普鲁卡因酰胺诱导肝癌细胞启动子区甲基化的GSTP1基因重新表达

目的　研究HepG2肝癌细胞GSTP1基因启动子区甲基化与GSTP1基因表达的关系 ,并探讨普鲁卡因酰胺用于诱导因甲基化失活的GSTP1基因重新表达的可能性。方法　分别用 5 -杂氮 - 2′ -脱氧胞苷 (5 -Aza -CdR)和普鲁卡因酰胺处理HepG2细胞后培养 ,甲基化特异性PCR(MSP)检测细胞中GSTP1基因的甲基化状况 ,RT -PCR和Westernblot分别检测细胞中GSTP1mRNA和GST -π的表达。结果　HepG2细胞在去甲基化药物处理前 ,GSTP1基因完全甲基化 ,GSTP1基因不表达 ;药物处理后 ,普鲁卡因酰胺组和 5 -Aza -CdR组GSTP1基因有表达。结论　肝癌细胞GSTP1基因启动子区甲基化可抑制GSTP1基因表达 ,普鲁卡因酰胺与 5 -Aza -CdR一样能使启动子区甲基化的GSTP1基因重新表达     

质粒介导的RNAi对神经母细胞瘤细胞Survivin基因表达的抑制作用

目的构建Survivin的短发夹RNA表达质粒并通过由其介导的RNA干扰来下调神经母细胞瘤细胞株SH—SY5Y细胞中Survivin的表达。方法针对人Survivin的mRNA序列设计合成两对寡核苷酸序列，退火后将其连入pBSHH1．对重组质粒pBSHH1—S1和pBSHH1-S2进行酶切和测序鉴定，然后将质粒转染SH-SY5Y细胞，运用RT—PCR和Western印迹检测Survivin基因的表达。结果酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被克隆到pBSHH1，pBSHH1-S1和pBSHH1—S2转染SH—SYSY细胞后，Survivin基因的mRNA以及蛋白水平的表达量均受到明显抑制结论成功构建了人Survivin基因的短发夹RNA表达质粒，并在SH—SYSY细胞中验证了它们对Survivin基因的表达抑制作用，为神经母细胞瘤等肿瘤的基因治疗研究奠定了基础。     

Survivin基因蛋白在原发性肝细胞癌的表达及意义

作者采用免疫组化SP方法，检测20例肝癌，21例肝硬化，和10例正常肝组织中Survivin的表达，结果表明该基因在肝癌中表达阳性率为75%（15/20），肝硬变组织为4.76%(1/21），正常肝组织均无表达，Survivin有可能作为肝癌标志物。     

Survivin和bcl-2在膀胱移行细胞癌中表达及其相关性研究

目的探讨凋亡抑制基因Survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及与bcl-2蛋白表达的相关性。方法应用免疫组织链酶卵白素-过氧化物酶复合物（SP）方法，检测40例膀胱移行细胞癌组织标本中Survivin、bcl-2蛋白的表达，并与15例正常膀胱粘膜移行细胞进行对照研究。结果40例膀胱移行细胞癌中，Survivin蛋白的阳性表达率为58．14％，而正常膀胱粘膜组织中未见Survivin蛋白阳性表达（P〈0．01）。Survivin蛋白表达与膀胱移行细胞癌的WHO肿瘤分级有相关性。根据Spearman相关分析表明Survivin与bcl-2蛋白表达正相关（P〈0．01）。结论Survivin基因可通过抑制膀胱移行细胞癌细胞凋亡，对膀胱移行细胞癌的发生发展起重要作用。Survivin的表达与膀胱癌组织中bcl-2蛋白的异常表达密切相关。     

细胞凋亡和相关基因Fas、bax和bcl-2蛋白在睾丸肿瘤中表达的研究

目的研究细胞凋亡和相关基因Fas、hax和bcl-2蛋白在睾丸肿瘤发生和发展中的作用。方法应用DNA未端标记、流式细胞术和细胞免疫荧光技术检测56例睾丸肿瘤细胞凋亡状态及凋亡相关基因Fas、bax和bcl-2蛋白的表达。结果凋亡指数与肿瘤病理类型和淋巴结转移密切相关(P＜0．05)。Fas蛋白阳性表达37例(66．1％)，bax阳性48例(85.7％)，bcl-2阳性40例(71．4％)；Fas、bax和bcl-2蛋白表达与肿瘤的病理类型、临床分期和淋巴结转移无明显相关(P＞0.05)：凋亡指数在Fas、bax及bcl-2蛋白阳性表达和阴性表达者中差异有显著性(P＜0.05)。结论细胞凋亡在睾丸肿瘤发生中有重要作用。Fas、bax和bcl-2蛋白的异常表达尚不能成为睾丸肿瘤发生和发展的预后参数。     

P53基因在HBV感染性肝癌发生中抑癌作用的研究

用ＨＢＶＤＮＡ转染体外细胞系（人肝肿瘤细胞株）而得到一种瞬间表达产物通过检验这种产物来研究Ｘ基因的表达特性,并通过同时转染抑癌基因Ｐ＾５３来观察其对Ｘ基因在人肝细胞中表达的抑制作用。结果提示：Ｐ＾５３提示可通过抑制Ｘ检验在细胞中的表达而例其活性功能丧失从而达到抑制癌肿产生的作用,但Ｐ＾５３抑癌机能的发挥与其在细胞中含量的多少有关。     

RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌中转录表达的研究

目的探讨RASSF1A(RAS association domain fanaly1A)基因mRNA表达水平与膀胱移行细胞癌发生、发展的关系.方法用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测37例膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell Carcinoma,BTCC)组织和8例正常膀胱组织中RASSFlA基因mRNA表达水平.结果RASSF1A mRNA在8份正常膀胱组织中全部表达,在BTCC组织中的表达率为35.1%(13/37),且表达量低于正常膀胱组织,两组间表达差异有显著性(P＜0.05),但在各肿瘤分期、病理分级间的表达差异无显著性(P＞0.05).结论RASSF1A mRNA表达缺失或下调,参与了肿瘤的发生,而与肿瘤的进展可能无关.     

HOGG1基因特异性锤头状核酶表达载体的构建及其在细胞中表达的研究

目的：设计并合成人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)基因并构建其真核表达载体。初步探讨其在A549细胞中的瞬时表达效应。方法：运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ)，将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA3．1( )中，阳性重组子由BamHⅠ和EcoRⅠ酶切，琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE 6的介导下引入人肺腺癌细胞株A549，RT—PCR(逆转录多聚酶链反应)法半定量检测转染细胞中HOGG1 mRNA表达的改变。结果：经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA3．1( )的BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点之间，命名为pcDNA3．1( )-RZ。经RT—PCR法检测到转染核酶的靶细胞中HOGG1 mRNA表达下降36％，与空白细胞组差异有显著性。结论：成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体。核酶在A549细胞内对靶基因HOGG1具有抑制其表达的作用。     

DNA氧化损伤修复相关基因hOGG1、MGMT在肺癌细胞中表达研究

目的研究DNA氧化损伤修复相关基因hOGG1和MGMT在正常人支气管上皮细胞(Human bronchial epithe-lial,16HBE)、反式7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(BPDE)转化细胞和裸鼠成瘤细胞中的表达。方法采用原位杂交技术检测hOGG1和MGMT在正常16HBE、反式BPDE转化细胞和裸鼠成瘤细胞中mRNA水平的表达。结果hOGG1、MGMT mRNA在反式BPDE转化细胞中阳性表达明显增强,而在裸鼠成瘤细胞中阳性表达相应减弱。结论DNA损伤修复相关基因hOGG1、MGMT mRNA在转化细胞模型中的表达水平明显增强。     

RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌中转录表达和启动子甲基化的研究

目的探讨RAssF1A（RAS association domain family1A）基因mRNA表达水平和基因启动子区CPG岛甲基化的关系。方法：用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术鉴测37例膀胱移行细胞癌（bladdert tansitional cell Carcinoma,BTCC）组织和8例正常膀胱组织中RASSFIA基因mRNA表达水平;用甲基化特异性PCR（Methylation—Specific PCR,MSP）。方法研究膀胱移行细胞癌组织和正常膀胱组织中的RASSF1A基因启动子区CPG岛甲基化状态。结果RASSF1 AmRNA在8份正常膀胱组织中全部表达,在BTCC组织中的表达率为35．1％（13／37）,二组间表达差异有显著性（P〈0．05）,但在各肿瘤分期、病理分级间的表达差异无显著性（P〉0．05）。在正常膀胱组织中RASSF1A基因启动子未发生甲基化,但在BTCC组织中RASSFIA基因启动子甲基化频率为51．3％（19／37）。二组间表达差异有显著性（P〈0．05）。在19份启动子异常甲基化的BTCC标本中,有16份同时伴有RASSF1AmRNA表达缺失．,两者存在明显相关性（P〈0．05）。结论RASSFIA基因启动子在BTCC组织中发生异常甲基化,使RASSF1AmRNA表达缺失或下调,从而使RASSF1A基因失活,参与了肿瘤的发生,而与肿瘤的进展可能无关。     

人卵泡抑素基因短发夹RNA表达质粒的构建及其干扰效果的初步鉴定

目的:构建人卵泡抑素(FS)基因短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,并瞬时转染方式初步鉴定其干扰效果。方法:依据GenBank数据库提供的人FS基因mRNA核苷酸序列,利用Ambion网站上siRNA软件设计shRNA干扰靶序列,将该序列克隆到线性化的pLKO.1质粒载体上,构建pLKO.1-FS-shRNA重组质粒,并进行酶切和测序鉴定。确认质粒构建成功后,用脂质体(Lipofectamine TM 2000)将重组质粒瞬时转染3AO人卵巢癌细胞系,并用实时定量反转录PCR法检测重组质粒对FS基因的表达抑制效果。结果:构建的shRNA序列经DNA测序证实与设计序列完全一致;实时定量反转录PCR结果显示pLKO.1-FS-shRNA重组质粒瞬时转染的3AO人卵巢癌细胞后,细胞中的FS基因转录受到抑制,抑制率达59%。结论:成功构建了靶向人FS基因的shRNA干扰靶序列重组质粒(PLKO.1-FS-shRNA),转染后对人卵巢癌细胞系FS基因的表达具抑制效果,该实验为进一步研究FS基因的生物学功能奠定基础。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合芬维A胺诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scdptaid、TSA分别联合芬维A胺诱导人肝癌细胞凋亡作用。方法组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid（10／zM）合芬维A胺（10／zM）、TSA（1／zM）联合芬维A胺（10／zM）分别处理人肝癌细胞株（SNU475。SNU449,SNU398,sK—HEP-1,PLC／PRF／5）。通过Caspase-3／7检测试剂盒和CellTiter—Glo发光细胞活力检测试剂盒监测组蛋白乙酰化酶抑制剂联合芬维A胺对肝癌细胞的影响。结果组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid（10／zM）、Ts（1／zM）联合芬维A胺（10肚M）处理细胞24h能显著诱导人肝癌细胞株SNU475、SNU449、SNU389、SK—HEP-1、PLC／PRF／5凋亡（P〈0．01）。结论组蛋白乙酰化酶抑制剂Scriptaid、TSA联合芬维A胺能诱导肝癌细胞凋亡。     

两元腺病毒载体系统转移bax基因诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的：采用两元腺病毒载体系统，介导bax基因转移至培养的肝癌细胞SMMC－7721，探讨腺病毒介导转移bax基因抗肝癌的活性。方法：常规方法在293细胞中扩增腺病毒Ad/GT-Bax和Ad/PGK-GV16,CsCl密度梯度离心法纯化病毒后测定病毒滴度。结果：（1）Bax蛋白表达情况：感染Ad/GT-Bax和Ad/PGK-GV16的SMMC－7721细胞，其在24、48和72小时的Bax蛋白表达量依次为阴性对照细胞的2．5、3．1和3．9倍；（2）PI染色后，感染Ad/GT-Bax和Ad/PGK-GV16的SMMC－7721细胞出现亚二倍体峰，该峰面积占总面积的值在24、48、72小时时依次为31．65％、50．44％和61．81％。结论：两元腺病毒载体系统介导转移Bax基因可诱导人肝癌SMMC－7721细胞凋亡，可望成为治疗肝癌的有力工具。     

肝细胞癌化疗栓塞后p53蛋白表达及意义

目的　评价肝细胞癌p5 3蛋白表达在经导管动脉化疗栓塞 (transcatheterarterialchemoembolization ,TACE)中的作用。方法　经手术病理证实的肝细胞癌 13 6例 ,其中行 1～ 5次TACE后Ⅱ期手术切除 79例 (TACE组 ) ,按治疗方式不同分 4组 ,A组 ,仅灌注化疗药物 11例 ,治疗 1～ 4次 ;B组 ,化疗药加碘化油栓塞 3 3例 ,治疗 1～ 5次 ;C组 ,化疗药加碘化油加明胶海绵颗粒栓塞 2 3例 ,治疗 1～ 3次 ;D组 ,化疗药加碘化油、无水乙醇、明胶海绵颗粒栓塞 12例 ,治疗 1～ 3次。单纯手术 5 7例 (非TACE组 )。用TUNEL法检测AI ,用免疫组化检测各标本Bcl -2 ,Bax ,p5 3 ,Ki-67和PCNA蛋白表达。结果　梁索型、透明细胞型p5 3蛋白表达显著低于假腺样型、实体型、低分化或未分化型、硬化型 ( P <0 0 5 ) ;随着病理分级的增高 ,p5 3蛋白表达也逐渐增多 ( P <0 0 5 ) ;p5 3蛋白表达与PCNA和Ki-67蛋白表达显著正相关 (P <0 0 5 ) ,与AI ,Bcl-2 /Bax蛋白表达率显著负相关 (P <0 0 5 )。p5 3蛋白表达A组显著高于B、C、D组和单纯手术组 ;B组显著高于C和D组 ;D组显著低于单纯手术组 (P <0 0 5 )。结论　在肝细胞癌化疗栓塞中p5 3蛋白表达起增强癌细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用     

超声体检对无症状肝癌和小肝癌的临床诊断价值以及肝癌病人的预后

[目的]评价超声体检在早期发现无症状肝癌和小肝癌(≤3.0 cm)的临床诊断价值。[方法]对14万人次的超声体检及门诊常规检查病人,检出可疑肝癌79例经手术病理证实的77例肝癌患者进行回顾分析。[结果]检出79例可疑肝癌患者,经手术病理证实的77例。根据患者有无症状,分A、B组,A组为无症状肝癌51例,在健康体检或因其他疾患就诊时经超声检查首先发现疑似肝癌的计为无症状组;B组为症状性肝癌组26例,有剑突下或右上腹疼痛不适的计为症状组。无症状性肝癌明显多于症状性肝癌,分别为66.23%和33.76%,77例患者术后随访12~60个月,A、B组瘤体大小3.1~5.0 cm,术后1、3、5年无瘤生存率分别为91.30%、82.60%、65.21%和90.90%、36.36%、18.18%;瘤体>5.1 cm,术后1、3、5年无瘤生存率分别为87.50%、75.00%、37.50%和80.00%、13.33%、6.66%,术后3、5年无瘤生存率A组明显高于B组。小肝癌组术后预后较好,3年和5年无瘤生存率(100.00%、94.73%)均明显高于3.1~5.0 cm及>5.1 cm者。[结论]超声体检是筛查早期无症状性肝癌和小肝癌的有效方法,无症状性患者的远期无瘤生存率显著高于有症状性患者。     

整合素β1在原发性肝细胞癌中的表达研究

目的研究整合素β1在原发性肝细胞癌中的表达及其意义,探讨整合素β1与肝癌浸润、转移和复发的关系,为肝癌的防治提供实验依据。方法应用免疫组织化学SP法检测38例肝癌、8例门脉高压症肝硬化和7例正常肝组织中整合素β1的表达情况,并结合临床病理指标进行分析。结果整合素β1在肝癌中的表达阳性率明显高于肝硬化和正常肝脏组织(P<0.05);整合素β1在有包膜侵犯组、病理分级III-IV组及有转移HCC中的表达明显高于无包膜侵犯组(P<0.05)、病理分级I-II级组(P<0.05)以及无转移HCC组(P<0.05)。结论整合素β1在肝癌组织中的表达上调与肝癌病理分期及是否有转移相关,提示整合素β1与肝癌的侵袭性和转移有关,检测其表达有助于判断肝癌的恶性程度和转移性。     

Mta-1与VEGF在原发性肝癌组织中的表达及其相关性

目的探讨肿瘤转移相关基因Mta-1、血管内皮生长因子(VEGF)在原发性肝癌组织和正常肝组织中的表达及其之间的相关性。方法免疫组化方法检测63例原发性肝癌组织和10例正常肝组织中转移相关基因(Mta-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达;分析Mta-1和VEGF与原发性肝癌组织的肿瘤体积、病理类型、临床分期、淋巴结转移等临床病理参数之间的关系及Mta-1表达与VEGF的相关性。结果Mta-1与VEGF在肝癌组织中的表达阳性率均明显高于正常肝组织(χ2=10.59、6.42,P0.01)。Mta-1在肝癌组织中的表达与肿瘤大小、临床分期、病理分级、有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓、有无血道转移组织相关(P0.01),VEGF在肝癌组织中的表达与临床分期、病理分级、有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓、有无血道转移组织相关(P0.01);在肝癌组织中Mta-1与VEGF蛋白表达呈正相关(rs=0.712,P0.05)。结论肝癌组织中Mta-1和VEGF均呈过量表达,且二者表达存在协同促进关系,为肝癌的分子靶向治疗提供了新的靶点。     

胆管梗阻型肝细胞癌的外科治疗

目的：探讨恶性胆管梗阻型肝细胞癌的诊断和外科治疗。方法：回顾分析1994年－2000年2月收治的13例胆管梗阻型肝癌患者的病例资料。结果：随访1年，健在10例，死亡3例。结论：黄疸不一定是肝癌的晚期表现，以手术为主的综合治疗常可获得较长术后生存时间。     

hMLH1、hMSH2在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的研究Hmlh1、Hmsh2在原发性肝癌组织中的表达及与临床病理特征的关系.方法应用SABC免疫组化法,检测Hmlh1、Hmsh2在37例原发性肝癌组织中的表达.Hmlh1、Hmsh2在癌组织中的阳性率及其评分分别为48.7%(1.65±1.70)分、59.5%(2.30±1.96)分,明显低于癌旁组织83.8%(3.30±1.37)分、86.5%(4.30±2.01)分及正常肝组织88.2%(3.88±1.98)分、82.3%(4.29±1.83)分(P＜0.01); Hmlh1、 Hmsh2的表达与原发性肝癌组织分化程度有关,Hmlh1的表达与AFP是否阳性有关,二者与其它临床病理特征无关.Hmlh1、Hmsh2在原发性肝癌组织发生发展中起重要抑制作用.Hmlh1、Hmsh2可作为预测原发性肝癌组织预后的重要指标-.