低氧诱导因子-1α对成骨细胞功能的调控作用

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响. 方法 分别在21%和2%O2浓度下培养成骨细胞,21%O2 培养24 h和2%O2培养6、12、24 h后分别检测成骨细胞表达HIF-1α、血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平,检测成骨细胞增殖率、分泌碱性磷酸酶情况以及钙结节形成情况. 结果 与21%O2培养相比,2%O2浓度下,成骨细胞在mRNA和蛋白水平HIF-1α表达均上升,同时成骨细胞表达血管内皮生长因子、核结合因子a1、骨钙素的水平逐渐升高;成骨细胞增殖率增加,分泌碱性磷酸酶的能力以及钙结节形成能力也逐渐增强. 结论 在2%O2浓度下24 h内,HIF-1α能促进成骨细胞增殖、分化和矿化,从而促进成骨细胞的成骨功能.     

低氧诱导因子-1α在骨形成过程中对成骨细胞功能的调控

目的探讨低氧诱导因子（HIF）-1α对成骨细胞功能的调控及其在骨形成过程中的作用。方法应用Cre-Loxp重组酶技术,在体内外条件性敲除成骨细胞中的HIF-1α基因及其上游调控VHL基因,在体外将成骨细胞在2％氧浓度培养48h后检测血管内皮生长因子（VEGF）、核结合因子a1（RunX2）、碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OC）的表达,在体内取3个月龄小鼠股骨远端骨组织,应用组织切片和Micro-CT方法检测骨组织形态计量学指标和骨矿密度（BMD）。结果体外条件性敲除成骨细胞中的HIF-1α基因后,由于HIF-1α的表达下降导致VEGF、RunX2、ALP、OC的表达水平降低,而敲除VHL基因后由于HIF-1α的表达上调导致上述基因的表达升高。体内条件性敲除HIF-1α基因小鼠骨组织形态计量学指标和BMD均劣于野生型小鼠,而体内条件性敲除VHL基因小鼠以上指标均优于野生型小鼠。结论在生理和病理条件下,由于低氧环境的存在,HIF-1α能够通过促进成骨细胞的功能而调控骨形成过程。     

补肾复方胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响

目的：观察补肾复方胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法：从新生SD大鼠颅骨获取成骨细胞进行培养,取第三代大鼠成骨细胞,分别予以5%、10%、20%浓度的含药血清和10%对照血清培养,测定成骨细胞的增殖率、碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节数目。结果：与对照组比较,除3d、6d的低浓度组外,其它各组、各时间点均可增加成骨细胞增殖,差异有统计学意义（P〈0.05或0.01）;除低浓度组培养24 h外,各浓度给药组培养24 h、48 h、72 h后,碱性磷酸酶分泌均呈不同程度增加（P〈0.05或0.01）;各浓度均可增加骨钙素的分泌（P〈0.05或0.01）,尤以高剂量组为显著（P值均〈0.01）;中、高浓度可以显著促进矿化结节形成,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：补肾复方胶囊含药血清在体外可以促进成骨细胞的增殖、分化和矿化,为其治疗骨质疏松提供实验依据。     

体外培养大鼠颌骨成骨细胞成骨及成血管相关因子表达检测

目的 探讨体外培养的大鼠颌骨成骨细胞成骨及成血管相关因子的表达情况。 方法 体外分离培养大鼠颌骨成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色(ALP)与矿化结节茜素红染色对细胞进行鉴定。应用实时荧光定量聚合酶链反应及酶联免疫吸附法检测细胞成骨与成血管相关细胞因子的表达情况。 结果 体外培养的大鼠颌骨成骨细胞ALP及矿化结节茜素红染色均为阳性。颌骨成骨细胞在高表达成骨相关基因、Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原和骨钙素的同时,在蛋白及基因水平均高表达成血管相关细胞因子血管内皮生长因子、血管生成素1和成纤维生长因子2。 结论 颌骨成骨细胞在成骨分化的同时可通过分泌成血管相关细胞因子参与血管化调控。     

高表达低氧诱导因子-1对成骨细胞增殖及细胞周期的调控研究

目的探讨低氧情况下高表达低氧诱导因子HIF-1对成骨细胞增殖及细胞周期的影响。方法获取大鼠颌面部成骨细胞,分别在低氧含量（2%O2）、常规氧含量（21%O2）及低氧含量（2%O2）＋二甲氧乙二酰甘氨酸（DMOG）条件下进行培养,在不同培养时间分别检测成骨细胞表达的增殖能力、细胞周期变化及HIF-1蛋白的表达。结果在低氧情况下,成骨细胞增殖活性降低,细胞周期分析可见处于分裂期细胞减少,加入DMOG后细胞的HIF-1蛋白处于高表达,细胞增殖特性与常规氧含量相比无统计学差异。结论 DMOG可促进低氧状态下成骨细胞低氧诱导因子-1的高表达,有利于低氧状态下成骨细胞的增殖活性回复,可加快骨生长,为骨缺损的治疗开辟了新途径。     

骨碎补总黄酮对大鼠成骨细胞VEGF和FGF-2表达的影响

目的：观察骨碎补总黄酮对体外培养大鼠成骨细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2,FGF-2）表达以及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性和矿化结节的影响。方法：在大鼠成骨细胞体系中加入不同浓度的骨碎补总黄酮作用24 h和48 h。采用ELISA和RT-PCR法检测VEGF和FGF-2表达变化,PNPP法检测ALP活性以及von Kossa染色检测矿化结节形成。结果：骨碎补总黄酮可刺激VEGF和FGF-2,使其在蛋白和mRNA水平表达均明显升高,显著提高成骨细胞ALP的活性和促进矿化结节的形成。结论：骨碎补总黄酮可提高成骨细胞VEGF和FGF-2的表达,促进其成骨作用。     

低氧微环境对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及HIF-1α表达的影响

目的观察低氧微环境对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响;探索不同时间梯度和细胞密度在低氧微环境下对HIF-1α表达的影响。方法 (1)构建脑胶质瘤细胞(T98G)生长的缺氧微环境,将细胞设为低氧组(1%氧气含量)和常氧组(21%氧气含量),在不同氧浓度下培养4～72 h后观察细胞生长情况;利用western blot印迹法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达情况;(2)将低氧组T98G细胞设计为四组不同细胞密度,在1%O2的低氧浓度下培养24 h,通过Western blot检测四组细胞HIF-1α表达情况。结果 (1)倒置显微镜和Hoechest染色均未见低氧组和常氧组细胞发生明显的细胞凋亡,MTT法检测二组细胞均呈增殖状态。与常氧组相比,低氧组细胞HIF-1α蛋白明显高表达(P <0.001)。低氧组细胞在4、6、12、24 h (<24 h) HIF-1α蛋白表达量快速升高(P <0.05),24、48、72 h (> 24 h) HIF-1α蛋白表达量逐渐下降;(2)低氧微环境下四组不同细胞密度中,24 h后高密度组(8.5万个细胞/cm2)细胞的HIF-... 更多     

柠檬酸化硫酸钙对鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的:观察柠檬酸化硫酸钙对成骨细胞功能的影响,探讨该材料作为骨移植替代材料的可行性。方法:采用体外培养成骨细胞的方法,观察材料浸提液对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶和骨钙素分泌能力的影响。结果:在100%浓度柠檬酸化硫酸钙浸提液中培养的成骨细胞增殖相对缓慢(但相对增殖率>90%),其细胞核内嗜银蛋白颗粒染色分析与对照组无显著性差异(P>0.05),其分泌骨钙素、碱性磷酸酶能力显著高于对照组(P<0.01)。结论:柠檬酸化硫酸钙对成骨细胞不具有细胞毒性作用,随着硫酸钙的溶解,在材料植入部位的局部形成高钙环境,这有利于成骨细胞的增殖和分化促进新骨的形成。     

低氧对小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1表达的影响

目的 探讨低氧环境对小鼠成骨细胞富含半胱氨酸61(Cyr61/CCN1)表达的影响.方法 分别在氧浓度和去铁敏诱导的低氧环境下培养小鼠成骨细胞,Real-time PCR和Western blotting于不同时间点检测成骨细胞低氧诱导因子- 1α(HIF-1α)、Cyr61/CCN1和血管内皮生长因子的表达.分别敲除小鼠成骨细胞中HIF-1α和VHL基因,检测细胞Cyr61/CCN1的表达.结果 两种低氧环境下,小鼠成骨细胞HIF-1α通路被激活,Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05或P<0.01).HIF-1α基因敲除小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著减少,VHL基因敲除成骨细胞Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05或P<0.01).结论 低氧环境通过激活HIF-1α通路来上调小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1的表达.     

红曲有效成分对体外培养成骨细胞增殖分化及矿化功能的影响

[目的]通过红曲有效成分对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能影响的研究,对有效成分抗骨质疏松症的作用机理进行初步探讨。[方法]取成年SD大鼠40只,随机分为空白组、倍美力组、-αD3组、红曲有效成分组4组,每组10只,分别予以生理盐水、倍美力水溶液、-αD3水溶液及红曲有效成分水溶液灌胃,10d后,制备含药血清;将从出生24h内的新生大鼠颅骨取材的成骨细胞培养于上述含药血清培养基中,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、BMP-2免疫组化染色及茜素红染色方法观察红曲有效成分对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶表达、BMP-2表达及矿化结节形成的影响。[结果]红曲有效成分组的成骨细胞数量、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成明显增加,而且发现BMP-2阳性率高于空白组。[结论]红曲有效成分能治疗骨质疏松症,其机制可能是通过促进成骨细胞增殖、分化、矿化及BMP-2表达来实现的。     

低氧浓度改变对神经干细胞增殖分化及HIF-1α表达的影响

目的:探讨不同的低氧浓度下离体培养胎鼠脑皮质神经干细胞(NSCs)的增殖分化及HIF-1α的表达情况,以此分析HIF-1α对神经干细胞的增殖分化作用。方法:体外低氧条件下(3%O2和10%O2)培养扩增胚鼠皮质来源的神经干细胞,实验组分为3%O2低氧1、3、5d组;10%O2低氧1、3、5d组,常氧为对照组。免疫细胞化学染色法鉴定神经干细胞及其子代细胞。RT-PCR检测实验组细胞HIF-1αmRNA的表达。结果:各低氧组NSCs内HIF-1αmRNA的表达量均明显高于对照组,且10%O2组与3%O2组相比,低氧5dHIF-1αmRNA的表达量显著增加;实验组NSE阳性神经元的比率均明显高于对照组,10%O2组与3%O2组相比,低氧5d10%O2组中NSE阳性神经元的比率明显增高。结论:低氧可促进NSCs增殖分化及HIF-1αmRNA的表达,且HIF-1αmRNA的表达量与低氧浓度及时间有关。     

低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-1α和低氧诱导因子-2α的差异性调控作用

目的探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因。方法体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用。通过加入线粒体活性氧族阻断剂观察低氧对HIF-2α和HIF-lα蛋白表达的影响,探讨其表达调控的机制。结果正常氧条件下,SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中,HIF-1α几乎不表达,HIF-2α在整细胞提取物中有少量表达,但在细胞核提取物中无明显表达。经低氧(0.5%O2)处理4 h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多;HIF-2α和HIF-1α蛋白与细胞浓度、氧浓度有关;HIF-1α蛋白在低氧4 h后增加,6 h后显著降低,而HIF-2α蛋白低氧4 h增加后并保持于此水平。HIF-1αmRNA水平在低氧6～12 h时降低,而HIF-2αmRNA表达持续升高;经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇处理4 h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白水平明显降低。结论低氧可在肺腺癌细胞诱导HIF-1...     

低氧通路对骨髓间充质干细胞多向分化能力的影响

目的探讨低氧通路中低氧诱导因子1α(H IF-1α)对骨髓间充质干细胞(MSCs)多向分化能力的影响。方法以腺病毒载体Ad-Cre对转基因鼠MSCs的VHL基因进行基因敲除(基因敲除组),设立对照组(感染腺病毒载体Ad-GPF的转基因鼠MSCs),采用Real-Tim e PCR技术检测H IF-1αmRNA表达。两组MSCs分别经成脂肪和成软骨诱导分化培养14 d,成骨诱导分化培养21 d;其中基因敲除组MSCs于5%O2条件下培养,对照组MSCs于20%O2条件下培养。采用Real-Tim e PCR技术检测软骨细胞标志物Ⅱ型胶原(ColⅡ)、脂肪细胞标志物过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及成骨细胞标志物骨钙素(OC)和碱性磷酸酶(ALP)的mRNA表达;ColⅡ染色和ALP染色光学显微镜观察两组ColⅡ和ALP染色阳性细胞的分布情况。结果基因敲除组H IF-1αmRNA表达显著高于对照组(P<0.05)。5%O2条件下培养的基因敲除组ColⅡ、PPARγ、OC、ALP mRNA表达均显著高于20%O2条件下培养的对照组(P<0.05)。与对照组比较,基因敲除组ColⅡ染色和ALP染色阳性细胞数...     

接骨中药含药血清对成骨细胞生物功能的影响

目的 比较伤科常用单味接骨中药含药血清对成骨细胞生物学功能的影响。方法 应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、茜素红染色方法和RT-PCR法，比较伤科常用单味中药当归、自然铜、骨碎补和续断对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶分泌、矿化结节形成和mRNA表达的影响。结果 单味中药当归对早期增殖期的成骨细胞有明显的促增殖和分化的作用；当归和自然铜能增加成骨细胞矿化期矿化结节的形成；当归和续断能上调BMP-2和IGF-ImRNA的表达。结论 单味接骨中药当归具有刺激体外培养成骨细胞增殖和分化的功能。     

接骨中药含药血清对成骨细胞生物功能的影响

目的比较伤科常用单味接骨中药含药血清对成骨细胞生物学功能的影响.方法应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、茜素红染色方法和RT-PCR法,比较伤科常用单味中药当归、自然铜、骨碎补和续断对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶分泌、矿化结节形成和mRNA表达的影响.结果单味中药当归对早期增殖期的成骨细胞有明显的促增殖和分化的作用;当归和自然铜能增加成骨细胞矿化期矿化结节的形成;当归和续断能上调BMP-2和IGF-Ⅰ mRNA的表达.结论单味接骨中药当归具有刺激体外培养成骨细胞增殖和分化的功能.     

Leptin对人成骨细胞增殖和功能的影响

目的 观察瘦素（leptin)对人成骨细胞增殖和功能的影响。方法 培养人成骨细胞,并观察其形态及功能变化。采用MTT比色法检测不同浓度的Leptin对人成骨细胞增殖的影响,同时观察不同浓度Letptin条件下骨钙素浓度的变化,并用细胞总蛋白较正。结果 体外培养的人成骨细胞大多呈长梭型,碱性磷酸酶组织化学染色、骨钙素免疫荧光组织化学染色阳性,培养液中加入β-甘油磷酸及L－抗坏血酸后钙茜素红染色阳性,在加入不同浓度Leptin后1、2、3天,人成骨细胞增殖无显著变化。Leptin可刺激骨钙素分泌,呈浓度依赖性（P＜0．05）,但无时间依赖性（P＞0．05）。结论 Leptin对人成骨细胞增殖无影响,但可刺激人成骨细胞功能。     

Influences of Shudi (Radix Rehmanniae Praeparata) and Biejia ( Carapax Trionycis ) on osteoblast proliferation, and expressions of alkaline phosphatase protein and Cbfα1 mRNA in rats

目的 观察熟地、鳖甲含药血清对大鼠成骨细胞增殖和功能的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为3组后,分别灌服高浓度熟地、鳖甲煎剂( 3.25 g/kg)、低浓度熟地、鳖甲煎剂(1.625 g/kg)及等量容积的蒸馏水,连续灌胃3d,制得大鼠高、低剂量熟地、鳖甲含药血清及空白对照血清.原代培养并传至第3代经碱性磷酸酶鉴定取得的大鼠成骨细胞,消化计数铺板并分为3组,以上述血清处理72 h,MTT法检测成骨细胞的增殖率,ELISA法检测碱性磷酸酶(ALP)分泌量并以相应OD值进行纠正,并且运用实时荧光定量PCR检测各组成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达情况.结果 低剂量含药血清组成骨细胞增殖率、ALP浓度及Cbfα1 mRNA表达量明显高于其他2组.结论 熟地、鳖甲可能是通过提高成骨细胞的增殖潜能而起骨保护作用的.     

熟地、鳖甲对大鼠成骨细胞增殖、碱性磷酸酶蛋白和核心结合因子α1 mRNA表达的影响

目的观察熟地、鳖甲含药血清对大鼠成骨细胞增殖和功能的影响。方法雄性SD大鼠随机分为3组后,分别灌服高浓度熟地、鳖甲煎剂(3.25 g/kg)、低浓度熟地、鳖甲煎剂(1.625 g/kg)及等量容积的蒸馏水,连续灌胃3 d,制得大鼠高、低剂量熟地、鳖甲含药血清及空白对照血清。原代培养并传至第3代经碱性磷酸酶鉴定取得的大鼠成骨细胞,消化计数铺板并分为3组,以上述血清处理72 h,MTT法检测成骨细胞的增殖率,ELISA法检测碱性磷酸酶(ALP)分泌量并以相应OD值进行纠正,并且运用实时荧光定量PCR检测各组成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达情况。结果低剂量含药血清组成骨细胞增殖率、ALP浓度及Cbfα1 mRNA表达量明显高于其他2组。结论熟地、鳖甲可能是通过提高成骨细胞的增殖潜能而起骨保护作用的。     

Effects of the serum containing LBP on proliferation, differentiation and mineralization of MC3T3-E1 osteoblastic cells

目的 研究含枸杞多糖血清对MC3T3-E1成骨细胞细胞增殖、分化和矿化的影响.方法 含枸杞多糖血清分别加入MC3T3-E1成骨细胞培养液中,使其终浓度为 5% 、10% 、20% 3种体积浓度,通过MTT法,碱性磷酸酶活性测定,骨钙素检测和Von kossa矿化染色法观察含枸杞多糖血清的促细胞增殖、分化、矿化作用.结果 含枸杞多糖血清在5%、10%浓度促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,差异有统计学意义(P＜0.05);10%、20%浓度提高MC3T3-E1成骨细胞内碱性磷酸酶的活性,差异有统计学意义(P＜0.01).含枸杞多糖血清在20%浓度培养7及11 d时能明显促进MC3T3-E1成骨细胞骨钙素合成和分泌,20%浓度培养18 d时MC3T3-E1成骨细胞的矿化结节数目增多,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 含枸杞多糖血清可以促进MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化能力.     

含枸杞多糖血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究含枸杞多糖血清对MC3T3-E1成骨细胞细胞增殖、分化和矿化的影响。方法含枸杞多糖血清分别加入MC3T3-E1成骨细胞培养液中,使其终浓度为5%、10%、20%3种体积浓度,通过MTT法,碱性磷酸酶活性测定,骨钙素检测和Von kossa矿化染色法观察含枸杞多糖血清的促细胞增殖、分化、矿化作用。结果含枸杞多糖血清在5%、10%浓度促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05);10%、20%浓度提高MC3T3-E1成骨细胞内碱性磷酸酶的活性,差异有统计学意义(P<0.01)。含枸杞多糖血清在20%浓度培养7及11 d时能明显促进MC3T3-E1成骨细胞骨钙素合成和分泌,20%浓度培养18 d时MC3T3-E1成骨细胞的矿化结节数目增多,差异有统计学意义(P<0.01)。结论含枸杞多糖血清可以促进MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化能力。