椎间盘退变与椎间盘软骨终板退变

<正>腰腿痛是常见的骨科疾病。主要由脊柱退行性疾病引起。流行病调查表明,80%的成年人受到腰腿痛的困扰。随着社会的发展及工作方式的变化,腰腿痛发病率逐渐上升,仅在美国,每年此疾病医疗费用达160亿美元[1]。由于该病症状多元化,一旦患病,很难完     

羟基红花黄素A拮抗IL-1β诱导软骨终板细胞凋亡的作用机制

目的探讨羟基红花黄素A(hydroxy safflower yellowA,HSYA)对IL-1β诱导小鼠软骨终板细胞凋亡的拮抗作用。方法用10μg.L-1的IL-1β诱导正常软骨终板细胞退变,分别制备不同浓度的HSYA培养基作为干预措施,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因的表达水平。采用Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达量,细胞免疫荧光分析各组Bax、Bcl-2细胞内定位。结果不同浓度的HSYA培养基均能拮抗IL-1β诱导的软骨细胞凋亡。流式细胞分析结果显示各浓度HSYA可以降低IL-1β诱导的小鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡比例;RT-PCR结果显示各浓度HSYA可拮抗IL-1β诱导细胞上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达作用;细胞免疫荧光结果显示HSYA 10-5 mol.L-1给药组可下调Bax表达,上调Bcl-2表达;Western blot结果显示HSYA 10-5 mol.L-1和HSYA10-6 mol.L-1均可以拮抗IL-1β诱导细胞上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达作用。结论羟基红花黄素A具有拮抗IL-1β诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的作用。     

六味地黄丸对兔退变椎间盘软骨终板细胞的保护作用

目的探讨六味地黄丸含药血清对兔退变椎间盘软骨终板细胞的保护作用。方法选择8月龄成年新西兰兔利用"异常应力负荷及椎间失稳法"建立新西兰兔腰椎椎间盘退变模型。病理切片确认模型成功后,取椎间盘分离下位软骨终板进行细胞培养,将生长良好的细胞随机分为含药组、损伤组与对照组。含药组体积分数为10%的六味地黄丸含药血清加体积分数为10%的胎牛血清与浓度为5μg·L-1的TNF-α混合的DMEM培养基;损伤组给予体积分数为10%的胎牛血清与浓度为5μg·L-1的TNF-α混合的DMEM培养基;对照组细胞培养用胎牛血清体积分数为10%的DMEM培养基。使用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测各组兔退变椎间盘软骨终板细胞增殖的变化。TUNEL法计数软骨终板活细胞与凋亡细胞数量,RT-PCR测定其Fas/Fas L的表达水平。结果对照组软骨终板细胞初期正常生长,增殖良好,随着时间延长,软骨终板细胞数量减少,凋亡细胞数量增多,细胞外基质胶原减少,细胞形态变化快。损伤组能够明显抑制椎间盘软骨终板细胞的增殖,软骨细胞及细胞外基质胶原数量减少明显,同一时间点比较,软骨细胞凋亡数量增多,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。而含药组软骨终板细胞增殖缓慢,软骨细胞下降少,细胞凋亡数量减少,细胞外基质胶原成分下降不明显,3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组软骨终板内Fas/Fas L的表达水平随时间逐渐增强,同期比较,损伤组Fas/Fas L表达水平高于对照组,而含药组软骨终板水平Fas/Fas L较损伤组表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论六味地黄丸含药血清能够抑制TNF-α诱导的兔退变椎间盘软骨终板细胞损伤,减少软骨细胞凋亡,起到延缓椎间盘损伤的作用,其机制可能与抑制Fas/Fas L基因在退变椎间盘软骨终板中的过度表达有关。     

刺五加苷B对IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的 探究刺五加苷B（acanthopanax B,ACA-B）对IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法 取SD大鼠软骨细胞随机分成5组,分别为对照组（PBS）、模型组（IL-1β）、ACA-B低剂量组（IL-1β+1×10^-8 mol·L^-1 ACA-B）、ACA-B中剂量组（IL-1β+1×10^-7 mol·L^-1 ACA-B）、ACA-B高剂量组（IL-1β+1×10^-6 mol·L^-1 ACA-B）;CCK8法检测不同浓度的ACA-B对软骨细胞增殖的影响,以及对IL-1β处理的软骨细胞活性的影响;采用Hoechst 33342染色观察软骨细胞核凋亡情况;采用qRT-PCR法检测凋亡相关基因的mRNA表达水平;采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果 当ACA-B浓度为1×10^-6 mol·L^-1或1×10^-7 mol·L^-1时,能够显著促进软骨细胞增殖。与模型组相比,ACA-B各组细胞活力明显增加;Hoechst 33342染色结果显示,ACA-B能够明显改善IL-1β诱导的软骨细胞核碎裂,萎缩现象,抑制细胞凋亡;与模型组比较,ACA-B加药组细胞中Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的mRNA及蛋白水平显著降低,Bcl-2的mRNA及蛋白水平显著升高。结论 刺五加苷B能够有效抑制IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞凋亡。     

自噬促进IL-1β诱导的大鼠INS-1胰岛β细胞凋亡

目的观察自噬在IL-1β促进INS-1胰岛β细胞凋亡中的作用。方法体外培养大鼠INS-1胰岛β细胞株,给予不同浓度IL-1β干预,用CCK-8法检测在不同作用时间点INS-1细胞的存活率;用Western blot技术检测不同IL-1β浓度下自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62的表达水平;Western blot法和流式细胞术检测INS-1细胞的凋亡水平。结果 IL-1β可以降低INS-1细胞的存活率,且呈浓度及时间依赖性(P<0.05,P<0.01)。与对照组相比,随着IL-1β浓度的增高,INS-1细胞凋亡水平逐渐升高(P<0.05),且细胞自噬水平也随着IL-1β浓度的增高而逐渐增高(自噬相关蛋白LC3、Beclin1表达上升,P62降低,P<0.05)。采用自噬激动剂雷帕霉素预处理细胞上调自噬可进一步增加IL-1β诱导的细胞凋亡,而用自噬抑制剂3-MA预处理抑制细胞自噬后则可逆转IL-1β诱导的INS-1胰岛细胞凋亡。结论 IL-1β通过诱导自噬增加促进INS-1胰岛β细胞凋亡。     

益气化瘀补肾方对大鼠损伤椎间盘软骨终板细胞的影响

目的观察益气化瘀补肾方对大鼠损伤椎间盘软骨终板细胞的影响方法选择SPF级Wistar大鼠椎间盘分离软骨终板并培养,将生长良好的细胞随机分为正常组、诱导损伤组与给药组。正常组细胞培养用胎牛血清体积分数为0.005的DMEM培养基;诱导损伤组给予体积分数为0.005的胎牛血清与浓度为10μg/L的白介素-1β(IL-1β)混合的DMEM培养基;给药组为益气化瘀补肾方含药血清加体积分数为0.005的胎牛血清与浓度为10μg/L的IL-1β混合的DMEM培养基。使用细胞增殖—毒性检测试剂盒(CCK-8)检测各组大鼠椎间盘软骨终板细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR检测聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶-13基因的表达差别。流式细胞仪检测益气化瘀补肾方对软骨终板细胞凋亡的影响。结果正常组软骨终板细胞正常生长,增殖良好,诱导损伤组椎间盘软骨终板细胞的增殖受到明显抑制,给药组软骨终板细胞增殖缓慢,3组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,诱导损伤组软骨终板细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原基因表达下调,基质金属蛋白酶-13基因表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。而给药组较诱导损伤组软骨终板细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原基因表达上调,基质金属蛋白酶-13基因表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论益气化瘀补肾方含药血清能够抑制IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞损伤,起到延缓椎间盘推变的作用。     

小分子药物kartogenin保护终板软骨退变的实验研究

目的：研究小分子药物kartogenin（KGN）对终板软骨组织细胞外基质分泌的影响,探讨其在终板软骨以及椎间盘退变中的作用。方法：建立大鼠椎间盘体外器官退变模型,分为对照组、退变组（穿刺注射生理盐水）、KGN处理组（穿刺注射100nmol／LKGN）,利用HE染色观察终板软骨及椎间盘形态,番红一固绿染色观察终板软骨细胞外基质的分泌。通过Realtime—PCR评价三组终板软骨组织中Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9的表达变化,Westernblot检测Ⅱ型胶原、SOX-9蛋白表达变化。结果：HE染色结果显示与对照组比较,退变组椎间盘髓核消失,终板软骨减少,发生明显退变,KGN处理组椎间盘结构较完整;番红一固绿染色可见实验组较对照组终板软骨细胞外基质分泌增多。Reahime-PCR结果显示退变组终板软骨组织Ⅱ型胶原、蛋白聚糖及SOX-9表达明显下调,KGN处理组中终板软骨组织Ⅱ型胶原、蛋白聚糖及SOX-9表达上调;Westernblot结果显示实验组软骨细胞中Ⅱ型胶原、SOX-9蛋白表达明显增高。结论：体外穿刺及培养能够诱导椎间盘及终板软骨的退变,小分子药物KGN能够促进终板软骨细胞外基质的分泌从而保护终板软骨及椎间盘的退变。     

转化生长因子β1及白介素-1β对终板软骨细胞的作用

目的:探讨椎间盘退变中转化生长因子β1(TGF-β1)与白介素-1β(IL-1β)在终板软骨细胞中的相关表达情况。方法:通过免疫组化SP染色法检验TGF-β1与IL-1β在颈椎病患者及对照组椎体软骨终板中的表达情况。结果:颈椎病患者的TGF-β1及IL-1β的阳性率与对照组具有统计学差异(P<0.05)。结论:TGF-β1与IL-1β参与了椎间盘退变及病情发展,在整个椎间盘退变及发病过程中起到了至关重要的作用。     

补阳还五汤对兔退变椎间盘中软骨终板血管芽的影响及意义

目的 观察补阳还五汤对兔退变椎间盘中软骨终板血管芽数目的影响,探讨其对椎间盘退变的治疗作用.方法 ①建立兔腰椎间盘退变模型,并用病理切片论证造模是否成功.②将造模后的兔子随机分成对照组(n=10)和治疗组(n=10),分别予生理盐水和补阳还五汤治疗;治疗后1、2月各处死4只兔子取腰4/5椎间盘下位软骨终板做软骨终板内血管芽数目测定.结果 ①造模后2个月,椎间盘病理切片证明造模成功.②治疗组软骨终板内血管芽数目逐渐增加;而对照组组软终板内血管芽数目逐渐减少,组间和组内对比具有显著差异(P＜0.05).结论 补阳还五汤具有促进退变椎间盘软骨终板中血管芽再生和改善软骨终板血供的作用,是防治椎间盘退变新的途径.     

桃仁-红花药对对动静力失衡性大鼠椎间盘软骨终板退变的影响

目的探讨桃仁-红花药对对大鼠颈椎间盘软骨终板退变的影响。方法选取清洁级健康Wistar大鼠50只,♂,随机分为对照组、模型组、假手术组、美洛昔康组、桃仁-红花药对组,每组10只。其中模型组、美洛昔康组、桃仁-红花药对组通过手术方法建立动静力失衡性大鼠椎间盘退变模型,假手术组切开皮肤后不做进一步操作。造模12周后,对照组、模型组、假手术组每日给予生理盐水灌胃,美洛昔康组、桃仁-红花药对组每日分别给予等量美洛昔康悬浊液、桃仁-红花煎剂灌胃,连续给药30 d后处死全部大鼠,完整取出C_4/5、C_6/7椎间盘。C_4/5椎间盘固定、切片,ABOG染色法观察椎间盘组织形态学变化;免疫组化法检测Ⅱ型胶原(type Ⅱ collagen,Col Ⅱ)、X型胶原(type X collagen,Col X)蛋白的表达情况;C_6/7椎间盘提取总mRNA,实时定量PCR检测Col Ⅱ、Col X基因的表达情况。结果与模型组比较,桃仁-红花药对组上调软骨终板细胞Col Ⅱ的mRNA及蛋白表达,下调软骨终板细胞Col X的mRNA及蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论桃仁-红花药对可以抑制动静力失衡性大鼠椎间盘退变中的软骨终板退变,进而延缓椎间盘退变。     

补阳还五汤对兔腰椎间盘退变模型中软骨终板的影响

目的观察补阳还五汤对兔退变椎间盘中软骨终板的蛋白多糖（简称：PG）含量的影响,探讨其对椎间盘退变的治疗作用。方法①建立兔腰椎间盘退变模型,并用病理切片论证造模是否成功。②将造模后的兔子随机分成对照组（n=10）和治疗组（n=10）,分别予生理盐水和补阳还五汤治疗;治疗后1、2月各处死4只兔子取腰4/5椎间盘下位软骨终板做蛋白多糖（PG）含量测定。结果①造模后2月,椎间盘病理切片证明造模成功。②治疗组软骨终板中蛋白多糖逐渐含量增加;而对照组组软终板内蛋白多糖含量逐渐减少,组间和组内对比具有显著差异（P〈0.05）。结论补阳还五汤具有提高退变椎间盘软骨终板中蛋白多糖含量、抑制和治疗软骨终板退变的作用,是防治椎间盘退变新的途径。     

软骨间层蛋白对椎间盘退行性变影响研究进展

软骨间层蛋白（cartilage Intermediate layer Protein,CILP）是人类关节软骨的基质组成成分,因其分布只局限于软骨组织特别是在软骨中间层分布丰富而得名[1]。但目前在半月板[2]、肌腱[3]、韧带[2]、滑膜[4]及椎间盘[5]均发现其存在。CILP在椎间盘组织中广泛存在,而且,其表达随年龄而增加,最近发现,CILP基因与腰椎间盘退行性疾病有关联。     

白细胞介素1β转化酶抑制剂对胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的诱导

目的 探讨白细胞介索(IL)1β转化酶(ICE)抑制剂诱导急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的作用.方法 120只SD大鼠随机分为假手术对照组(S)、胰腺炎组(P)和ICE抑制剂干预组(Ⅰ),每组40只.各组造模后在2、6、12和24 h 4个时间点分别检测10只大鼠.Ⅰ组于制模前48 h开始腹腔注射ICE抑制剂0.25 mg/100 mg体质量,间隔12 h注射一次.P组仪同时注射等量生理盐水.应用ELISA方法、细胞凋亡原位标记(TUNEL)染色等检测血清中淀粉酶、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β和胰腺细胞凋亡.结果 HE染色见胰腺组织中典型的细胞核固缩及凋亡小体形成.Ⅰ组各个时间点病理学评分和血淀粉酶、TNF-α、IL-1βp浓度均明显低于P组,胰腺细胞凋亡指数显著高于P组(P<0.01).结论 ICE抑制剂能减轻急性胰腺炎严重程度,其机制可能与其对炎症介质的抑制和诱导胰腺腺泡细胞的凋亡有关.     

髓核内注射预TGF-β1防软骨终板退行性变的实验研究

目的 探讨髓核内注射转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对预防椎间失稳后软骨终板退行性变的作用.方法 选用6月龄日本大耳白兔36只,随机分为对照组和预防组,每组18只.所有实验动物均制作为腰5-6、腰6-7椎间失稳模型.对照组不予任何处理.预防组在完成椎间失稳手术后立即于同一切口通过侧后方入路显露腰5~6、腰6-7椎间盘,并行髓核内注射TGF-β1.于术后3、6个月各取8只进行HE染色及Mankin评分.结果 术后3、6个月预防组较对照组软骨终板退行性变明显减缓(P＜0.05,P＜0.01).结论 髓核内注射TGF-β1对椎间失稳后软骨终板退行性变具有明显的预防作用.     

髓核内注射预TGF-β1防软骨终板退行性变的实验研究

目的 探讨髓核内注射转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对预防椎间失稳后软骨终板退行性变的作用.方法 选用6月龄日本大耳白兔36只,随机分为对照组和预防组,每组18只.所有实验动物均制作为腰5-6、腰6-7椎间失稳模型.对照组不予任何处理.预防组在完成椎间失稳手...     

氧氟沙星通过抑制β1整合素诱导关节软骨的细胞凋亡

目的本研究将以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象,以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型,从β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路方面探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。方法藻酸微囊包被3周龄新西兰兔关节软骨细胞,培养4d后给予10μg/ml的氧氟沙星,用免疫共沉淀试验、荧光双染凋亡定量试验以及Westernblot研究氧氟沙星是否会对软骨细胞β1整合素功能和ERK/MAPK信号通路有影响。结果与对照组相比,各个时间点的β1整合素mRNA水平基本没有变化;但是,在同样条件下,从作用48h开始,氧氟沙星就使β1整合素的蛋白表达明显下降;10μg/ml的氧氟沙星作用48h后,β1整合素的胞浆域不能与胞内激活的信号蛋白进行相互作用;在补充足够镁离子的条件下,10μg/ml氧氟沙星不能诱导微囊包被软骨细胞凋亡以及使β1整合素表达下降;从作用48h开始,10μg/ml氧氟沙星就使ERK/MAPK通路的关键信号蛋白Grb2和phospho-ERK1/2的表达显著降低;在同样的时间点,尽管对Caspase-3进行了特异性抑制,但是氧氟沙星还是显著地降低了phospho-ERK1/2和β1整合素的表达水平;ERK/MAPK信号通路的特异抑制剂U0126以浓度依赖的方式引起微囊包被软骨细胞凋亡。但是,在同样条件下,β1整合素的表达水平则没有改变。结论氧氟沙星可能通过影响关节软骨细胞的β1整合素功能而抑制了ERK/MAPK信号通路,从而最终导致凋亡。     

IL-23诱导人外周血单个核细胞对MUTZ-1细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的 白介素-23(IL-23)诱导人外周血单个核细胞对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ-1增殖、凋亡及相关基因表达的影响.方法 采用密度梯度离心法分离获得正常人外周血单个核细胞(PBMNC),细胞分4组:阴性对照组(未加IL-23),3个浓度IL-23组(2、10、50 ng/ml),体外诱导72 h,并与MUTZ-1共培养.MTT实验检测MUTZ-1细胞增殖.流式细胞仪检测MUTZ-1细胞凋亡和细胞周期变化.Real time-PCR和Western-blot检测MUTZ-1细胞Bax、Bcl-2、caspase-3、survivin mRNA和蛋白表达.结果 2、10、50 ng/ml IL-23诱导的PBMNC与MUTZ-1细胞共培养后,MUTZ-1细胞增殖速度、S期细胞比例明显降低,细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例明显增加,呈时间和浓度依赖性,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);同时Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调,Bcl-2、survivin mRNA和蛋白表达明显下调,呈时间和浓度依赖性,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IL-23诱导PBMNC能够明显抑制MUTZ-1细胞增殖,促进MUTZ-1细胞凋亡,其机制与上调Bax、caspase-3表达、下调Bcl-2、survivin表达有关.     

退变椎间盘中NF-κB与IL-1、IL-6、TNF-α表达的相关性研究进展

椎间盘退变是导致腰腿痛常见的原因之一,给患者带来极大痛苦的同时严重干扰了患者的日常生活和工作.NF-κB作为调节细胞基因转录的关键因子,能对炎症因子的表达起到一定的调控作用,而炎性细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α在椎间盘退变中发挥着重要作用,现就椎间盘退变中NF-κB与IL-1、IL-6、TNF-α表达的相关性做...     

转化生长因子β1对大鼠局灶脑缺血/再灌注后细胞凋亡的影响

近年来,有学证实转化生长因子β1(TGF-β1)可减少缺血所致神经元损害,但其具体方法及作用机制目前还处于探索阶段,国内尚处于开始阶段。本研究中,我们通过给予外源性TGF-β1观察它对大鼠脑缺血再灌注损伤及细胞凋亡的影响,现报告如下。     

白细胞介素1β通过β1整合素糖基化修饰诱导EA.hy926细胞凋亡

目的探讨IL-1β对血管内皮细胞损伤机制。方法以EA.hy926血管内皮细胞为研究对象,利用不同浓度IL-1β刺激24 h,采用Western blot方法检测IL-1β对β1整合素、Bcl-2、Bax、Caspase-3及N-乙酞氨基葡萄糖转移-V(GnT-V)表达的影响;通过Lectin blot方法显示IL-1β对GnT-V所修饰的所有糖蛋白量的影响;免疫共沉淀方法检测IL-1β对β1整合素糖基化修饰量的变化;流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果 IL-1β可从蛋白翻译水平抑制β1整合素的表达,同时可以下调Bcl-2/Bax的比例,上调Caspase-3的表达。初步揭示IL-1β诱导血管内皮细胞凋亡可能是通过β1整合素N-连接糖基化作用来完成的。结论 IL-1β可通过调控EA.hy926细胞β1整合素的糖基化修饰,增加细胞凋亡率,损伤血管内皮细胞。