血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗肺癌的实验研究

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)反义寡核苷酸对C57BL 6小鼠肺癌的抑制作用。方法　制作C57BL 6小鼠皮下肺癌模型 30只 ,分为VEGF反义寡核苷酸 (ASODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸 (SODN)治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后 2 4h内 ,用ASODN及SODN皮下注射治疗 ,对照组只注射生理盐水 ,观察小鼠肿瘤的生长情况以及组织形态学改变。标本常规石蜡切片 ,HE染色。结果　对照组、VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组平均瘤重分别为 (7.83± 0 .78)g、(4 .4 9± 0 .4 3)g和 (7.73± 0 .6 9)g。VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组抑瘤率分别为 4 2 .7%、5 .9%。结论　原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长。     

Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡的促进作用

目的通过体外试验,研究Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡的促进作用。方法NCI-H446肺癌细胞株分5组,分别为空白对照、单纯照射组、脂质体加照射组、无义序列加照射组、反义寡核苷酸加照射组。培养至6h、12h、24h、48h和72h,分别收集各组细胞,瑞吉染色做细胞形态学分析,应用RT-PCR半定量测定p53、Bcl-2和PTEN基因的mRNA表达,流式细胞仪检测各组细胞DNA倍体,分析细胞凋亡指数。结果Bcl-2反义寡核苷酸联合照射后p53和PTEN表达明显增加,Bcl-2mRNA表达则明显降低。流式细胞仪检测照射后72h空白对照组、照射组、脂质体加照射组、无义序列加照射组、反义寡核苷酸加照射组凋亡率分别为0.14±0.09,13.17±2.47,11.84±1.76,13.72±1.4,21.26±2.97,反义寡核苷酸加照射组与其余4组比较差别有显著性意义(P<0.01)。结论Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡有促进作用;细胞凋亡受p53和Bcl-2基因调控,p53基因的表达促进了细胞的凋亡,而Bcl-2基因的高表达抑制细胞的凋亡,PETN的表达与凋亡也有相关性。     

反义寡核苷酸技术研究进展

反义寡核酸技术，是应用反义寡核苷酸类药物通过Waston-Crick碱基配对与细胞内核酸（DNA或RNA）特异结合形成杂交分子，从而在转录和翻译水平抑制特定基因表达的基因治疗技术，是一种新的药物开发方法。其机制是：①反义寡核苷酸与靶mRNA结合形成DNA-RNA杂合分子，可以激活RNase H。该酶可以切割杂合分子中的RNA链，导致靶mRNA降解。②不能激活RNase H活性的反义寡核苷酸可以通过空间位阻效应阻止核糖体结合来抑制靶mRNA的翻译：另外还可以通过封闭剪接位点有选择的促进蛋白某个可变剪接体的表达，从而纠正错误的剪接。     

Bcl-2反义寡核苷酸联合照射对肺癌细胞的抑制作用

[目的]研究Bcl-2反义寡核苷酸联合照射对肺癌细胞的抑制作用。[方法]NCI-H446肺癌细胞株分5组:空白对照、单纯照射组、反义寡核苷酸加照射组、无义序列加照射组、脂质体加照射组。相应组照射10GY后24、48、72小时,MTT法检测各组的细胞增殖抑制率和联合相互作用。[结果]照射组、反义寡核苷酸加照射组、无义序列加照射组、脂质体加照射组均有细胞抑制,并呈时间依赖关系。其中Bcl-2反义寡核苷酸联合照射组抑制率明显高于其它三组(P<0.01),联合作用指数(CDI)=0.86。[结论]Bcl-2反义寡核苷酸促进了照射对NCI-H446肺癌细胞的增殖抑制作用,两者有协同作用。     

Livin反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的：探讨Livin基因反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides,ASODN）对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法：用阳离子脂质体介导Livin ASODN转染至A549细胞,反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测Livin基因mRNA的表达;MTT法检测转染细胞的生长抑制情况。结果：转染ASODN后A549细胞的Livin基因mRNA的表达明显减少,Livin基因ASODN显著抑制A549细胞增殖,并呈剂量依赖性,与对照的错义寡核苷酸（missense oligodeoxynucleotides,MSODN）比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Livin反义寡核苷酸能明显抑制A549细胞Livin基因mRNA的表达,抑制细胞增殖,Livin基因有望成为肺癌基因治疗的新靶点。     

bcl-2硫代反义寡核苷酸增强膀胱癌细胞对顺铂的敏感性

目的　研究凋亡抑制基因bcl 2硫代反义寡核苷酸 (S ODN)转染T2 4细胞后对顺铂药物敏感性影响。方法　将培养细胞分为 6组 :反义S ODN组 ,正义S ODN组 ,反义S ODN +顺铂组 ,正义S ODN +顺铂组 ,顺铂组和对照组。应用脂质体法介导bcl 2正义、反义S ODN转染T2 4细胞。通过免疫细胞化学方法观察细胞内BCL 2的蛋白表达 ,RT PCR方法检测细胞内bcl 2mR NA的相对表达量 ,MTT法测经顺铂 (cis platinum)处理的各组细胞的生成率 ,流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡率。结果　bcl 2反义S ODN处理过的T2 4细胞中BCL 2蛋白和bcl 2mRNA表达明显下降。顺铂对反义S ODN组细胞的半抑制浓度 (IC50 )为 (2 .2 5± 0 .0 9) μg/ml显著低于正义S ODN组 (5 .83± 0 .15 ) μg/ml和对照组 (6 .11± 0 .2 1) μg/ml(P <0 .0 1)。顺铂处理反义S ODN组细胞的凋亡率显著高于其它组。结论　bcl 2反义S ODN能显著抑制T2 4细胞中BCL 2蛋白的表达并增强T2 4细胞对顺铂的药物敏感性     

β1整合素反义寡核苷酸联合顺铂治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的研究

目的：探讨以β1整合素反义寡核苷酸（ASODN）治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的可行性.方法：常规体外培养SKOV3细胞,采用皮下注射法建立移植瘤裸鼠动物模型.32只荷瘤鼠随机分为ASODN组（A组）、ASODN联合顺铂（DDP）组（A＋D组）、DDP组和0.9％氯化钠注射液对照组（NS组）,每组8只,分组给药.以脂质体包裹的β1整合素ASODN直接移植瘤内注射,观察肿瘤生长情况,测瘤体积并计算抑瘤率.采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法分别检测β1整合素mRNA的表达.结果：A组肿瘤体积和抑瘤率分别为（316.10 ±21.77） mm3和48.15％,与NS组比较抑瘤率较高,肿瘤生长缓慢（P＜0.01）.而A＋D组肿瘤体积和抑瘤率分别为（178.70±40.67） mm3和70.37％,与DDP组、A组及NS组差异均有统计学意义（P ＜0.05 ～P＜0.01）.RT-PCR和免疫组织化学检测,A组和A＋D组肿瘤组织中β1整合素mRNA的表达均明显下调（P＜0.01）.结论：单用β1整合素ASDON或联用DDP均可有效抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织的生长,可能与其特异性下调β1整合素基因表达有关.特异性靶向β1整合素ASODN可用于卵巢癌的辅助治疗.     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制Lewis肺癌的血管形成

目的 探讨反义寡核苷酸(ASODN)抑制Lewis肺癌细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达的效应.方法 将人工合成的VEGF反义寡核苷酸(ASODN)、正义寡核苷酸(SODN)加入培养的Lewis肺癌细胞中,检测Lewis肺癌细胞中VEGF蛋白的表达,同时测定各上清液刺激血管内皮细胞生长的受抑情况.结果 VEGF-ASODN能明显抑制Lewis肺癌细胞VEGF蛋白的表达,而且可以通过抑制VEGF的表达抑制内皮细胞的生长.结论 VEGF反义寡核苷酸抑制肺癌细胞表达VEGF,有望成为肺癌基因治疗的一种新的治疗手段.     

反义寡核苷酸类药物的研究进展

反义寡核苷酸类药物通过与靶mRNA的相互作用调节目的基因的表达.它必须具备三个首要条件,即稳定性、选择性和通透靶向性.各种化学修饰包括第二代、第三代寡核苷酸明显增强了反义寡核苷酸的稳定性;靶序列选择方法的改进为其发挥高度选择性提供基础;各种靶向转运技术的应用大大增强了对作用部位的通透性和靶向性.这些方面的研究进展开阔了反义寡核苷酸类药物的应用领域.     

Survivin 反义寡核苷酸对小鼠肺癌的生长抑制作用

目的　Survivin是一种凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisproteins ,IAP)家族成员,在几乎所有肿瘤组织中特异性表达,而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达。选择五组小鼠survivin反义寡核苷酸,并从中进步筛选效果显著的反义寡核苷酸,在小鼠体内进一步验证其抑制肿瘤生长的能力。方法　设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸五组。利用脂质体转染技术将其转入肺癌细胞D12 1,Westernblot检测survivin的表达抑制效应,从中筛选效果显著的反义寡核苷酸,确定最佳浓度,将此浓度下转染的D12 1细胞经小鼠尾静脉注入,观察生存曲线。结果　各组反义寡核苷酸在4 0 0nmol·L-1转染细胞,Westernblot结果显示NO .5组survivin表达程度减弱,选取NO .5反义寡核苷酸,在不同浓度下观测转染2 4h后,细胞凋亡情况及survivin表达状况。2 0 0nmol·L-1时,sur vivin表达出现减弱,但细胞生长尚未受到影响;4 0 0nmol·L-1时细胞开始出现凋亡,指数明显高于对照组(P <0 .0 5 ) ,以6 0 0nmol·L-1转染组最为明显。用NO .5反义寡核苷酸在2 0 0nmol·L-1浓度下转染D 12 1细胞,将此细胞致瘤小鼠,小鼠的生存期明显延长。结论　因为survivin基因在多数恶性肿瘤组织中丰富表达,选择合适的sur vivin反义寡核苷酸,将有利于应用在肿瘤的     

VEGF反义寡核苷酸抑制小鼠Lewis肺癌生长的研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对C57BL/6小鼠Lewis肺癌肿瘤生长的抑制作用。方法制备C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,随机分为3组,每组10只VEGF反义寡核苷酸(ASPODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SPODN)治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内,分别皮下注射ASPODN及SPODN进行治疗,对照组只注射生理盐水,每周2次,连续4周;观察各组小鼠肿瘤的生长情况、游标卡尺测量肿瘤体积大小。所有C57BL/6小鼠于接种后第25天先用二维超声观察肿瘤的实时图象,利用脉冲多普勒获取血流频谱,获得收缩期峰值速度(PS),阻力指数(RI)。断颈处死小鼠,光镜及电镜下观察肿瘤组织形态学改变及超微结构变化,免疫组化法检测微血管密度(MVD)。结果与对照组瘤重比较(7.83±0.78)g、VEGF-ASPODN组(4.49±0.43)g能明显抑制小鼠肿瘤生长(P<0.01)、VEGF-SPODN组(7.73±0.69)g则无明显作用(P>0.05)。VEGF-ASPODN组、VEGF-SPODN组抑瘤率分别为42.7%、5.9%。组织形态学及超微结构观察,VEGF-ASPODN对肿瘤生长具有抑制作用。VEGF-ASPODN组与对照组相比较PS及RI有明显差异(P<0.01);VEGF-SPODN组与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论肿瘤原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长。     

以存活素为靶点的反义寡核苷酸在胰腺癌治疗中的研究

反义寡核苷酸具有高特异性、靶向性、无毒性等特有的优点,近年来一直是抗肿瘤、抗病毒领域研究的热点。为恶性肿瘤的治疗提供了一种新方法。本文就以survivin为靶点的反义寡核苷酸的作用机制及与胰腺癌关系进行综述。     

ERCC1在非小细胞肺癌中的表达及预后意义

目的探讨DNA修复因子ERCC1蛋白在非小细胞肺癌中表达的临床意义及其与NSCLC预后的关系。方法收集117例非小细胞肺癌组织石蜡标本制成组织芯片,利用免疫组化SP法检测ERCC1的表达,分析其与临床各因素的关系。结果 117例NSCLC组织中ERCC1蛋白的阳性表达率为39.3%,ERCC1在肺癌组织和正常肺组织中的表达有统计学差异(P<0.01)。ERCC1的表达与肺癌分化程度和组织学分型密切相关(P<0.05),ERCC1阳性表达组5年生存率(41.6%)高于阴性表达组(28.0%)(P<0.05),ERCC1表达与NSCLC的预后相关。结论 ERCC1阳性者预后较好,提示其表达对预后评估有一定的指导价值。     

ERCC-1在晚期非小细胞肺癌中的表达及其与铂类药物化疗敏感性关系

①目的 探讨DNA切除修复基因ERCC-1在晚期非小细胞肺癌中的表达及其与铂类药物化疗敏感性的关系.②方法 采用免疫组化S-P法检测61例ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者中DNA切除修复基因ERCC-1的表达情况.所有患者均经铂类为基础的化疗方案化疗.③结果 在61例患者中,ERCC-1的表达为37.7%（23/61）,与患者性别、年龄及临床分期无关;腺癌的表达明显高于其它病理类型,其表达与以顺铂为基础的化疗耐药有关.化疗耐药组ERCC1的阳性表达率为54.84.%,化疗敏感组的ERCC1的阳性表达率为20%,组间差异有统计学意义（P＜0.05）.ERCC1阳性组平均生存时间为645天,阴性组为500天,用Kaplan-Meier进行单因素的生存分析,其差异无统计学意义（P＞0.05）.④结论 晚期肺癌存在ERCC1的表达,且与DDP为基础的化疗敏感性相关.检测ERCC-1可以预测晚期肺癌的铂类药物化疗敏感性.     

不均一性核糖核蛋白B1在肺癌中的表达及临床意义

目的探讨不均一性核糖核蛋白B1（HnRNPB1）的表达与肺癌发生发展的关系及其临床意义。方法采用RT-PCR方法扩增肺癌组织、癌旁组织标本中的HnRNPB1 mRNA,观察它与肿瘤分期、病理类型的关系。结果HnRNPB1在鳞状化生、不典型增生及各种类型的肺癌中均有高表达,其中在腺癌中的表达率相对较低。HnRNPB1 mRNA在癌组织（T）中的表达量明显高于癌旁组织（N）,T/N=1.5～7.34。HnRNPB1在Ⅰ、Ⅱ期肺癌的表达率达100%,随着肿瘤TNM分期的进展表达率和表达量均有下降趋势。结论HnRNPB1的异常表达为肺癌发生的早期事件,是诊断早期肺癌灵敏度很高的指标。     

ERCC1在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

肺癌的发病率在世界范围逐年上升,在我国肺癌已占常见肿瘤第1位。其中非小细胞肺癌占肺癌的80%左右,首诊时多属晚期,能够作为根治性手术者仅占30%左右。因而化疗是晚期非小细胞肺癌多学科治疗的主要策略之一。其中以铂类为基础的联合化疗效果优于最佳支持治疗,也能达到减轻症状、提高生活质量和延长生存期的目的。目前在对于DNA损伤修复基因的研究中发现,切除修复交叉互补基因1与非小细胞肺癌铂类化疗敏感性及其预后有关,本文对其研究进展进行综述。     

HIF-1与肺癌关系研究新进展

低氧诱导因子1(HIF-1)被认为是诱导低氧基因和修复细胞内氧环境的一核心调节因子,广泛存在于慢性缺氧细胞中。随着对HIF-1在肺癌发生、发展中作用认识的逐渐深入,近年诸多相关研究显示,HIF-1在肺癌细胞组织中呈高表达,它能促进肺癌细胞增殖,诱导肿瘤新生血管形成,增强肿瘤侵袭性,增加肿瘤对放化疗的抵抗性;表明HIF-1的表达与肺癌的生长、浸润、转移及预后关系密切。     

ERCC1基因异常表达与宫颈癌化疗耐药关系初步研究

目的探讨 ERCC1基因过度表达与宫颈癌铂类药物化疗耐药之间的关系。方法采集宫颈癌患者术后标本,分为化疗敏感及耐药组。采用 RT-PCR 及 Western Blot 分别从核酸及蛋白水平检测 ERCC1基因的表达。结果与化疗敏感患者相比,耐药患者 ERCC1基因 RNA 及蛋白表达水平明显升高。结论 ERCC1基因的异常表达,可能是宫颈癌铂类药物化疗耐药的原因之一。