自拟更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠卵巢细胞凋亡相关因子的影响

目的探讨自拟更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠卵巢组织形态学及卵巢颗粒细胞凋亡因子bax、bax mRNA、bcl-2、bcl-2 mRNA的影响。方法选用自然老化的围绝经期雌性SD大鼠,臀部肌肉左右交替肌注氢化可的松构建肾阳虚型围绝经期大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为更年汤组、教材方组、利维爱组、生理盐水组;另选择4月龄SD雌性大鼠20只作为青年组,18月龄SD雌性大鼠20只作为老年组。青年组、老年组、生理盐水组均给予生理盐水灌胃,各给药组给予相应药物灌胃,灌胃15 d后处死大鼠,分离摘取双侧卵巢,运用病理切片观察卵巢组织大体形态,运用免疫组化及原位杂交法检测卵巢颗粒细胞凋亡因子bax、bax mRNA、bcl-2、bcl-2 mRNA表达情况。结果各给药组卵泡发育良好情况优于老年组和生理盐水组(P均0.05),卵泡闭锁、卵泡扩张情况轻于老年组和生理盐水组(P均0.05);自拟更年汤组与利维爱组卵泡发育良好情况优于教材方组(P均0.05),自拟更年汤组与利维爱组比较差异无统计学意义(P0.05);自拟更年汤组卵泡闭锁、卵泡扩张情况轻于教材方组和利维爱组(P均0.05),教材方组与利维爱组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。各给药组bax、bax mRNA阳性表达明显低于老年组和生理盐水组(P均0.05),bcl-2与bcl-2 mRNA阳性表达明显高于老年组和生理盐水组(P均0.05);自拟更年汤组与利维爱组bax、bax mRNA阳性表达明显低于教材方组(P均0.05),bcl-2与bcl-2 mRNA阳性表达明显高于教材方组(P均0.05),自拟更年汤组bax、bax mRNA、bcl-2、bcl-2 mRNA阳性表达与利维爱组比较差异无统计学意义(P均0.05)。结论自拟更年汤能促进卵泡发育,抑制卵泡闭锁和扩张,能上调卵巢颗粒细胞抑制凋亡因子bcl-2、bcl-2 mRNA的阳性表达,抑制促凋亡因子bax、bax mRNA的阳性表达。     

更年宁神汤对围绝经大鼠卵巢颗粒细胞caspase-3蛋白的影响

目的探讨更年宁神汤对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞caspase-3蛋白的影响。方法选用雌性wister大鼠40只,月龄13~15月,随机分为4组:模型组、更年宁神汤高剂量组、更年宁神汤低剂量组、西药利维爱组,每组各10只。另选5月龄、体质量(180±20)g的雌性wister大鼠10只作为青年对照组。中药高剂量组灌服更年宁神汤5.68 g/(kg.d),中药低剂量组更年宁神汤1.42 g/(kg.d),围绝经期模型组灌服等量生理盐水,西药对照组每日灌服3mL西药利维爱溶液0.26 mg/(kg.d),连续治疗4周。采用免疫组织化学法及Westernblot方法检验各组大鼠卵巢颗粒细胞caspase-3蛋白的表达。结果模型组大鼠卵巢中caspase-3蛋白表达高于青年对照组,治疗组caspase-3蛋白表达水平较模型组降低,更年宁神汤高剂量组、利维爱组大鼠卵巢中caspase-3蛋白表达低于模型组差异显著;中药高剂量组与中药低剂量组比较有统计学意义;中药高剂量组与利维爱组比较比较,差异无统计学意义。结论更年宁神汤治疗围绝经期综合征的机制可能是通过抑制卵巢颗粒细胞分泌caspase-3凋亡因子,延缓卵巢衰老,疗效与利维爱相当。     

针刺对围绝经期大鼠卵巢形态学及血清E2的影响

目的:观察针刺对围绝经期大鼠卵巢形态学及血清雌二醇(E2)的影响。方法:围绝经期大鼠随机分为空白对照组、针刺组、药物组,并与青年大鼠对照,应用光镜和电镜观察大鼠卵巢组织形态学变化,放射免疫分析法检测大鼠血清E2含量。结果:与围绝经期大鼠比较,针刺治疗后,血清E2含量增高;卵巢卵泡数量增多,闭锁卵泡减少;凋亡颗粒细胞减少,颗粒细胞内线粒体丰富,内质网丰富,胞质内有脂滴。结论:针刺可部分改善卵巢形态及分泌雌激素的功能。针刺可能通过延缓围绝经期大鼠卵巢衰退,抑制颗粒细胞凋亡,减少卵泡闭锁达到使E2含量增多的作用。     

不同时期电针干预对围绝经期综合征大鼠耐热能力的影响

目的:探讨电针对围绝经期综合征大鼠耐热能力的影响及干预的合理时机。方法:建立大鼠去卵巢模型,分为5个不同电针干预时期,观察不同时期电针对围绝经期综合征大鼠耐热能力的影响。结果:电针能够提高围绝经期综合征大鼠的耐热能力,以造模前7天组、模后1天组、模后8天组、模后15天组差异显著。结论:从耐热能力的角度出发,电针干预围绝经期综合征大鼠以预防和早期治疗较为重要。     

针刺对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的从细胞凋亡角度研究针刺治疗围绝经期综合征的作用机制。方法将围绝经期大鼠随机分为围绝经期组、针刺组和药物组,并设青年对照组。围绝经期组大鼠不治疗,作为空白对照;针刺组大鼠针刺肾俞、足三里、三阴交治疗;药物组大鼠采用更年安药物治疗;青年对照组大鼠不治疗。应用原位杂交法检测卵巢颗粒细胞Fas、Bcl-2 mRNA表达,并进行图像分析。结果与青年对照组比较,围绝经期组大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达明显升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.01);针刺治疗后围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达明显降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达明显提高(P<0.01)。结论针刺能够下调围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达。     

围绝经期卵巢衰老的中医药研究

"围绝经期"是世界卫生组织1994年通过讨论而用以代替"妇女更年期"的.这一时期是卵巢功能逐渐衰退至完全消失的过渡时期,是困扰妇女的一种常见疾病,属于中医学"经断前后诸证"范畴.     

四物合剂对化疗后大鼠卵巢形态及颗粒细胞凋亡的影响

目的:探讨四物合剂对化疗所致卵巢储备功能下降的大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法:以40只雌性SD大鼠为研究对象,随机分为正常对照组(正常组)、顺铂模型组(模型组)、四物合剂组(四物组)和倍美力组,每组各10只.模型组、四物组和倍美力组连续7d腹腔注射顺铂2mg·kg-1·d-1,正常组连续7d腹腔注射等量的生理盐水,随后正常组和模型组连续7d纯净水灌胃10 mL·kg-1·d-1,四物组连续7d四物合剂灌胃1mg·kg-1·d-1、倍美力组连续7d倍美力溶液灌胃1 mg·kg-1·d-1.自实验第1天起,每日制作大鼠阴道分泌物涂片以观察大鼠动情周期;实验第14天大鼠称重、麻醉,取血清运用放免法测血中卵泡刺激素( FSH)、黄体生成激素(LH)、雌二醇(E2)和孕酮(Pro):取双侧卵巢,同侧切片后常规HE染色,图像分析仪下进行颗粒细胞层最大厚度的显微测量,并运用原位细胞死亡检测法检测颗粒细胞凋亡情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠FSH和凋亡指数均升高,差异有统计学意义(P＜0.05),同时E2值下降.与模型组比较,四物组大鼠FSH和凋亡指数降低,差异有统计学意义(P＜0 05),同时E2值升高.结论:四物合剂对化疗后大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡有一定的抑制作用,能促进卵巢功能恢复,但还不能起到完全修复的作用.     

左归饮对围绝经期大鼠卵巢VEGF及SPARC表达的影响

目的:观察滋阴理气中药左归饮对围绝经期大鼠卵巢血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)表达的影响.方法:采用围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮(13.78,20.67,31.00 g·k~(g-)1)灌胃处理8周.用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢VEGF mRNA及蛋白的表达,用RT-PCR方法检测卵巢SPARC mRNA的表达水平.结果:围绝经期大鼠卵巢VEGF mRNA的表达明显高于青年组(P＜0.01),中、高剂量左归饮可有效降低其表达水平(P＜0.01).围绝经期大鼠卵巢SPARC mRNA的表达明显低于青年组(P＜0.01),中、高剂量左归饮可使其表达显著升高(P＜0.01).结论:VEGF和SPARC表达异常可能在卵巢衰老过程中起一定作用.滋阴理气中药左归饮能通过下调VEGF的表达、上调SPARC的表达,从而促进衰老大鼠卵巢的血管生成,延缓卵巢衰老过程.     

大豆异黄酮对围绝经期大鼠卵巢FSHR表达的影响

目的：观察大豆异黄酮（SI）对围绝经期大鼠卵巢促卵泡激素受体（FSHR）表达的影响,初步探讨大豆异黄酮作用于卵巢的分子机制。方法：采用自然老化法建立围绝经期大鼠动物模型,分别给予低剂量（50mg/kg）、中剂量（158mg/kg）、高剂量（500mg/kg）的SI灌胃处理8周。采用放射免疫分析法（RIA）检测血清FSH水平,RT-PCR检测卵巢组织中FSHRmRNA的表达。结果：与青年对照组相比,围绝经期模型组大鼠血清FSH水平有所升高（P〈0.05）,卵巢FSHRmRNA表达显著降低（P〈0.01）。与模型组相比,各SI组血清FSH水平的降低无统计学意义（P〉0.05）,卵巢FSHRmRNA的表达量则显著升高（P〈0.05或P〈0.01）。结论：一定剂量的大豆异黄酮虽不能降低围绝经期大鼠血清FSH水平,但可明显上调衰老卵巢FSHRmRNA的表达。     

滋水清肝饮对围绝经期抑郁症模型大鼠海马神经元细胞凋亡相关因子的影响

目的观察滋水清肝饮对围绝经期抑郁症模型大鼠海马神经元凋亡因子的影响及对海马神经元凋亡过程的抑制作用。方法将45只实验大鼠随机分5组。假手术组;模型组;滋水清肝饮治疗组;雌二醇＋盐酸氟西汀治疗组;雌二醇治疗组。各组给予相应药物,观察各组大鼠海马神经元细胞凋亡的过程。结果模型组细胞凋亡指数显著高于假手术组,经过治疗后,滋水清肝饮治疗组和雌二醇＋盐酸氟西汀治疗组的凋亡细胞指数显著降低。模型组中促进细胞凋亡的Bax表达量较假手术组显著增强,抑制细胞凋亡的Bcl-2的表达量显著降低。结论海马神经元细胞凋亡是海马功能发生改变的基础,可能是围绝经期抑郁症发生的病理机制之一。中药滋水清肝饮及雌激素加抗抑郁药物的治疗都能改善这一病理状态,但是从疗效看,中药治疗显著优于西药组,其疗效接近于假手术水平。滋水清肝饮对细胞凋亡的调节是通过作用于细胞凋亡相关基因Bcl-2家族的促进及抑制细胞凋亡的一对相关基因而起效的。     

针刺对单纯性肥胖症体重指数及腰臀围比的影响

目的：观察针刺减肥的疗效。方法：将80例单纯性肥胖患者随机分为针刺组和药物组，每组各40例。针刺组采用体针、电针，配合耳穴贴压的方法，体穴取天枢、关元、三阴交等，耳穴取神门、内分泌、脾等；药物组采用口服西药西布曲明的方法。分别于治疗前后测定患者的体重、体重指数、腰围、臀围及腰臀围比值，并评价减肥疗效。结果：针刺组的总有效率为87．5％，药物组的总有效率为82．5％，2组的治疗结果相近（P〉0．05）；2组患者治疗后的体重、体重指数、腰围、臀围及腰臀围比值均较治疗前显著下降，并且针刺组患者的腰围及腰臀围比值的改善优于药物组（P〈0．05）。结论：针刺减肥的疗效确切，并且针刺能有效地改善单纯性肥胖患者的体重、体重指数、腰围、臀围及腰臀围比值。     

针刺对多发梗塞性痴呆大鼠海马CuZnSOD mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨针刺治疗血管性痴呆的作用机理。方法通过栓子注入法制作多发梗塞性痴呆模型,随机分为模型组、针刺组和非穴组,并设正常组和假手术组。应用原位杂交和免疫组化的方法检测痴呆大鼠海马区CuZnSOD的基因表达情况,并分析针刺的干预作用。结果与正常组比较,模型组大鼠海马区CuZnSOD mRNA及蛋白表达下降(P<0·01);针刺组可明显增强其表达水平(P<0·01),与正常组及假手术组比较无显著性差异。结论针刺在转录和翻译水平上均可上调CuZnSOD的表达水平,从而增强抗氧化酶活性,以有效地清除自由基,改善痴呆大鼠的智能状态。     

电针对大鼠局灶脑缺血再灌注后脑内血管生长因子和血管抑制因子表达的影响

目的:探讨电针对缺血性脑卒中的作用机制。方法:线栓法制备Wistar大鼠局灶脑缺血再灌注模型。将大鼠随机分为正常组、模型组、电针组。选取双侧“合谷”穴为电针穴位,采用原位杂交法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达,免疫组化法检测血管生成素(Ang-1)和内皮抑素(Endostatin)蛋白的表达。结果:模型组VEGFmRNA、Ang-1蛋白、Endostatin蛋白的表达较正常组增加(P<0·05),电针组VEGFmRNA、Ang-1蛋白比模型组增加更明显(P<0·05),而En-dostatin蛋白表达增加较模型组明显下降,差异有显著性意义(P<0·05)。结论:电针可能通过上调血管生长因子和下调血管抑制因子的表达来促进局灶脑缺血再灌注后的血管新生。     

针刺手厥阴经穴对缺血再灌注损伤大鼠心肌钙泵活性及基因表达的影响

目的：观察针刺-22包经“内关”“郄门”穴治疗心肌缺血的作用机制。方法：将大鼠随机分为5组,假手术组、缺血-再灌注模型组、针刺“内关”治疗组、针刺“郄门”治疗组、针刺“支沟”对照组。后3组电针相应穴位20min后,结扎冠状动脉左前降支40min,心电图（ECG）监测,再电针穴位20min,松扎,恢复灌流60min,摘取心脏,取心室肌制备心肌细胞肌浆网,定磷法测定三磷酸腺苷酶（Ca^2＋-ATPase）活性的高低;用Northen-Blot方法测定肌浆网Ca^2＋-ATPasemRNA的相对含量。结果：模型组Ca^2＋-ATPase活性明显降低,Ca^2＋-ATPasemRNA的表达下降。针刺心包经“内关”穴组和“郄门”穴组Ca^2＋-ATPase活性和Ca^2＋-ATPasemRNA表达均发生明显变化,与模型组比较均有非常显著性意义（P〈0.01）,针刺“支沟”穴组酶活性与基因的表达和模型组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：针刺手厥阴,22包经穴“内关”“郄门”穴可提高心肌细胞肌浆网Ca^2＋-ATPase的活性,促进Ca^2＋-ATPasemRNA基因的表达,减轻缺血再灌注损伤的程度,增强心肌的功能。     

针刺对快速老化模型鼠脑中衰老相关基因表达的调整作用

目的：探讨针刺调整作用在分子水平的反映。方法：以快速老化模型鼠（SAM）脑中衰老相关基因的表达为研究对象。应用由磁珠分离法纯化mRNA,SMART-PCRcDNA合成和AFLP-银染法结合形成的mRNA-AFLP分析技术，进行mRNA指纹检测，寻找衰老相关性差异表达的基因片段。并观察针刺对其表达水平的影响。结果：随机应用20对引物作选择性AFLP扩增，共发现42条带型较为清晰的SAMP，R两系组间差异表达带，其中，33条（约占78.6%)在P系相对于R系低表达，9条（约占21.4%)在P系相对于R系高表达，针刺SAMP10的不同腧穴，可使异常低表达的基因表达水平不同程度地上调，使异常高表达的基因表达水平不同程度地下调，其变化均趋同于正常老化的SAMR1。结论：针刺对衰老机体紊乱的分子网络能发挥整体调节作用。促使其恢复协调平衡，从而延缓衰老进程。     

不同时辰针刺对豚鼠血清SOD、MDA的影响

目的:观察不同时辰按灵龟八法开穴针刺的抗氧化效应差异。方法:选用健康豚鼠182只,随机分为12个时辰针刺组和1个空白对照组,每组14只。时辰针刺组在子、丑、寅、卯、辰、巳、午、未、申、酉、戌、亥12个时辰里按照灵龟八法开穴针刺,每日1次,连续7d。观察超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)治疗前后的变化。结果:健康豚鼠在12个时辰里SOD活力和MDA含量各不相同,SOD活力午时最高,子时最低;MDA含量子时最高,午时最低。灵龟八法针刺可提高健康豚鼠SOD活力,卯时升高幅度最大,午时升高幅度最小;亦可降低丙二醛的含量,午时降低幅度最大,亥时降低幅度最小。结论:不同时辰按灵龟八法开穴针刺对豚鼠血清SOD和MDA的影响存在差异,灵龟八法可以提高健康豚鼠SOD活力,降低MDA含量。     

隔药饼灸对不同年龄健康人红细胞CD58表达的影响

目的:观察灸法对不同年龄健康人群红细胞表面白细胞分化抗原58(CD58)表达的影响,探讨其对不同年龄人群的效应差异及艾灸预防疾病的作用机制。方法:82例健康人按年龄分为青年组和中老年组。将以熟地、山药、山茱萸等为主方的药物制成药饼置于神阙、关元、足三里、脾俞、肾俞施隔药灸,每穴3壮,隔日1次,共灸10次。分别于施灸前、施灸10次(1疗程)后各抽取静脉血2mL,用流式细胞仪测定红细胞表面CD58分子的平均荧光强度。结果:隔药饼灸后,青年组与中老年组红细胞CD58分子的荧光强度均明显高于施灸前(均P0.01),红细胞CD58均呈高表达状态。其中,青年组的变化尤为突出,其增高幅度与中老年组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:艾灸对青年人的效应优于中老年人,其预防疾病的作用机制为增强了红细胞CD58的高表达。     

针刺对胚泡着床障碍大鼠胚泡着床及发育的影响

目的:探讨针刺提高辅助生殖技术成功率的作用机制。方法:将孕鼠随机分为正常组、模型组及针刺组。模型组和针刺组均采用米非司酮造模,针刺组自妊娠第1天连续接受1w针刺治疗。观察各组大鼠妊娠率及平均着床胚泡数,比较其子宫、卵巢重量及单个胚泡大小、重量的差异;并用光镜观察各组大鼠子宫内膜及卵巢的形态结构差异。结果:针刺组妊娠率及平均着床胚泡数较模型组显著提高(P<0.01);模型组子宫、卵巢重量等均较正常组及针刺组轻,且子宫内膜发育不良;针刺组子宫内膜发育与正常组相似。结论:针刺可在一定程度上逆转米非司酮抗着床的作用,促进大鼠胚泡着床及胚泡发育。     

针刺对2型糖尿病患者情绪障碍及糖代谢的干预作用

目的:观察针刺对2型糖尿病患者抑郁、焦虑情绪和糖代谢影响。方法:将100例患者随机分为药物组(口服二甲双胍)、针药组(口服二甲双胍加针刺百会、风府)各50例,测定治疗前后抑郁量表(HAMD、SDS)、焦虑量表(HAMA、SAS)评分及空腹血糖(FPG)、餐后2小时血糖(PG2h)、糖化血红蛋白(GHb)水平。结果:治疗后2组患者情绪障碍均得到改善,FPG、PG2h、GHb水平均下降,针药组优于药物组(P<0.05)。结论:针刺可改善2型糖尿病患者负性心理状态及紊乱的糖代谢,有助于患者血糖的控制。     

电针对脊髓损伤早期bcl2mRNA及蛋白表达的影响

目的：探讨电针治疗脊髓损伤的机制。方法：成年雄性SD大鼠，随机分为模型(MC)组、电针(EA)治疗组、甲基强的松龙(MP)组及假手术(SO)组。采用改良的Allen’s捶击法致大鼠T10脊髓损伤，应用原位杂交和免疫组织化学方法及图像定量分析法观察脊髓损伤早期bcl-2 mRNA和蛋白的表达。结果：MC组脊髓损伤后6h bcl-2 mRNA表达有增高趋势，伤后24h表达增高；伤后6h bcl-2蛋白表达未见明显变化，伤后24h表达有增高趋势。EA组bcl-2 mRNA及蛋白表达均高于模型组，与MP组相比差异无显著性意义。结论：电针可上调bcl-2 mRNA及蛋白的表达，从而抑制细胞凋亡，保护神经细胞。