骨碎补提取液对成骨细胞增殖的影响

目的:观察骨碎补提取液对体外培养成骨细胞增殖的影响。方法:实验药物与体外培养成骨细胞共同培养3、5、7、10d后,分别采用免疫组化染色和放免法测定I型胶原蛋白和碱性磷酸酶的含量,检测成骨细胞的增殖情况。结果:骨碎补提取液对成骨细胞的增殖有促进作用,且和药物剂量有密切关系。1000mg/L的骨碎补提取液对成骨细胞有明显的促进作用,在1000~1500mg/L的浓度范围内,其促进作用随浓度升高而增加,并于1500~1600mg/L时达到最大效应。结论:骨碎补提取液对成骨细胞的增值分化有促进作用。     

中药双黄补对牙周病防治机制研究进展

双黄补由三种中药配伍制成,从促进牙周组织再生修复、抑制炎症反应、抗菌及抗内毒素等多方面发挥治疗效果,其中黄芩和黄连具有更明显的抗炎、抗菌作用,而骨碎补具有更好地促进牙周组织修复与再生的作用。三种药物相辅相成、联合作用,促进牙周病患者的痊愈,且因其是天然药物,无明显毒副作用,更易被患者接受。将双黄补开发、研制成各种剂型,通过不同作用途径用于防治牙周病或作为牙周基础治疗的辅助用药,具有广阔的应用前景。     

碱性成纤维细胞生长因子对培养的人牙周膜细胞增殖和分化的作用

目的 :观察人重组碱性成纤维细胞生长因子 (hu manbasicfibroblastgrowthfactor,hbFGF)对人牙周膜细胞(periodontalligamentcells,PDLC)增殖和分化的效应 .方法 :对hbFGF (5 0 μg·L-1 )刺激后 3,9,1 5和 2 1d的细胞进行计数 ,同时行HE和免疫组织化学染色 .结果 :hbFGF (5 0 μg·L-1 )可促进PDLC细胞生长 ,在培养的 3,9,1 5和 2 1d时 ,其细胞计数分别是 38× 1 0 3 ,80× 1 0 3 ,1 0 6× 1 0 3 ,99× 1 0 3 .但不改变PDLC的形态和生长方式 ;与对照组相比PDLC的ConA ,WGA凝集素受体表达无差异 .两组细胞均未出现钙化现象 .结论 :hbFGF可促进体外PDLC的增殖 ,本实验未发现hbFGF对细胞的促分化效应     

神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖的影响

目的 探讨神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)分别及联合作用对体外培养的人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖的影响.方法 体外培养人牙周膜细胞,与不同浓度的NGF、bFGF或NGF+bFGF作用,用噻唑盐(MTT)法观察PDLC增殖的情况.结果 不同浓度的NGF、bFGF都可促进人PDLC的增殖,这种促进作用呈一定的浓度依赖性.NGF与bFGF联合应用对人PDLC的增殖有协同作用,且与单独应用相比具有统计学差异.结论 NGF、bFGF都可促进人PDLC的增殖,且二者联合具有协同作用.     

壳聚糖胶原支架复合胰岛素样生长因子-1在牙周组织工程中的应用

目的:观察复合胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的壳聚糖胶原支架对体外培养的人牙周韧带细胞(PDLC)的影响,以探讨复合IGF-1的壳聚糖胶原支架在人PDLC增殖中的作用。方法:将体外培养PDLC接种于复合IGF-1的壳聚糖胶原支架上,通过MTT法测定对细胞增殖的影响,同时通过半定量PCR检测细胞mRNA合成变化。结果:PDLC在两种不同支架上的增殖及mRNA合成情况有显著性差异(P<0.5)。结论:该复合支架可以作为IGF-1的载体;复合在支架上的IGF-1对PDLC的粘附与增殖及细胞外基质的合成均有较好地促进作用。     

中药黄芩有效成分黄芩苷在牙周病防治中的实验研究

目的探讨中药黄芩有效成分黄芩苷在牙周病防治中的的临床应用。方法选取在本院就诊的100例牙周病患者进行治疗,随机分成两组,即LPS组、黄芩苷+LPS组,每组50例,另取无牙周病健康体检者50例作为对照,加入黄芩苷,即为黄芩苷组。其中黄芩苷的浓度为0.1μg/ml,LPS浓度为100μg/ml,三组在基本培养基的基础上加入相应的效应物质,采用细胞培养技术进行体外培养人牙周膜细胞(PDLC),应用噻唑盐比色测定法测定PDLC由脂多糖(LPS)介导增殖的时间效应,用流式细胞仪技术测定PDLC由LPS介导细胞周期的影响,比较三组之间的差异。结果经细胞培养,三组在酶标仪A490nm处检测,黄芩苷组OD值为(0.341±0.034),LPS组为(0.192±0.023),黄芩苷+LPS组为(0.249±0.026)。黄芩苷组与LPS组比较,t=27.2947,P<0.01;黄芩苷组与黄芩苷+LPS组比较,t=16.0786,P<0.01;黄芩苷+LPS组与LPS组比较,t=11.6109,P<0.01:各组OD值比较,差异均有显著统计学意义。结论对中药黄芩有效成分的研究可为牙周病的防治提供实验依据;桂西中医药材资源丰富,加工手艺简单,成本低,具有地方特色,中药黄芩有效成分的推广应用可带来良好的社会效益。     

5种中药体外抗白色念珠菌的实验研究

[目的]探索黄连、黄芩、黄柏、知母、甘草等5种中草药单独或两两配伍情况下对白色念珠菌的体外抑菌作用。[方法]采用水提醇沉法提取5种单味药及两两配伍药物的提取液,按倍比稀释法将药物提取液进行稀释,体外测定黄连等5种中草药单独及等比例两两配伍情况下对白色念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）。[结果]黄连、黄柏和黄芩单药提取液对白色念珠菌有较强的抑菌效果,其MIC分别为6.25 mg/ml、50 mg/ml和100 mg/ml。在配伍药物组中,黄连配伍其它药物的药物组均显示出了一定的抑菌效果。其中以黄连＋知母（MIC为6.25 mg/ml）和黄连＋黄柏（MIC为12.5 mg/ml）两个药物组抑菌效果最强。[结论]黄连、黄芩和黄柏三种中草药具有直接的抗白色念珠菌作用,其中尤以黄连的抑菌作用最为显著;而知母和甘草对白色念珠菌不具备明显的抑制作用。在两两配伍的中药提取液中以黄连配知母的药效最好。     

Experimental study on the effect of baicalin, the active ingredients of traditional Chinese medicine Scutellaria, in the prevention and control of periodontal diseases

目的 探讨中药黄芩有效成分黄芩苷在牙周病防治中的的临床应用.方法 选取在本院就诊的100例牙周病患者进行治疗,随机分成两组,即LPS组、黄芩苷+LPS组,每组50例,另取无牙周病健康体检者50例作为对照,加入黄芩苷,即为黄芩苷组.其中黄芩苷的浓度为0.1 μg/ml,LPS浓度为100 μg/ml,三组在基本培养基的基础上加入相应的效应物质,采用细胞培养技术进行体外培养人牙周膜细胞(PDLC),应用噻唑盐比色测定法测定PDLC由脂多糖(LPS)介导增殖的时间效应,用流式细胞仪技术测定PDLC由LPS介导细胞周期的影响,比较三组之间的差异.结果 经细胞培养,三组在酶标仪A490 nm处检测,黄芩苷组OD值为(0.341±0.034),LPS组为(0.192±0.023),黄芩苷+LPS组为(0.249±0.026).黄芩苷组与LPS组比较,t＝27.2947,P＜0.01;黄芩苷组与黄芩苷+ LPS组比较,t＝16.0786,P＜0.01;黄芩苷+LPS组与LPS组比较,t＝11.6109,P＜0.01:各组OD值比较,差异均有显著统计学意义.结论 对中药黄芩有效成分的研究可为牙周病的防治提供实验依据;桂西中医药材资源丰富,加工手艺简单,成本低,具有地方特色,中药黄芩有效成分的推广应用可带来良好的社会效益.     

骨碎补对人牙龈成纤维细胞增殖分化的影响

目的 探讨中药骨碎补对体外培养的人牙龈成纤维细胞增殖分化的影响.方法 将体外培养的人牙龈成纤维细胞与10×103、50×102、100×103、500×103与1000×10μg/mL浓度骨碎补共孵育后,测定碱性磷酸酶活性,将最佳浓度骨碎补作用于培养细胞,应用流式细胞仪检测细胞周期的改变.结果 在骨碎补各浓度范围内,实验组的OD值均高于对照组(P<0.05),且浓度为100 μg/mL时其碱性磷酸酶活性最高,G1期细胞减少,S期和G2M期细胞增多,增殖指数值高于对照组(P<0.05).结论 骨碎补在一定浓度范围内,使体外培养的人牙龈成纤维细胞的碱性磷酸酶活性增强,更多的细胞进入增殖状态.     

骨碎补提取物调节成骨细胞活性、增殖及相关基因表达的实验研究

目的:研究骨碎补提取物对成骨细胞活性、增殖及相关基因表达的影响。方法:取SD大鼠,分离并培养股骨内的成骨细胞,分为用0.02g/mL骨碎补提取物处理的骨碎补组以及用不含血清培养基处理的对照组;处理后24、36、48h时,采用CCK-8试剂盒测定成骨细胞的增殖活力,采用荧光定量PCR试剂盒测定成骨活性相关基因、增殖相关基因的mRNA表达量。结果:处理后24、36、48h时,骨碎补组成骨细胞的增殖活力值显著高于对照组;骨碎补组成骨细胞中Runx2、OPN、OCN、ALP、OPG、PI3K、AKT、EKR1/2、CyclinD1、CDK2、CDK4、E2F的mRNA表达量显著高于对照组。结论:骨碎补提取物能够促进成骨细胞增殖、增加成骨细胞的成骨活性,同时通过PI3K/AKT、ERK1/2信号通路加速细胞周期的进程。     

信号系统对骨骺干细胞增殖与分化调控作用的初步观察

目的 研究激活的Notch1信号系统对体外培养的骨骺干细胞增殖与分化的调控作用。方法向体外培养的骨骺于细胞中分别加入Notchl激活剂rhNF-kB和抑制剂γ-secretase inhibitorⅡ（MW167）,空白对照加PBS缓冲液。用RT-PCR、免疫组化、MTT、流式细胞仪、碱性磷酸酶染色和Western印迹方法检测。结果骨骺干细胞中有Notch1和Jagged1表达;与对照组相比,rhNF-kB诱导组表达PCNA、胶原Ⅱ蛋白明显增多,促细胞增殖作用明显（P=0．027）,并且进入分裂期（S期）的细胞增多（26．54％）,而MW167诱导组碱性磷酸酶、CollagenX蛋白表达明显增多,胶原Ⅱ蛋白及分化标志蛋白stathmin表达明显减少。结论当Notch信号系统被激活时,骨骺干细胞进行增殖;当Notch信号系统被抑制时,骨骺干细胞进行分化。     

血小板衍生生长因子-BB对人牙周膜细胞在牙根面上附着和生长的影响

目的:探讨血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)对人牙周膜(PDL)细胞在离体牙根面上附着、增殖的影响.方法:应用细胞计数法和扫描电镜观察法,观察在细胞因子作用下,离体正常和牙周病患牙根面上PDL细胞附着和增殖的情况.结果:无论是否加入PDGF-BB,PDL细胞在正常牙根面(N组)上的附着数量均明显多于病变(P组)根面(P＜0.01);与对照(C组)相比,PDGF-BB(S组)既能促进PDL细胞在正常根面的附着(P＜0.01),也能促进PDL细胞在牙周病变根面上的附着(P＜0.05).不加PDGF-BB时,PDL细胞在NC上的增殖率为80.0%,PC只有50%;加入PDGF-BB后,NS增殖率为249.4%,PS的增殖率为213.09%,与对照(C)组相比,PDGF-BB既能明显促进PDL细胞在正常根面的增殖(P＜0.01),又能显著提高PDL细胞在病变牙根面上的增殖(P＜0.01);扫描电镜下病变牙根面上生长的PDL细胞数量较少,形态细长,细胞的突起伸展不够充分,边缘皱缩,与根面附着较松散,经PDGF-BB作用后,细胞与根面的附着状态有所改善,较为紧密,数量有所增加.结论:PDGF-BB是一种有效的促PDL细胞生长的因子,可促进PDL细胞在牙根面的附着和增殖.     

熊果酸对活化型肝星状细胞NADPH氧化酶亚基p47Phox表达及ERK1/2信号通路活化的影响

目的 研究熊果酸（Ursolic acid ,UA）对瘦素诱导的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）NADPH氧化酶（NOX）亚基p47Phox及ERK1/2信号通路活化的影响,并观察细胞增殖及I型胶原合成情况。方法 将培养激活的HSC-T6细胞株分为6组：正常对照组不加任何药物;瘦素组给予重组大鼠瘦素(100ng/ml)刺激细胞;各干预组分别给予UA、JAK抑制剂AG490、NOX抑制剂DPI、ERK抑制剂PD98059预处理30min,再加入瘦素刺激不同时间。采用Western blotting检测细胞膜移位的p47Phox蛋白、细胞总的p47Phox蛋白和磷酸化的ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖;采用RT-PCR法检测I型胶原mRNA的表达。结果 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后细胞膜p47phox蛋白表达显著增高于正常对照组（0.68±0.09比0.44±0.11,P<0.01）,细胞内p-ERK1/2蛋白表达也随之增高（P<0.01）;UA、AG490及DPI干预后抑制了p47phox蛋白向细胞膜移位和细胞内ERK1/2蛋白磷酸化,PD98059抑制p47phox蛋白膜移位的作用较弱。瘦素刺激HSC-T6细胞12h后I型胶原的mRNA表达较正常对照组升高（P<0.01）,UA干预后I型胶原的mRNA表达明显低于瘦素组（0.57±0.18比1.02±0.5,P<0.01）,AG490、DPI及PD98059干预后I型胶原mRNA的表达均低于瘦素组（P<0.01）。瘦素刺激HSC-T6细胞12h、24h、48h后细胞增殖率高于正常对照组（均P<0.01）;UA、AG490、DPI及PD98059干预不同时间点的细胞增殖率均低于瘦素组（均P<0.01）,UA的抑制作用稍弱于DPI。结论：UA能抑制瘦素诱导的HSC-T6细胞增殖及I型胶原表达,机制可能与抑制NOX亚基p47phox向细胞膜移位及下游信号通路ERK1/2的激活有关。     

犬骨髓间充质干细胞体外培养及诱导成软骨特性初步研究

目的：观察月龄、来源部位对犬骨髓MSCs体外增殖能力及成软骨细胞分化能力的影响，对软骨组织工程种子细胞的选择提供参考。方法：体外分离、培养4月龄、12月龄Beagle犬髂骨和胫骨骨髓中的MSCs，向软骨细胞诱导分化。依靠形态学观察、原代集落生成率、MTT法测生长曲线等方法观察各组MSCs的增殖能力，通过GAG含量、Ⅱ型胶原免疫组化比较诱导成软骨细胞效果。结果：4月龄犬髂骨与胫骨来源MSCs体外增殖特性及诱导成软骨细胞特性比较差异无统计学意义；12月龄犬髂骨组MSCs较胫骨组原代融合时间短、集落生成率高、生长曲线左移，但成软骨细胞特性无差异。相同部位比较，4月龄来源MSCs均较12月龄表现出较高的增殖能力和成软骨细胞分化能力，差异具有统计学意义。结论：成年犬不同部位来源MSCs增殖能力不同，分化能力相同；幼龄犬MSCs增殖、分化能力均高于成年犬。     

鹿茸Ⅰ型胶原对骨髓间充质干细胞增殖的影响及其与Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达的关系

目的：观察鹿茸Ⅰ型胶原（VACTⅠ）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖及细胞周期的影响，探讨其与Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达的关系。方法：选取健康雄性4周龄SD大鼠，差时贴壁法提取BMSCs并传代培养。实验分为空白对照组、转化生长因子β3（TGF-β3）（10μg·L^-1）组和不同浓度（1.25、2.50、5.00、10.00和20.00 g ·L^-1）VACTⅠ组，CCK-8法检测各组BMSCs增殖率，ELISA法检测各组细胞上清液中骨形态生成蛋白4（BMP-4）和转录因子Sox9水平，流式细胞术检测各组不同细胞周期BMSCs百分率，RT-PCR法和Western blotting法分别检测各组细胞中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA和蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较，2.50~20.00 g·L^-1 VACTⅠ组大鼠BMSCs增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01）；ELISA法，与空白对照组比较，TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组细胞上清液中BMP-4和Sox9水平明显升高（P<0.05或P<0.01）；流式细胞术，与空白对照组比较，TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组不同细胞周期BMSCs百分率差异无统计学意义（P>0.05）；RT-PCR法，与空白对照组比较，TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组细胞中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA表达水平明显升高（P<0.05）；Western blotting法，与空白对照组比较，TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：VACTⅠ可促进BMSCs释放BMP-4和Sox9，提高Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达水平，抑制BMSCs增殖，是一种潜在的成软骨分化诱导剂。     

熊果酸对小鼠成牙骨质细胞系OCCM-30细胞分化的促进作用

目的：探讨熊果酸对小鼠成牙骨质细胞系OCCM-30细胞分化的影响,为牙根吸收的修复提供理论依据。方法：将对数生长期的OCCM-30细胞分为对照组和不同浓度熊果酸组。其中熊果酸组OCCM-30细胞以3种浓度（0.625、1.250和2.500 μmol·L^-1）的熊果酸处理,对照组不做任何处理。采用MTT法检测不同时间点（24、48和72 h）各组OCCM-30细胞增殖抑制率,碱性磷酸酶（ALP）法检测细胞体外分化和矿化情况,实时定量PCR法检测24h内骨桥蛋白（OPN） mRNA表达水平,Western blotting法检测给药3和5 d时OPN蛋白表达水平。结果：不同浓度熊果酸组与对照组OCCM-30细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,2.500μmol·L^-1熊果酸组熊果酸处理3、5和7 d后,OCCM-30细胞中ALP活性明显升高（P<0.05）,不同浓度熊果酸组OCCM-30细胞中OPN mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：一定浓度熊果酸对小鼠成牙骨质细胞系OCCM-30细胞增殖无明显抑制作用,但可促进其分化并上调OPN mRNA和蛋白表达水平。     

中药马勃对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

［摘 要］ 目的：中药马勃作用于体外培养大鼠皮肤的成纤维细胞,观察大鼠成纤维细胞增殖及胶原合成的能力,探讨马勃有效组分在细胞水平上促皮肤患处愈合的作用机制。方法：运用体外细胞培养技术对新生大鼠乳鼠皮肤的成纤维细胞进行培养,实验分为对照组（不给药组）和马勃有效组分37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L组;实验组于传代培养24 h后加入不同浓度的药物,继续培养24、48、72 h后收集细胞。采用MTT比色法测定细胞增殖,生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法测定细胞胶原含量。结果：与对照组比较,37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L实验组的成纤维细胞增长率和成纤维细胞胶原合成能力均显著性升高（P＜0.01）。在药物作用时间方面,与对照组比较,在24、48和72 h观察细胞增殖率和胶原合成能力均显著增强,72 h最强,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：在不同剂量马勃有效组分作用下,大鼠成纤维细胞活化增殖,胶原合成的能力增强。     

通心络对大鼠胚胎神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨不同剂量通心络含药血清对大鼠胚胎神经干细胞增殖和分化的影响及其可能作用机制.方法 自E12～14大鼠胚胎中分离、培养神经干细胞,添加不同剂量通心络含药血清干预,在干预后不同时段通过免疫荧光双标观察含药血清对大鼠胚胎神经干细胞增殖和分化的影响.结果 大鼠胚胎神经干细胞经通心络含药血清干预后,Nestin( )细胞比例先下降后回升,β-tubulin( )细胞比例3 d与7 d时与对照组相比有显著性差异;7 d时大剂量组β-tubulin( )细胞比例与小剂量组相比有显著性差异.结论 通心络可以促进大鼠胚胎神经干细胞的增殖及向神经元分化,大剂量组效应更明显及持久.     

表面修饰对纳米晶胶原基骨细胞相容性的影响

目的:探索纤维蛋白(fibrin,FB)修饰的纳米晶胶原基骨(nanoHydroxyapatite/collagen,nHAC)支架材料上成骨诱导的骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)黏附、增殖及分化的情况。方法:实验分为两组:实验组,纤维蛋白修饰的纳米晶胶原基骨(FB-nHAC);对照组,单纯的纳米晶胶原基骨(nHAC)。将SD大鼠骨髓间充质干细胞定向诱导为成骨细胞,种植于支架材料上,体外复合培养。通过检测支架材料的细胞黏附率、不同时间点(3,7,10,14 d)支架材料中细胞数、碱性磷酸酶表达量以及扫描电镜观察细胞在支架材料上的生长状况,比较分析不同支架材料与细胞生物相容性差异。结果:大鼠MSCs经诱导培养14 d后,I型胶原免疫荧光染色为阳性;实验组支架材料的细胞黏附率显著高于对照组(P<0.05);且相同时间点实验组支架材料中的细胞数及碱性磷酸酶表达量也明显高于对照组(P<0.05);电镜观察发现两组材料上均有细胞生长,但实验组的细胞生长状况明显好于对照组。结论:表面修饰纤维蛋白后的nHAC支架材料具有更好的细胞黏附、增殖及促成骨分化能力。     

衰老和缺氧对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨衰老及缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌(PASMCs)增殖的影响。方法 将细胞分为年轻常氧组、老年常氧组、年轻缺氧组、老年缺氧组。应用MTT比色法、^3H-TdR掺入法、流式细胞术、免疫组化方法检查细胞的增殖情况。结果 同年轻组比较，老年组PASMCs的生长曲线明显抬高，^3H-TdR掺入明显增加，进入有丝分裂期的细胞比例明显增加，总蛋白量减少，增殖细胞核抗原(PCNA)增加；同常氧组比较，缺氧组PASMCs的生长曲线明显抬高。^3H-TdR掺入先受抑制，后明显增加，进入有丝分裂期的细胞比例明显增加，总蛋白量减少，PCNA增加。结论 衰老和缺氧部能直接刺激平滑肌细胞的增殖．衰老的平滑肌细胞受缺氧刺激增殖最为明显。