阿托伐他汀可能通过调节Bcl-2/Bax蛋白表达抑制高浓度葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。     

葛根素对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞的增殖及蛋白激酶-α和核转录因子-κB表达的影响

目的:观察葛根素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及对蛋白激酶-α(PKC-α)和核转录因子(NF)-κB表达的影响,探讨其可能存在的抑制VSMC增殖的分子机制.方法:体外培养Wistar大鼠的VSMC,给予单纯1.5×10-3mol/L葛根素处理2 h(P组)、单纯10-8mol/L AngⅡ处理24 h(A组)和1.5×10-3mol/L葛根素预处理2 h后再加10-8mol/L AngⅡ处理24 h(P A组)刺激后,四氮唑盐法检测增殖情况,采用Western blot的方法检测PKC-α和NF-κB的表达.结果:对照组、P组、A组、P A组VSMC增殖的A值分别为0.178±0.017、0.198±0.028、0.373±0.017和0.286±0.024.与对照组比较,A组和P A组差异有统计学意义(均P＜0.05);A组和P A组VSMC中PKC-α、NF-κB的表达与对照组比较,均显著增高(均P＜0.05);P A组较A组均有明显下降(均P＜0.05).结论:一定浓度的葛根素可通过下调PKC-α和NF-κB的表达来抑制AngⅡ引起的VSMC的增殖.     

阿托伐他汀对氧化低密度脂蛋白信号转导途径的影响

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxLDL)促血管平滑肌细胞增殖的信号转导机制及3羟基3甲基戊二酸单酰辅酶A抑制剂阿托伐他汀(atorvastatin)的干预作用。方法 采用培养兔血管平滑肌细胞方法，以细胞计数、噻唑蓝比色法测定细胞增殖能力，Western印迹法定量蛋白激酶B(PKB)表达水平，特异底物组蛋白H2B中γ^32P掺入量测定PKB活性。以磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)特异抑制剂渥曼青霉素(WT)预处理细胞，间接反映PI3K活性。结果 oxLDL(50mg／L)使细胞增殖指标增至1．8～3．2倍，oxLDL可浓度(5～50mg／L)、时间(3min～24h)依赖地增加PKB活性。WT及阿托伐他汀均可显抑制VSMC增殖及PKB活性，并完全逆转oxLDL的上述作用，阿托伐他汀对VSMC增殖的抑制作用可被胆固醇前体甲羟戊酸(MVA)阻止。同等浓度的LDL对细胞增殖及PKB活性无明显影响。oxLDL、低密度脂蛋白(LDL)、WT及阿托伐他汀对PKB蛋白表达均无显影响。结论 oxLDL可能通过对PI3K／PKB的活化发挥促VSMC增殖作用，阿托伐他汀至少部分通过抑制PKB信号通路而显抑制VSMC增殖，并且此作用与减少MVA的产生有关。     

粉防已碱对AngⅡ诱导血管平滑肌细胞增殖及NF-κB通路的影响

采用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导培养Wistar大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）,MTT比色法测定粉防已碱（Tet）对血管平滑肌细胞抑制增殖率;考马斯亮蓝法测定蛋白含量;免疫印记法测定NF-κB（p65）及其抑制物（I-κBα）表达;凝胶电泳迁移率分析测定核转录因子-κB（NF-κB）体外活性。发现Tet能显著抑制血管平滑肌细胞增殖;抑制VSMC胞核NF-κB表达,同时抑制胞浆I-κBα磷酸化;同时显著抑制NF-κB体外活性。提示Tet明显抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,机制与调控NF-κB通路有关。     

阿托伐他汀减轻大鼠颈动脉损伤后组织蛋白酶S表达的影响

背景新生内膜形成是动脉粥样硬化、再狭窄等血管病理改变时的重要特征。阿托伐他汀能否通过抑制组织蛋白酶S(Cat S)及核转录因子κB(NF-κB)表达减轻新生内膜形成目前尚不清楚。目的观察阿托伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后Cat S及NF-κB表达的影响。方法 24只雄性SD大鼠分为正常对照组(n=8)、手术组(n=8)和阿托伐他汀组(n=8),手术组和阿托伐他汀组行左侧颈动脉球囊损伤。阿托伐他汀组予阿托伐他汀10 mg/(kg·d)。实验前后测定血清白细胞介素1-β(IL-1β)变化,28 d后大鼠处死行病理形态学检查,检测各组Cat S和NF-κB表达。结果与手术组比较,阿托伐他汀组大鼠颈动脉内膜面积和内膜/中膜面积(I/M)比值明显减少,差异有统计学意义[内膜面积:(148.6±8.8)×103μm2比(64.8±5.1)×103μm2;I/M:(2.1±0.2)比(0.9±0.1),均P<0.01]。与手术组比较,阿托伐他汀组Cat S表达和NF-κB评分也明显减少,差异有统计学意义[Cat S mRNA:(0.80±0.07)比(0.50±0.04);Cat S评分:(15.3±1.4)比(8.5±0.7);NF-κB评分:(12.5±1.3)比(6.7±0.5),均P<0.01]。内膜面积与Cat S和NF-κB表达呈正相关(P<0.05)。结论阿托伐他汀可能通过抑制NF-κB使Cat S表达减少,减轻颈动脉球囊损伤后新生内膜形成。     

高迁移率族蛋白1及其受体促进人主动脉血管平滑肌细胞增殖及迁移的作用研究

目的研究高迁移率族蛋白1(HMGB1)及其受体对体外人主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及迁移的影响。方法体外培养人VSMC株,50、100、200μg/L HMGB1作用细胞24 h后,CCK法检测VSMC的增殖情况;细胞划痕修复及Transwell小室实验检测VSMC迁移情况;Real-time PCR及Western blot检测细胞晚期糖基化终产物受体(RAGE)干扰效率;CCK法及Transwell小室实验检测沉默RAGE后HMGB1对细胞增殖及迁移的影响;Western blot检测核因子(NF-κB)蛋白表达水平。结果 HMGB1作用VSMC后可明显促进细胞增殖及迁移(P0.05);转染si RNA-RAGE后,RAGE的m RNA及蛋白表达水平明显下降(P0.05);与HMGB1组相比,si RNA-RAGE可抑制HMGB1诱导的细胞增殖、迁移及NF-κB蛋白表达(P0.05)。结论 HMGB1可促进VSMC增殖及迁移,机制可能与HMGB1和RAGE结合后激活NF-κB表达有关。     

瑞舒伐他汀预处理对外周血树突状细胞的影响

目的探讨瑞舒伐他汀对树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟程度及其功能的影响。方法体外分离培养外周血单核来源的DCs,第一部分给予不同剂量的瑞舒伐他汀预处理24 h,依次分为他汀1摩组、他汀5摩组、他汀10摩组和他汀15摩组;第二部分不同时间给予10 μmol/L瑞舒伐他汀预处理依次为他汀1 h组、他汀12 h组、他汀24 h组、他汀36 h组;第三部分选用10 μmol/L瑞舒伐他汀作用36 h为预处理组;各组均用TNF-α诱导DCs成熟的方式,三部分实验中,PBS预处理为空白组,仅加TNF-α处理为对照组,用流式细胞仪检测各组DCs表面分子CD86、CD83、CD40、HLA DR、CD80的表达,用ELISA法检测DCs分泌的趋化因子,~3H胸腺嘧啶核苷掺入法检测DCs诱导自体T淋巴细胞增殖反应。Western blot法检测DCs细胞质NF-κB抑制蛋白(IκBα)、NF-κB表达。结果与对照组比较,不同浓度和不同时间作用组CD86表达均有下降趋势;经终浓度10μmol/L瑞舒伐他汀处理36 h后DCs表面分子CD83、CD40、CD86、HLA-DR、CD80均有不同程度的下调,上清液中MCP-1浓度以及DCs促T淋巴细胞增殖的作用明显下降(P0.01)。Western blot检测表明,瑞舒伐他汀预处理后各组,IκBα表达均有不同程度增加,NF-κB含量则存在不同程度的减少,并表现一定的剂量和作用时间的依赖性,但当剂量达到10μmol/L,作用时间为24 h时,作用达到一个平台期。结论瑞舒伐他汀预处理可以抑制外周血单核来源的DCs成熟,并影响DCs的促T淋巴细胞增殖能力及迁移能力。     

姜黄素对血管平滑肌细胞增殖及cyclinD1和p21waf1/cip1蛋白表达的影响

目的 观察姜黄素（curcumin）抑制大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导细胞周期停滞的作用,以及对细胞周期蛋白cyclinD1,p21waf1/cip1表达的影响。方法 采用组织贴块法体外培养大鼠VSMC,MTT法测定姜黄素对VSMC增殖的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期分布,Western印迹法检测cyclinD1,p21waf1/cip1蛋白的变化。结果 MTT示不同浓度姜黄素(7.5～120 μmol/L)在24～72 h范围内,浓度和时间依赖性抑制VSMC增殖;30 μmol/L以上浓度姜黄素显著抑制增殖的VSMC细胞周期进程,使S及G2/M期减少(P<0.05),G0/G1期增加(P<0.05);30 μmol/L的姜黄素可抑制cyclinD1表达,促进p21waf1/cip1蛋白表达。结论 姜黄素具有明确的抑制VSMC增殖和细胞周期停滞的作用,其与cyclinD1,p21waf1/cip1蛋白变化有关。