四物汤及其有效成分对大鼠肝脏主要药物代谢酶的影响

目的研究四物汤及其有效成分对大鼠肝脏P450酶的影响,从药物代谢酶角度为四物汤的配伍规律提供实验依据。方法大鼠口服灌胃四物汤10 g·kg-1·d-1及其有效成分果糖0.334 g·kg-1·d-1,阿魏酸0.002 g·kg-1·d-1,川芎嗪0.011 g·kg-1·d-1,芍药苷0.022 g·kg-1·d-1,连续给药1周后处死,用生理盐水灌流肝脏,制备肝微粒体,采用混合探针与肝微粒体体外孵育法考察四物汤及其有效成分对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响。利用实时定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测四物汤及其有效成分对大鼠肝脏P450 mRNA表达的影响,利用Western blot法检测四物汤及其有效成分对大鼠肝脏CYP2B1蛋白表达的影响。结果肝微粒体孵育结果显示,果糖对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2D6酶活性具有抑制作用,阿魏酸对CYP2C9、CYP2B6酶活性具有抑制作用,川芎嗪对CYP1A2、CYP2C9、CYP2B6的酶活性具有抑制作用,芍药苷对CYP2D6、CYP2B6酶活性具有抑制作用。阿魏酸、果糖、芍药苷组对CYP2B1mRNA的表达具有抑制作用,与酶活性水平一致。4种单体成分对CYP2B1蛋白表达具有抑制作用。结论阿魏酸、果糖、芍药苷组在CYP450酶活性、mRNA基因转录水平及蛋白表达水平对CYP2B1均有抑制作用。     

基于经皮给药研究制川乌与白芍配伍对大鼠皮肤及肝微粒体中CYP450活性的影响

目的：研究经皮给予制川乌-白芍药对后,配伍药对大鼠皮肤、肝脏药物代谢酶的影响,以探讨制川乌-白芍药对的配伍机制。方法：大鼠连续经皮给药制川乌、白芍、制川乌与白芍配伍凝胶剂14 d后,采用探针底物与皮肤、肝微粒体体外孵育,通过高效液相色谱法（HPLC）检测皮肤微粒体中1种探针底物及肝微粒体中4种探针底物的浓度,计算代谢速率,考察各给药组大鼠皮肤、肝微粒体CYP450酶活性的变化。结果：与空白组比较,白芍、制川乌对大鼠皮肤微粒体中的CYP3A4酶具有明显的抑制作用（P<0.05）;与白芍单用组比较,制川乌与白芍配伍给药使大鼠皮肤微粒体中的CYP3A4酶活性显著下降（P<0.05）;与制川乌组比较,制川乌与白芍配伍给药使大鼠皮肤中微粒体的CYP3A4酶的活性显著增加（P<0.05）。与空白组比较,白芍、制川乌对大鼠肝微粒体中的CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6酶都具有明显的抑制作用（P<0.05）;与制川乌组、白芍组比较,制川乌与白芍配伍使大鼠肝微粒体中CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6酶活性均明显增加（P<0.05）。结论：制川乌、白芍均为CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6药酶的抑制剂,两药配伍可引起大鼠皮肤、肝微粒体中药酶活性的改变而致活性成分的代谢速度改变,这可能是制川乌与白芍配伍发挥"增效减毒"的作用机制之一。     

体外培育牛黄及其主要成分对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶作用的体外研究

摘要：目的:探讨体外培育牛黄（CBS）及其主要成分对大鼠肝微粒体6种细胞色素CYP450酶同工酶活性的影响。方法:采用大鼠肝微粒体为研究工具,将CBS或其主要成分与CYP1A2、CYP2C19、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A1/2这6种同工酶特异性探针底物共同孵育,通过液相-串联质谱法（LC-MS/MS）检测各探针底物代谢物生成量,评价CBS及其主要成分对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2C19、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A1/2这6种CYP450酶同工酶的体外抑制作用。结果:CBS对大鼠肝微粒体CYP2D6和CYP2E1两种亚型酶活性无抑制作用,而对CYP1A2、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A1/2的活性有一定的抑制作用;其主要成分胆酸（CA）、去氧胆酸（DCA）、熊去氧胆酸（UDCA）等对这6种CYP450酶同工酶具有不同程度的抑制作用。结论:CBS在体外可对CYP1A2、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A1/2产生抑制作用,从而可能影响合并用药的体内药动学过程,需进一步开展临床研究。     

罗通定和羟考酮体外代谢的相互作用

目的体外实验考察罗通定(RTD)和羟考酮(OCD)对细胞色素P450(CYP)同工酶的抑制和诱导作用,分析预测两药合用时潜在的药物代谢性相互作用。方法将混合人肝微粒体与RTD,OCD或阳性抑制剂与CYP探针底物孵育30min,用高效液相色谱-质谱法测定孵育液中特异性探针底物代谢产物的生成率、得到各同工酶的相对活性并计算相应的CYP同工酶的IC50值,评价两药对CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6和CYP3A4的潜在抑制作用。RTD(20,200和2000μg·L-1)、OCD(2,20和200μg.L-1)或阳性诱导剂与原代SD大鼠肝细胞孵育72h后加入特异性探针底物再孵育60min、测定细胞孵育液中探针底物的清除率、计算得到相对酶活性,通过与阳性诱导剂组的比较评价RTD和OCD对CYP1A和CYP3A的诱导作用。结果OCD对CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6和CYP3A4均无诱导和抑制作用。RTD对CYP2D6有一定的抑制作用,IC50值为3.72μmol·L-1,除此之外对其他的CYP同工酶无诱导和抑制作用。结论RTD是CYP2D6的一个中等程度的抑制剂,在体内血浆水平相当或高于其IC50值(3.72μmol·L-1)时,RTD对OCD经CYP2D6酶介导的O-去甲基化代谢途径有一定的抑制作用,但是在临床常用剂量水平上RTD和OCD临床合用产生明显的代谢性相互作用的可能性很小。     

盐酸小檗碱对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶含量及活性的影响

目的考察盐酸小檗碱对大鼠肝微粒体的蛋白含量、CYP450酶总量和主要CYP450酶亚型(CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C19)活性的影响。方法以溶剂为空白对照灌胃给予盐酸小檗碱250 mg/(kg·d),连续7 d,测定其肝微粒体蛋白含量、CYP450蛋白含量以及CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C19活性。结果与空白对照组比较,盐酸小檗碱给药组大鼠肝微粒体蛋白含量及肝微粒体CYP450含量无明显差异(P>0.05)。盐酸小檗碱给药后,给药组大鼠的平均CYP3A4活性是空白对照组的1/2;而两组之间CYP1A2、CYP2D6和CYP2C19的活性相当。结论盐酸小檗碱对大鼠CYP3A4活性有一定抑制作用,对CYP1A2、CYP2D6和CYP2C19的活性没有影响。     

吴茱萸次碱在人肝微粒体中对细胞色素P450酶的抑制作用

目的研究吴茱萸次碱(WZY)在人肝微粒体中对细胞色素P450酶的抑制作用。方法对照组和抑制组酶活性均用探针药测定,探针药物及其代谢产物用HPLC进行检测。用代谢产物与母药比值来表达酶的活性。结果加入50μmol·L-1吴茱萸次碱组CYP1A2,CYP2C19,CYP2E1和CYP2D6的活性显著降低,CYP3A4和CYP2C9活性无显著变化。结论吴茱萸次碱对CYP1A2,CYP2C19,CYP2E1和CYP2D6的活性有显著抑制作用,而对CYP2C9和CYP3A4的活性无显著影响。     

槲皮素对兔体内维拉帕米及其主要代谢产物去甲维拉帕米药动学的影响

作者研究了从银杏中提取的29种成分体外对人肝微粒体5种主要细胞色素P450（CYP）同工酶CYPlA2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A活性的抑制作用。结果显示，三萜内酯类化合物银杏内酯A、B、C、J和白果内酯以及黄酮醇苷类成分对5种CYP同工酶活性仅有微弱的或无抑制作用；黄酮醇苷元山柰酚、槲皮素、芹菜苷元、4一羟基-甲基芹菜苷元、     

混合探针底物法测定五味子成分对大鼠肝脏细胞色素P450同工酶的影响

研究大鼠多次口服五味子成分和体外对肝脏细胞色素P450酶(CYP450)6种同工酶的影响。采用超速离心法制备正常及多次口服五味子醇/水提物的大鼠肝微粒体并与探针药进行体外温孵,应用液相色谱?串联质谱分析方法测定CYP450的6种同工酶特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、右美沙芬(CYP2D2)、双氯芬酸钠(CYP2C6)、美芬妥英(CYP2C11)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A1/2)在大鼠肝微粒体的代谢产物生成(对乙酰氨基酚、右啡烷、4-羟基双氯芬酸钠、4-羟基美芬妥英、6-羟基氯唑沙宗、1-羟基咪达唑仑)以反映各CYP450同工酶活性。五味子醇提物(28～120μg.mL-1)体外对大鼠肝微粒体CYP450的6个同工酶均有不同程度的抑制作用。大鼠多次口服五味子醇提物(1.5 g.kg-1,qd×7d)对肝脏CYP3A1/2和CYP2E1有显著诱导作用,对CYP2D2和CYP2C11有明显抑制作用,而对CYP2C6和CYP1A2无明显影响。五味子水提物(100～500μg.mL-1)体外对大鼠肝脏CYP450同工酶亦有抑制作用;体内多次给药(1.5 g.kg-1,qd×7d)对肝脏CY...     

S（＋）盐酸氯胺酮对大鼠肝微粒体CYP450同工酶的影响

目的：研究S（＋）盐酸氯胺酮对大鼠肝微粒体CYP450 6种主要同工酶的诱导或抑制作用。方法：应用HPLC-UV法测定CYP4506种主要同工酶的特异性探针底物右美沙芬（CYP2D）、二氯酚酸钠（CYP2C6）、奥美拉唑（CYP2C）、氨本砜（CYP3A）、非那西丁（CYPlA2）和氯唑沙宗（CYP2E1）的代谢速率。大鼠静脉给予S（＋）盐酸氯胺酮25mg·kg-1·d-1，连续给药7d，评价药物对大鼠肝微粒体CYP450主要同工酶的诱导或抑制作用。结果：S（＋）盐酸氯胺酮50肛M时可明显抑制大鼠肝脏CYP2C，2C6和3A，分别为对照组的31．3％，45．8％和61．4％，其中以对CYP2C的抑制作用最为明显。S（＋）盐酸氯胺酮1和10μM对CYP450同工酶无明显影响，仅10μM S（＋）盐酸氯胺酮对CYP2C有轻度抑制作用。S（＋）盐酸氯胺酮静脉给药7d后，对大鼠肝微粒体CYPlA2和CYP2C有不同程度的诱导作用，分别诱导137．5％和117．6％，对CYP2E1，3A，2D，2C6无明显影响。结论：S（＋）盐酸氯胺酮50μM时可明显抑制肝脏CYP2C，2C6和3A，连续给药7d后可诱导CYPlA2和CYP2C，提示S（＋）盐酸氯胺酮与经上述同工酶代谢的药物联合应用时，应注意药物-药物相互作用的可能性。     

rh-EGF对恒河猴肝细胞色素P450s的影响

目的研究重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rh-EGF)对恒河猴肝细胞色素P450s同工酶活性的影响.方法恒河猴口服rh-EGF 16,32,160μ*kg-1*d-1,qd,连续给药26周,于停药时及停药8周后,各解剖一半动物,制备肝微粒体,进行肝细胞色素P450s总量、肝微粒体蛋白含量测定,用荧光分光光度法和HPLC法进行肝细胞色素P450s同工酶中7-乙氧基试卤灵脱乙基酶(CYP1A1)、香豆素7-羟化酶(CYP2A6)、甲苯磺丁脲羟化酶(CYP2C8/9)、S-(+)-美芬妥英羟化酶(CYP2C19)、丁呋洛尔1-羟化酶(CYP2D6)、氯唑沙宗羟化酶(CYP2E1)比活性测定.结果给药26周和停药8周后,rh-EGF对恒河猴肝细胞色素P450s总量、微粒体蛋白含量无明显影响,肝细胞色素P450s同工酶(CYP1A1,CYP2A6,CYP2C8/9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1)活性无显著变化.结论本试验建立的恒河猴肝细胞色素P450s测定方法快速、简便,可广泛用于药物开发早期以及预测药物间相互作用和药物毒性的研究等.rh-EGF对恒河猴肝P450s部分同工酶无影响.