经卡介苗活化的树突状细胞疫苗治疗胰腺癌的基础及临床运用展望——暨向2011年诺贝尔医学奖得主Ralph Steinman教授致敬

目的 探讨经卡介苗(BCG)活化的树突状细胞(DC)疫苗体外直接抗胰腺癌细胞Panc02的机制,以及观察经不同部位注射DC疫苗抗小鼠胰腺癌移植瘤的效应.方法 从C57BL/6小鼠骨髓中诱导培养DC,并予以BCG促成熟,用流式细胞技术检测DC成熟度,CCK-8细胞计数检测DC直接抑制Panc02增殖情况,流式细胞仪检测BCG促成熟DC表面凋亡诱导配体(TRAIL)的表达量.C57BL/6小鼠皮下接种Panc02胰腺癌细胞制成荷瘤小鼠,第7d予以DC疫苗注射免疫治疗(DC疫苗为经Panc02细胞冻融抗原致敏后BCG促成熟的DC),分为3组:瘤内注射生理盐水组、皮下注射DC疫苗组和瘤内注射DC疫苗组,1周后再治疗1次,第2次治疗后15d处死小鼠,观察不同治疗抗肿瘤的效果.结果 BCG活化后DC疫苗成熟度明显增加,其表型CD86表达增加;经BCG活化成熟的DC能直接抑制Panc02细胞生长,这一作用可被TRAIL抗体部分抑制,且流式细胞术检测发现成熟DC表面分子TRAIL明显高于未经BCG促成熟组未成熟DC.肿瘤体重:瘤内注射DC疫苗组＜皮下注射DC疫苗组＜瘤内注射生理盐水组(P＜0.01).结论 BCG活化的胰腺癌DC疫苗的生物活性明显增加,并可通过TRAIL这一途径直接杀伤肿瘤细胞;且经BCG活化的DC疫苗瘤内注射免疫治疗抗肿瘤作用更强.     

热休克联合OK-432处理PANC1细胞裂解物致敏的树突状细胞体外抗癌实验

4±0.98)%,对SGC7901几乎没有杀伤作用.结论 经热休克联合OK-432处理后PANC1细胞裂解物致敏的DC生物活性增强,其刺激的自身淋巴细胞可产生高效特异的抗肿瘤免疫效应.     

体外负载HSP70-K-ras突变多肽复合物树突细胞的抗胰腺癌作用

背景：K-ras突变多肽难以很好地被树突细胞（DC）捕获,诱导的抗肿瘤效应有限。目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）-K-ras突变多肽复合物体外负载于DC的抗胰腺癌作用。方法：使HSP70与K-ras突变多肽在体外结合成复合物,负载于由人外周血单个核细胞体外诱导分化获得的DC。酶联免疫吸附测定（ELISA）检测DC的细胞因子分泌能力,流式细胞仪分析DC负载抗原前后的细胞表型变化,胆囊收缩素（CCK）-8法检测负载抗原后DC对同基因淋巴细胞的促增殖作用,以及激活的同基因淋巴细胞对人胰腺癌细胞株Patu8988、PANC-1和正常人肝细胞株L-02的细胞毒作用。结果：HSP70-K-ras突变多肽复合物可激活DC,最适浓度为0.75μg/ml,可使DC的白细胞介素（IL）-12、肿瘤坏死因子（TNF）-α分泌量和细胞表面CD80、CD83、CD86、HLA-DR表达率显著增高。0.75μg复合物可有效激活1×10^6个DC,刺激1×10^7个同基因淋巴细胞增殖,特异性杀伤具有相同12位点突变类型（GGT→GTT）的Patu8988细胞,杀伤率达52.9%±5.1%,对不同突变类型的PANC-1细胞（GGT→GAT）和正常人肝细胞杀伤作用不明显。结论：负载HSP70-K-ras突变多肽复合物的DC活性增强,可刺激同基因淋巴细胞产生高效而特异的抗胰腺癌效应。     

胰腺癌Capan-2细胞与树突状细胞融合诱导特异性抗癌免疫应答的体外研究

目的观察人胰腺癌Capan-2细胞与树突状细胞(DC)融合后诱导的特异性抗肿瘤免疫反应。方法收集2013年4月-2015年3月于沈阳军区总医院消化科就诊的人类白细胞抗原(HLA)-A2~+胰腺癌患者6例,从患者外周血单个核细胞中分离并培养DC。所获DC分为3组:(1)使用聚乙二醇-二甲基亚砜诱导法,将DC与Capan-2细胞融合以负载肿瘤抗原;(2)DC与Capan-2细胞共培养;(3)单独DC培养。通过流式细胞术检测PE-MUC4/FITC-CD86抗体双标细胞评估融合率;应用四甲基偶氮唑盐法检测各组DC的存活率变化。使用干扰素(IFN)γ酶联免疫法检测DC诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)活化反应。采用51Cr标准细胞毒实验检测DC诱导的抗原特异性CTL对体外胰腺癌细胞的杀伤作用。多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果DC与Capan-2融合细胞同时表达DC表型(CD86)和MUC4分子,CD86与MUC4双阳性表达率为(38.30±7.30)%,明显高于共培养组(7.21±1.06)%;融合细胞组DC存活率呈时间依赖性下降,转染后96 h的存活率降低至62.81%,而与Capan-2细胞共培养组DC存活率稳定在80%以上,两组间差异有统计学意义(P0.05)。DC-Capan-2融合细胞诱导的CTL 24 h IFNγ释放量为(85.34±2.97)U/ml,DC、Capan-2共培养组DC诱导的IFNγ释放量为(19.07±4.25)U/ml,两转染组的差异有统计学意义(P0.05)。DC-Capan-2融合细胞诱导的特异性CTL能够有效识别和杀伤HLA-A2~+/MUC4~+的Capan-2细胞及HLAA2~+/MUC4-的PANC-1细胞,但不能有效识别和杀伤HLA-A2-/MUC4-的Mia Pa Ca-2细胞和HLA-A2-/MUC4~+的As PC-1细胞。结论胰腺癌细胞与DC融合后可诱导出显著的CTL抗肿瘤免疫反应,此过程受主要组织相容性复合体Ⅰ类抗原呈递的限制。     

胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA体外转染树突细胞的方法探讨

目的 探讨将胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA转染树突细胞(DCs)最优化的方法.方法 以rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α联合诱导外周血单核细胞以获得DCs,观察DCs的形态变化,流式细胞术检测DCs表面标志CD40、HLA-DR、CD83和CD86表达,混合淋巴细胞反应(MLR)测定DCs刺激异体T细胞增殖的能力.采用脂质体转染、电穿孔及被动转染三种方法将MiaPaCa-2总RNA转染DCs,应用实时定量PCR法检测MUC1 mRNA表达,MTT法测定DCs存活率.结果 所获细胞具有典型的成熟DCs形态特征,CD40、HLA-DR、CD83和CD86阳性表达率分别为34.3%、50.2%、89.2%和73.6%,对同种异体T淋巴细胞具有极强的刺激增殖作用.电穿孔法DCs转染48 h后,DCs的MUC1 mRNA表达量为45.39±9.33,明显高于脂质体法的31.68±7.25和被动转染法的18.53±3.26;DCs存活率为(80.36±2.43)%,较被动转染法的(91.48±5.42)%略低,但高于脂质体法的(67.44±2.51)%,且基本稳定在80%左右.结论 采用电穿孔法将胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA体外转染DCs的效率较高,且较安全.     

负载胰腺癌抗原的树突状细胞疫苗诱导T淋巴细胞抗肿瘤效应的研究

培养树突状细胞(DC),反复冻融法裂解培养的负载胰腺癌细胞(PC-3),提取细胞抗原,致敏DC,获得负载胰腺癌抗原的DC疫苗后诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的生成,MTT法检测CTL对不同肿瘤细胞的杀伤作用.发现负载PC-3细胞抗原的DC疫苗能诱导产生肿瘤特异性的CTL,其对PC-3细胞具有明显地杀伤效应,而对人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞7721细胞杀伤作用弱.认为负载胰腺癌抗原的DC疫苗能够诱导高效而特异地CTT杀瘤活性,为将来DC疫苗在胰腺癌的免疫治疗中提供了实验依据.     

树突状细胞体外诱导抗肝癌免疫

目的应用树突状细胞（ＤＣ）在体外诱导高效而特异抗肝癌免疫．方法自肝癌患者外周血中分离ＤＣ;以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）及白介素４（ＩＬ４）联合刺激ＤＣ;以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ;ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖、分化为细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）;检测ＣＴＬ及其上清液对ＨｅｐＧ２肿瘤细胞、ＬＯＶＯ肿瘤细胞及ＨＯＳ８６０３肿瘤细胞的细胞毒作用．结果经人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的ＴＡＡ激活并经ＧＭＣＳＦ及ＩＬ４联合刺激后,肝癌患者外周血ＤＣ能够诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖分化为ＣＴＬ,该ＣＴＬ及其上清液对ＨｅｐＧ２肿瘤细胞均有高效而特异性的杀伤作用（杀伤率分别为９２％±１０５％和４１％±８９％）．结论肝癌患者外周血ＤＣ体外能够诱导高效而特异抗肝癌免疫．提示ＤＣ作为一新概念上的抗肿瘤疫苗可能在肿瘤治疗及预防中发挥重要作用．     

树突状细胞HBsAg疫苗抗乙型肝炎病毒免疫的体外研究

目的 研究人单核细胞来源的树突状细胞（DC）激活的HBsAg特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对表达HBsAg的HepG2/S靶细胞的杀伤效应，以探索DC-HBsAg疫苗在抗乙型肝炎病毒（HBV）中的作用。方法 从健康外周血中分离邮单核细胞，在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素4（IL-4）的作用下培养7d诱导出DC，然后以DC为刺激细胞在体外诱导出HBsAg特异性CTL；将携有HBV-S基因的pLXSN/S重组质粒电击导入肝癌细胞系（HepG2)，建立表达HBsAg的靶细胞模型HepG2/S；用染色法检测HBsAg特异性CTL对HepG2/S靶细胞的杀伤效应。结果 DC激活的HBsAg特异性CTL对HepG2/S靶细胞具有较强的杀伤效应，不同浓度HBsAg(0μg/L，50μg/L和100μg/L）诱导的CTL的杀伤率分别为3.8%,69.5%和85.1%，而CTL对HepG2细胞无明显杀伤效应。结论 由DC激活的HBsAg特异性CTL具有较强制 特异性抗HBV作用。     

胰腺癌细胞总RNA转染树突细胞诱导特异性CTL能力的体外研究

目的观察人胰腺癌Mia Pa Ca-2细胞总RNA电转染树突细胞(Dendritic Cell,DC)体外激发抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte,CTL)的能力。方法自6例胰腺癌患者外周血单核细胞中分离、培养DC。使用电穿孔法将Mia Pa Ca-2细胞总RNA体外转录和PCR扩增的MUC1m RNA转染DC,以未负载抗原的DC为对照。采用实时定量PCR技术检测各组DC中MUC1表达。四甲基偶氮唑盐(MTT)检测转染各组DC存活率变化;混合细胞培养法评价各组DC体外刺激自体T淋巴细胞增殖能力;ELISA法检测各组DC体外激发抗原特异性CTL细胞因子释放量。结果 Mia Pa Ca-2总RNA与MUC1 m RNA分别转染后48 h DC中目标抗原的相对表达量分别为37.24±3.17和34.53±2.02,两者比较无显著差异(P0.05)。电转染后96 h Mia Pa Ca-2总RNA转染组DC存活率降至60.81%,低于MUC1 m RNA单转染时DC的存活率(80%左右)(P0.05)。转染Mia Pa Ca-2总RNA DC刺激自体T细胞增殖指数为8 432±611.25,显著高于MUC1单独转染组3 664±305.17(P0.05);且转染Mia Pa Ca-2总RNA DC激发特异性CTL分泌IL-2、IL-10、Granzyme B、IFN-γ水平亦显著高于MUC1 m RNA单独转染组(P0.05)。结论胰腺癌肿瘤细胞总RNA转染的DC较单一胰腺癌相关抗原负载DC有更强的体外抗原特异性CTL激发能力。     

细胞因子对树突状细胞抗肝癌作用的影响

目的研究人血树突状细胞（ＤＣ）和细胞因子ＴＮＦ,ＧＭＣＳＦ或ＩＦＮγ联合ＤＣ对淋巴因子和ＰＨＡ激活的杀伤细胞（ＬＰＡＫ细胞）体外杀伤人肝癌细胞株ＢＥＬ７４０２的影响．方法实验分为Ｌ组（ＬＰＡＫ）,Ｄ组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ）,Ｔ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５０００ｋＵ／Ｌ）,Ｔ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ１００ｋＵ／Ｌ）,Ｉ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ５００ｋＵ／Ｌ）和Ｉ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ１００ｋＵ／Ｌ）．每组效靶细胞比分别采用５∶１和１０∶１两种．培养４８ｈ后用中性红比色法检测细胞毒活性．结果Ｌ,Ｄ,Ｔ２和Ｔ１组的细胞毒活性依次增强,各组间差异有显著性（Ｐ＜００１）．Ｇ１和Ｇ２组均高于Ｄ组（Ｐ＜００１）,但Ｇ１,Ｇ２组间差异无显著性．Ｉ１,Ｉ２组与Ｄ组相比,也无显著性差异．随效靶比增加,各组细胞毒活性均相应增强．结论ＤＣ能增强ＬＰＡＫ细胞对肝癌细胞ＢＥＬ７４０２的细胞毒活性;ＴＮＦ或ＧＭＣＳＦ与ＤＣ联用,两者有协同作用;但与ＩＦＮγ联用,则无进一步增强作用     

胰腺癌相关抗原MUC1与survivin mRNA联合转染树突细胞激发特异性细胞毒T淋巴细胞能力的体外研究

目的 研究人胰腺癌MUC1与survivin mRNA联合转染树突细胞（DC）体外激发特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）的能力,为构建负载多抗原表位DC疫苗治疗胰腺癌提供实验依据.方法 自6例胰腺癌患者外周血单核细胞中分离、培养并鉴定DC.常规培养人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2,采用RT-PCR方法扩增MUC1和survivin mRNA.应用电穿孔法将两种mRNA单独或联合转染DC,分别命名为DC-MUC1、DC-survivin、DC-MUC1＋ survivin.采用实时定量PCR法检测DC的MUC1、survivin mRNA表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测DC存活率;使用混合细胞培养法检测转染DC体外刺激自体T淋巴细胞的增殖能力;应用ELISA法检测转染DC体外激发抗原特异性CTL释放Th1型细胞因子IL-2、IL-10、granzyme B、IFN-γ的水平.结果 成功获得成熟的DC,成熟DC的表面标志物CD40、HLA-DR、CD83和CD86的阳性表达率分别为34.31％、50.21％、89.17％和73.62％.DC-MUC1的MUC1 mRNA表达量为36.24±5.17;DC-survivin的survivin mRNA表达量为34.53±4.02;DC-MUC1＋survivin的MUC1、survivin mRNA表达量分别为31.79±4.26和14.67±2.96,显著低于单转染的DC（P值均＜0.05）.DC-MUC1＋ survivin的存活率呈现时间依赖性下降,96 h时的存活率显著低于单转染DC（50.21％比80％左右,P值均＜0.05）.当作为刺激细胞的DC和作为效应细胞的T淋巴细胞比例为1∶10、1∶20时,DC-MUC1＋ survivin刺激自体T细胞的增殖指数显著高于单转染DC,差异有统计学意义（P值均＜0.05）;而比例为1∶40、1∶80时的增殖指数差异无统计学意义.当DC∶T为1∶10孵育14 d时,DC-MUC1、DC-survivin、DC-MUC1＋survivin的IL-2水平分别为（892.73±32.90）、（713.62±56.37）、（1884.37±95.21） pg/ml;granzyme B水平分别为（501.62±12.30）、（203.84±12.55）、（1193.15±86.04） pg/ml;IFN-γ水平分别为（981.50±47.82）、（696.05±41.66）、（2237.94±189.55） pg/ml.DC-MUC1＋ survivin显著高于单转染的DC,差异有统计学?     

胰腺癌MUC1 mRNA转染树突细胞疫苗诱导特异性抗肿瘤的免疫反应

目的 研究人胰腺癌MUC1 mRNA转染树突细胞(DC)诱导的特异性抗肿瘤免疫反应,为DC疫苗治疗胰腺癌提供实验依据.方法 从外周血中分离单核细胞(PBMC)并培养成DC,从细胞形态和表面标志进行鉴定.通过RT-PCR扩增胰腺癌MiaPaCa-2细胞的MUC1 mRNA后用电穿孔法将其转染DC.采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测培养不同时间点DC的MUC1的表达.用四甲基偶氮唑蓝法检测DC存活率.采用51Cr标准细胞毒实验观察转染MUC1 mRNA的DC诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应;应用ELASA法检测CTL的IFN-γ释放量.结果 培养获得的细胞呈现典型的DC形态特征和表面标志(CD40+、HLA-DR+、CD83+、CD86+).MUC1 mRNA转染DC48 h后,细胞MUC1 mRNA表达水平最高,为38.43(36.89 ～48.06),蛋白表达亦最强.转染后DC的存活率稳定在80％左右.转染MUC1 mRNA的DC可有效诱导HLA-A2 +/MUC+特异性CTL免疫反应;胰腺癌Capan-2细胞与转染MUC1的DC刺激MUC1特异性CTL的24 h IFN-γ释放量分别为(28.44±4.96)和(16.31 ±2.54) U/ml,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 人胰腺癌MUC1 mRNA体外转染DC后可诱导CTL产生特异性抗肿瘤免疫反应.     

In vitro induction of a bladder cancer-specific T-cell response by mRNA-transfected dendritic cells

Purpose: To design a tumor-specific immunotherapeutic strategy for treating tumors for which no specific antigens are described (such as bladder urothelial carcinoma), we attempted to activate tumor-specific T-cells by dendritic cells transfected with tumor-derived mRNA. Methods: Dendritic cells were generated from a patient's peripheral blood and loaded with mRNA derived from the urothelial carcinoma tissue of the same patient. Autologous T-cells were incubated twice on these dendritic cells and tested for their ability to lyse tumor cells. Results: Dendritic cells transfected with tumor-derived mRNA were able to activate T-cells that recognized autologous tumor cells. Cytotoxicity was around 26% for an effector:target ratio of 50:1. Tumor-infiltrating lymphocytes did not kill the autologous tumor cells in vitro, but after a single stimulation with the transfected dendritic cells, they induced tumor cell lysis of 35.7% at an effector:target ratio of 50:1. Conclusions: These results indicate that dendritic cells transfected with tumor mRNA containing messages for one or more tumor antigens could serve for the ex vivo activation of effector T-cells or directly as vaccines for a wide range of human neoplasias. Received: 24 July 2000 / Accepted: 23 August 2000     

胰腺癌Capan-2细胞总RNA转染树突细胞诱导特异性抗肿瘤免疫反应的体外研究

目的 观察人胰腺癌Capan-2细胞总RNA转染的树突细胞（DCs）所诱导的抗肿瘤免疫反应.方法 从6例胰腺癌患者外周血单核细胞中分离、培养DCs.使用电穿孔法将Capan-2细胞总RNA及MUC4 mRNA分别转染DCs.应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染后DCs的存活率.采用蛋白质印迹法检测DCs中MUC4 mRNA的表达.使用IFN-γ酶联免疫法检测DCs诱导的细胞毒T淋巴细胞（CTLs）的活化反应.采用51Cr标准细胞毒实验检测DCs诱导的抗原特异性CTLs对体外胰腺癌细胞的杀伤效应.结果 Capan-2细胞总RNA转染的DCs（DC-Capan-2-total RNA）的存活率呈时间依赖性下降,转染后96 h的存活率降低至60.8％,而转染MUC4 mRNA的DCs（DC-MUC4 mRNA）的存活率稳定在80.0％左右,两转染组DCs的差异具有统计学意义（P＜0.05）.DC-Capan-2-total RNA的MUC4蛋白表达量亦显著低于DC-MUC4 mRNA（P＜0.05）.DC-Capan-2-total RNA诱导的CTLs 24 h IFN-γ释放量为（89.34±3.85） U/ml,DC-MUC4 mRNA为（21.77±2.14） U/ml,两转染组的差异有统计学意义（P＜0.05）.DC-Capan-2-total RNA诱导的特异性CTLs能够有效识别和杀伤HLA-A2 ＋/MUC4＋的Capan-2细胞及HLA-A2 ＋/MUC4-的PANC1细胞,而不能有效识别和杀伤HLA-A2-/MUC4-的MiaPaCa-2细胞和HLA-A2-/MUC4＋的AsPC-1细胞.结论 胰腺癌细胞总RNA转染的DCs较单个胰腺癌相关抗原转染的DCs能诱导出更加显著的CTLs抗肿瘤免疫反应,但受到MHC Ⅰ类抗原递呈的限制.     

骨髓瘤独特型抗原负载树突细胞介导的抗肿瘤效应研究

目的:研究骨髓瘤独特型抗原(Idiotype,Id)负载树突细胞(DC)对同源细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体外抗瘤活性的影响。方法:采集健康供者外周血单个核细胞(PBMNC)用常规方法诱导DC和CIK细胞,将骨髓瘤OPM-2细胞培养上清提取的Id冲击或未冲击的DC与CIK细胞共培养(CIK、DC加CIK、Id-DC加CIK),用流式细胞术分析细胞表型,MTT法检测体外效应细胞杀伤活性。结果:在(5～20):1效靶比范围内, CIK细胞对OPM-2和K562细胞的杀伤率分别为(24．47±3．00)％～(40．64±1．62)％和(23．36±1．51)％～(42．52±2．06)％。DC加CIK及Id—DC加CIK对OPM-2和K562细胞的杀伤活性均高于CIK组,差异有统计学意义(P<0．05);而在相同效靶比之下,Id-DC加CIK对OPM-2细胞的杀伤活性最强,差异有统计学意义(P <0．05)。结论:CIK细胞对骨髓瘤细胞有强的杀伤活性,经Id负载的DC与CIK细胞共培养能进一步增强其特异性杀伤活性,对骨髓瘤可能有免疫治疗作用。     

双胰腺癌相关抗原RNA转染树突细胞诱导特异性抗癌免疫反应的实验研究

目的研究人胰腺癌MUC4与Survivin mRNA联合转染树突细胞(DC)诱导的特异性抗肿瘤免疫反应,为构建负载多抗原表位DC疫苗治疗胰腺癌提供实验依据。方法自胰腺癌患者外周血单核细胞中分离、培养DCs。使用体外转录和胰腺癌PCR技术扩增MUC4和Survivin mRNA后用电穿孔法将其联合转染DC。采用Western blot技术检测DCs中MUC4和Survivin的表达。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染前后DCs存活率变化;使用IFN-γ酶联免疫法检测MUC4 mRNA与Survivin mRNA联合转染后DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活化反应。采用51Cr标准细胞毒实验检测转染MUC4和Survivin mRNA后DCs诱导的特异性CTL对体外胰腺癌细胞的杀伤作用。结果 MUC4与Survivin mRNA联合转染后72 h DCs中两者的相对表达量低于其分别转染。顺序转染后96 h DCs存活率降至50.2%,低于MUC4 mRNA与Survivin mRNA分别转染时DC 80%的存活率(P0.05)。MUC4和Survivin mRNA联合转染DC诱导的特异性CTL 24 h IFN-γ释放量达(33.84±3.51)U/mL,高于MUC4与Survivin mRNA分别转染DC诱导的CTL IFN-γ释放水平[(21.87±4.12)U/mL和(16.61±2.09)U/mL,P0.05]。DCs经MUC4 mRNA与Survivin mRNA联合转染后,可有效诱导HLA-A2+/MUC4+/Survivin+特异性CTL免疫反应,对体外培养的胰腺癌细胞具有显著的杀伤作用。结论 MUC4与Survivin mRNA联合转染的DCs可较单胰腺癌相关抗原负载DCs诱导出更加显著的特异性CTL抗肿瘤免疫。     

体外诱导白血病源性树突状细胞及其对T细胞杀伤活性影响的研究

目的 :探讨体外培养白血病源性树突状细胞 (DC)及其对T细胞杀伤活性的影响。方法 :从慢性髓细胞性白血病 (CML)患者外周血中分离单个核细胞 ,加入 1× 10 6U/L粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)、1×10 6U/L白细胞介素 (IL) 4和 5 0× 10 3 U/L肿瘤坏死因子 (TNF α) ,每 3～ 4天换液 1次 ,连续培养 14天 ,获得DC。取外周血单个核细胞加入 5 0 0× 10 3 U/LIL 2 ,培养至第 7天 ,把细胞分成两组 ,其中一组加入培养的DC ,两组细胞继续培养 3～ 4天 ,然后测定T细胞杀伤活性。结果 :DC具有典型的树状突起 ,高表达CD1a,具有慢粒特异性染色体t(9;2 2 ) ,能增强T细胞对白血病细胞的杀伤活性。结论 :在体外利用细胞因子可以把CML细胞诱导分化成具有刺激T细胞产生细胞毒性反应的白血病源性DC。     

Recognition of chronic myelogenous leukaemia cells by autologous T lymphocytes primed in vitro against the patient's dendritic cells

Defects in immune responses are common in patients with chronic myelogenous leukaemia (CML). However, using dendritic cells (DCs) to promote T-cell immunity in vitro may nonetheless elicit potent specific anti-tumour responses for use in immunotherapy. Here, we show that DCs generated from CML patients had a typical dendritic phenotype and were able to stimulate autologous T cells. Three primed T-cell lines were studied in more detail in one patient. They were stimulated by autologous CML cells, but not by normal non-leukaemic cells from the patient's HLA-identical sibling. This was blocked by HLA-DR-specific, but not HLA-DQ- or HLA-DP-specific antibodies. CML-stimulated cytokine secretion, including interferon-gamma and granulocyte macrophage-colony stimulating factor, suggested a Th1-type phenotype for these sensitized anti-leukaemic T cells. This study therefore shows that cells with a functional dendritic phenotype can be generated from the blood of CML patients and are potent inducers of T-cell responses to tumour cells. This approach allows sensitization of patients' T cells by their own particular tumour without the need to identify the exact leukaemia antigens involved, and may find application in immunotherapy of CML.