T-bet/GATA-3的比值在哮喘大鼠免疫失衡中的意义

目的:探讨转录因子T-bet/GATA-3比值在支气管哮喘免疫失衡中的意义.方法:SPF级SD大鼠随机分为对照组和哮喘组,每组12只.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法和Western blot法分别检测T-bet,GATA-3 mRNA和蛋白在肺组织的表达.结果:大鼠肺组织中对照组和哮喘组T-bet mRNA表达分别为0.71±0.19,0.08±0.12;T-bet蛋白表达分别为0.72±0.22,0.18±0.06,两组比较均有显著性差异(P＜0.01).大鼠肺组织中对照组和哮喘组GATA-3 mRNA表达分别为1.06±0.25,1.56±0.28;GATA-3蛋白分别为1.04±0.44,2.25±0.74,两组比较均有显著性差异(P＜0.01);对照组T-bet/GATA-3 mRNA表达量的比值0.73±0.32,明显高于哮喘组0.06±0.09 (P＜0.01),对照组T-bet/GATA-3 蛋白表达量的比值0.75±0.25,高于哮喘组0.09±0.04 (P＜0.01).结论:转录因子T-bet/GATA-3 mRNA和蛋白表达量比值在哮喘中明显降低,可作为评价哮喘免疫失衡的客观指标之一.     

大鼠脑损伤后caspase-3表达的时间规律性研究

目的:探讨大鼠脑损伤后半胱天冬酶3(caspase-3)在神经元、神经胶质细胞表达的时间规律性.方法:以冲击应力σd为355.09kPa致大鼠脑损伤后不同时间段分别应用原位杂交、免疫组化、免疫组化双染色技术检测caspase-3 mRNA和蛋白的表达强度,用图像分析系统测定阳性反应物平均灰度,进行统计学处理.结果:caspase-3 mRNA及蛋白在对照组为弥散分布,弱表达;分别于伤后15,30 min表达开始呈现增强趋势,至伤后1 d,表达达到峰值,平均灰度值分别为129.76±2.79,128.13±1.97,与对照组、伤后12 h组比较均具有显著性差异(P＜0.05),并维持高水平表达分别至伤后7 d(123.34±1.60)、伤后4 d(120.34±2.96),与对照组比较均具有显著性差异(P＜0.05).免疫组化双染结果显示,伤后阳性细胞包括神经元和星形胶质细胞.结论:脑损伤后caspase-3 mRNA及蛋白的表达具有一定的时间规律性,可运用于法医学推断脑损伤的形成时间.     

雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠脑海马区水通道蛋白 4表达的影响

目的 探讨雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠海马区水通道蛋白4（AQP4）表达的影响.方法 30只SD大鼠随机分成三组：对照组、海人酸组、雷公藤内酯干预组,每组10只.海人酸组颈内皮下注射海人酸,剂量为10 mg/kg;雷公藤内酯干预组在海人酸注射前连续7d腹腔内注射雷公藤内酯,剂量为30 μg/kg;对照组注射等量的生理盐水.造模成功后取脑海马组织,应用RT-PCR和Western blot法检测各组动物海马区AQP4蛋白的表达.结果 Western blot结果显示,海人酸组和对照组AQP4条带与GAPDH条带的灰度值比分别为0.872±0.141和0.453±0.078,海人酸组AQP4表达显著增多（P＜0.05）;雷公藤内酯干预组中海马AQP4蛋白相对灰度值比为0.647±0.185,表达较海人酸组减少（P＜0.05）.RT-PCR结果显示,海人酸组与对照组AQP4条带与GAPDH条带的灰度值比分别为1.212±0.115和0.843±0.091,海人酸组AQP4 mRNA表达比对照组显著增加（P＜0.05）;雷公藤内酯干预组AQP4 mRNA相对灰度值比为1.105±0.192,与海人酸组比较明显减少（P＜0.05）.结论 雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠脑海马区AQP4蛋白的表达有下调作用,可以作为临床难治性癫痫的候选药物之一.     

干预糖毒性对肥胖大鼠胰岛β、α细胞功能改善的作用

目的 探讨糖毒性对肥胖大鼠胰岛β、α细胞功能及分子生物学的损害作用.方法 雄性SD大鼠36只分为4组:(1)正常组:9只,普通饲料喂养.(2)高脂组:9只,高脂饲料喂养.(3)DM对照组:9只,不给予药物干预.(4)糖毒性干预组:9只,皮下注射超长效甘精胰岛素(5 U·kg-1·d-1)降低血糖,共4周.所有大鼠在实验结束时,通过免疫组化观察分析胰岛β、α细胞形态学特点,RT-PCR测定胰腺内胰岛素原mRNA表达水平,Western印迹方法检测胰腺中胰岛素蛋白质含量,胰岛素干预2周和4周后复测葡萄糖耐量试验.结果 糖毒性干预组,胰岛内β细胞比糖尿病对照组相对量增加(分别为0.38±0.08,0.11±0.05,P＜0.01),β细胞浆内胰岛素水平增加(分别为0.58±0.03,0.34±0.14,P＜0.01),胰岛素原mRNA表达增加(分别为1.52±0.14,1.26±0.14,P＜0.01);Western印迹检测胰岛素蛋白质含量明显升高;胰岛内α细胞相对量减少(分别为0.28±0.15,0.16±0.04,P＜0.01).结论 干预糖毒性4周能显著改善糖尿病大鼠胰岛β、α细胞的病理学变化,部分恢复胰岛细胞的功能.     

复方青黛膏对寻常型银屑病皮损内VEGF的影响

目的 以银屑病皮损内血管内皮细胞生长因子(VEGF)为指标,探讨复方青黛膏对银屑病的治疗机制.方法 60例寻常型银屑病患者随机分为3组:空白对照组、他扎罗汀组、青黛膏组,疗程4周.免疫组化检测复方青黛膏治疗前后皮损内的VEGF阳性染色,并以video pr0 32彩色图像分析系统测定其灰度值.Realtime-PCR法检测治疗前后mRNA的表达,并与他扎罗汀对照及空白组比较.结果 复方青黛膏组皮损内VEGF蛋白灰度值低于空白组及他扎罗汀组(P＜0.05),其VEGF mRNA表达水平较其他组低(P＜0.05).结论 复方青黛膏可降低皮损内VEGF的表达,通过抑制局部微血管增生治疗寻常型银屑病.     

白癜风患者皮损处核因子E2p45相关因子2核转位异常

目的 明确白癜风患者皮损处是否存在核因子E2p45相关因子2(Nrf2)核转位异常.方法 应用试剂盒检测8例表皮移植白癜风患者皮损处与正常供皮处疱液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)水平,采用细胞免疫荧光组化法鉴定8例寻常型白癜风患者皮损处与正常供皮处表皮细胞以及3例健康对照包皮原代培养的表皮细胞中Nrf2的表达,同时应用蛋白质印迹法检测上述样本中表皮细胞的胞质和胞核中Nrf2的表达水平.结果 皮损处SOD与CAT水平显著低于正常供皮处(P＜0.05),MDA水平显著高于正常供皮处(P＜0.05);细胞免疫荧光结果显示,健康对照、患者正常供皮处Nrf2在表皮细胞的胞质和胞核中均有表达,而患者皮损处Nrf2表达主要集中在胞质,胞核中表达量非常低.蛋白质印迹结果显示,核蛋白中Nrf2表达水平,白癜风患者皮损处(0.11±0.03)明显低于正常供皮处(0.27±0.06)和健康对照(0.32±0.02,均P＜0.01);胞质蛋白Nrf2表达水平,皮损处(0.63±0.04)与正常供皮处(0.61±0.03)和健康对照(0.65±0.04)差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 白癜风患者皮损处表皮细胞存在Nrf2核转位异常.     

慢传输性便秘患者结肠黏膜DNA甲基转移酶表达显著增高

目的 研究DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,Dnmt)在慢传输性便秘(slow transit constipation,STC)结肠黏膜中的表达.方法 收集2015年9月至2017年6月我科收治的8例STC患者乙状结肠标本,采用免疫组织化学染色、Western blot检测Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白在结肠黏膜的表达情况,real-time qRT-PCR检测结肠黏膜Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b mRNA相对表达量.对照组标本采用直肠癌患者术中切除的远离癌灶的近端乙状结肠.结果 免疫组织化学染色结果显示:对照组Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b IOD值分别为(705±362)、(538 ±206)、(359±238),STC组Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b IOD值分别为(4077±1 219)、(4 214±1 858)、(3 026±1 619),两组比较差异有统计学意义(P＜ 0.05);Western blot检测结果显示:对照组Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白相对表达量分别为(0.663±0.349)、(0.250 ±0.159)、(0.330±0.195),STC组Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白相对表达量分别为(1.475±0.372)、(1.035±0.362)、(0.977 ±0.258),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);Real-time qRT-PCR结果显示:对照组Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b mRNA相对表达量分别为(0.285 ±0.121)、(0.069±0.021)、(0.512±0.112),STC组Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b mRNA相对表达量分别为(0.563±0.172)、(0.340±0.083)、(0.964±0.219),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 STC患者结肠黏膜Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b表达显著增高,可能是STC发病的重要环节.     

血小板源性生长因子B及受体αmRNA在复发性尖锐湿疣皮损中的表达与意义

目的 研究血小板源性生长因子B(PDGF-B)及其受体a(PDGFR-α) mRNA在复发性尖锐湿疣皮损中的表达及意义.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测复发性、未复发性尖锐湿疣皮损和正常皮肤中PDGF-B及PDGFR-α mRNA表达水平.结果 尖锐湿疣复发组、未复发组的PDGF-B和PDGFR-α mRNA表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);复发组PDGF-B和PDGFR-α mRNA表达水平高于未复发组,复发组治疗前PDGF-B和PDGFR-a mRNA水平高于治疗后(P＜0.01).结论 PDGF-B和PDGFR-α mRNA可能与尖锐湿疣的复发有一定的关系.     

甘露糖结合凝集素对肠上皮细胞屏障功能的影响

目的 观察甘露糖结合凝集素(mannose binding lectin,MBL)对人结肠癌细胞株Caco-2屏障功能的影响并探讨其分子机制.方法 体内实验:取14只C57小鼠,按随机数字表法分为假手术组和LPS组(经腹腔注射LPS,构建肠炎症损伤模型),通过免疫组化和Real-time PCR观察MBL的变化情况,HE染色观察肠黏膜的损伤情况.体外实验:Caco-2细胞分为对照组、空转染组和MBL shRNA组(应用MBL干扰质粒转染Caco-2细胞),采用Real-time PCR、Western blot检测紧密连接蛋白的表达情况,并检测其跨上皮电阻(TER).结果 体内实验TER显示LPS组肠黏膜通透性(80.32 ±5.43)比假手术组(140.45 ±4.78)明显增加(P＜0.01),HE染色显示LPS处理后肠黏膜完整性比假手术组降低,免疫组化和Real-time PCR检测结果显示LPS处理组MBL表达升高(P＜0.05).在体外实验中,我们成功构建MBL shRNA质粒模型,MBL shRNA组细胞中MBL的蛋白和mRNA表达[(0.34±0.09),(0.42±0.12)]较对照组及空转染组明显降低(P＜0.05).MBL shRNA组的紧密连接蛋白Occludin和Claudin-1的蛋白[(0.43±0.10)、(0.53±0.11)]和mRNA水平[(0.43±0.08)、(0.45±0.10)]明显低于其余组(P＜ 0.05);MBL shRNA组TER值(80.33 ±7.64)降低较其余组明显(P＜0.05).结论 下调MBL基因可减少肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin和Claudin-1 mRNA及蛋白水平的表达,减弱肠上皮细胞的屏障保护功能.     

肝型脂肪酸结合蛋白及血管内皮生长因子在原发性肝癌中的表达以及相互关系

目的 研究肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)与血管内皮生长因子(VEGF)在原发性肝癌中的表达变化,探讨二者在原发性肝癌发生、发展中的作用及相互关系.方法 采用RT-PCR及免疫组织化学技术,检测61例手术切除的病人肝癌组织及癌旁组织中L-FABP、VEGF的mRNA及蛋白质的表达水平,并做统计学处理.结果 RT-PCR结果显示,肝癌L-FABP以及VEGF在mRNA表达水平明显高于癌旁组织(L-FABP:0.97±0.12,0.83±0.14,t=5.21,P＜0.05;VEGF:0.92±0.11,0.59±0.15,t=11.79,P＜0.05).免疫组化染色发现,L-FABP阳性反应物主要存在于细胞浆,肝癌组阳性反应物灰度值明显高于癌旁对照组(肝癌组:92.73±7.67,癌旁对照组:82.83±6.90,t=7.44,P＜0.05),阳性细胞计数肝癌组高于癌旁对照组(肝癌组:92.18±4.44,癌旁对照组:84.52±6.43,t=5.94,P＜0.05);肝癌细胞胞浆有VEGF阳性反应物,在癌旁组织细胞则偶见VEGF阳性反应物,差异有显著性(肝癌组:88.69±5.56,癌旁对照组:77.61±5.93,t=8.72,P＜0.05).相关性分析表明L-FABP以及VEGF在肝癌组织与癌旁组织中在mRNA和蛋白质水平上均有正相关性(P＜0.05).结论 L-FABP、VEGF基因以及蛋白质在肝癌组织中表达均显著上调,并且二者具有正相关性,我们推测L-FABP在获取更多的脂肪酸的同时可以促进血管的增生,进而促进了肝癌的发展.     

FGFR1在尖锐湿疣中的表达及其临床意义

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子I型受体（FGFR1）在尖锐湿疣（CA）中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法分别检测FGFR1在33例尖锐湿疣和10例正常人皮肤组织中的表达情况。结果正常对照包皮组织中FGFR1无或仅有弱的表达,CA皮损组织则呈强阳性表达,两组间比较有极显著统计学意义（P〈0.001）。结论 FGFR1在尖锐湿疣组织中过度表达,提示其可能在促真皮毛细血管生成和表皮细胞增殖中发挥重要作用。     

PAI-3在正常成人皮肤中的表达及作用的初步研究

目的探讨PAI-3在成人皮肤中的表达,为进一步研究PAI-3在皮肤表皮增殖、分化中的作用及机制提供基础.方法采用免疫组织化学技术和RT-PCR检测PAI-3和uPA在成人皮肤中的表达.结果检测到PAI-3 mRNA及uPA mRNA的表达,PAI-3在正常成人皮肤组织中主要位于表皮的基底层、颗粒层和棘层,在分化程度较高的表皮角质形成细胞(keratinocyte,KC)中,其表达增强,而uPA主要位于皮肤表皮的基底层.结论PAI-3在正常成人皮肤中有表达并与表皮KC的分化有关.     

TIG2在寻常型银屑病中的表达变化及意义

目的 研究TIG2在寻常型银屑病中的作用机制.方法 用免疫组化和原位杂交的方法检测正常组织,未受累组织和银屑病皮损中TIG2蛋白和mRNA的表达变化.结果 在正常组织及未受累组织中,TIG2表达于表皮全层,在银屑病周围皮损中,可见TIG2阳性染色于棘层上部,在棘层下部及基底层中表达较少,而在银屑病中间皮损中无表达.TIG2在正常和未受累皮肤基底层中的表达高于其在银屑病边缘皮损基底层中的表达(p<0.01);TIG2在正常皮肤和未受累皮肤中的表达高于其在银屑病中间皮损中的表达(P<0.01);银屑病边缘皮损基底上层中的表达高于其在银屑病中间皮损中的表达(P<0.01).结论 TIG2可保持表皮正常分化功能,TIG2的降低可能参与银屑病的发生和发展.     

蕈样肉芽肿组织中psoriasin的表达及意义

目的研究psoriasin(S100A7)在蕈样肉芽肿中的表达及作用机制。方法用免疫组化方法检测正常皮肤组织及蕈样肉芽肿皮损中psoriasin蛋白的表达变化。结果 psoriasin蛋白不表达于正常皮肤组织;在21例蕈样肉芽肿中,可见psoriasin蛋白表达于角质层及棘层,而不表达于基底层,阳性率为90.5%。在蕈样肉芽肿中,psoriasin的表达明显低于正常皮肤组织(P<0.001)。结论 psoriasin可能通过趋化CD4+T细胞在蕈样肉芽肿的发病中起作用。     

p63在尖锐湿疣中的表达及临床意义

目的研究p63在尖锐湿疣（CA）中的表达及其在CA发生、发展中的作用与意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测50例CA患者的手术切除标本及10例正常包皮中p63的表达；分析其与年龄、部位、性别间的关系。结果（1）p63表达于胞核，在CA组织中主要表达于基底层、棘层和颗粒层，染色强度从基底层到颗粒层呈逐渐减弱的趋势；正常组织中主要表达于基底层，棘层和颗粒层较少表达或缺如。50例CA组织中p63阳性表达45例，10例正常对照组中8例阳性。CA标本中的p63染色强度明显高于对照组（P〈0．01）。（2）p63的表达值与发病部位成正相关（肛周的表达明显高于生殖器部位，P〈0．05），与年龄、性别无关（均P〉0．05）。结论p63在CA组织中高表达，提示其在CA的转归中起重要作用。     

Caspase3、Bcl-2和PCNA在银屑病皮损组织中的表达

目的　探讨银屑病发生发展中细胞增殖和凋亡相关指标表达的趋势。方法　应用免疫组化技术检测 30例寻常型银屑病皮损、邻近皮肤及 10例正常皮肤中PCNA、Bcl - 2、Caspase3的表达。结果　在正常表皮中Bcl - 2和PCNA在基底层阳性表达 ,但在寻常型银屑病皮损中Bcl- 2表达明显低于正常皮肤组 ,皮损处与邻近皮损处表达、邻近皮损处与正常皮肤表达比较有统计学差异 (均P <0 0 5 ) ;PCNA在银屑病皮损处为角质形成细胞广泛阳性表达 ,皮损处与邻近皮肤的表达、邻近皮肤与正常皮肤相比有统计学差异 (P <0 0 1) ;Caspase3在寻常型银屑病皮损处与邻近皮肤及正常皮肤的表达无统计学差异 (P >0 0 5 )。结论　银屑病时 ,PCNA过度表达 ,Bcl - 2低表达 ,表明细胞过度增殖 ,凋亡基因Caspase3表达无统计学差异     

胃腺癌组织中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体-4的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-4(TRAIL-R4)在诱导胃癌细胞凋亡过程中的作用.方法:应用Western blot、RT-PCR、原位杂交和免疫组织化学技术,检测31例正常胃黏膜和胃腺癌组织中TRAIL-附蛋白和mRNA的表达.结果:Western blot结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4蛋白的阳性表达率80.65%,高于其在胃腺癌组织中的阳性表达率6.45%(P＜0.05);免疫组织化学结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4蛋白均有强染色,在胃腺癌组织中染色均为阴性(P＜0.05);RT-PCR结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4 mRNA表达高于胃腺癌组织中的表达(P＜0.05);原位杂交结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4 mRNA染色均为阳性,而在胃腺癌组织中阳性表达率为3.23%(P＜0.05).结论:TRAIL-R4在胃癌组织中的表达缺失是TRAIL特异性诱导肿瘤细胞凋亡的原因之一.     

角蛋白16和17在部分表皮肿瘤中的表达和意义

目的 研究角蛋白16 和17（K16、K17）在部分表皮肿瘤中的表达和意义。方法 采用免疫组化法检测K16、K17在正常皮肤、脂溢性角化病、日光性角化病、皮角、基底细胞癌、鳞状细胞癌中的表达。结果 K16、K17 在正常皮肤表皮各层呈阴性表达;在脂溢性角化病表皮各层中除了角质层外大多呈阳性表达;在日光性角化病表皮K16 均不表达,K17 除了角质层外在其他各层也不表达;K16 在皮角表皮棘层呈强阳性表达,但在其他各层均呈阴性表达,K17 在皮角表皮各层基本呈阳性或强阳性表达;在基底细胞癌中,K16、K17除了在棘层呈弱阳性表达外,在其他各层均呈阴性表达;在鳞状细胞癌中,K16 在基底层呈阴性表达,但在其他各层及K17 在表皮全层均呈阳性或强阳性表达。K16 除基底层外在肿瘤表皮其他各层表达比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;K17 在表皮各层表达差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论 K16、K17的表达状况可为表皮肿瘤的鉴别诊断提供病理学方面的依据。     

尖锐湿疣表皮CCL20及CXCR4的表达

目的 了解尖锐湿疣(CA)表皮中CCL20及CXCR4的表达,并探讨它们对CA表皮朗格汉斯细胞的影响.方法 使用Affymetrix寡核苷酸芯片,对3例CA表皮和3例正常表皮中的CCL20及CXCR4的mRNA表达进行检测.采用Western blot法,检测3例CA表皮和3例正常表皮中的CCL20及CXCR4的蛋白表达.结果 基因芯片检测到CCL20及CXCR4的mRNA在CA表皮中表达下调.Western blot法检测到CCL20蛋白及CXCR4蛋白在CA表皮中的显著下调表达.结论 CCL20及CXCR4在CA表皮中表达下调,并可能分别与CA表皮中朗格汉斯细胞的数目减少及回流障碍有关.     

热休克蛋白60在银屑病、慢性湿疹中的表达研究

目的：观察银屑病患者及慢性湿疹患者皮损表皮细胞中热休克蛋白（HsP60）的表达情况。方法：通过免疫组织化学（SABC）方法及原位杂交技术检测了33例银屑病皮损及28例慢性湿疹皮损表皮组织中HSP60蛋白及其mRNA的表达,并与16例正常皮肤组织作对照。结果：HSP60蛋白在正常人及慢性湿疹患者皮损表皮细胞中表达很弱或无表达,两者问差异无统计学意义（P〉0．05）;在银屑病患者皮损表皮细胞中表达增强,与正常对照组及慢性湿疹患者皮损表皮相比,差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。HSP60mRNA与HSP60蛋白表达部位较一致。结论：HSP60在不同皮肤疾病的发病机制中发挥着不同作用。