牙周膜成纤维细胞对成骨细胞细胞数量和碱磷酶活性的影响

目的:观察人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)对成骨细胞(Osteoblast cells,OBs)细胞数量和碱磷酶活性的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法:建立人OBs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察人牙周膜成纤维细胞对成骨细胞细胞数量和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性的影响。结果:3d和5d时,共培养组OBs细胞计数分别为4.5×104及8.5×104,明显高于对照组,且两组分别与对照组OBs细胞计数有显著性差异(P<0.05)。transwell共培养组与对照组相比,在3d时,两组OBsALP活性有显著性差异(P<0.05),5d及7d时差异尤其显著(P<0.01),transw ell共培养组OBsALP活性低于对照组。结论:人HPLFs能增加OBs的细胞数量,但抑制OBsALP活性。     

人外周血单个核细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响

目的:观察人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)增殖分化的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法:建立人PBMCs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察人外周血单个核细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果:3 d和5 d时,共培养组HPLFs细胞计数分别为4.5×104及8.5×104,明显高于对照组,且两组分别与对照组HPLFs细胞计数有显著性差异(P<0.05)。transwell共培养组与对照组相比,在3 d时,两组HPLFs分泌型ALP活性有显著性差异(P<0.05),5 d及7 d时差异尤其显著(P<0.01),tran-swell共培养组HPLFs分泌型ALP活性低于对照组。结论:人PBMCs能促进HPLFs的增殖,但抑制HPLFs分泌型ALP活性。     

IL - 1β对人牙周膜成纤维细胞的增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)为研究对象,观察IL-1β对HPLFs的增殖和碱性磷酸酶(ALP)表达的影响,旨在从细胞学水平探索IL-1β在牙周炎的发生、发展、及转归中的作用.方法取酶消化法培养的第6代细胞,随机分5个实验组及1个对照组,实验组分别加入含系列浓度IL-1β (0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml) 的α- MEM培养液,对照组加入含1% FBS的α- MEM培养液,分别测定MTT和ALP活性;加入浓度为10ng/ml的 IL-1β的α- MEM培养液,观察IL - 1β对HPLFs的ALP活性影响的时间效应.结果MTT实验结果表明,不同浓度的IL-1β对HPLFs的增殖与对照组相比无显著差异(P>0.05); IL-1β对HPLFs的HPLFs活性有抑制作用,显著低于空白对照组(P<0.05);浓度为10ng/ml 的IL-1β作用于HPLFs,其 ALP活性显著低于空白对照组(P<0.05).结论IL-1β在牙周炎的早期阶段可能对HPLFs的增殖无显著影响; 但在牙周炎的修复过程中IL-1β可能通过抑制 HPLFs的 ALP活性,阻止HPLFs分化为成骨细胞,从而抑制牙周炎病灶区的骨性修复.     

黄芩醇提取物对牙龈卟啉菌膜泡抑制牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的:探讨黄芩醇提取物对牙龈卟啉菌(Porphyromonas gingivalis Pg)膜泡(extracellular vesicles,ECV)抑制牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响.方法:采用体外培养的人牙周膜成纤维细胞,酶联免疫法检测ECV对人牙周膜成纤维细胞ALP活性的影响以及黄芩醇提取物对ECV这一生物活性的阻断作用.结果:与空白对照组相比P<0.01,细胞培养物中加入50 μg/mL ECV时,人牙周膜成纤维细胞ALP的活性受到明显抑制,当同时加入各浓度黄芩醇提取物时人牙周膜成纤维细胞ALP的活性明显增高,与ECV组相比均P<0.01,且随黄芩醇提取物浓度升高,ALP的活性也随之增高,呈一定浓度依赖性.结论:黄芩醇提取物可能在病变修复过程中,通过阻断ECV抑制牙周膜成纤维细胞ALP的活性,促使牙周膜成纤维细胞向成骨细胞转化,而有利于病变的愈合.     

人成骨细胞与脐静脉血管内皮细胞直接混合培养的实验研究

目的探讨人成骨细胞(MG-63)与人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共同培养后,对成骨细胞功能的影响。方法取MG-63与人HUVECs直接联合培养于培养皿中,通过对人成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OC)定量测定,观察HUVECs对人成骨细胞功能的影响。结果人成骨细胞与HUVECs直接联合共培养后,两种细胞均生长良好,人成骨细胞内ALP活性和OC定量测定结果,共培养组明显高于对照组。结论HUVECs在体外与人成骨细胞直接联合共培养中,有促进人成骨细胞活性的作用。     

辛伐他汀对人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响

一些学者通过检测体外培养的人牙周膜细胞(human peri-odontal ligaments cells,HPLCs)的碱性磷酸酶(alkaline phospha-tase,ALP)活性和矿化诱导实验发现HPLCs具有成骨细胞表型[1-2]。那么辛伐他汀对牙周膜细胞的ALP活性会有什么样的影响呢,是否会促进HPLCs的类骨质化呢?本实验     

成骨细胞和牙周膜成纤维细胞交互作用的初探

目的　了解牙周组织再生中两种重要的细胞(成骨细胞和牙周膜成纤维细胞)之间的相互调控作用,以探讨牙周膜形成和维持的相关因素及其对牙种植体周围结构的影响机制。方法　采用原代培养法获取同一SD大鼠的成骨细胞和牙周膜成纤维细胞,将两种细胞分别接种于培养板上,再置于细胞培养池中以建立体外共同培养模型,分别测试两种细胞的碱性磷酸酶(ALP)及Ⅰ型胶原表达。结果　两种细胞在共同培养后,其ALP活性都发生显著变化,牙周膜成纤维细胞ALP表达明显提高,而成骨细胞ALP则降低;Ⅰ型胶原未发生显著变化。结论　当两种细胞在体外共同培养时,牙周膜成纤维细胞能抑制成骨细胞的成骨作用,而成骨细胞则能诱导牙周膜成纤维细胞向成骨样细胞分化。     

根管消毒药物体外细胞毒性和细胞回复能力的研究

目的:探讨5种常用根管消毒药物的细胞毒性以及毒性的可逆性,寻找一种较理想的根管消毒药物。方法:用体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPLFs),通过MTT法、ALP活性测定法以及透射电镜等方法,系统评价甲醛甲酚(FC)、樟脑酚(CP)、甲硝唑、氢氧化钙和中药制剂的细胞毒性及其毒性的可逆性。采用SPSS11.5软件包,所有数据均经正态分布检验、方差齐性检验、t检验和方差分析。结果:FC和CP对HPLFs的增殖、ALP活性均有显著抑制作用(P<0.01、P<0.05)。FC的细胞毒性为3～4级,细胞回复度<30%。CP的细胞毒性为1～3级,细胞回复度<30%。甲硝唑对HPLFs的增殖、ALP活性有轻微抑制作用,细胞毒性为1级,细胞回复度为32%～85%。氢氧化钙和中药制剂对HPLFs的增殖和ALP活性均无显著抑制作用(P>0.05),细胞毒性为0～1级,细胞回复度>90%。通过透射电镜观察,HPLFs的超微结构显示,FC、CP有重度毒性,甲硝唑有轻度毒性,而氢氧化钙和中药制剂基本无毒性。结论:FC、CP细胞毒性大,且毒性不可逆;甲硝唑有轻微细胞毒性,但毒性可逆;氢氧化钙和中药制剂无细胞毒性。临床上可用氢氧化钙或中药制剂作为较理想的根管消毒药替代有毒性的FC、CP。     

人骨髓基质干细胞对人牙周膜干细胞膜片再生牙周膜样组织的影响

目的:研究人骨髓基质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,HBMMSCs)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,HPDLSCs)膜片再生牙周膜样组织的影响。方法:利用Transwell共培养HBMMSCs和HPDLSCs,通过ALP和MTT的方法检测共培养HPDLSCs的ALP活性和增殖活性。将共培养的HPDLSCs制成膜片与煅烧的陶瓷牛骨(ce-ramic bovine bone,CBB)复合,行裸鼠体内异位移植。结果:体外结果显示,HBMMSCs可以提高HPDLSCs的ALP活性,促进细胞增殖。体内结果显示,共培养的HPDLSCs膜片不仅可以再生含矿化结构的牙周膜样组织,而且再生出丰富的血管。结论:HBMMSCs促进HPDLSCs膜片再生血管化的牙周膜样组织。     

人牙周膜干细胞的初步鉴定及体外成骨诱导

目的：体外培养、鉴定人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs）并定向诱导分化为成骨细胞，探讨人PDLSCs的多向分化潜能：方法：体外分离、培养人牙周膜细胞，待细胞达一定量后用有限稀释法进行克隆化培养，筛选鉴定牙周膜干细胞（PDLSC），矿化诱导培养21d后检测钙结节形成情况、ALP活性，免疫细胞化学检测骨涎蛋白（BSP）、Ⅰ型胶原表达，RT—PCR检测ALP、BSP mRNA表达。结果：人PDLSCs体外诱导培养21d后可见钙结节形成，成骨细胞相关蛋白及mRNA均阳性表达。结论：人PDLSCs在体外诱导条件下具有成骨潜能。     

内皮素促人牙周膜成纤维细胞生长作用的体外研究

目的:探讨不同浓度内皮素-1(ET-1)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblastcells,HPLFs)增殖和分化的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法:采用HPLFs体外培养技术和四唑盐(MTT)显色分光光度法及生化检测法观察ET-1对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果:与对照组相比,10-8mol/L组ET-1对HPLFs具有显著的促增殖作用(P<0.01),10-6mol/L组ET-1对HPLFs的增殖具有明显的抑制作用(P<0.01)。ET-1对HPLFs的分化没有影响。结论:ET-1为促HPLFs生长因子,但是对细胞分化不产生影响,可能在正畸过程中牙周组织的改建中发挥作用。     

茶多酚对炎性牙周膜细胞生物活性的影响

目的观察茶多酚对内毒素脂多糖(LPS)作用的人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响,为茶多酚在牙周疾病的防治中提供一定依据。方法体外培养人牙周膜细胞,采用MTT比色法观察茶多酚对LPS作用的人牙周膜细胞增殖活性的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定法观察茶多酚对人牙周膜细胞的分化作用。结果100μg/ml LPS可抑制人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性。加入LPS同时分别给予50～1100μg/ml不同浓度茶多酚,能对抗LPS的抑制作用,增强人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性,其中在800μg/ml作用24h时促进作用达到最强。结论茶多酚可对抗内毒素对人牙周膜细胞的毒性作用,促进细胞的增殖和骨向分化。     

血管内皮细胞对牙周组织细胞增殖的影响

目的：通过血管内皮细胞与牙周组织细胞复合培养模拟牙周组织再生环境,观察血管内皮细胞对牙周组织细胞增殖的作用规律,探讨血管内皮细胞对牙周组织修复再生的影响。方法：应用原代培养的血管内皮细胞,在Transwell嵌套中实现与人牙周膜成纤维细胞、牙龈成纤维细胞间的复合培养,分别于复合培养第2、4、6、8和10天,以细胞计数手段检测血管内皮细胞共存条件下2种牙周组织细胞的增殖情况,并与单独培养的2种牙周组织细胞作为对照,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果：在血管内皮细胞存在条件下,2种牙周组织细胞的增殖速率均显著高于单独培养条件。血管内皮细胞存在时,牙周膜成纤维细胞增殖速率逐渐超越牙龈成纤维细胞(第6天起),并在第8天细胞数量上超过牙龈成纤维细胞,差异具有显著性(P<0.01)。结论：血管内皮细胞的存在,对牙周组织细胞的增殖具有促进作用,对牙周膜成纤维细胞增殖的促进作用显著高于牙龈成纤维细胞。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

依那西普对牙龈卟啉菌内毒素作用下原代培养牙周膜细胞影响的实验研究

目的　观察依那西普（Etanercept）对牙龈卟啉菌内毒素（lipopolysaccharide,LPS)作用下体外培养的人牙周膜细胞(HPDLCs)的增殖能力的影响。方法　体外原代培养人牙周膜细胞,经免疫细胞化学鉴定,加入LPS和1 μg/ml Etanercept+LPS,LPS浓度分别为10、50、100、200、300 μg/ml检测（吸光度）A值。采用MTT法测定细胞增殖能力。结果　 人牙周膜细胞原代细胞生长状态良好。第3代细胞进行鉴定,Vimentin染色呈阳性,Ck(pan)染色呈阴性。MTT法检测加入梯度浓度的LPS 24 h后,HPDLCs增殖率随着LPS浓度的增加,对HPDLCs的增殖抑制逐渐增强,200 μg/ml LPS能最大程度抑制HPDLCS的增殖,抑制率为46.21%(P<0.01)。Etanercept + LPS组对HPDLCs细胞作用相对增殖率与LPS组比较（P＜0.01）,能明显抑制LPS对HPDLCs的抑制作用。结论　TNF-α抑制剂Etanercept能明显抑制牙周膜细胞在内毒素刺激下的死亡。     

HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达

目的：观察HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达及探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-1β（IL-1β）与HGF之间的关系。方法：分别采用IL-1β梯度浓度、最佳干预浓度和TGF-β1梯度浓度干预第5代人牙周膜成纤维细胞,并运用酶联免疫技术检测人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的表达。结果：经IL-1β单独作用,人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的含量较空白对照组高,并优选出IL-1β的最佳干预浓度为10 ng/mL。当一定浓度的TGF-β1和10 ng/mL的IL-1β联合干预人牙周膜成纤维细胞,该细胞上清液中HGF的含量较单独IL-1β作用组低。结论：TGF-β1能够抑制IL-1β诱导的人牙周膜成纤维细胞分泌HGF。     

兔脂肪源干细胞与牙周膜成纤维细胞共培养的实验研究

目的:研究脂肪源干细胞能否与牙周膜成纤维细胞直接共培养,在共培养状态下,脂肪源干细胞能否促进牙周膜成纤维细胞胶原特异基因的表达。方法:分别从新西兰白兔皮下脂肪和牙周膜组织中分离出脂肪源干细胞和牙周膜成纤维细胞,体外常规培养;将两种细胞等量混合共培养,利用光镜和F-actin染色标记细胞骨架的方法观察共培养细胞的形态变化,并与单纯培养的细胞比较;利用DAPI染色标示细胞核细胞计数法检测共培养细胞的增殖情况;利用定量PCR法检测特异基因I型胶原在单纯培养和共培养细胞中的表达。结果:脂肪源干细胞和牙周膜成纤维细胞能直接共培养;共培养细胞形态近似牙周膜成纤维细胞;共培养对细胞增殖无明显影响;脂肪源干细胞可提高牙周膜成纤维细胞I型胶原基因的表达。结论:脂肪源干细胞可与牙周膜成纤维细胞共培养,并促进牙周膜成纤维细胞的胶原分泌。     

机械压力对人牙周膜成纤维细胞增殖活力的影响

目的:探讨不同力值和不同时间的压力对人牙周膜成纤维细胞增殖活力的影响。方法:采用细胞加载装置,对细胞分别施加0、0.25、0.5、1.0 MPa的压力30 min;施加1.0 MPa的压力,分别持续10、30、50 min,通过四唑盐比色实验(MTT法)检测细胞受力后6、12、18、24、30、36 h的OD值。结果:0.25、0.5 MPa组的OD值与对照组无显著性差异(P>0.05);1.0 MPa压力下,加载30 min和加载50 min组有显著性差异(P<0.05),表现为受力后6 h细胞OD值即明显降低,12 h进一步降低,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),24 h后细胞OD值与对照组无差异。结论:人牙周膜成纤维细胞的增殖活力和压力值以及压力作用时间存在一定的关系;细胞的增殖活力随着压力值的增加、压力作用时间的延长而有所降低,但这种影响是可逆的。     

几种胚胎干细胞标志在牙周膜细胞中的表达及意义

目的检测部分胚胎干细胞标志在牙周膜细胞中的表达。方法通过酶解组织块法分离牙周膜细胞,利用多向分化实验和流式细胞术分析表面标志对获得细胞进行鉴定。利用免疫荧光法和RT-PCR法检测牙周膜细胞中Oct4、Nanog、Sox2、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81这些胚胎干细胞标志的表达。结果牙周膜细胞为成纤维细胞样,可分化为成骨细胞和成软骨细胞,可均一表达间充质细胞标志CD44、CD90、CD105,异质性表达间充质标志CD146、Stro-1。细胞免疫荧光实验显示牙周膜细胞表达部分胚胎干细胞标志:Oct4、Nanog、SSEA-4、TRA-1-60阳性,Sox2、TRA-1-81阴性。半定量RTPCR结果显示P3和P8代牙周膜细胞表达Oct4和Nanog,表达量差异不大,Sox2则为阴性。结论牙周膜细胞除了表达常用间充质干细胞标志外,也可表达部分胚胎干细胞标志,这对牙周膜细胞的鉴定和进一步分选纯化有一定应用价值。