内质网应激信号通路在高脂诱导的心肌细胞损伤中的作用

目的探讨内质网应激信号通路在高脂诱导的心肌细胞损伤中的作用。方法棕榈酸(0.1~0.4 mmol·L~(-1))刺激心肌细胞(0~48 h),CCK-8法评估细胞生长状态,免疫印迹法评估细胞内内质网应激信号通路相关蛋白表达水平及细胞凋亡蛋白表达水平。结果棕榈酸(0.1~0.4 mmol·L~(-1))刺激H9C2心肌细胞24 h,0.2、0.4 mmol·L~(-1)组细胞增殖率均出现明显下降。棕榈酸(0.2 mmol·L~(-1))刺激H9C2心肌细胞时,24、48 h组细胞增殖率均出现明显下降。棕榈酸(0.2 mmol·L~(-1))刺激24 h,GRP78、CHOP、PERKphos、IRE1phos、ATF6等内质网应激相关蛋白及Bax蛋白表达均明显增高(P<0.05),而Bcl-2表达出现明显降低(P<0.05)。预处理内质网应激抑制剂普伐他汀(pravastatin,10mol·L~(-1))的棕榈酸(0.2 mmol·L~(-1))组与不加pravastatin的棕榈酸(0.2 mmol·L~(-1))组相比,Bcl-2及Bax的表达均恢复至正常水平。结论内质网应激信号通路对高脂引起的心肌损伤的发病及治疗均起到重要作用。     

白藜芦醇对长期高热量饮食小鼠的认知功能保护及突触相关机制研究

目的 观察白藜芦醇（resveratrol,RES）对长期高热量饮食（high-calorie diet,HCD）小鼠认知功能的影响并探讨其相关机制。方法 50只C57BL/6小鼠随机均分为对照组、HCD组、HCD+25 mg·kg^-1RES组（低剂量组）、HCD+50 mg·kg^-1RES组（中剂量组）和HCD+100 mg·kg^-1RES组（高剂量组）。6个月后,检测小鼠基本生理指标,并利用Morris水迷宫和条件恐惧试验检测认知水平,RT-PCR和ELISA分别检测海马BDNF、Trk B、SYP和PSD95 mRNA及蛋白水平。结果 与HCD组比较,RES干预使小鼠体质量、肥胖指数和脂肪系数均明显降低,空腹血糖、胰岛素和HOMA-IR明显降低,海马依赖性学习记忆明显提高,海马组织BDNF、Trk B、SYP和PSD95 mRNA和蛋白水平明显升高,以高剂量组更显著。结论 RES可通过上调海马BDNF、Trk B、SYP、PSD95基因和蛋白表达改善HCD小鼠学习记忆能力。     

白藜芦醇对H9c2心肌细胞抗氧化应激损伤的内质网应激机制研究

目的:研究白藜芦醇(resveratrol)对H9c2心肌细胞抗氧化应激损伤的"内质网-线粒体对话"保护作用并探讨其可能的机制。方法:培养H9c2心肌细胞建立氧化应激模型,随机分为4组:正常组(对照组)、模型组(H2O2组)、白藜芦醇+H2O2组、白藜芦醇组。Western blot测定H2O2对内质网应激(ERS)特征性分子伴侣,即葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP 94)的表达;观察白藜芦醇对氧化应激所致GRP 78、GRP 94、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化的影响;共聚焦显微镜观察白藜芦醇对氧化应激所致线粒体通透性转移孔(m PTP)开放的影响;电镜观察白藜芦醇对氧化应激所致心肌细胞超微结构的影响。结果:与正常组相比,H2O2(600μmol·L-1)引起H9c2心肌细胞氧化损伤并使GRP 78,GRP 94表达明显增加;白藜芦醇(10μmol·L-1)明显抑制氧化应激所致GRP 78,GRP 94的表达及GSK-3β磷酸化水平。与正常组相比,模型组TMRE荧光强度明显减少,白藜芦醇明显抑制氧化应激所致TMRE荧光强度的减少(即线粒体膜电位减少、m PTP开放)。白藜芦醇明显减少氧化应激所致心肌细胞线粒体、内质网超微结构的损伤。结论:白藜芦醇对氧化应激所致H9c2心肌细胞损伤具有保护作用,该作用可能与抑制ERS使GSK-3β失活,进而阻止m PTP开放有关。     

梓醇缓解内质网应激抑制非酒精性脂肪肝细胞凋亡

探讨梓醇对非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)状态下肝细胞凋亡的保护作用及其机制.体内实验采用高脂饮食(high fat diet,HFD)诱导小鼠建立NAFLD模型,实验过程和动物福利均遵循江汉大学动物伦理委员会的规定;体外实验采用棕榈酸(palmitate,...     

内质网应激介导高脂及棕榈酸致骨骼肌胰岛素抵抗及非诺贝特的干预机制初探

目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)介导高脂及棕榈酸致骨骼肌胰岛素抵抗及非诺贝特(fenofibrate,FF)的干预机制。方法♂SD大鼠随机分为标准饮食组(SCD)、高脂饮食组(HFD)及治疗组(HFD+FF)。高脂组和治疗组先分别给予高脂饮食20周,高脂组继续给予高脂饮食8周,治疗组给予非诺贝特(30 mg·kg-1·d-1)灌胃治疗8周。分析大鼠胰岛素抵抗的改善作用、骨骼肌葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子GADD153(CHOP)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因的表达。将骨骼肌细胞C2C12分为正常对照组(NC组)、模型组(棕榈酸组,PA)、阳性对照药组(衣霉素组,TM)、治疗组(棕榈酸+非诺贝特酸,PA+FA),分别检测GRP78、CHOP、Akt和pAkt的表达。结果与SCD组相比,HFD组大鼠体重和血脂水平明显增高,出现明显的胰岛素抵抗,GRP78和CHOP基因表达水平均明显上调;与HFD组相比,HFD+FF组上述指标均出现明显改善。与NC组相比,PA组GRP78和CHOP基因表达明显增加,p-Akt明显下调;与PA组相比,PA+FA组GRP78和CHOP基因表达明显降低,p-Akt明显上调。结论非诺贝特有改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗的作用,这可能与其降低ERS中CHOP和GRP78的表达有关。     

白藜芦醇改善高脂饮食小鼠的糖代谢并棕化腹股沟白色脂肪

目的：观察白藜芦醇治疗对高脂饮食诱导肥胖小鼠的体重,体脂比及血糖代谢的作用,初步探索白藜芦醇对白色脂肪棕化的作用。方法：小鼠高脂饮食（45％热量来自脂肪）8周后随机分为对照组（HFD—Con）和白藜芦醇治疗组（HFD—Res,白藜芦醇400mg／kg）,治疗2周后称重、测定糖耐量和计算体脂比例,实时PCR测定腹股沟皮下白色脂肪组织解耦联蛋白-1（UCP-1）和cIDEA基因表达。结果：与HFD．Con组相比,HFD—Res组体重下降明显,糖耐量改善,脂肪组织／体重比无改变;而腹股沟皮下白色脂肪组织解耦联蛋白-1（UCP-1）和CIDEA基因表达升高。结论：白藜芦醇治疗可降低高脂饮食诱导肥胖小鼠体重和改善糖代谢,同时可能促进腹股沟皮下白色脂肪组织棕化。     

高脂饮食对大鼠血管内皮功能及腹主动脉形态学的影响

目的观察高脂饮食对大鼠血管内皮功能和腹主动脉形态学的影响。方法选用健康SD雄性大鼠16只,体质量150～180g,随机分为正常对照组和高脂饮食组,每组8只。正常对照组用普通饲料喂养,高脂饮食组用高脂饲料喂养4周。观察高脂饮食对大鼠血浆血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）、血浆内皮素（endothelin,ET）和血清一氧化氮（nitrogen monoxide,NO）的影响,以及腹主动脉形态学变化。结果4周后高脂饮食组血浆血管紧张素Ⅱ、血浆内皮素与正常对照组相比明显升高（P〈0.01）,血清NO与正常对照组相比明显降低（P〈0.01）;光学显微镜、透射电镜下见高脂饮食组腹主动脉壁结构异常。结论高脂饮食可致大鼠血管内皮功能障碍和腹主动脉形态学改变。     

牛黄中胆酸类成分改善大鼠脑缺血再灌注损伤及调节内质网应激作用比较

目的 观察牛黄中有效成分对大鼠脑缺血再灌注损伤的改善作用,从内质网应激角度探讨其作用机制,并对牛黄有效成分的药效进行比较研究。方法 SD大鼠随机分成6组：假手术组、模型组、清开灵（阳性药,3 mL/kg）组、牛磺酸（25 mg/kg）组、熊去氧胆酸（UDCA,78 mg/kg）组、牛磺熊去氧胆酸（TUDCA,100 mg/kg）组,每组10只。制备大脑中动脉闭塞模型,造成大鼠脑缺血再灌注损伤,采用神经功能评分法评定神经功能缺损,TTC染色法测定脑梗死体积,免疫组化、Western blotting法检测缺血脑组织中内质网应激相关蛋白（P-PERK、P-EIF2α、ATF4）的表达情况。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分显著降低（P<0.01）;与模型组比较,清开灵组、UDCA组、TUDCA组神经功能评分显著升高（P<0.05、0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠形成明显缺血灶（P<0.01）;与模型组比较,各给药组均能明显减小脑梗死体积（P<0.01）。与假手术组比较,模型组海马区和皮层区的P-PERK、P-EIF2α、ATF4的表达明显升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组均不同程度的减少了P-PERK、P-EIF2α、ATF4的表达,尤以清开灵、TUDCA的下降最明显。结论 牛黄有效成分通过抑制内质网应激改善大鼠脑缺血再灌注损伤,其中TUDCA的作用优于牛磺酸和UDCA。     

氟伐他汀对高胆固醇血症患者血清NO及血管内皮功能的影响

目的　观察短期氟伐他汀治疗对高胆固醇血症患者一氧化氮和一氧化氮合酶血管内皮功能的影响。方法　 35例原发性高胆固醇血症患者每日口服氟伐他汀 4 0mg共 8wk ,服药前后测量患者血清的TC、TG、LDL C和HDL C以及NO和NOS值 ,及用彩色多普勒超声测定反应性充血时肱动脉内径的变化。并与对照组进行比较。结果　原发性高胆固醇血症患者经氟伐他汀 8wk治疗后 ,血清的TC、TG、LDL C明显下降 ,血清的HDL C以及NO和NOS值明显增加 ,反应性充血时肱动脉内径扩张程度明显增加 ,这些与治疗前相比有明显差异。结论　氟伐他汀短期治疗能使高胆固醇血症患者血脂改变 ,NO和NOS值增加 ,血管内皮功能改善。     

Resveratrol protects against vinorelbine-induced vascular endothelial cell injury

Abstract

Vinorebine (VNR), a second-generation vinca alkaloid antitumor drug, caused serious local venous toxicities, such as venous irritation, phlebitis and necrotizing vasculitis. This study investigated whether resveratrol (RES), a naturally occurring polyphenol compound, could reduce the vascular injury induced by VNR. Human vascular endothelial cell line ECV-304 cells were exposed to VNR for 10?min and then cells were cultured with serum-free medium with or without RES for 24?h. MTT (3-[4, 5-dimethyl-2-thiazolyl]-2, 5-diphe-nyl-2-tetrazolium bromide) assay was used to detect the cell viability. Reactive oxygen species (ROS) was measured with 2′, 7′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA). The activity of superoxide dismutase (SOD) was assessed by SOD detection kit. VNR decreased the viability of ECV-304 cells in a dose-dependent manner. Moreover, VNR caused cell apoptosis, the generation of intracellular ROS and the reduction of intracellular SOD. Interestingly, pretreatment with RES for 2?h increased the cell viability in a dose-dependent manner. Cell apoptosis, the intracellular ROS generation and the reduction of intracellular SOD induced by VNR were also attenuated when cells were pretreated with RES for 2?h. These results demonstrated that RES would protect against vascular endothelial cell injury induced by VNR. So the use of RES together with VNR may be a possible therapeutic approach to avoid the vascular injury induced by VNR.     

eNOS参与铁过载诱导的血管内皮细胞线粒体损伤

目的探讨e NOS及ADMA/DDAHⅡ介导的铁过载对HUVECs细胞线粒体的损伤作用。方法常规培养HUVECs细胞,随机分为正常对照(Ctrl)组、右旋糖酐铁(Iron)组、L-精氨酸(L-Arg)组。48 h后,MTT法检测细胞存活率;HPLC法检测ADMA含量及DDAHⅡ活性;Western blot法检测e NOS表达;比色法检测培养液LDH活性、NO含量、细胞MDA含量以及m PTP开放;流式细胞仪检测心肌细胞ROS含量、线粒体膜电位及细胞凋亡。结果 Iron处理48 h后,HUVECs细胞存活率明显降低,培养液ADMA及LDH活性升高,NO含量减少;细胞e NOS表达下调、DDAHⅡ活性降低;MDA含量与ROS生成明显增加,线粒体膜电位减小,m PTP大量开放,细胞凋亡增加;ADMA生理性对抗剂L-Arg则可明显减弱Iron的上述损伤作用。结论 e NOS参与铁过载诱导的HUVECs细胞线粒体损伤,ADMA/DDAHⅡ机制也可能发挥了作用。     

柚皮苷对高糖引起血管内皮损伤的保护作用与CX3CL1及抗氧化有关

目的研究柚皮苷(naringin,Nar)对趋化因子CX3CL1参与的慢性高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤机制的保护作用。方法 MTS法测定不同浓度的柚皮苷对正常HUVEC的活性影响,及不同葡萄糖浓度下对HUVEC的损伤程度。实验分为对照组(Ctrl)、柚皮苷组(Nar)、高糖组(HG)和高糖加柚皮苷组(HG+Nar)4组。细胞经各种条件处理5 d后,硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)含量,多功能酶标仪测定细胞内活性氧(ROS)含量,RT-PCR和Western blot检测CX3CL1 mRNA和蛋白的表达。结果高糖组与正常对照组相比NO水平明显降低,ROS含量则明显升高,高糖处理后加入柚皮苷能增加NO的产生,同时降低细胞内ROS含量,柚皮苷组与对照组之间差异无显著性。RT-PCR和Western blot结果显示柚皮苷可以降低高糖组CX3CL1 mRNA和蛋白的表达,柚皮苷组与对照组相比无显著性差异。结论柚皮苷对趋化因子CX3CL1参与的慢性高糖引起的HUVEC损害具有保护作用,且其保护作用可能与其抗氧化应激及抗炎作用有关。     

N-acetylcysteine attenuates TNF-alpha-induced human vascular endothelial cell apoptosis and restores eNOS expression

The circulatory inflammatory cytokine tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) is increased in pathological conditions, such as diabetes, which initiate or exacerbate vascular endothelial injury. Both nitric oxide (NO) and reactive oxygen species may play a dual role (i.e., inhibiting or promoting) in TNF-alpha-induced endothelial cell apoptosis. We investigated the effects of the antioxidant N-acetylcysteine on TNF-alpha-induced apoptosis in human vascular endothelial cell (cell line ECV304) apoptosis, NO production and lipid peroxidation. Cultured vascular endothelial cell (ECV304) were either not treated (control), or treated with TNF-alpha (40 ng/ml) alone or TNF-alpha in the presence of N-acetylcysteine at 30 mmol/l or 1 mmol/l, respectively, for 24 h. Cell viability was measured by MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay. Cell apoptosis was assessed by flow cytometry. TNF-alpha-induced endothelial cell apoptosis was associated with increased inducible NO synthase but reduced endothelial NO synthase (eNOS) protein expression. NO production and the levels of the lipid peroxidation product malondialdehyde were concomitantly increased. Treatment with NAC at 30 mmol/l restored eNOS expression and further increased NO production as compared to TNF-alpha alone, resulting in improved cell viability and reduced apoptosis. This was accompanied by increased superoxide dismutase activity, increased glutathione peroxidase production and reduced malondialdehyde levels. N-acetylcysteine at 1 mmol/l, however, did not have significant effects on TNF-alpha-induced endothelial cell apoptosis and cell viability despite it slightly enhanced glutathione peroxidase production. N-acetylcysteine attenuation of TNF-alpha-induced human vascular endothelial cell apoptosis is associated with the restoration of eNOS expression.     

LW-AFC对饮食和链佐星联合诱导糖尿病大鼠的治疗作用

目的评价LW-AFC治疗糖尿病的作用,并探讨其作用特点。方法采用高热量饲料对Wistar大鼠饮食诱导5周,随后一次性ip给予链佐星(STZ)30 mg.kg-1制备糖尿病大鼠模型。7 d后ig给予LW-AFC 0.28,0.56和1.12 g.kg-1,每天1次,连续8周。在给药后2,4,6和8周动态监测大鼠空腹血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)水平,称量内脏脂肪质量(VFM)并计算内脏脂肪系数(VFC)。采用酶比色法检测血糖、TC和TG,采用清除法检测LDL-C,采用放射免疫分析法检测胰岛素。结果与正常对照组比较,模型组大鼠VFM和VFC显著升高(P<0.01),空腹血糖水平显著升高(P<0.01),胰岛素水平在2和6周明显升高(P<0.05),TC水平在4,6和8周明显升高,LDL-C水平在2,6和8周明显升高(P<0.05),TG水平在2周明显升高。与模型组比较,LW-AFC 0.56和1.12 g.kg-1给药8周可显著降低VFM至17.1±3.0和(16.0±3.6)g,可降低VFC至(4.5±0.6)%和(4.3±0.9)%(P<0.01);LW-AFC 1.12 g.kg-1给药4,6和8周可将空腹血糖水平由19.3±3.1,21.4±7.0和(17.0±4.7)mmol.L-1分别降低至14.2±4.0,11.8±4.9和(11.2±4.9)mmol.L-1;LW-AFC对胰岛素水平无明显影响。HOMA-IR在2～8周明显升高(P<0.01),HOMA-IR降低至17.3±4.8,17.4±6.7和4.1±2.4(P<0.05),LW-AFC 1.12 g.kg-1给药4,6和8周可明显降低TC至2.34±0.22,2.09±0.29和(2.16±0.22)mmol.L-1。LW-AFC 1.12 g.kg-1给药2周可将LDL-C降至(0.41±0.11)mmol.L-1;在6和8周降至0.50±0.10和(0.46±0.08)mmol.L-1。LW-AFC 0.56和1.12 g.kg-1给药2周TG降低至1.9±0.8和(1.8±0.8)mmol.L-1。结论 LW-AFC对糖尿病模型大鼠具有改善腹型肥胖、糖脂代谢紊乱和胰岛素抵抗的作用。     

1,8-桉叶油素调节自噬改善高糖诱导的内皮细胞损伤

目的探讨1,8-桉叶油素(1,8-Cineole)通过调节自噬来改善高糖(HG)诱导人主动脉内皮细胞(HAECs)损伤的保护作用。方法采用HG作用HAECs 60 h,不同剂量的1,8-Cineole进行干预,运用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞毒性,Western blot法检测Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62、caspase-3和caspase-9的蛋白表达,及使用自噬抑制剂氯喹(CQ)作用HAECs后,检测Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62、caspase-3和caspase-9的表达情况。结果1,8-Cineole提高细胞活力,减少LDH含量,激活自噬和抑制细胞凋亡。与空白组比较,CQ组的Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62、caspase-3和caspase-9表达增加,同时观察到CQ+HG+CH组与CQ+HG组比较时,以上蛋白差异均无统计学意义。结论1,8-Cineole对高糖诱导HAECs损伤具有保护作用,其作用与改善自噬流相关。     

NADPH oxidases regulate endothelial inflammatory injury induced by PM2.5 via AKT/eNOS/NO axis

Fine particulate matter (PM_2.5)-induced detrimental cardiovascular effects have been widely concerned, especially for endothelial cells, which is the first barrier of the cardiovascular system. Among potential mechanisms involved, reactive oxidative species take up a crucial part. However, source of oxidative stress and its relationship with inflammatory response have been rarely studied in PM_2.5-induced endothelial injury. Here, as a key oxidase that catalyzes redox reactions, NADPH oxidase (NOX) was investigated. Human umbilical vein endothelial cells (EA.hy926) were exposed to Standard Reference Material 1648a of urban PM_2.5 for 24 h, which resulted in NOX-sourced oxidative stress, endothelial dysfunction, and inflammation induction. These are manifested by the up-regulation of NOX, increase of superoxide anion and hydrogen peroxide, elevated endothelin-1 (ET-1) and asymmetric dimethylarginine (ADMA) level, reduced nitric oxide (NO) production, and down-regulation of phosphorylation of endothelial NO synthase (eNOS) with increased levels of inducible NO synthase, as well as the imbalance between tissue-type plasminogen activator (tPA) and plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1), and changes in the levels of pro-inflammatory and anti-inflammatory factors. However, administration of NOX1/4 inhibitor GKT137831 alleviated PM_2.5-induced elevated endothelial dysfunction biomarkers (NO, ET-1, ADMA, iNOS, and tPA/PAI-1), inflammatory factors (IL-1β, IL-10, and IL-18), and adhesion molecules (ICAM-1, VCAM-1, and P-selectin) and also passivated NOX-dependent AKT and eNOS phosphorylation that involved in endothelial activation. In summary, PM_2.5-induced NOX up-regulation is the source of ROS in EA.hy926, which activated AKT/eNOS/NO signal response leading to endothelial dysfunction and inflammatory damage in EA.hy926 cells.     

红花黄色素B对AngⅡ诱导内皮细胞线粒体损伤的保护作用

血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)作为血液与组织之间的屏障,参与多种生理和病理过程,其功能异常与动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等有紧密的联系[1?4]。血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)可促进内皮细胞内活性氧自由基(reactiveoxygen species,ROS)的生成,改变胞内Ca2+     

Captopril attenuates hypertension and renal injury induced by the vascular endothelial growth factor inhibitor sorafenib

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槲皮素对缺氧缺糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

大量资料表明 :不同源性的内皮细胞缺氧后均有活性氧的大量产生[1 ] ,而自由基、活性氧、脂质过氧化物等均可引起内皮细胞损伤。在缺血性脑血管疾病中血管内皮细胞因缺氧致功能受损直接参与疾病的发生发展[2 ] 。槲皮素(quercetin ,Que)属于黄酮类化合物 ,具有多种药理作用 ,对超氧阴离子、羟自由基和单线态氧均有良好的清除作用[3] 。实验研究发现 ,槲皮素对心肌和脑缺血再灌注损伤也有保护作用[3] 。本文利用体外细胞培养的方法 ,研究槲皮素对缺氧缺糖后内皮细胞变化、功能的影响及保护作用。1　材料与方法1 .1　材料　槲皮素和四氮唑蓝 …