肝细胞生长因子对肝细胞癌细胞系SMMC-7721黏着斑激酶的影响

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对黏着斑激酶(FAK)、Src表达及活性的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:LY294002预处理阻断PI3K的活性、HGF处理SMMC-7721后检测FAK和Src的表达、磷酸化及在细胞内的分布. 应用免疫印迹技术检测FAK、Src的表达及磷酸化, 免疫荧光技术检测FAK在SMMC-7721细胞中的分布.结果:HGF(50 μg/L)可以促进FAK Y397位点的磷酸化, 对FAK的表达没有影响. 应用PI3K抑制物LY294002处理后, FAK Y397的磷酸化水平显著降低. HGF处理后, FAK主要位于细胞边缘, 呈簇状分布, 应用PI3K抑制物, FAK在细胞内弥散分布. HGF处理后, Src激酶和SrcY416的磷酸化水平明显增加, 而经LY294002处理后, Src激酶与Src Y416的磷酸化水平明显降低.结论:肝细胞癌中, HGF以PI3K依赖性的方式促进FAK和Src的活化.     

体外RNA干扰下调黏着斑激酶表达对HSC-T6细胞黏附与迁移的影响

目的 探讨特异性阻断黏着斑激酶(FAK)表达对纤维连接蛋白刺激的肝星状细胞(HSC-T6)黏附与迁移的影响.方法 构建靶向FAK的RNA干扰重组体,在阳离子聚合物介导下转染大鼠肝星状细胞系HSC-T6,筛选出可高效抑制FAK表达的重组质粒;荧光实时定量PCR和Western blot检测FAK基因敲除效果;甲苯胺蓝染色法检测细胞黏附,划痕修复实验和改良的Boyden双腔系统检测细胞迁移.多组间均数差异性比较采用单因素方差分析.结果 成功构建并筛选出可高效抑制FAK的质粒表达载体.质粒转染后,FAK mRNA和蛋白表达分别下降了76.82%和72.53%,同时,p-FAK(Tyr397)蛋白表达下降了62.71% FAK表达下调可明显抑制HSC-T6细胞黏附,抑制率约58.69%;FAK基因沉默可显著抑制纤维连接蛋白诱导的HSC迁移,使细胞迁移距离降低了58.27%,跨膜迁移细胞数减少了83.70%. 结论 RNA干扰技术可选择性下调HSC中FAK的表达,并可显著抑制HSC-T6的黏附和迁移.     

缺氧促进人肺动脉平滑肌细胞黏着斑激酶表达

黏着斑激酶（FAK）与人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）增殖有关。FAK是否参与了缺氧状态下HPASMC的增殖尚少报道。我们的研究对此进行了缺氧情况下FAK在HPASMC增殖中的作用。     

黏着斑激酶相关非激酶对肝星状细胞凋亡及细胞外信号调节激酶的影响

目的 应用黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)表达质粒瞬时转染纤维连接蛋白(FN)预刺激的肝星状细胞(HSC),探讨FRNK对HSC凋亡及细胞外信号调节激酶(ERK)的影响.方法 在体外,以FN诱导HSC增殖,采用脂质体介导的方法用FRNK表达质粒瞬时转染HSC,应用膜联蛋白/碘化丙啶双标记流式细胞术、DNA凝胶电泳技术和透射电镜技术检测细胞的凋亡,Western blot及RT-PCR方法检测FRNK、黏着斑激酶(FAK),p FAK(Tyr397)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)、ERK1、p-ERK蛋白及其mRNA表达. 结果FRNK表达质粒成功转染HSC,在翻译后水平抑制FAK磷酸化.与空质粒组比较,FRNK表达质粒转染HSC48 h后,HSC凋亡率由9.28%±1.05%增至25.37%±1.92%(P<0.01),caspase-3蛋白由185.82±9.69增至264.17±12.60(P<0.01),caspase-3 mRNA由1.07±0.27增至4.19±0.48(P<0.01).FRNK抑制FAK磷酸化和在翻译和转录水平抑制ERK1、p-ERK的表达,而FN则促进FAK和ERK1,p-ERK在翻译和转录水平的表达. 结论在脂质体介导下瞬时转染FRNK表达质粒,可使外源性的FRNK在HSC内大量表达,在翻译后水平抑制FAK磷酸化;并可能通过FAK-ERK信号转导通路诱导FN刺激的HSC发生凋亡.     

黏着斑激酶在结肠癌细胞中的表达及对其迁移的影响

[目的]观察局部黏着斑激酶（FAK）在结肠癌细胞中的表达及对结肠癌细胞侵袭动力和生长的影响。[方法]应用RT-PCR、Western blot方法测定结肠癌细胞株（HT-29）和正常肠上皮细胞中FAK的表达；在血小板源性生长因子（PDGF）刺激肿瘤细胞后，应用细胞黏附分析和体外侵袭试验方法，测定不同时间点细胞的体外黏附能力变化及侵袭能力，同时行FAK表达测定。[结果]结肠癌细胞较正常上皮细胞存在较高水平的FAK表达。PDGF干预组与非干预组比较，能促进HT-29的黏附功能（90．0％）和侵袭能力（54．5％），在该过程中，FAK的表达和活性升高（P〈0．05）。[结论]FAK对结肠癌细胞的体外黏附与迁移发挥重要的作用。     

磷酸化黏着斑激酶在结肠癌中表达及意义

目的:观察磷酸化黏着斑激酶(phosphorylatedfocaladhesionkinase,phospho-FAK)在结肠癌组织和对应癌旁组织中的表达,探讨其在结肠癌发病的可能机制.方法:采用Westernbloting方法检测20例新鲜结肠癌及相对应的癌旁组织FAK表达水平,并在调平每对组织FAK的含量后再进行FAKTyr397磷酸化蛋白的检测.结果:20例结肠癌组织FAK阳性表达率为95%,对应癌旁组织FAK阳性表达率为60%(c2=5.16,P<0.05);癌组织表达平均值为0.482±0.150,癌旁表达平均值为0.269±0.015(t=6.39,P<0.01).20例结肠癌组织18例有FAKTyr397磷酸化蛋白表达,表达率为90%,而对应癌旁组织仅有4例有FAKTyr397磷酸化蛋白表达,表达率为20%(c2=17.1,P<0.01);癌组织表达平均值为0.385±0.021,癌旁表达平均值为0.110±0.005(t=54.23,P<0.01).结论:FAK特别是FAKTyr397磷酸化蛋白的表达水平增加在结肠癌的发生、发展中可能起重要作用.     

黏着斑激酶在鼻咽癌细胞系6-10B中的表达及其对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨黏着斑激酶(FAK)在鼻咽癌细胞6-10B中的表达及其对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的影响。方法鼻咽癌细胞6-10B培养后利用RNA干扰(RNAi)技术下调FAK在6-10B中的表达水平,通过RT-PCR、Real-time PCR、Western印迹检测其干扰效率,通过Western印迹检测干扰后凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平,通过Hoechst染色观察细胞凋亡形态。结果干扰后FAK在鼻咽癌细胞6-10B中表达量较低、下调明显(P0.05);鼻咽癌细胞系6-10B干扰FAK后,Bcl-2和Bax的表达量发生较明显改变(P0.05);Hoechst染色结果显示干扰后细胞出现明显的凋亡形态。结论干扰FAK后促进鼻咽癌细胞凋亡,提示可以通过下调FAK表达水平促进肿瘤细胞凋亡,为鼻咽癌的基因治疗提供新的思路。     

RNA干扰沉默STAT3基因对肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721的影响

肝细胞癌是常见的危害人类健康的恶性肿瘤之一,其发生、发展过程受诸多因素的影响.近年研究发现,信号转导和转录激活因子(STAT)具有强烈的抑制细胞凋亡,促进细胞增殖的作用,参与了人类恶性肿瘤的发生、发展和演变,其中以STAT3尤为活跃.本研究利用RNA干扰(RNAi)技术,用短发夹样RNA(shRNA)设计并构建RNAi-DNA质粒,筛选稳定表达小干扰RNA(siRNA)的肝癌HepG2及SMMC-7721细胞株,体外研究siRNA稳定和特异性诱导肝癌STAT3基因转录后沉默并逆转其恶性表型的能力,从而探索肝癌治疗的新方法.     

黏着斑激酶在结肠癌组织中的表达及意义

目的探讨黏着斑激酶（FAK）在结肠癌发生、发展中的作用。方法采用RT-PCR法检测30例新鲜结肠癌及与之相对应的癌旁组织的FAK mRNA表达；同时用Western印迹法检测20例新鲜结肠癌及相对应的癌旁组织FAK蛋白表达水平，调平每对组织FAK蛋白含量后再行FAK Tyr397磷酸化位点蛋白检测。结果30例结肠癌组织FAK mRNA阳性率为90．0％，其表达值为0．745±0．530，对应癌旁组织阳性率为43．3％，其表达值为0．241±0．131（P〈0．01）；20例结肠癌组织FAK蛋白阳性率为95．0％，表达值为0．482±0．150；对应癌旁组织阳性率为60．0％，表达值为0．269±0．015；P均〈0．01。20例结肠癌组织中FAK Tyr397磷酸化蛋白阳性率为90．0％（18／20），表达值为0．385±0．021；而对应癌旁组织阳性率为20％（4／20），表达值为0．110±0．005，P均〈0．01。结论FAK特别是FAK Tyr397磷酸化蛋白表达增加在结肠癌的发生、发展中可能起重要作用。     

川芎嗪对人肝癌细胞钙激活中性蛋白酶-2、黏着斑激酶及迁移侵袭能力的影响

目的探讨川芎嗪(TMP)对人肝癌细胞钙激活中性蛋白酶(Calpain)-2、黏着斑激酶(FAK)及迁移侵袭能力的影响,以了解其抑制肝癌的机制。方法将人肝癌细胞(MHCC97-H)分为对照组和TMP组,TMP组予以TMP 1.0 mg/ml干预24 h,采用Western印迹检测两组Calpain-2、FAK蛋白表达情况,划痕实验、Transwell实验检测MHCC97-H迁移、侵袭能力。结果与对照组比较,TMP组Calpain-2、FAK蛋白表达均明显下调(P0.05);其迁移率、穿膜细胞数及吸光度值均明显下降(P0.05)。结论下调肝癌细胞系(MHCC97-H)的Calpain-2、FAK水平可能是TMP抗肝癌作用机制之一。     

反义局部粘着斑激酶脱氧寡核苷酸对肝癌细胞侵袭性生长的抑制作用

目的 观察反义局部粘着斑激酶脱氧寡核苷酸(FAK ODN)转染对肝癌细胞侵袭性生长的影响,并探讨其作用机制。 方法 以LipofecTAMINE介导的反义FAK ODN转染Bel 7402肝癌细胞株,测定Bel 7402肝癌细胞株体外生长曲线、细胞活力,测定不同时间点该细胞体外黏附能力变化,以Transwell小室测定细胞的体外侵袭能力,同时行FAK表达与细胞DNA含量的双参数流式细胞仪检测及细胞凋亡的流式细胞仪检测。 结果 p125FAK表达在反义转染组(6.49％±0.10％)显著低于正义转染组(14.33％±1.88％)与对照组(16.68％±1.62％),F=7.66,P<0.01;反义FAK ODN转染显著抑制Bel 7402肝癌细胞株的生长,其细胞活力显著下降,肿瘤细胞抑制率在30％-60％之间;细胞体外黏附能力受到显著抑制,黏附抑制率在25％-55％间;细胞的体外侵袭能力显著下降,侵袭抑制率在15％-25％之间;细胞凋亡显著增加;细胞周期分析显示S期细胞比率显著降低,细胞生长主要阻滞在G2/M期。 结论 FAK在Bel 7402肝癌细胞的黏附与迁移运动中发挥重要作用,其表达阻断显著抑制肝癌细胞的体外黏附与侵袭活性。FAK表达阻断显著抑制肝癌细胞的体外增殖,促进细胞凋亡。     

端粒酶逆转录酶小干扰RNA对肝癌细胞的体外抑制作用

目的 研究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小干扰RNA(siRNA)在肝癌细胞SMMC-7721中抗肿瘤作用。方法 针对hTERT基因编码区及非编码区，采用T7转录系统在体外合成了2条siRNA，转染SMMC-7721细胞。以四甲基偶氮唑盐试验、逆转录聚合酶链反应及western blot观察其对SMMC-7721细胞增殖、hTERT mRNA及蛋白表达的影响。结果 2条siRNA以剂量依赖性方式抑制了SMMC-772l细胞增殖，当给药浓度为100nmol／L时，对hTERT mRNA及蛋白表达有明显的抑制作用。结论 靶向hTERT的siRNA对hTERT基因表达有抑制效果，有可能发展为一种新的抗肿瘤药物。     

黏着斑激酶在结直肠癌中的研究进展

黏着斑激酶(focal adhe sion kinase,FAK)是一种非受体酪氨酸激酶,他作为整合素介导的信号传导过程中的中心分子与多个信号通路相交通,参与细胞的生长、增殖、损伤修复及凋亡等多种生物学行为.FAK在结直肠癌中高表达,在正常大肠组织中呈弱阳性或阴性.FAK可能成为结直肠癌治疗的一个重要靶点,抑制FAK的功能可以阻断多条与肿瘤相关的信号通路.     

粘着斑激酶在胃癌中的表达及临床意义

目的观察粘着斑激酶(FAK)在胃癌及癌旁组织表达的差异,探讨FAK与胃癌临床病理参数的关系。方法应用免疫组化SP法检测61例胃癌组织及其癌旁组织FAK的表达。结果FAK在胃癌及其癌旁组织阳性表达率分别为86.8%(53/61)和75.4%(46/61),差异无显著性(P>0.05);但FAK较强阳性/强阳性(即++/+++)的表达率分别为59%、26.2%,差异有显著性(P<0.05),且其表达水平与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期呈正相关。结论在胃癌组织中FAK(++/+++)的表达水平较正常组织明显增高,提示FAK参与胃癌的发病,并与胃癌的浸润、转移关系密切。     

纤粘连蛋白介导的平滑肌细胞粘附迁移与粘着斑激酶的磷酸化

目的　探讨纤粘连蛋白介导的血管平滑肌细胞粘附和迁移与粘着斑激酶 (focaladhesionkinase ,FAK)的磷酸化的关系。方法　不同浓度的纤粘连蛋白 (fibronectin ,FN)刺激培养的血管平滑肌细胞 (smoothmusclecells,SMCs) ,观察细胞粘附反应 ,统计铺展比率。免疫沉淀和Wsternblot分别检测FAK及FAK磷酸化的表达量。利用改良的BoydenChamber测SMCs迁移。结果　FN有效地促进了SMC粘附 ,其铺展比率、迁移细胞数均显著高于对照 (P <0 0 5 ) ,且随FN浓度递增而增加。其中 2 0、40、6 0 μg ml组分别为 (75 6± 6 5 ) %、(80 9± 5 4) %和 (82 4± 7 9) % ,无组间差异 ,但均高于 5 μg ml的 (2 0 8± 3 2 ) %和 10 μg ml组的 (32 8± 4 7) % ,各组迁移细胞数也从 16 8± 3 6 HFP 2 0 0×增加到48 9± 6 1 HFP 2 0 0×。不同浓度FN作用后均有FAK的表达 ,FN10 μg ml即可致FAK磷酸化。表明FN介导SMCs粘附和迁移时伴有显著的FAK活化。结论　FN诱导平滑肌细胞粘附和迁移可能是通过FAK介导的 ,对其活性进行调控将有助于抑制血管损伤后内膜平滑肌细胞的迁移。     

Progress in researches about focal adhesion kinase in gastrointestinal tract

Focal adhesion kinase (FAK) is a 125-kDa non-receptor protein tyrosine. Growth factors or the clustering of integrins facilitate the rapid phosphorylation of FAK at Tyr-397 and this in turn recruits Src-family protein tyrosine kinases, resulting in the phosphorylation of Tyr-576 and Tyr-577 in the FAK activation loop and full catalytic FAK activation. FAK plays a critical role in the biological processes of normal and cancer cells including the gastrointestinal tract. FAK also plays an important role in the restitution, cell survival and apoptosis and carcinogenesis of the gastrointestinal tract. FAK is overexpressed in cancer cells and its over-expression and elevated activities are associated with motility and invasion of cancer cells. FAK has been proposed as a potential target in cancer therapy. Small molecule inhibitors effectively inhibit the kinase activity of FAK and show a potent inhibitory effect for the proliferation and migration of tumor cells, indicating a high potential for application in cancer therapy.     

C-met-siRNA在肝癌细胞株MHCC97-H侵袭和转移中的作用

目的探讨c—met-siRNA对肝细胞癌生长和侵袭的影响。方法采用脂质体法将pSuppressorRetro／c—met—siRNA导入包装细胞Phoenix A中获得含c-met-siRNA的逆转录病毒颗粒，进一步感染靶细胞MHCC97-H，Western blot检测c—Met的表达，通过生长曲线、运动试验及侵袭试验比较转染前后细胞的生长、运动及侵袭能力。结果肝细胞癌MHCC97-H细胞中c—Met的表达显著降低；细胞的生长、运动及侵袭均受到明显抑制。结论c—met—siRNA能抑制肝细胞癌细胞MHCC97-H的生长、运动及侵袭，这对肝细胞癌的生长、转移具有重要的临床意义。     

去甲斑蝥素通过c-Jun氨基末端激酶通路诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

斑蝥素是从中药斑蝥中提取的一种抗肿瘤活性成分~([1-3]),曾试用于治疗原发性肝癌,能够缓解患者病情~([4-8]).但是斑蝥素的剧烈毒性以及对泌尿系统的严重刺激性限制了其在临床的应用~([9-12]).近年来陆续合成了不良反应少的同类药物,如斑蝥酸钠、羟基斑蝥胺及甲基斑蝥胺等.     

Silencing profilin-1 inhibits gastric cancer progression via integrin β1/focal adhesion kinase pathway modulation

AIM:To investigate the role of profilin-1(PFN1)in gastric cancer and the underlying mechanisms.METHODS:Immunohistochemical analysis,quan-titative real-time polymerase chain reaction(q RTPCR)and Western blot were performed to detect PFN1expression in clinical gastric carcinoma and adjacent tissues,and the association of PFN1 expression with patient clinicopathological characteristics was analyzed.PFN1 was knocked down to investigate the role of this protein in cell proliferation and metastasis in the SGC-7901 cell line.To explore the underlying mechanisms,the expression of integrinβ1 and the activity of focal adhesion kinase(FAK)and the downstream proteins extracellular-regulated kinase(ERK)1/2,P38 mitogen-activated protein kinase(MAPK),phosphatidylinositol 3-kinase(PI3K),AKT and mammalian target of rapamycin(m TOR)were measured through Western blot or q RT-PCR analysis.Fibronectin(FN),a ligand of integrinβ1,was used to verify the correlation between alterations in the integrinβ1/FAK pathway and changes in tumor cell aggressiveness upon PFN1 perturbation.RESULTS:Immunohistochemical,Western blot and q RT-PCR analyses revealed that PFN1 expression was higher at both the protein and m RNA levels in gastric carcinoma tissues compared with the adjacent tissues.In addition,high PFN1 expression(53/75,70.4%)was correlated with tumor infiltration,lymph node metastasis and TNM stage in gastric cancer,but not with gender,age,location,tumor size,or histological differentiation.In vitro experiments showed that PFN1knockdown inhibited the proliferation of SGC-7901cells through the induction G0/G1 arrest.Silencing PFN1 inhibited cell migration and invasion and downregulated the expression of matrix metalloproteinase(MMP)-2 and MMP9.Moreover,silencing PFN1 reduced the expression of integrinβ1 at the protein level and inhibited the activity of FAK,and the downstream effectors ERK1/2,P38MAPK,PI3K,AKT and m TOR.FN-promoted cell proliferation and metastasis via the integrinβ1/FAK pathway was ameliorated by PFN1silencing.CONCLUSION:These findings suggest that PFN1 plays a critical role in gastric carcinoma progression,and these effects are likely mediated through the integrinβ1/FAK pathway.