亲和层析法提纯甲胎蛋白

利用抗人ＡＦＰ多抗亲和层析和抗人ＡＦＰ大鼠单抗亲和层析，从人脐带血和ＡＦＰ阳生肝癌病人腹水中提纯ＡＦＰ，多抗亲和层析纯化ＡＦＰ的回收率为３６％，单抗亲和层析回收率为６０％。两法提纯的ＡＦＰ产物与抗正常人血清抗体在对流免疫电流和双向琼脂扩散中无沉淀线出现，与人ＡＦＰ多抗出现明显的沉淀线，在免疫电泳中两法提纯的ＡＦＰ与抗ＡＦＰ出现沉淀线与抗正常人血清不出现沉淀线，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示一条分子量约６８     

亲和层析法纯化尿激酶

目的研制尿激酶的纯化工艺,为临床尿激酶制剂提供原料。方法以琼脂糖凝胶为载体,对氨基苯甲脒为配基,采用亲和层析法纯化尿激酶。结果尿激酶活性回收率62．96％,精制品纯化4．03倍。结论该方法特异性强,纯化效果好,酶活性回收率高,可作为尿激酶纯化的一种有效方法。     

亲和层析法纯化溶栓素

目的 :探讨亲和层析纯化溶栓素的方法。方法 :采用高碘酸钠法制备溶栓素抗体的亲和层析介质纯化溶栓素。结果 :提纯的溶栓素经聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( PAGE)鉴定为一条带 ,活性回收率为 49.5 %。结论 :亲和层析的高碘酸钠法是纯化溶栓素的一种分离速度快、特异性强、经济、安全可靠的方法 ,并适合于大规模纯化     

亲和层析法纯化大鼠单克隆抗体

1986年我国引进Lou大鼠杂交瘤体系获得成功。此体系技术方法与小鼠的相同,但单抗(McAb)腹水产量高,具有独特的亲和层析纯化McAb方法。该纯化法简便易行,能较好解决宿主蛋白污染问题。其原理如下:(1)大鼠免疫球蛋白(Ig)轻链95％为Kappa型(K型);(2)K轻链恒定区有两个不同个体基因型(1a、b),定位稳定,这二种鼠完全组织相容。将分泌IgK-1a型McAb杂交瘤接种IgK-1b型鼠腹腔生产腹水。利用小鼠抗大鼠IgK-1a型的McAb与CNBr-Sepharose 4B交联制成亲和层析柱,即可纯化IgK-1a型McAb。鉴于95％Ig为K型,绝大多数McAb得到回收。此体系反之亦然。     

亲和层析法纯化大鼠单克隆抗体

我们承担了“大鼠杂交瘤技术的建立及应用的研究”,已初步获得了成功。大鼠杂交瘤体系具有诸多优点,为小鼠杂交瘤体系的良好补充。其快速特异,简便易行的单克隆抗体(McAb)提纯方法,是明显优于小鼠的特点之一。纯化原理为Lou大鼠免疫球蛋白(Ig)轻链95％为Kappa型,其K轻链恒定区有二个不同个体基因型(1a、1b),定位稳定,二种鼠完全组织相容。利用小鼠抗Lou大鼠K-1a型轻链McAb     

免疫亲和层析法分离纯化人胎盘芳香族硫酸酯酶B

<正> 芳香族硫酸酯酶B(EC3.1.6.1,以下简称ASB)是一种溶酶体硫酸酯酶,它催化N-2酰氨基半乳糖-4-硫酸的脱硫酸反应。ASB的分离纯化分二步进行。第一步按经典方法纯化,其纯化倍数为15000倍,回收率为5.3％,PAGE电泳呈显一条带,SDSPAGE电泳呈显八条带。第二步用第一步纯化的ASB免疫家兔制备免疫亲和层析柱,然后经过6500×g离心,ConA-Sepharose层析,免疫亲和层析,     

两步亲和层析法纯化HBsAg的实验报告

目前,用于纯化HBsAg的方法较多,如盐析、凝胶过滤、超速离心以及单纯亲和层析等方法,但不易达到免疫纯,有的设备亦较复杂。利用羊抗HBs抗体制成的亲和层析柱从HBsAg阳性人血清中纯化HBsAg,再用羊抗人r球旦白亲和层析柱吸收HBsAg溶液中尚存的正常人旦白,可获得活性好的免疫纯HBs Ag,用于免疫动物,亦可获得较理想的抗HBs抗体。     

用亲和层析法纯化牛精浆蛋白

目的：从牛精浆中纯化牛精浆（BSP）蛋白。方法：利用盐析及亲和层析等方法对BSP蛋白进行纯化。结果：用Gelatin-Sephorase4B亲和胶纯化出一个蛋白峰,经电泳及氮基础测序证实为BSP－A1／－A2蛋白。结论：用市售Gelatin-Sephorase4B亲和胶可方便的纯化出BSP－A1／A2蛋白。     

用亲和层析法纯化胰弹性蛋白酶

本文提供了一种纯化胰弹性蛋白酶的特异、简便方法。经 AmberliteCG-50树脂初步分离的胰弹性蛋白酶,通过弹性蛋白——纤维素亲和柱,一次精制,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳纯弹性蛋白酶。     

用亲和层析法纯化人精浆蛋白

【目的】用亲和层析法从增生的前列腺组织中纯化人精浆蛋白(-γseminoprotein,-γsm)。【方法】采用超声波粉碎、NP-40提取与两种免疫亲和层析相结合[抗人精浆蛋白单抗(E4B7mAb)亲和层析和蛋白A亲和层析]的新提纯方案,获得了高纯度-γsm抗原。【结果】所纯化的-γsm蛋白经ELISA双抗夹心法和免疫印迹分析检测证明,用此法从增生的前列腺组织中分离到-γsm抗原,而且纯化的-γsm具有生物活性。【结论】这种方法的建立将为分离-γsm抗原提供一种有效途径,为抗精浆蛋白基因工程抗体的研究提供良好的抗原保证。     

以单克隆抗体的抗体纯化单克隆抗体——一种改进的免疫吸附亲和层析法

用盐析和离子交换层析获得的胎儿甲种球蛋白的单克隆抗体制备免疫血清,再分离其中的免疫球蛋白并以之制备免疫吸附柱来分离和纯化胎儿甲种球蛋白的单克隆抗体。这种方法具有下述优点:1)作为抗原的单克隆抗体可以用腹水法或组织培养法大量生产;2)专一性更强,可以分离出针对不同抗原决定簇的单克隆抗体。     

亲和层析法提取纯化人心肌肌钙蛋白Ⅰ

目的研究出一种提纯人心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）的简便方法。方法将兔骨骼肌肌钙蛋白C（sTnC）与经溴化氰活化的Sepharose 4B凝胶偶联,制成sTnC亲和层析柱。人心肌经匀浆、离心后,上清液上sTnC亲和层析柱,洗脱后可获得cTnⅠ纯品。结果SDS-PAGE得到一条电泳带,其分子量为25kD。Western blot结果表明,提纯的cTnⅠ可被cTnⅠ单克隆抗体特异性识别。cTnⅠ试产率为82．6mg／100g人心肌。结论亲和层析法提高了cTnⅠ的产率,为下一步cTnI体外诊断的研究工作打下基础。     

原核表达融合蛋白的亲和层析法纯化

目的 :以T7·TagAffinityPurificationKit纯化原核表达Tropic 180 8基因编码的融合蛋白 ,并进行免疫印迹检测。方法 :以 0 .4mmol/LIPTG诱导含pET -2 1a -180 8重组质粒的BL2 1(DE3)大肠杆菌 ,T7·TagAffinityPurifica tionKit纯化菌体上清液 ,SDS -PAGE分析 ,将SDS -PAGE蛋白区带转移至NC膜进行免疫印迹检测。结果 :外源性Tropic 180 8基因在大肠杆菌中表达的融合蛋白可经T7·TagAffinityPurificationKit进一步纯化 ,纯化后的蛋白为单一条带 ,分子量约为 32 .0kDa ,其免疫印迹反应结果提示该蛋白为Tropic 180 8基因编码的融合蛋白。结论 :在大肠杆菌中表达的融合蛋白可以免疫亲和法进行纯化和鉴定。     

亲和层析法提取纯化人心肌肌钙蛋白I

目的 研究出一种提纯人心肌肌钙蛋白I (cTnI)的简便方法.方法 将兔骨骼肌肌钙蛋白C (sTnC)与经溴化氰活化的Sepharose 4B凝胶偶联,制成sTnC亲和层析柱.人心肌经匀浆、离心后, 上清液上sTnC亲和层析柱,洗脱后可获得cTnI纯品.结果 SDS-PAGE得到一条电泳带,其分子量为25 kD.Western blot结果表明,提纯的cTnI可被cTnI单克隆抗体特异性识别.cTnI产率为82.6 mg/100 g人心肌.结论 亲和层析法提高了cTnI的产率,为下一步cTnI体外诊断的研究工作打下基础.     

两种亲和层析法纯化白桂木凝集素的比较

分别采帮人血清γ球蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析及半乳糖－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ亲和层析来分离纯化白桂木凝集素。结果：两种方法提取的ＡＨＬ在纯度，凝集活力及回收率上均无明显差别。     

柱层析法分离与纯化心磷脂

目的 建立提取、分离和纯化心磷脂的研究方法。方法 将新鲜猪心制作为肌匀浆，从中提出总脂类，分离出丙酮沉淀物，制备为酸性磷酸脂钙盐，上样于硅胶Ｇ层析注，用洗脱液进行洗脱，分部收集洗脱液，作薄层层析，合并Ｒｆ值为０．８３的洗脱液，减压浓缩即为纯化的心磷脂。结果 薄层层析鉴定心磷脂显色呈单一斑点，其Ｒｆ值与参照物的值一致，每１００ｇ新鲜猪心可获４．５０ｍｇ纯化的心磷脂。结论 本研究是一种简便、有效的分离     

离子交换层析法分离纯化人肝醇脱氢酶

实验样品取自健康青年死后4～6小时的肝脏,置二倍体的 pH7.6磷酸盐缓冲液(PBS),0℃下匀浆、离心。上清液通过DEAE-Cellulose 柱,用 pH7.6 PBS 及 NaCl     

应用Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化单克隆抗体

目的：纯化单克隆抗体（ 单抗,ＭｃＡｂ） 。方法：应用Ｐｒｏｔｅｉｎ ＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ４Ｂ制备免疫亲和层析柱,纯化载脂蛋白（Ａｐｏ）Ｅ４、ＡｐｏＥ６、抑制素（ｉｎｈｉｂｉｎＩＮＨ）α、βＡ、βＢ５ 种ＭｃＡｂ。结果：ＭｃＡｂ 纯化后电泳呈一条带,并有较好的免疫活性。结论：应用蛋白Ａ亲和层析法可以纯化ＭｃＡｂ。     

亲和层析法纯化尿胰蛋白酶抑制剂及部分性质研究

UTI(Urinary Trypsin Inhibitor)是一种单链多肽糖蛋白,含糖量10％左右,等电点2至3,具有耐热性,是一个极性很强的蛋白质。