nm23-H1基因逆转肺癌细胞转移表型的功能鉴定

肺癌侵袭和转移是多基因、多步骤共同作用的结果,协同促进了细胞癌变、侵袭和转移.其中肿瘤转移抑制基因结构和功能异常,导致对肿瘤转移表型的失调控,最终导致肿瘤转移.近年来细胞水平和组织水平的研究表明nm23-H1为肿瘤转移抑制基因(tumor metastasis suppressor genes),与肺癌细胞的转移潜力密切相关.本研究利用基因转染技术,通过体外实验研究nm23-H1对nm23-H1基因缺失肺癌细胞株L9981转移表型的影响,初步探讨nm23-H1基因对肺癌的治疗价值,以期为肺癌的基因治疗提供客观依据.     

GSTM1基因缺失及吸烟与非小细胞肺癌的易感性

目的:探讨谷胱甘肽硫转移酶μ基因(GSTM1)缺失与肺癌遗传易感性的关系.方法:采用病例对照研究方法和PCR检测手段分析GSTM1基因缺失在213例病例和199例对照中的分布情况,并分析其与吸烟共同作用在肺癌发生中的作用.结果:GSTM1基因缺失率在肺癌病例组为61%,对照组为48%,OR=1.7(95%CI1.2～2.5),P=0.007.吸烟组肺癌患者与非肺癌患者相比,GSTM1基因缺失的OR=1.9(95%CI1.2～3.0),P=0.011.吸烟量≥30包×年的OR=5.9(95%CI2.6～13.0),P<0.01.结论:GSTM1基因缺失是肺癌发生的重要危险因素,吸烟与GSTM1基因缺失联合作用可增加患肺癌的风险,并有显著的剂量效应关系.     

RAS区域相关家族基因与肺癌

肺癌严重影响着人们的生活,威胁着人们的身体健康,是癌症相关致死疾病中病死率最高的[1],尽管在基因研究,药物发现以及肺癌扫描检查方面广泛努力,5年生存率仍为10%～14%[2].肺癌涉及多阶段,多步骤,多因素,是一种多基因病.而RAS区域相关家族基因(RASSF1A基因)为新发现的RAS家族相关基因,已经发现在多种肿瘤中表达,在抑制肿瘤的发生、发展方面起着重要的作用,尤其是肺癌,被认为是肺癌候选抑癌基因,有意义的是肺癌等肿瘤患者RASSF1A基因不表达很少由突变和缺失造成,主要机制是其启动子区出现高甲基化,目前国内相关报道较少,现就RASSF1A基因与肺癌关系的进展综述如下.     

壮族人群GSTM1和GSTT1基因多态性与肺癌相关性研究

目的:研究广西地区壮族人群GSTM1、GSTT1基因多态性的分布频率,探讨GSTM1、GSTT1基因多态性与肺癌相关性.方法:采用病例对照研究方法,病例组为68例肺癌患者,对照组为同时期70例呼吸系统非肿瘤疾病住院患者,用PCR及复合PCR技术判定基因型,分析GSTM1、GSTT1基因多态性及其与临床相关因素关系.结果:①广西地区壮族非肺癌人群GSTM1、GSTT1基因缺陷频率分别为55.71％和48.57％.②GSTM1和GSTT1基因缺陷型在肺癌组和对照组中的频率分别为69.12％,55.71％和66.18％,48.57％,两组差异均无统计学意义.③GSTM1、GSTT1基因联合缺陷型在肺癌组和对照组中的频率分别为50.0％和27.14％,两组有统计学差异(P=0.034).④GSTM1、GSTT1基因型分布频率与肺癌临床分期及病理类型无相关性(P＞0.05).结论:①GSTM1、GSTT1基因多态性分布频率在广西壮族非肿瘤人群与广西地区正常汉族人群之间无差异.②GSTM1、GSTT1的单一基因缺陷型不增加患肺癌的危险,而两者联合缺陷时可能与肺癌易感性相关,同时携带GSTM1(一)、GSTT1(一)的患者易患肺癌.     

肺癌组织中经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化的检测

目的 检测肺癌组织中经典wnt信号途径相关基因(WIF-1、sFRP-1、DKK-3)启动子的甲基化状态及其与患者临床病理特征问的关系,探讨其在肺癌发生中的作用.方法 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测30例纤维支气管镜活检肺癌组织、11例石蜡包埋肺癌组织和10例肺良性疾病患者的纤支镜活检标本以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化.结果 肺良性疾病患者活检标本未检测到所选基因的甲基化,肺癌患者活检标本WIF-1、sFRP-1、DKX-3基因启动子甲基化的发生率分别为:46.3%、29.3%和36.6%;重度吸烟患者肺癌组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P<0.05).肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态.结论 经典wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌袁观遗传干预治疗的新靶点.     

谷胱甘肽S转移酶系基因多态性与非小细胞肺癌患者生存率的关系

目的　研究谷胱甘肽S转移酶系 (GSTs)基因多态性对非小细胞肺癌生存率的影响。方法　检测 5 70名非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞DNA上GSTs基因多态性。以回顾性队列研究的方法获得不同GSTs基因多态性对象肺癌治疗的生存结果 ,并用Kaplan Meier法和Cox回归分析探讨GSTs基因多态性对肺癌患者预后的影响。结果　接受化疗的肺癌患者GSTT1空白型基因与死亡的RR为 1.73,GSTT1和GSTM1均呈空白型基因的肺癌患者死亡的RR为 1.77,其中接受化疗的肺癌患者的RR为 2 .4 7。结论　GSTT1、GSTT1合并GSTM 1空白型基因与肺癌化疗后较低的生存率有关     

FHIT基因、吸烟与肺癌

肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,每年死于肺癌的患者超过100万[1].病因学研究显示,与肺癌发生有关的因素主要包括吸烟、职业因素、环境因素、病毒感染、遗传背景以及肺癌的基因易感性等,其中约90%的肺癌与吸烟相关[2].目前大量文献报道脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad, FHIT)基因异常与吸烟、肺癌关系密切.现就FHIT基因、吸烟与肺癌的研究进展做一综述.     

人肺腺癌转移相关基因的初步筛选及验证

目的 利用建立的人肺癌高转移细胞系筛选转移基因,为研究肺癌转移的分子标志奠定基础. 方法 人肺癌细胞系SPC-A-1和相应的高转移细胞系SPC-A-1sci常规培养后提取总RNA,采用cDNA芯片技术检测两种细胞中差异表达基因,对部分有差异表达的基因进行蛋白免疫印迹（Western blot）分析验证. 结果 通过基因芯片技术筛选出了7 649个可能与肺癌转移相关的基因,其中上调基因3 891个,下调基因3 758个,功能涉及细胞黏附、凋亡、转录、信号传导、细胞周期和代谢等.经过Western分析,CD44与CDC42EP3在SPC-A-1sci中的表达明显高于SPC-A-1,而FNI的结果则相反.这与基因芯片的结果相一致. 结论 基因芯片高通量筛选提示7600余条基因可能与人肺癌转移相关,为进一步研究肺癌的转移机制和发现新的转移相关基因提供了较为有价值的线索.     

siRNAi沉默DNMT1基因对肺癌细胞WIF-1启动子甲基化的影响

目的 探讨DNA甲基转移酶(DNMT1)siRNAi对人肺癌A549细胞内抑癌基因wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子高甲基化的影响.方法 利用pSilencer 4.1-CMV neo载体,通过siRNAi表达载体法制备DNMT1 siRNAi.将DNMT1 siRNAi转染肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot检测观察转染前后肺癌A549细胞DNMT1内DNMT1基因的表达改变,并利用甲基化PCR,直接测序法检测WIF-1基因启动子甲基化水平.结果 构建的DNMT1 siRNAi转染肺癌A549细胞后,明显抑制DNMT1基因的表达,mRNA表达下降75%,蛋白表达下调82%;同时,WIF-1基因启动子序列较转染前甲基化水平明显降低.结论 靶向DNMT1的siRNAi可明显下调靶基因DNMT1的表达,并逆转WIF-1基因启动子高甲基化水平.     

皖南地区汉族人群GSTM1基因频率及其与肺癌发生相关性的研究

目的　研究皖南地区正常汉族人群谷胱甘肽 S转移酶M1基因的基因频率 ,分析该基因的遗传特征 ,探讨GSTM 1纯合缺失基因型与肺癌发生的相关性。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)方法对 99例健康汉族人 ,3 8例肺癌患者及 8个家庭进行GSTM 1基因检测。结果　GSTM 1基因符合孟德尔遗传规律 ,呈常染色体显性遗传 ;皖南地区正常汉族人群组GSTM 1基因频率为 2 4.12 % ,GSTM1基因纯合缺失率为 5 7.5 % ,肺癌组GSTM 1基因纯合缺失率为 63 .2 % ,两组间差异无显著性 (χ2 =0 .3 5 ,P =0 .13 ) ;按吸烟与否分层分析表明 ,在吸烟人群中 ,肺癌患者的该基因的纯合缺失率与对照组相比亦无显著性差异 (χ2 =0 .199,P =0 .191)。结论　GSTM1基因的纯合缺失可能不是个体患肺癌的重要危险因素     

肿瘤谱阵列芯片技术分析人体不同癌组织hHBrk1基因的差异表达

目的检测不同肿瘤及其癌旁正常组织中hHBrk1基因的差异表达,为进一步研究hHBrk1基因对肿瘤生物学过程的影响提供线索。方法以154对正常及肿瘤组织(19种不同人体组织)和10种肿瘤细胞株的cDNA的肿瘤谱阵列芯片(Cancer profiling arrayⅡ)为研究材料,采用Northern杂交方法分析目的基因表达水平的差异。根据阳性结果收集临床肿瘤组织样本,用RT-PCR检测hHBrk1基因表达,以验证芯片结果的可靠性。结果154对组织及10个肿瘤细胞株均表达hHBrk1基因。其中肺肿瘤组织高表达hHBrk1基因,与正常配对肺组织表达丰度差异有显著性(P<0.01);在肾癌组织中的hHBrk1基因表达丰度低于配对肾组织(P<0.01)。RT-PCR证实8临床肺肿瘤组织中5例高表达hHBrk1基因。结论肿瘤谱阵列芯片技术能够快速检测hHBrk1基因在不同组织中的表达差异,hHBrk1基因可能与肺癌及肾癌的发生、发展有关。     

ABCE1基因siRNA 稳定转染小细胞肺癌细胞株阳性克隆的筛选

 目的构建携带绿色荧光蛋白的ABCE1基因的siRNA 表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,筛选稳定转染细胞株。方法根据的DNA 序列设计3 对siRNA 引物,构建可用于筛选阳性克隆且带有绿色荧光的基因siRNA 表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-1、ABCE1-PRNAT-U6.1/Neo-siRNA-2 及ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-N,采用FUGENE-HD法将载体转染入NCI-H446 细胞中,并以G418 进行阳性克隆筛选,筛选ABCE1基因沉默的稳定转染细胞系。结果经酶切和DNA测序验证,证实ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA 表达载体构建成功。将基因siRNA表达载体成功转染小细胞肺癌细胞NCI-H446 后,小细胞肺癌细胞内可见绿色荧光,通过G418 筛选,获得了基因沉默的小细胞肺癌细胞系,该细胞系的ABCE1水平明显低于未转染siRNA 的小细胞肺癌细胞。结论成功的构建了基因siRNA 表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1 /Neo-siRNA。筛选出ABCE1基因沉默的稳定转染小细胞肺癌细胞系,为今后应用ABCE1基因siRNA 表达载体研究基因的作用机制提供实验基础。     

Pim-1在非小细胞肺癌中的表达及其与c-M yc的相关性

目的：研究原癌基因Pim‐1在非小细胞肺癌及癌旁正常组织中的表达情况及其与c‐M yc的相关性。方法收集该院胸外科手术切除的非小细胞肺癌患者的肺癌及癌旁正常肺组织标本各30例,统计临床病例资料及跟踪后期病理结果,利用RT‐PCR、qRT‐PCR及免疫组织化学方法检测肺癌及癌旁正常组织中 Pim‐1 mRNA、c‐Myc及 Pim‐1蛋白的表达,分析Pim‐1表达与临床病理特征及c‐Myc表达的相关性。结果在非小细胞肺癌中Pim‐1阳性率、mRNA及蛋白表达量明显高于癌旁组织, mRNA表达量分别为0．798±0．083和0．394±0．107（P＜0．01）,蛋白阳性例数分别为18例及6例（P＝0．002）。Pim‐1蛋白的表达与非小细胞肺癌患者的年龄差距、性别差异、有无吸烟史、肿瘤病理类型及分化程度无关（P＞0．05）,但与有无淋巴结转移及肿瘤的TNM分期有关（P＜0．05）,有淋巴结转移及TNM分期升高,其表达量也随之上调。Pim‐1与c‐Myc蛋白表达呈正相关,相关系数（r）为0．433（P＝0．017）。结论 Pim‐1在非小细胞肺癌组织中呈高表达趋势,且随着存在淋巴结的转移及 TNM 分期的升高,其表达也随之增加。     

维生素D受体基因Bsm1多态性与非小细胞肺癌易感性的关系

目的探讨维生素D受体基因Bsm1位点多态性与非小细胞肺癌遗传易感性的关系。方法采用聚合酶链限制性片段长度多态性技术,对140例非小细胞肺癌患者和132例健康对照者的维生素D受体基因Bsm1位点多态性进行分析。结果维生素D受体基因Bsml酶切位点基因型和等位基因的频率在非小细胞肺癌和正常人二组之间的差异无统计学意义。结论维生素D受体基因Bsml酶切位点的多态性可能与非小细胞肺癌的遗传易感性无关。     

肺癌细胞系中KEAP1与NRF2相互作用区域基因突变的检测

目的 检测非小细胞肺癌细胞系中KEAP1及NF-E2相关因子2(NRF2)相互作用结构域基因的突变情况.方法 以6个非小细胞肺癌细胞系为材料,检测KEAP1基因的第2至第6外显子及NRF2的DLG和ETGE基序编码序列的碱基序列突变情况,推测相应的氨基酸序列变异.同时检测供试细胞系的细胞内活性氧浓度,分析目标序列突变对肺癌细胞抗氧化系统的影响.结果 在KEAP1基因第4外显子区域发现4个所有癌细胞系共有的突变,部分细胞系的第3外显子区域还存在错义突变,所有NRF2-ETGE基序编码序列均存在多重遗传变异.活性氧检测发现供试细胞系活性氧浓度均高于肺胚细胞.结论 KEAP1和NRF2基因相互作用结构域的基因突变在供试细胞系内普遍存在,非小细胞肺癌细胞系对细胞内活性氧浓度失去调控能力是普遍现象.     

中医药对肺癌p53基因表达影响的研究进展

正原发性肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。据最新数据统计,我国新发肺癌病例70.5万,死亡病例为56.9万,死亡率占我国恶性肿瘤死亡率的第一位~[1]。p53与肺癌的生物学行为存在相关性~[2]。p53作为一种抑癌基因,是癌症中最常见的突变基因之一~[3],人类恶性肿瘤患者中超过50%的人存在p53基因的突     

应用cDNA微阵列技术研究MMP1，TIMP1基因在肺癌中的表达

研究基质金属蛋白酶-1(MMP1)和基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP1)基因在肺鳞癌、肺腺癌中的表达。方法：利用含4 096个基因的cDNA微阵列检测肺鳞癌、肺腺癌组织与正常肺组织的差异表达基因。重点分析MMP1，TIMPl在肺鳞癌与肺腺癌中的表达。结果：MMP1，TIMPl基因在肺鳞癌与肺腺癌中均表达上调。结论：MMPl，TIMP1在肺鳞癌、肺腺癌中均出现表达上调，可作为肺鳞癌、肺腺癌的重要分子标记。     

不同转移潜能人肺癌细胞系KAI1基因的表达

目的:探讨KAI1基因与人肺癌细胞系转移潜能的关系.方法:利用逆转录-PCR和Northern blot杂交法分析不同转移潜能人肺癌细胞系中KAI1 mRNA的表达,并用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)检测与突变的关系.结果:在高转移潜能细胞系PG中KAI1 mRNA表达降低,在无转移潜能的PAa细胞中KAI1的表达量比PG细胞高10倍以上(积分光密度比值分别为0.7313和0.0549).PCR-SSCP结果显示在PG细胞KAI1基因第7外显子出现异常改变.结论:肺癌细胞的转移潜能可能与KAI1基因表达量有关,KAI1基因的低表达可能由基因突变所致.