胰腺癌组织相关蛋白质分子的差异表达

目的用双向凝胶电泳的方法建立胰腺癌、癌旁组织和正常胰腺组织的蛋白质组二维图谱并分析差异蛋白质点。方法提取人正常胰腺组织、胰腺癌和癌旁组织总蛋白质，双向电泳分离蛋白，比较不同组织中蛋白质表达的差异。每份组织均重复电泳3次。结果在同一份组织的3张银染的凝胶蛋白质图谱上均可辨识1000个左右的蛋白质点，蛋白质点在形状、位置和密度上一致，重复性好。在不同组织之间发现了22个明显差异的蛋白质点，初步确定了其等电点和分子量。正常胰腺组织有一个高表达的蛋白质点，癌和癌旁组织有21个高表达的蛋白质点。结论正常胰腺组织、胰腺癌、癌旁组织蛋白质组二维图谱存在明显的差异，部分差异蛋白质可能具有诊断应用价值。     

胰腺癌组织相关蛋白质分子的差异表达

目的用双向凝胶电泳的方法建立胰腺癌、癌旁组织和正常胰腺组织的蛋白质组二维图谱并分析差异蛋白质点.方法提取人正常胰腺组织、胰腺癌和癌旁组织总蛋白质,双向电泳分离蛋白,比较不同组织中蛋白质表达的差异.每份组织均重复电泳3次.结果在同一份组织的3张银染的凝胶蛋白质图谱上均可辨识1 000个左右的蛋白质点,蛋白质点在形状、位置和密度上一致,重复性好.在不同组织之间发现了22个明显差异的蛋白质点,初步确定了其等电点和分子量.正常胰腺组织有一个高表达的蛋白质点,癌和癌旁组织有21个高表达的蛋白质点.结论正常胰腺组织、胰腺癌、癌旁组织蛋白质组二维图谱存在明显的差异,部分差异蛋白质可能具有诊断应用价值.     

人胰腺癌相关蛋白质的差异表达研究

胰腺癌5年存活率不超过5％，蛋白质组学（proteomics）的出现为寻找一种特异性高、敏感性强的胰腺癌肿瘤标志物带来了希望。蛋白质组学技术改变传统的分割式研究单个蛋白质的模式，建立全面、立体、快速的分析方法．以透视全体基因在特定细胞或组织的表达。本研究针对人正常胰腺、胰腺癌、胰腺癌旁组织，利用双向凝胶电泳（2-DE）技术以及质谱技术和生物信息学，分析胰腺组织不同生理状态下蛋白质的差异表达，旨在寻找胰腺癌早期诊断的肿瘤标志物．为早期诊断奠定基础。     

人胰腺癌胰液蛋白质谱差异表达初步分析

目的 应用蛋白质组学方法 分析胰腺癌胰液与慢性胰腺炎、胆总管结石患者胰液问差异蛋白质的表达,初步探索胰液中可能的胰腺癌标志物,为临床胰腺癌和慢性胰腺炎的鉴别诊断提供依据.方法 内镜下逆行胰胆管造影(ERCP)放置鼻胰引流管收集患者胰液,双向凝胶电泳(2-DE)分离5例胰腺癌、6例慢性胰腺炎和3例胆总管结石患者等量混合胰液的蛋白质,运用图像分析软件进行比较和分析,识别差异表达蛋白质.应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定部分差异蛋白质点.结果 收集到胰液总量35～200 ml,Bradford法测定蛋白质浓度为0.8～4.6 μg/μl.胰腺癌、慢性胰腺炎和胆总管结石患者等量混合胰液凝胶的蛋白质点数分别为196±12、209±15和199±10,三组间两两对比后的平均匹配率均在75%以上.部分差异蛋白质点经MALDI-TOF-MS鉴定显示:相比胆总管结石和慢性胰腺炎,转甲状腺素蛋白(TTR)二聚体支链A在胰腺癌患者胰液中表达增高;载脂蛋白A1(ApoA-1)支链A、胰石蛋白支链、Reg1β再生蛋白前体表达降低.结论 人胰腺癌、慢性胰腺炎和胆总管结石患者胰液的蛋白质谱存在一定的差异,TTR、ApoA-1、胰石蛋白和Reglβ再生蛋白可能成为胰腺癌胰液中的肿瘤标志物,为临床胰腺癌和慢性胰腺炎的鉴别诊断提供依据.     

肝、结肠和胰腺癌患者血清visfatin的表达及意义

目的研究肝、结肠和胰腺癌患者血清内脏脂肪素(visfatin)的表达变化,探讨其对肿瘤诊断的价值及与营养状况、抗肿瘤治疗的关系。方法采集首次确诊的肝癌、结肠癌、胰腺癌患者手术前后及慢性胃炎、消化性溃疡等对照者的血清样品,采用ELISA和放免法检测血清visfatin、癌胚抗原(CEA)水平,采用全自动生化分析仪检测反映机体营养状况的相关生化指标(如白蛋白、前白蛋白等);同时测量其体质学指标(如身高、体质量、腰围、臀围等)。结果与慢性胃炎、消化性溃疡等患者相比,三组肿瘤患者血清visfatin均显著升高(P均<0.05);肿瘤患者术后血清visfatin较术前显著降低(P均<0.05);随肿瘤分期的进展各组血清visfatin亦随之升高(P均<0.05);CEA、相应生化指标及体质学指标均有不同程度变化。结论 visfatin有望成为一项新的广谱性肿瘤标记物、评估营养状况的新指标及治愈肿瘤的新靶点。     

肝纤维化患者血清差异蛋白质的筛选

目的: 对比分析肝纤维化患者和健康人血清中差异表达的蛋白质, 筛选与肝纤维化发生密切相关的血清蛋白质.方法: 肝纤维化患者和健康人空腹血清标本各6例分别等量混合成2个样本, 去除血清中的白蛋白和IgG. 利用双向凝胶电泳(2-DE)分离肝纤维化血清和健康人血清总蛋白质后, 硝酸银染色, 经图像分析筛选差异表达的蛋白点. 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF-MS)鉴定差异表达的蛋白点, 并用ELISA法对其中部分差异蛋白的表达水平进行验证.结果: 筛选出2组间的差异蛋白点共517个, 对其中表达量差异3倍以上的24个蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析, 鉴定出包括触珠蛋白、载脂蛋白A-Ⅳ、转铁蛋白、T细胞受体b链、血清白蛋白及血清白蛋白前体等8个蛋白质, 其中3个蛋白质在肝纤维化血清中表达上调, 5个蛋白质在肝纤维化血清中表达下调. 与健康人血清比较, ELISA法检测肝纤维化血清中触珠蛋白、载脂蛋白A-Ⅳ表达均下调, 结果与双向凝胶电泳一致.结论: 肝纤维化血清与健康人血清的蛋白质表达谱表现出一定差异, 这些差异表达的血清蛋白质有望成为肝纤维化诊断与判定预后的血清标志物.     

胰腺癌分子诊断的研究进展

近年胰腺癌的发病率呈逐年上升趋势,本病恶性程度较高,与其早期局部侵犯和转移有关,因此早期诊断胰腺癌是实施根治性切除、延长患者生存期的关键。目前临床上尚缺乏有效的非创伤性早期筛查手段,多数患者确诊时已不能行手术切除。随着近年分子生物学和高通量测序技术的发展,在全基因组、转录组、蛋白质组水平筛选胰腺癌分子标记物成为了可能,可有效提高本病的早期诊断率。本文就胰腺癌分子诊断的研究进展作一综述。     

胰腺癌肿瘤基因标记物的研究现况

手术切除是胰腺癌惟一治愈手段,然而,85%的胰腺癌患者在就诊时已属晚期或发生远处转移,手术切除率较低,故胰腺癌的早期诊断具有非常重要的意义。胰腺癌患者血清中含有较多的肿瘤标记物,临床应用较多的是CA19-9、CA242及癌胚抗原(CEA)等。然而,现阶段血清学肿瘤标记物由于灵敏度及特异性尚未尽如人意,故临床急需有效的联合检测以提高其早期诊断率,改善整体治疗效果。     

胰腺癌相关糖尿病的血清蛋白质组学分析

目的 检测胰腺癌相关糖尿病的血清蛋白标志物,并建立诊断模型.方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱( SELDI-TOF-MS)技术检测17例胰腺癌相关糖尿病与17例新发2型糖尿病、17例健康对照者血清的差异表达蛋白,用Biomarker Patterns Software 5.0软件建立胰腺癌相关糖尿病诊断模型并验证.结果 在胰腺癌相关糖尿病、新发2型糖尿病,健康者各10例的蛋白指纹图谱中筛选出12个差异表达蛋白峰,其中质荷比为6116、6695、8936 Da的蛋白峰被选为建立胰腺癌相关糖尿病诊断模型的蛋白峰.该诊断模型的诊断正确率为90％.盲法验证各组另7例样本,正确诊断胰腺癌相关糖尿病患者达100％,新发2型糖尿病患者为71％,健康人群为86％.经检索蛋白质数据库,与以上3种差异表达蛋白分子质量最为接近的蛋白分别为金属硫蛋白、胰腺干细胞增殖分化因子和成纤维细胞生长因子 1.结论 通过SELDI方法筛选出3种胰腺癌相关糖尿病的血清蛋白标志物,建立了可靠的胰腺癌相关糖尿病的诊断模型.     

胰腺癌的早期诊断

胰腺癌恶性程度高,预后极差,目前临床早期诊断困难。回顾了胰腺癌发生、发展及转移过程中恶性分子生物学特征的变化及机制,从中分析可能用于胰腺癌临床诊断的靶点。归纳了胰腺癌的临床表现、高危因素、肿瘤标志物、联合检测及新设备在早期诊断中的作用,提出了合理联合应用血清学、影像学检查方法,研究、探寻新的肿瘤标志物均是目前提高临床胰腺癌早期诊断率的重要方法。     

血清唾液酸在肝癌患者诊疗中的临床价值

目的：评价血清唾液酸（SA）在肝癌诊断和疗效监测中的临床价值。方法检测2011年1月至2013年1月云南省第三人民医院就诊的163例肝癌（原发性肝癌135例,转移性肝癌28例）、234例其他肝病患者和300名健康人血清 SA含量;采用高、低两个浓度的样本,每日测量4次,连续测量5 d,评价 SA试剂盒的批内和批间变异系数（CV）;用135例原发性肝癌和300名健康人血清 SA检测数据绘制受试者工作特征（ROC）曲线确定 SA的临界值,并评价 SA的诊断价值。同时,对76例肝癌患者治疗前和治疗后1、7、14 d和1、3、6、9个月的 SA 水平进行追踪监测和评价分析。采用 SPSS 17.0进行统计分析。结果低浓度水平样本的批内和日间变异分别为2.4%和3.2%;高水平样本的批内和日间变异分别为2.2%和3.1%。用 ROC曲线确定 SA的临界值为659 mg/L,用其诊断肝癌的敏感度和特异度分别为63.7%（86/135）、94.6%（105/111）。肝癌患者血清 SA水平（726±123）mg/L明显高于其他肝病组（552±128）mg/L和健康对照组（599±62）mg/L,（U值分别为1832.52和887.00,均P〉0.01）。随访76例原发性肝癌患者,其血清 SA水平在治疗后1周升高（817±139）mg/L,（t=-3.272,P〉0.05）;持续到治疗后1个月（782±127）mg/L,（t=-2.694, P〉0.05）;在第3个月时,SA降低至治疗前水平（662±108）mg/L,（t=1.225,P〈0.05）;第6个月时降低至（615±124）mg/L,（t=1.999,P〉0.05）,接近健康对照组水平;有63例肝癌患者 SA水平与治疗前相比降低,与临床病情的符合率为82.9%（63/76,Kappa值=0.79）。有5例肝癌患者在治疗后第9个月复发,SA水平明显增高（939±155）mg/L。结论血清 SA对肝癌的辅助诊断和疗效监测可能有临床价值。     

胰腺癌肿标志物单项和联合检测的价值

目的 评价血清肿瘤标志物单项检测和联合检测对胰腺癌诊断的意义。方法 对10例慢性胰腺炎和51例胰腺癌病人用放免法测定血清CA199,CA50,CA125和CEA含量,分析并比较单项检测和联合检测的意义。结果 4种肿瘤标志物单项检测以CA199对胰腺癌诊断意义最大,敏感性和特异性最好,分别达92．5％和81．81％,误检率18．18％,漏检率7．5％,阳性预测值94．87％,阴性预测值75％,研究还发现CA199特别是胰体癌诊断有较大意义;联合检测以CA199＋x(CA50,CA125,CEA任一阳性）意义较大,敏感性87．5％,特异性81．81％,误检率18．18％,漏检率12．5％,阳性预测值94．59％,阴性预测值64．28％;但诊断 价值不大于CA199单项检测（P＞0．05）。结论 CA199检测对胰腺癌诊断意义较大,特别是对早期胰体癌诊断有较大意义;联合检测并不能提高CA199的诊断价值,却增加医疗费用,意义不大。     

微小核糖核酸-25在胃癌患者血清中的异常表达及其临床意义

目的 探讨微小核糖核酸-25(miRNA-25)在胃癌患者血清中的异常表达及其临床意义.方法 选择第四军医大学西京医院手术及随访资料完整的胃癌(86例)、胃腺瘤(70例)患者和健康对照者(80名)为研究对象,提取血清总RNA,在建立了稳定、敏感的血清miRNA-25绝对定量检测方法(qRT-PCR)的基础上,检测胃癌、胃腺瘤患者和健康对照者血清中miRNA-25表达水平.分析胃癌、胃腺瘤和健康对照者血清中的miRNA-25表达差异及血清miRNA-25表达水平与胃癌临床病理参数的关系.结果 胃癌患者血清中miRNA-25的表达水平(135.6 fmol/μg总RNA)显著高于胃腺瘤(67.7 fmol//μg总RNA)和健康对照者(62.2 fmol/μg总RNA,P＜0.01),同时miRNA-25的受试者工作特征曲线显示,血清miRNA-25对胃癌诊断具有良好的特异度和敏感度(曲线下面积=0.827);有淋巴结转移者[(148.3±10.2)fmol/μg总RNA]和临床病理分期Ⅲ/Ⅳ期[(146.7±9.5)fmol/μg总RNA]胃癌患者血清miRNA-25的表达分别明显高于无淋巴结转移者[(120.3±10.1)fmol/μg总RNA]和Ⅰ/Ⅱ期胃癌患者[(119.4±12.2)fmol/μg总RNA](P＜0.05);相关性研究结果表明,血清miRNA-25高表达胃癌患者的生存期与血清miRNA-25低表达胃癌患者无明显差异(P＞0.05).结论 血清miRNA-25的检测可能有助于胃癌的诊断和预后预测.

Abstract：

Objective To investigate the abnormal expression of microRNA (miRNA)-25 in the serum of gastric cancer patients and its clinical significance. Methods In Xijing Hospital of Digestive Diseases,Fourth Military Medical University,86 gastric cancer patients with operation and completed follow-up data,70 gastric adenoma patients and 80 healthy controls were selected as study objects.Total RNA was isolated from the serum. After the stable and sensitive miRNA-25 absolute quantity detection method established,the serum levels of miRNA-25 in gastric carcinoma patients,gastric adenoma patients and healthy controls were tested according to this method. The expression differences of miRNA-25 in the serum of patients with gastric cancer and gastric adenoma and healthy controls were analyzed with statistic analysis,and the correlation between miRNA-25 expression level and clinic pathological features of gastric cancer was also analyzed. Results The expression level of miRNA-25 in the serum of gastric cancer patients (135. 6 fmol/μg total RNA) was significantly higher than that of gastric adenoma patients (67. 7 fmol/μg total RNA) and healthy controls (62. 2 fmol/μg total RNA)(P＜0. 01). The receiver operating characterisstic curve of miRNA-25 indicated that serum miRNA-25 with good specificity and sensitivity in gastric cancer diagnosis (AUC=0. 827). The serum level of miRNA-25 in gastric cancer patients with lymph node metastasis [(148. 3±10. 2) fmol/μg total RNA] or clinicopathological stage Ⅲ /Ⅳ patients [(146. 7±9.5) fmol/μg total RNA] was significantly higher than that of gastric cancer patients without lymph node metastasis [(120. 3±10. 1)fmol/μg total RNA] or clinicopathological stage Ⅰ/Ⅱpatients [(119. 4±12. 2) fmol/μg total RNA] (P＜0.05). The correlation statistical analysis result indicated that there was no significant difference in survival period between serum miRNA-25 highly expressed and lowly expressed gastric cancer patients (P＞0. 05).Conclusion Serum miRNA-25 testing maybe helpful in diagnosis and prognosis of gastric cancer.     

CEA、CA19—9、CA50水平与胰腺癌分期和肿瘤大小的关系

目的探讨血清肿瘤标志物CEA、CA19-9、CA50水平与胰腺癌分期和肿瘤大小的关系。方法分别测定35例胰腺癌和36例慢性胰腺炎患者血清CEA、CA19—9与CA50水平。外科手术和（或）病理学判定TNM分期和肿瘤大小．分析两者之间的关系。结果血清CEA、CA19—9、CA50对胰腺癌诊断的敏感性分别为12％、82％、74%。特异性分别为75%、83％、77％。Ⅲ-Ⅳ期的CA19—9和CA50水平明显高于Ⅰ-Ⅱ期患者（P〈0.05）．CEA超过正常值者仅见于Ⅲ期以上胰腺癌患者。TS3-TS1组的CEA、CA19-9、CA50水平比TS1-TS2组明显增高（P〈0．05）。结论胰腺癌血清CEA、CA19—9、CA50水平与胰腺癌分期和肿瘤大小有一定相关性．对手术前判断胰腺癌的可切除性有一定的参考价值。     

胰腺癌患者血清中巨噬细胞因子-1、糖链抗原19-9、糖链抗原242及癌胚抗原的检测分析

目的 探讨血清巨噬细胞因子-1（MIC-1）、糖链抗原（CA）19-9 、CA242及癌胚抗原（CEA）在胰腺癌中的应用价值.方法 分析129例胰腺癌患者和120例健康体检者4项肿瘤标志物的检测结果,计算各肿瘤标志物组合方式对提高胰腺癌诊断的作用.结果 胰腺癌患者血清中各项肿瘤标志物的水平与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）.MIC-1＋CA19-9组合的敏感性与单项检测敏感性最高的MIC-1比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;MIC-1＋CA19-9组合的特异性与单项检测特异性最高的CA19-9比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.Ⅲ~Ⅳ期胰腺癌患者血清CA19-9、CA242水平与Ⅰ~Ⅱ期比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 4项肿瘤标志物的检测对胰腺癌的诊断均有一定的价值,MIC-1＋CA19-9联合检测可提高诊断的敏感性,同时未降低其特异性.CA19-9、CA242对判断胰腺癌的预后有一定价值.     

胰腺癌患者血清十二种肿瘤标记物的变化

目的 探讨定量测定胰腺癌患者血清12种肿瘤标志物的临床意义。方法 用蛋白芯片技术定量测定42例正常人、30例胰腺癌和16例胰腺炎患者血清12种肿瘤标志物的变化并对检测效果进行评价。结果 42例正常人血清CA19-9(KU/L)、NSE(μg/L)、CEA(μg/L)、CA242(KU/L)、Ferritin(μg/L)、β-HCG(μg/L)、AFP(μg/L)、f-PSA(μg/L)、PSA(μg/L)、CA125(KU/L)、HGH(μg/L)和CA153(KU/L)的含量分别为:12.42±10.62、2.24±1.41、1.78±1.04、5.73±5.67、91.17±78.47、0.64±0.33、2.96±3.89、0.13±0.11、0.62±1.38、5.46±9.53、1.63±2.37、9.83±9.40;30例胰腺癌患者血清12种肿瘤标志物含量依次为:279.47±402.0、9.50±11.30、8.57±21.95、98.23±89.33、301.98±216.63、1.49±2.28、5.50±7.69、0.27±0.62、1,62±3.23、167.16±252.49、3.38±8.38、43.22±99.34;16例胰腺炎患者其含量依次为:53.38±86.38、12.78±28.50、1.20±0.94、22.99±51.13、343.43±308.27、3.63±11.99、5.09±3.66、0.10±1.32、0.66±0.61、98.67±212.23、1.79±1.63、4.15±2.13。该蛋白芯片测定的敏感性为70.0％,特异性为89.7％,阳性预测值为77.8％,阴性预测值为88.1％。结论 采用蛋白芯片技术同时测定患者血清中多种肿