白藜芦醇对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的作用研究

目的 探讨白藜芦醇对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的保护作用及其相关机制.方法 将H9 C2心肌细胞随机分为3组:正常组、模型组和实验组.模型组和实验组的细胞用异丙肾上腺素(ISO)10μmol·L-1作用48 h造成心肌细胞肥大.实验组在造模的同时给予白藜芦醇(Res)10μmol·L-1.检测各组心肌细胞表面积,用...     

内质网应激及其介导的凋亡在锰致神经毒性中的作用

目的探讨内质网应激(ERS)及其介导的细胞凋亡在锰引起的神经毒性中的作用。方法以人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞为细胞模型,通过MTT比色法检测MnCl2对细胞存活的影响,流式细胞技术(FCM)检测MnCl2对细胞凋亡的影响,Western blot检测MnCl2作用后,细胞ERS分子伴侣BiP、Sigma-1受体(Sig-1R)、CHOP及凋亡相关蛋白Caspase-4表达的变化。结果 MnCl2可呈时间、剂量依赖性地降低细胞存活率,并诱导SH-SY5Y细胞凋亡;MnCl2上调ERS分子伴侣Bip、Sig-1R、CHOP及Caspase-4的表达。结论 MnCl2可诱导SH-SY5Y细胞发生ERS,早期的ERS对细胞具有保护性效应,持续的ERS通过上调CHOP和Cappase 12的表达介导细胞凋亡,这可能是锰神经毒性机制之一。     

二氟甲基鸟氨酸对2型糖尿病大鼠心肌肥厚及内质网应激的影响

目的研究二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DFMO)对2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌肥厚的作用,以及对内质网应激蛋白GRP78和CHOP的影响。方法采用高糖高脂膳食负荷链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)单次腹腔注射,建立T2DM大鼠模型。实验大鼠分为正常对照组、T2DM模型组和DFMO治疗组,上述条件继续饲养12周。检测各组大鼠空腹血糖、心脏参数、心肌纤维化程度;测定MDA含量、SOD和T-AOC活性;检测GRP78和CHOP蛋白表达。结果 DFMO治疗后,降低T2DM大鼠空腹血糖和心脏参数(P<0.05),心肌间质纤维化程度下降(P<0.05),MDA含量降低,SOD和T-AOC活性增加。同时,DFMO治疗可以下调GRP78和CHOP蛋白表达水平(P<0.05)。结论 DFMO抑制T2DM大鼠心肌肥厚,机制与下调GRP78和CHOP蛋白表达,抑制内质网应激有关。     

壬基酚暴露致小鼠睾丸GRP78和CHOP表达改变

目的 观察壬基酚暴露下小鼠睾丸中内质网应激相关分子表达改变,初步探索壬基酚对雄性生殖功能影响的机制.方法 将32只SPF级雄性昆明小鼠随机分为对照组(等体积注射玉米油)、壬基酚(50 mg/kg·bw)组、壬基酚(50 mg/kg·bw) +4-PBA(100 mg/kg·bw)组和4-PBA(100 mg/kg·bw...     

抑制MEK对内质网应激诱导乳腺癌细胞凋亡的增敏作用

目的探讨抑制MEK/ERK信号通路对人乳腺癌细胞内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激途径细胞凋亡的影响,以期为乳腺癌化疗提供新的靶点。方法不同浓度(0、1.5、3、6、9、12μmol.L-1)衣霉素(tunicamycin,TM)处理乳腺癌细胞SK-BR-3,48h后溴化丙啶(propidium iodide,PI)染色检测细胞凋亡率;TM(3μmol.L-1)处理SK-BR-3细胞不同时间(0、6、12、24、36h),Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)、ERK1/2、pERK1/2的表达;MEK抑制剂U0126(20μmol.L-1)预处理1h后再给予TM(3μmol.L-1)同上处理,检测上述指标,比较U0126作用前后上述指标的变化。结果SK-BR-3细胞对TM诱导的细胞凋亡率<20%,且TM上调GRP78的表达;TM没有诱导ERK1/2的进一步激活;U0126明显增加TM诱导的细胞凋亡率(78%),同时下调GRP78的表达和阻断TM对GRP78的上调作用。结论MEK/ERK信号通路的抑制增强人乳腺癌细胞SK-BR-3对ER应激途径细胞凋亡的敏感性,抑制非折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)的诱导。     

原花青素对脑缺血再灌注后大鼠海马内质网应激相关分子GRP78和CHOP表达的影响

目的:探讨原花青素(procyanidin,PC)对脑缺血再灌注后大鼠海马内质网应激(endoplasmic re-ticulum stress,ERS)相关分子表达的影响。方法:将180只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和PC组,每组60只。PC组于术前1周灌胃给予PC(100 mg.kg-1)然后建立脑缺血再灌注模型,分别在脑缺血再灌注后3,6,12,24和48 h处死大鼠。观察不同时间点大鼠的神经行为表现;焦油紫染色处理大鼠海马组织切片,光镜观察病理学改变;末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;采用免疫组化及RT-PCR方法检测脑缺血再灌注后不同时间点大鼠海马GRP78和CHOP的表达。结果:PC组大鼠脑缺血再灌注后的神经功能缺损明显改善,与模型组相比具有统计学差异(P<0.01),其细胞凋亡数亦明显少于模型组(P<0.05);模型组与假手术组相比,GRP78与CHOP明显升高(P<0.01),PC组GRP78表达高于模型组(P<0.05),而PC组CHOP表达低于模型组(P<0.05)。结论:PC对脑缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用,其机制可能与其增加GRP78表达、拮抗CHOP表达、阻断内质网应激(E...     

辣椒素通过调节GRP78触发内质网应激对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的影响

目的 探讨辣椒素通过调节GRP78触发内质网应激对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的影响及机制.方法 CCK-8筛选辣椒素的最佳作用浓度;Wright-Giemsa染色观察HL-60细胞的形态;Western blot检测GRP78蛋白的表达量;Annexin V-FITC/PI双染法检测HL-60细胞的凋亡率.结果...     

白藜芦醇对H9c2心肌细胞抗氧化应激损伤的内质网应激机制研究

目的:研究白藜芦醇(resveratrol)对H9c2心肌细胞抗氧化应激损伤的"内质网-线粒体对话"保护作用并探讨其可能的机制。方法:培养H9c2心肌细胞建立氧化应激模型,随机分为4组:正常组(对照组)、模型组(H2O2组)、白藜芦醇+H2O2组、白藜芦醇组。Western blot测定H2O2对内质网应激(ERS)特征性分子伴侣,即葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP 94)的表达;观察白藜芦醇对氧化应激所致GRP 78、GRP 94、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化的影响;共聚焦显微镜观察白藜芦醇对氧化应激所致线粒体通透性转移孔(m PTP)开放的影响;电镜观察白藜芦醇对氧化应激所致心肌细胞超微结构的影响。结果:与正常组相比,H2O2(600μmol·L-1)引起H9c2心肌细胞氧化损伤并使GRP 78,GRP 94表达明显增加;白藜芦醇(10μmol·L-1)明显抑制氧化应激所致GRP 78,GRP 94的表达及GSK-3β磷酸化水平。与正常组相比,模型组TMRE荧光强度明显减少,白藜芦醇明显抑制氧化应激所致TMRE荧光强度的减少(即线粒体膜电位减少、m PTP开放)。白藜芦醇明显减少氧化应激所致心肌细胞线粒体、内质网超微结构的损伤。结论:白藜芦醇对氧化应激所致H9c2心肌细胞损伤具有保护作用,该作用可能与抑制ERS使GSK-3β失活,进而阻止m PTP开放有关。     

葡萄糖调节蛋白78与肿瘤内质网关系研究进展

GRP78存在于人体内质网中,并参与蛋白质成熟、装配、折叠等重要生物学过程。当细胞受到内部或外界刺激时,内质网腔中未折叠和错误折叠的蛋白质会大量聚集造成内质网应激,细胞则通过未折叠蛋白应答(UPR)来缓解这种应激状态,以恢复内质网稳定。这种情况同样会发生在肿瘤细胞中,在肿瘤细胞的内质网处于应激状态时,会伴有过度增殖、缺血、缺氧、代谢异常等一系列反应,此时GRP78会被激活来缓解内质网腔内压力。但实际上过多的GRP78会带来抑制凋亡、产生耐药性等负面作用。本文主要对GRP78与肿瘤内质网之间的关系展开综述。     

内质网应激信号通路在高脂诱导的心肌细胞损伤中的作用

目的探讨内质网应激信号通路在高脂诱导的心肌细胞损伤中的作用。方法棕榈酸(0.1~0.4 mmol·L~(-1))刺激心肌细胞(0~48 h),CCK-8法评估细胞生长状态,免疫印迹法评估细胞内内质网应激信号通路相关蛋白表达水平及细胞凋亡蛋白表达水平。结果棕榈酸(0.1~0.4 mmol·L~(-1))刺激H9C2心肌细胞24 h,0.2、0.4 mmol·L~(-1)组细胞增殖率均出现明显下降。棕榈酸(0.2 mmol·L~(-1))刺激H9C2心肌细胞时,24、48 h组细胞增殖率均出现明显下降。棕榈酸(0.2 mmol·L~(-1))刺激24 h,GRP78、CHOP、PERKphos、IRE1phos、ATF6等内质网应激相关蛋白及Bax蛋白表达均明显增高(P<0.05),而Bcl-2表达出现明显降低(P<0.05)。预处理内质网应激抑制剂普伐他汀(pravastatin,10mol·L~(-1))的棕榈酸(0.2 mmol·L~(-1))组与不加pravastatin的棕榈酸(0.2 mmol·L~(-1))组相比,Bcl-2及Bax的表达均恢复至正常水平。结论内质网应激信号通路对高脂引起的心肌损伤的发病及治疗均起到重要作用。     

Inhibitory effect of resveratrol on angiotensin II-induced cardiomyocyte hypertrophy

Resveratrol is proposed to account in part for the protective effect of red wine on the cardiovascular system. Angiotensin II (Ang II) is a potent hypertrophic stimulus in cardiomyocytes. In this study, we determined the effect of resveratrol on Ang II-induced cardiomyocyte hypertrophy. Cultured neonatal rat cardiomyocytes were stimulated with Ang II, and [³H]leucine incorporation and -myosin heavy chain (-MyHC) promoter activity were examined. Intracellular reactive oxygen species (ROS) were measured by a redox-sensitive fluorescent dye, 2 7-dichlorofluorescin diacetate, and the extracellular signal-regulated kinase (ERK) phosphorylation was examined by Western blotting. Resveratrol inhibited Ang II-increased intracellular ROS levels. Furthermore, resveratrol, as well as the antioxidant N-acetyl-cysteine, decreased Ang II- or H₂O₂-increased protein synthesis, -MyHC promoter activity, and ERK phosphorylation. In summary, we demonstrate for the first time that resveratrol inhibits Ang II-induced cardiomyocyte hypertrophy via attenuation of ROS generation.Abbreviations Ang II Angiotensin II - MAPKs Mitogen-activated protein kinases - ERK Extracellular signal-regulated kinase - JNK c-Jun N-terminal kinase - p38 MAPK p38 mitogen-activated protein kinases - MEK MAPK or ERK kinase - NAC N-acetylcysteine - DCF-DA Dichlorodihydrofluorescein diacetate - DCF Dichlorofluorescein     

辛伐他汀通过内质网应激途径诱导K562细胞凋亡

探讨内质网应激在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用。采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化，AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率，激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ｃa²⁺浓度，RT-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78，GRP78)、钙蛋白酶(calpain)基因mRNA表达水平，Western blotting检测GRP78、 calpain、 caspase-3， -6， -7， -9， -12蛋白水平。结果显示，10、 20、 30 μmol·L^-1辛伐他汀(simvastatin，Sim)作用K562细胞72 h后，细胞出现典型的凋亡形态，凋亡率分别为12.41%、 19.08%和23.41%；细胞内Ca²⁺浓度增加，荧光强度分别为43、54和64；GRP78、calpain基因mRNA表达上调；calpain、 caspase-3， -6， -7， -9， -12蛋白剪切活化、GRP78蛋白表达增强。以上结果表明，内质网作为细胞凋亡的重要途径参与了辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡。辛伐他汀将可能被用于临床治疗白血病。     

内质网应激凋亡通路中的耐药节点

内质网应激 (endoplasmic reticulum stress,ERS)介导的细胞凋亡是一种新的凋亡途径,ERS过长过强,可多途径诱导细胞凋亡.肿瘤化疗药物的作用机制是诱导肿瘤细胞发生凋亡,因此凋亡信号传导通路在肿瘤治疗中尤为关键.凋亡通路中任意环节缺陷都能导致肿瘤细胞对凋亡的耐受.该文就内质网中影响凋亡信号传导通路中发挥关键作用的一些重点耐药分子作一综述,包括P-gp分子、IAP家族、Bcl-2耐药家族中的关键蛋白以及内质网钙泵IP3R.     

Bax deficiency mediated drug resistance can be reversed by endoplasmic reticulum stress induced death signaling

Tumors often acquire drug resistance due to functional loss of pro apoptotic gene Bax, a critical and essential component of cell death rendering them insensitive to most anti-tumor agents. Compounds that can induce Bax independent apoptotic cell death are expected to overcome such drug resistance. We have employed a live cell based screening platform to identify potential compounds that can induce programmed cell death in Bax deficiency. Release of cytochrome C from mitochondria into the cytosol is a decisive initial event required for the caspase dependent cell death. We have engineered both wild type and Bax knock out colon cancer cells stably expressing cytochrome C with EGFP fusion protein to identify compounds that can trigger cytochrome C release in both cells with equal efficiency. In the fluorescent translocation assay, most of the drugs tested failed to induce cytochrome C release in Bax deficient cells validating the sensitivity of the assay. This study identified five lead compounds such as thapsigargin, tunicamycine, MG132, kaempferol and camptothecin that could induce cytochrome C release in both wild type and Bax deficient cells with equal potency. All the positive hits induced ER stress signaling as evidenced by up-regulation of Grp78. Studies with a Bak deficient cells indicate that Bak deficiency confers protection to cells from ER stress through autophagy. Further studies revealed that ER stress inducing agents are capable of triggering classical mitochondrial apoptotic cell death through the conformational activation of Bak, substantiating the potential of this pathway in designing drugs against Bax deficiency mediated drug resistance.     

活性氧与内质网应激

内质网(endoplasmic reticulum,ER)是细胞加工蛋白质和贮存Ca2+的主要场所,对应激极为敏感,其功能紊乱时出现错误折叠与未折叠蛋白在腔内聚集以及Ca2+平衡紊乱的状态,称为内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)。活性氧(reactive oxygen species,ROS)作为第二信使,在细胞生物学功能的调节中起着重要作用。细胞内氧化还原状态的改变促进了ROS的产生和凋亡诱导因子的激活,致使细胞凋亡的同时又加剧了细胞内氧化还原状态的改变。研究发现细胞内氧化还原水平的改变在ERS介导的细胞凋亡过程中承担重要的角色,推测ROS可能是ERS介导的凋亡通路的上游信号分子,该文就ROS与ERS之间的关系作一综述。     

缺血性脑中风中与内质网应激相关炎症反应研究进展

内质网是机体微环境的重要组成结构和功能单位,内质网内稳态失衡导致的内质网应激成为近年来的一个研究热点。该文主要针对内质网应激在缺血性脑中风中的作用及相关信号通路的研究进展进行综述,特别对内质网应激触发脑中风炎症反应的机制进行了系统的整理和总结,以期为缺血性中风的防治提供新的研究思路。     

昆布多糖对肾纤维化大鼠肾组织内质网应激的保护作用

目的研究昆布多糖对肾纤维化大鼠肾组织内质网应激(ERS)分子伴侣GRP78、GRP94蛋白表达的影响。方法采用单侧输尿管梗阻(UUO)诱导大鼠肾间质纤维化的动物模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组、昆布多糖高、中、低剂量组。术后第7天处死大鼠,收集血清测定肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平。采用Western免疫印迹法检测大鼠肾组织GRP78、GRP94的蛋白表达;采用HE、Masson染色检测肾小管损伤及肾间质纤维化程度。结果各治疗组与模型组比较大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质纤维化程度、血清Scr、BUN水平及肾组织GRP78、GRP94蛋白表达有差异(P<0.05;P<0.01),昆布多糖与依那普利组比较,大鼠肾组织GRP78、GRP94表达升高(P<0.05),肾小管间质损伤及肾间质纤维化程度明显降低(P<0.05),肾功能Scr、BUN明显降低(P<0.05)。结论UUO早期昆布多糖可能通过上调ERS分子伴侣GRP78、GRP94蛋白表达,协助变性蛋白进行重新折叠、装配及跨膜转运,抑制未折叠蛋白反应,阻断ERS应激信号传导通路,从而减轻肾间质纤维化的发生和发展。     

内质网应激与氧化应激:恶性循环还是双刃剑?

目的综述内质网应激与氧化应激之间相互作用关系的研究进展。探讨氧化应激与内质网应激相互作用诱发相关疾病的机制。方法阅读国内外文献数据库中相关文献,尤其是近年来关于氧化应激与内质网之间关系的文献,结合临床,从疾病诱发机制等方面对文献进行整理和综述。结果根据疾病背景,促进细胞存活的治疗策略主要在于加强保护未折叠蛋白反应(UPR)信号响应,衰减内质网应激水平,或者灭活UPR促凋亡化合物;而从氧化应激出发,控制氧化应激水平,减弱内质网应激是控制疾病发作的重要方法。结论本文对两种应激关系的研究近况进行整理总结,为相关疾病发病机制的深入研究和临床应用提供理论依据。