RNA干扰技术研究新进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA介导的序列特异的基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达,具有高效性和高特异性的特点.小干扰RNA(small interfering RNA 或 short interfering RNA,siRNA)是RNAi作用中的效应分子,作为引导序列,按照碱基互补原则识别靶基因转录出的信使RNA(mRNA),并引导沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)复合体结合mRNA.     

RNA干扰及其在药用植物代谢工程中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是把双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)导入某些生物和细胞而引起同源mRNA降解的现象,是一种转录后基因沉默机制。dsRNA在体内被Dicer二聚体切割成21～25bp的小干涉RNA(smallinterfering RNA,siRNA),然后在siRNA引导下,由RNA诱导沉默复合体(RN Ainduced silencing complex,RISC)降解靶mRNA。RNA干扰作为一种新型反义技术可以有效的抑制特异基因的表达,因此可用于对药用植物次生代谢产物的生物合成途径进行调控,达到调控天然产物生物合成的目的。现将RNAi机制研究的最新进展及RNAi在药用植物代谢工程方面的应用进行综述。     

慢病毒载体介导RNAi的研究进展

一、慢病毒及慢病毒载体 目前RNAi技术作为一种主要的分子生物学研究手段,被广泛应用于特异性抑制基因的表达研究.RNAi的作用机制表明:双链RNA分子首先被细胞内RNA酶Dicer降解成21～23个碱基大小的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),siRNA结合一个核酶复合物形成RNA诱导沉默复合物(RNA-in-duced silencing complex,RISC),RISC通过碱基配对定位到有同源序列的mRNA上,并在特定位置切割该mRNA,从而抑制该同源基因的表达[1].siRNA被认为是RNAi的主要效应物.     

RNA干扰及其在喉鳞癌研究中的应用

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是指一种双链RNA（double-stranded RNA,dsRNA）分子在mRNA（messenger RNA）水平关闭相应序列基因的表达后,使其沉默或表达下调,从而达到抑制某种特定基因表达的目的,是一种序列特异性的转录后基因沉默。RNA干扰主要通过双链RNA被核酸酶切成21～23个小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）,这种siRNA与细胞源性的某些酶和蛋白质形成RNA诊导的沉默复合体,由此复合体介导使与双链RNA同源序列的信使RNA被降解,抑制基因表达;     

RNA干扰及其在医学研究中应用的进展

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的,序列特异的基因沉默现象。小干扰RNA(siRNA)是RNAi作用中的效应分子。RNAi技术作为新兴的基因阻断技术具有明显优势,已经广泛地应用于基因功能研究、抗病毒感染和抗肿瘤等热门领域。现就RNAi作用机制、siRNA的制备、设计及RNAi技术在医学研究中应用做一综述。     

RNA干扰技术在肝癌研究中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种广泛存在的,由外源或内源性的双链RNA(double strands RNA,dsRNA)诱发的同源mRNA特异性沉默,进而抑制其相应基因表达的过程.小片段干扰RNA(small interference RNA,siRNA)技术在沉默癌基因、抑制抗凋亡癌基因、减少过度表达的生长因子和受体、抗血管生成、抑制肝癌细胞化疗耐药、降低肝癌细胞的侵袭转移能力等方面均取得了可喜的研究成果,部分研究已从体外试验过渡到体内试验,为肝癌的临床治疗奠定了基础.但在这一技术广泛应用于临床前,仍存在一些问题,需要进一步的研究.     

HDAC2 siRNA转染对人胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨RNA干扰沉默组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)基因表达对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 培养人胰腺癌PaTu8988细胞株,并将其随机分为5组:空白对照组,20 nmol／L HDAC2 siRNA阴性组,40 nmol／L HDAC2 siRNA阴性组,20 nmol／L HDAC2 siRNA组,40 nmol／L HDAC2 siRNA组。合成针对HDAC2基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),利用阳离子脂质体将HDAC2 siRNA瞬时转染人胰腺癌PaTu8988细胞,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测HDAC2基因及蛋白的表达;MTT比色法检测细胞的增殖率;流式细胞术测定细胞凋亡率。结果: 与空白对照组和阴性siRNA 组对比,HDAC2 siRNA组的HDAC2基因和蛋白的表达水平均明显下降(P均<0.05),细胞增殖率减慢(P<0.01),凋亡率明显升高(P<0.01)。结论: 采用RNA干扰沉默人胰腺癌细胞HDAC2基因表达,可抑制癌细胞增殖和诱导其凋亡。     

siRNA敲除STAT3基因对结肠癌HCT116细胞侵袭的抑制

目的:了解RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的可能作用.方法:根据STAT3基因特点,设计合成STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并转染人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3mRNA,采用软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,采用Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭能力.结果:STAT3 siRNA可有效抑制结肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关.结论:STAT3 siRNA可抑制结肠癌细胞的侵袭.     

RNA干扰沉默中期因子基因表达诱导肝癌细胞凋亡

目的:探讨RNA干扰(RNA interference)沉默中期因子(midkine,MK)基因表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:根据中期因子基因mRNA序列特点,设计合成中期因子基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染肝癌SMMC 7721细胞后,分别以实时定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中期因子表达情况,分别通过检测caspase-3活性和琼脂糖凝胶电泳方法了解肝癌细胞凋亡,以软琼脂集落培养试验检测对各组细胞增殖的影响.结果:中期因子siRNA可有效抑制肝癌细胞中期因子 mRNA和蛋白水平.转染组肝癌细胞caspase-3活性增高,呈浓度和时间依赖性;转染组出现明显的DNA条带.中期因子转染组细胞增殖受到明显抑制,且呈浓度依赖性.结论:采用RNA干扰沉默肝癌细胞中期因子基因表达,可抑制癌细胞增殖和诱导凋亡.     

可递送siRNA的非病毒纳米载体的设计

RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术可让不同水平的基因沉默,主要是通过双链RNA（dsRNA）在体内诱导靶基因mRNA产生特异性降解而实现的。小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）是RNAi的效应分子,需要借助递送载体进入细胞内发挥治疗作用。纳米载体具有很多优势：增加生物膜通透性、控制药物释放速度、改变体内分布、提高生物利用度等。本文综述了siRNA非病毒递送载体的相关研究,重点阐述了其结构和生物学特征。     

组织蛋白酶L基因的RNA干扰真核表达载体的构建

目的:构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的RNA干扰真核表达载体.方法:根据GenBank数据库提供的CTSL基因核苷酸序列,设计并化学合成4对双链小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA),瞬时转染卵巢癌细胞系A2780细胞,通过半定量RT-PCR检测各转染细胞CTSL表达筛选一个有效的siRNA序列.设计并合成能表达其小发卡结构RNA(Small hairpin RNAs, shRNA)的DNA序列,并与psilence4.1-CMV-neo质粒定向连接,构建真核表达载体,DNA测序进行鉴定,并通过半定量RT-PCR验证其干扰效果.结果:构建CTSL的RNA干扰真核表达载体psilence4.1-CMV-neo-CTSL,经DNA测序证实与设计完全一致,通过半定量RT-PCR证实其能够沉默A2780细胞的CTSL基因表达.结论:CTSL基因RNA干扰真核细胞表达载体构建成功.     

siRNA反向转染法提高原代悬浮细胞转染效率的应用

RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)进入细胞后,按照碱基互补配对原则与靶mRNA完全互补配对,进而引发靶mRNA的降解、抑制靶基因的表达.     

微小RNA在肾脏及其相关疾病中的调控作用

微小RNA(miRNA)是细胞内源性的一种非编码的RNA,可表达出原始miRNA转录物(pri-miRNA),较大的primiRNA经一种RNA内切酶Ⅲ(Drosha)和辅助因子Pasha(含有双链RNA结合区域)加工成单链miRNA前体,随后具有发卡结构的单链miRNA前体在细胞质中被双链RNA专一性RNA内切酶(Dicer)切割成约22 nt的miRNA.成熟的miRNA中的一条单链与RNA诱导的沉默复合体(RNAinduced silencingcomplex,RISC)结合,形成RISC复合体.通过与靶基因mRNA的3'非翻译区(3'UTR区域)的碱基完全或不完全配对,导致mRNA降解或mRNA翻译抑制,即转录后基因沉默[1].     

RNAi技术在肿瘤基础研究中的应用

RNA干扰（RNAi）是内源性或外源性小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）引起的同源mRNA降解的细胞反应,自发现之初即成为科学研究的热点。至今短短十年的时间,RNAi技术已成为一种成熟的基因沉默工具,对生命科学研究产生了深远的影响。由于siRNA对目的基因的高度特异和高效率的抑制作用,使RNAi技术成为实验室用作基因沉默的常规技术,用于研究基因表达及调控,信号传导通路,药物的作用机制,肿瘤的临床治疗等诸多领域中,下面仅对其在肿瘤基础研究中的应用作一总结。     

分子生物学在心力衰竭研究领域中的应用

心力衰竭的病理生理机制目前仍不清楚.随着分子生物学技术的迅速发展,拓展了心力衰竭的研究空间.本文对微小RNA(microRNA,miRNA)芯片、小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)、原位检测技术(如激光共聚焦技术)及蛋白质组学技术在心力衰竭中的研究进展作一介绍.     

小干扰RNA的设计

小干扰RNA（siRNA）是产生RNA干扰的功能分子,在作为基因研究工具和治疗药物方面具有广泛的前景。为了最有效地沉默靶基因并减少脱靶效应,需对siRNA进行精确设计。本文从提高siRNA的沉默效率、降低siRNA的序列特异性和非序列特异性脱靶效应、siRNA进入RNA诱导沉默复合物时的序列选择倾向性、化学修饰的种类和位点选择策略、靶序列的位置和结构选择等几个方面提出并分析了设计siRNA时需要遵循的原则。     

RNA干扰对HL-60白血病细胞株WT1基因表达的抑制作用

目的 研究RNA干扰(RNA interference, RNAi) 对白血病细胞株WT1 基因表达的抑制作用.探讨WT1小干扰RNA在白血病治疗中的应用.方法 设计制备多对针对WT1基因的小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA),转染HL-60人白血病细胞株,采用RT-PCR法测定WT1 mRNA 的表达,Western blot 测定WT1 蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 siRNA 后WT1 mRNA与蛋白的表达强度分别为(23.62±1.28)%和(23.20±1.04)%,和对照组比较有显著性差异(P＜0.05);在WT1表达受到抑制的同时,HL-60细胞的凋亡率为(13.72 ±1.33)%,和对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 siRNA能有效抑制HL-60细胞中WT1基因的表达,增加细胞凋亡.     

小分子RNA干扰技术及其抗肿瘤作用研究进展

RNA干扰是一种由双链RNA介导的基因沉默现象,现已成为生物学领域研究的热点。RNA能特异性抑制同源基因的表达,尤其在抗肿瘤方面,已经得到了深入的研究。小分子RNA主要包括siRNA、miRNA和piRNA 3类,表现出截然不同的作用效果,为人类在治疗恶性肿瘤时提供了很有潜力的方向。但还存在特异性和介导率较低和毒副作用的问题,值得进一步深入研究。