加味黄芪建中汤对脾虚证肺癌小鼠肿瘤转移及HIF-1α、V-ATPase c mRNA表达的影响

目的:探讨加味黄芪建中汤对脾虚证肺癌小鼠肿瘤转移及HIF-1α、V-ATPase c mRNA表达的影响。方法:复因素法建立脾虚证小鼠模型,进行分组并接种Lewis肺癌瘤株后的第10天,取肺及肿瘤组织,压片法计肺转移结节数,RTPCR法检测V-ATPase c mRNA的表达,Power Vision法检测HIF-1α的表达。结果:与肺癌对照组比较,肺癌脾虚组小鼠肺转移结节数增多(P<0.05),与脾虚肺癌组比较,脾虚肺癌治疗组肺转移结节数减少,HIF-1α表达下调(P<0.01)。结论:加味黄芪建中汤对小鼠肿瘤转移有抑制作用,其机制可能与肿瘤微环境的HIF-1α表达下调有关。     

加味黄芪建中汤对脾气虚证Lewis肺癌小鼠CXCL12、CXCR4、TGF-β基因表达的影响

目的:研究加味黄芪建中汤对脾气虚证肺癌小鼠趋化因子受体4(CXCR4)、趋化因子12(CXCL12)、转化生长因子-β(TGF-β)基因表达的影响。方法:采用苦寒泻下、劳倦、节食的方法建立小鼠脾气虚证小鼠模型,小鼠右腋部皮下接种肿瘤细胞建立Lewis肺癌模型。小鼠分为正常组、脾气虚组、肺癌组、脾气虚肺癌组、脾气虚肺癌黄芪组,其中脾气虚肺癌黄芪组用中药加味黄芪建中汤灌胃,其余各组均用0.9%NaCl溶液灌胃;连续灌胃9 d。Real-time PCR方法检测肿瘤组织CXCR4、CXCL12、TGF-β的mRNA表达。结果:与肺癌组比较,CXCL12 mRNA水平明显增高(P0.05);与脾气虚肺癌组比较,脾气虚肺癌黄芪组CXCL12 mRNA表达水平明显降低(P0.01)。肺癌组、脾气虚肺癌组和脾气虚肺癌黄芪组的CXCR4、TGF-β的mRNA表达差异无统计学意义(P0.05);脾气虚肺癌黄芪组和脾气虚肺癌组CXCL12 mRNA与CXCR4 mRNA的表达呈正相关(P0.05,P0.01)。结论:加味黄芪建中汤抑制了肿瘤微环境中的趋化因子CXCL12基因的高表达,影响CXCL12/CXCR4通路,可能通过解除肿瘤微环境免疫抑制网络的形成而达到治疗肿瘤的目的。     

肺癌微环境脾气虚证肿瘤组织相关巨噬细胞microRNA的表达及加味黄芪建中汤干预机制研究

目的〓研究肺癌微环境脾气虚证肿瘤组织相关巨噬细胞microRNA的表达及加味黄芪建中汤的影响。方法〓50只小鼠采用苦寒泻下,劳倦,节食的方法造模,在建立小鼠脾气虚证Lewis肺癌模型后,加味黄芪建中汤灌胃治疗10d,脱颈椎处死小鼠,取肿瘤组织。采用microRNA基因芯片检测正常小鼠巨噬细胞与3组肿瘤组织相关巨噬细胞MicroRNA基因表达的变化。结果〓“脾气虚”组肿瘤组织相关巨噬细胞microRNA的表达谱表达异常（与正常组比较）,不同于肿瘤组,具有独特的microRNA变化,而加味黄芪建中汤可明显双向调节“脾气虚”组肿瘤组织相关巨噬细胞microRNA的表达谱的异常变化,使其恢复正常。结论〓加味黄芪建中汤可使“脾气虚”组microRNA的表达谱接近恢复正常。     

脾气虚证肺癌小鼠血清IL-12，IL-10的表达及加味黄芪建中汤的影响

目的 研究脾气虚证肺癌小鼠血清IL-12、IL-10的表达及加味黄芪建中汤影响。方法 采用苦寒泻下，劳倦，节食的方法造模，在建立小鼠脾气虚证Lewis肺癌模型后，按实验设计方案处理各组小鼠。造模后加味黄芪建中汤灌胃，脱颈椎处死小鼠，取血清。分别称取每只小鼠瘤重，ELISA方法检测肺癌小鼠血清IL-12，IL-10。结果 “脾气虚”可明显影响肺癌小鼠血清IL-12、IL-10的表达；加味黄芪建中汤可下调肺癌小鼠血清IL-10（P<0.05）的表达，上调肺癌小鼠血清IL-12（P<0.05）的表达。结论 “脾气虚”可导致肺癌小鼠Th细胞的异常漂移，可能是肺癌小鼠免疫调节紊乱的一种表现失调；加味黄芪建中汤有助于恢复肺癌小鼠免疫调节。     

黄芪-莪术配伍对Lewis肺癌生长转移及血管生成的抑制作用及机制研究

目的通过检测黄芪-莪术配伍对Lewis肺癌瘤组织微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨其通过调控肿瘤血管生成抑制肿瘤生长及转移的作用机制。方法腋下接种Lewis肺癌细胞,建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,然后随机分成模型组、顺铂组、低中高剂量黄芪-莪术配伍组,自接种后第2天起低、中、高剂量黄芪-莪术配伍组分别予4,8,16 g/(kg·d)生药灌胃1 d,连续15 d;顺铂组腹腔注射顺铂2 mg/kg,1/2 d,共8次。于接种后第16天处死小鼠,称瘤重计算抑瘤率并计数肺转移灶,免疫组化法检测肿瘤组织中微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)表达。结果各中药配伍组均可抑制肿瘤生长及转移,低、中、高剂量黄芪-莪术配伍组的抑瘤率分别为20.9%、37.70%、40.42%,且瘤重和肺转移灶计数均低于模型组,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组相比,各中药组瘤组织的MVD平均计数和VEGF蛋白平均光密度显著降低(P0.01),且高剂量黄芪-莪术配伍组降低最为显著。结论黄芪-莪术配伍应用可降低瘤组织微血管密度,抑制瘤组织VEGF表达,发挥抑肿瘤生长及转移的作用。     

黄芪建中汤抑制脾气虚证肺癌小鼠肿瘤转移的实验研究

目的:探讨黄芪建中汤对脾气虚证肺癌小鼠抑制肿瘤转移的作用机制。方法:苦寒泻下法建立小鼠脾气虚证Lewis肺癌模型,模型成功建立后,按实验设计方案处理各组小鼠,同时观察小鼠的整体情况。14 d后,眼球取血,检测血清木糖水平,28 d后,取胸腺、肺及肿瘤组织。分别称取每只小鼠胸腺重量、体重,计数肺转移结节数,计算胸腺指数,采用RT-PCR方法检测nm23、CD44的表达。结果:脾气虚小鼠的整体状况及免疫功能降低,高剂量黄芪建中汤可明显改善脾气虚证Lewis小鼠的整体情况,升高小鼠胸腺指数,结节数少于模型组;黄芪建中汤各剂量组均可下调CD44-mRNA的表达、上调nm23-mRNA的表达。结论:高剂量黄芪建中汤对脾气虚证肺癌小鼠肿瘤的转移具有一定的抑制作用能够,其机制可能与提高胸腺指数,下调CD44-mRNA及上调nm23的表达有关。     

黄芪建中汤对脾虚小鼠免疫功能的调节作用

为探讨脾虚证的免疫学变化及黄芪建中汤的免疫药理作用，采用小鼠大黄脾虚模型，用核素掺入法测定白细胞介素－２（ＩＬ－２）活性，核素标记靶细胞测定自然杀伤细胞（ＮＫ）Ｉ知性，微量细胞病变法测定免疫干扰素（ＩＦＮ－γ）水平。结果脾虚小鼠的免疫指标明显低于正常组；黄芪建中汤可使之提高至正常水平，而对正常小鼠免疫指标无明显影响。提示免疫功能降低是脾虚证重要表现之一，黄芪建中汤对此有调整作用，可提高到接近正常水     

CEACAM1在肺癌组织的表达及其与VEGF和MVD的相关性

目的检测肺癌组织中癌胚抗原相关细胞粘附因子1(carcinoembryonic antigen-related cell adhesionmolecule 1,CEACAM1)的表达,探讨其与血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及微血管密度(microvessel density,MVD)值的相互关系。方法应用免疫组织化学方法(S-P法)检测50例肺癌组织、10例正常肺组织中CEACAM1、VEGF的表达及MVD值。结果 CEACAM1在肺癌组织中的阳性表达率较在正常肺组织中的阳性表达率增高(P0.01),VEGF在肺癌组织中的阳性表达率较在正常肺组织中的阳性表达率增高(P0.05),肺癌组织中MVD值较正常肺组织中MVD值增高(P0.01)。肺癌组织中CEACAM1的表达与VEGF的表达存在正相关关系(r=0.59,P0.01),肺癌组织中CEACAM1的表达与MVD值存在的正相关关系(r=0.44,P0.01)。结论肺癌组织中CEACAM1的表达增高,提示CEACAM1可能参与了肺癌的发生发展。肺癌组织中CEACAM1的表达与VEGF的表达及MVD值均呈正相关关系,提示CEACAM1可能参与肺癌血管生成。     

血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶在非小细胞肺癌中的表达及与微血管密度的相关性研究

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP-2)和微血管密度(MVD)与非小细胞肺癌(NSCLC)的相关性。方法:应用免疫组化法检测VEGF、MMP-2在非小细胞肺癌组织及正常肺组织中的表达水平并计数微血管密度。结果:NSCLC组织中VEGF及MMP-2阳性表达率和MVD值显著高于正常肺组织(P<0.05),VEGF、MMP-2的阳性表达率和MVD值与非小细胞肺癌临床分期和淋巴结转移具有相关性,与肿瘤病理类型无关。结论:非小细胞肺癌组织中VEGF、MMP-2及MVD明显升高,与临床分期及有无淋巴结转移有关,对判断预后有重要意义。     

HIF-1α和VEGF在非小细胞肺癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的探讨缺氧诱导因子(HIF-1)与血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与肿瘤血管生成的关系.方法免疫组化法检测NSCLC组织HIF-1α和VEGF的表达,并测定微血管密度(MVD).结果 NSCLC组织中HIF-1α及VEGF阳性表达率显著高于正常肺组织(P＜0.05);HIF-1α的表达与淋巴结转移及临床分期有关(P＜0.05),与肿瘤的大小和肿瘤的分化程度无明显关系(P＞0.005);VEGF在NSCLC组织中的表达与肿瘤的大小、淋巴结转移、肿瘤的分化程度及临床分期均密切相关(均P＜0.05);HIF-1α与VEGF、MVD,VEGF与MVD的表达之间均呈正相关(r分别为0.589、0.448、0.571,均P＜0.01).结论HIF-1 α及VEGF的增强表达与非小细胞肺癌的浸润性发展和肿瘤血管生成有密切关系.     

舌鳞癌组织肾上腺髓质素表达及与血管生成的关系

目的研究肾上腺髓质素(ADM)在舌鳞癌(TSCC)组织表达及其与血管生成关系。方法采用免疫组化法检测ADM、血管内皮生长因子(VEGF)在35例TSCC及相应正常舌组织、7例口腔白斑组织表达,并进行微血管密度(MVD)计数。结果 TSCC组织中ADM阳性表达率高于正常舌组织和口腔白斑组织(Z=-5.441、-4.285,P0.01)。ADM表达与VEGF表达及MVD计数呈正相关(r=0.623、0.783,P0.05)。结论 ADM能够促进VEGF的表达并与VEGF协同诱导肿瘤血管生成,从而促进肿瘤的生长和转移。     

加味保安方对带瘤C57小鼠肿瘤及肺组织VEGF表达水平的影响

目的:探讨加味保安方对Lweis肺癌C57小鼠肿瘤和肺组织的VEGF表达水平的影响。方法:将Lweis肺癌C57小鼠分为加味保安方大、小剂量组,西黄丸对照组,模型组,观察各组对Lweis肺癌C57小鼠对肿瘤和肺组织的VEGF水平的表达。结果:加味保安方大、小剂量及西黄丸均抑制Lweis肺癌C57小鼠肿瘤及肺组织的VEGF水平的表达(P<0.05),尤其是加味保安方大剂量作用明显,与西黄丸相当。结论:加味保安方能明显降低Lweis肺癌C57小鼠肿瘤及肺组织的VEGF水平的表达。     

非小细胞肺癌P53、VEGF表达及其与肿瘤血管形成的关系

目的 :探讨P5 3和血管内皮生长因子 (VEGF)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其与肿瘤血管形成的关系。方法 :用免疫组织化学方法 (S -P法 ) ,检测 76例非小细胞肺癌患者手术切除标本P5 3、VEGF蛋白表达 ,并用Ⅷ因子抗体标记瘤组织中血管内皮细胞 ,计数MVD。结果 :非小细胞肺癌区P5 3、VEGF的阳性表达率及MVD值分别为 :5 5 .2 6 % ,36 .84 % ,32 .6 1± 8.14。非小细胞肺癌组织P5 3和VEGF的阳性表达率与淋巴结转移及临床分期密切相关。P5 3(+)或VEGF(+)组MVD (37.5 6± 6 .2 8,37.37± 7.98)均显著高于P5 3(- )或VEGF(- )组 (2 7.0 0± 5 .13,2 9.5 3± 5 .83;P <0 .0 1) ;VEGF和P5 3均为阳性时 ,MVD值最大 (4 3.5 3± 5 .0 1,P <0 .0 1)。MVD与P5 3蛋白及VEGF阳性表达、VEGF阳性表达与P5 3蛋白阳性表达均呈正相关。结论 :在非小细胞肺癌血管生成过程中 ,P5 3基因、VEGF在调控肿瘤血管形成方面起重要作用。     

羟基红花黄色素A对Lewis肺癌移植瘤微血管密度及血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠Lewis肺癌移植瘤中微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响,探讨HSYA抑制肿瘤的分子机制。方法运用C57/BL小鼠接种Lewis肺癌细胞株于右侧肋腹皮下建立小鼠肺癌移植瘤模型,随机分为对照组(生理盐水)、环磷酰胺组(CTX)、HSYA不同剂量组(28 mg/L、56 mg/L、112 mg/L),给药方式均为腹腔注射给药。用药22 d后脱颈处死小鼠并剥离肿瘤组织,采用免疫组织化学法检测MVD,采用实时荧光定量PCR检测各组肿瘤组织中VEGF mRNA的表达情况。结果 56 mg/L、28 mg/L HSYA组与CTX组小鼠肿瘤组织MVD分别为30.01±3.12、22.56±2.11、16.21±2.40,显著低于对照组的41.10±2.93以及112 mg/L HSYA组的37.66±3.04,差异有统计学意义(X~2=2.82,P=0.010;X~2=3.16,P=0.007;X~2=4.58,P=0.000)及(X~2=1.98,P=0.038;X~2=2.45,P=0.016;X~2=3.82,P=0.001)。28 mg/L HSYA组与对照组VEGF扩增荧光表达阈值所需循环次数比较,差异无统计学意义,但其VEGF mRNA的表达值仅为0.43±0.16,明显低于对照组的0.82±0.06,差异有统计学意义(F=0.77,P=0.038)。结论 28 mg/L HSYA能够使小鼠Lewis肺癌移植中MVD明显减少,具有抑制肿瘤生长的作用,可能与下调VEGF mRNA表达有关。     

非小细胞肺癌中两种雌激素受体亚型与血管内皮生长因子的表达及相关性研究

目的分析非小细胞肺癌（NSCLC）中雌激素受体ER（ERα、ERβ）表达与血管内皮生长因子（VEGF）表达、肿瘤微血管密度（MVD）计数和肿瘤临床指标的相关性,探讨ER表达的意义及其对肺癌微血管生成的影响。方法采用免疫组化EnVision法检测研究54例NSCLC患者,以及10例正常肺组织、10例肺良性肿瘤组织中ERα、ERβ和VEGF的表达及MVD计数。结果正常肺组织和肺良性肿瘤组织中无ERα和ERβ表达,NSCLC中ERα、ERβ和VEGF阳性表达率分别为20.4%（11/54）、45.1%（26/54）和64.8%（35/54）。ERα的表达在各项肺癌临床参数间均无显著性差异;ERβ在腺癌中阳性表达率显著高于鳞癌（P〈0.05）,高分化癌组ERβ阳性表达率显著高于低分化＋中分化癌组（P〈0.05）。VEGF表达在淋巴结转移及肺癌TNM分期间存在差异（P〈0.05）。ERα与VEGF表达、MVD计数呈正相关性（P均〈0.05）。ERβ与VEGF表达、MVD计数无相关性。结论 NSCLC中ERβ表达与病理分类和分化程度有关,提示ERβ表达对NSCLC类型、恶性程度判断具有一定的参考价值。ERα表达与VEGF表达及MVD计数呈正相关性,表明ERα可能通过调节VEGF的表达而促进肺癌微血管的生成。     

加味四君子汤干预脾气虚肺癌survivin基因研究

目的:探讨加味四君子汤对脾气虚肺癌survivin基因的影响。方法:用苦寒泻下、劳倦、饮食节制复合因素法成功建立小鼠脾气虚证模型后,按实验设计方案处理各组小鼠,同时观察小鼠的整体情况。第17天,摘取肺组织,检测肺组织匀浆上清液中TNF-α。造模后以加味四君子汤灌胃14 d,脱颈椎处死小鼠,剥取肿瘤组织计算瘤重及采用RT-PCR方法检测肿瘤组织中survivin基因表达。结果:脾气虚小鼠的整体状况低下,肺组织匀浆中TNF-α与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01)。加味四君子汤可明显改善脾气虚肺癌小鼠的整体情况,升高小鼠脾指数,抑制肺癌生长且可下调脾气虚肺癌组织survivin基因表达。结论:加味四君子汤可以抑制脾气虚证肺癌小鼠肿瘤的生长,其机制可能与下调survivin基因表达有关。     

胰腺癌组织的平均微血管密度和血管内皮细胞生长因子的表达

目的:通过检测胰腺癌、慢性胰腺炎及正常胰腺标本中的平均微血管密度(MVD)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达水平,了解胰腺癌肿瘤血管生成情况.方法:胰腺癌标本26例,慢性胰腺炎标本7例,癌旁正常胰腺组织26例(采用胰腺癌标本中无肿瘤浸润的组织),所有标本均行免疫组化染色.MVD检测为在200倍显微镜下计数5个视野最高数目的微血管,以其平均数表示.VEGF的定量标准为VEGF染色强度与阳性细胞百分比分值的乘积.统计分析采用t检验和二元变量相关分析法.结果:VEGF在胰腺癌、慢性胰腺炎及癌旁正常胰腺组织中均有表达.胰腺癌组织的MVD值及VEGF表达水平均明显高于慢性胰腺炎及癌旁正常胰腺组织(P<0.01).26例胰腺癌组织MVD值及VEGF表达水平在统计学上有相关性(Spearman法r=0.862,P<0.000;Pearson法r=0.855, P<0.000).结论:胰腺癌的微血管生成水平高于慢性胰腺炎及癌旁正常胰腺组织;胰腺癌组织内MVD值及VEGF表达水平在统计学上有相关性.     

血管内皮生长因子的表达及微血管密度与头颈肿瘤发生发展的关系

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)的表达及微血管密度 (MVD)与头颈恶性肿瘤发生发展的关系。方法 :应用免疫组织化学 S- P法 ,检测 32例头颈恶性肿瘤 (头颈恶性肿瘤组 )、2 0例头颈良性肿瘤及新生物 (头颈良性肿瘤组 )、1 6例头颈部无瘤组织 (头颈无瘤组织组 )石蜡标本组织中的 VEGF表达和 MVD计数。结果 :头颈恶性肿瘤组 VEGF的表达及 MVD计数明显高于头颈良性肿瘤组及头颈无瘤组织组 (P均 <0 .0 1 )。有淋巴结转移者的 VEGF表达和 MVD计数亦比无淋巴结转移者高(P<0 .0 5 )。VEGF表达与 MVD呈正相关 (r=0 .392 ,P<0 .0 1 )。结论 :VEGF与头颈肿瘤血管生成有关 ,参与头颈恶性肿瘤的发展及转移的过程 ,而且起重要作用。 VEGF及 MVD有可能成为判断头颈恶性肿瘤发生发展、转移潜能及预后的指标     

非小细胞肺癌组织血管内皮生长因子的表达及微血管密度的变化

目的观察非小细胞肺癌（NSCLC）组织血管内皮生长因子（VEGF）的表达及微血管密度（MVD）的变化,初步探讨VEGF在NSCLC发生发展及转移中的作用。方法采用免疫组化法对36例NSCLC患者及17例肺良性瘤样病变患者周围正常组织中MVD及VEGF的表达进行检测。结果 NSCLC组织VEGF的阳性表达率及MVD值变化显著高于正常肺组织（P〈0.05;P〈0.01）。VEGF表达和MVD值与肿瘤组织学类型及分化程度有关,在高、中、低（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级）分化癌中存在显著差异（P〈0.01;P〈0.05）;有淋巴结转移组VEGF表达和MVD值显著高于无淋巴结转移组（P〈0.05）。结论 VEGF在肿瘤的血管形成、发展和转移中起重要作用,并可能成为肿瘤预后判断的参考指标。     

放疗对lewis肺癌荷瘤小鼠MMP、VEGF、MVD的影响

目的 建立lewis肺癌荷瘤小鼠动物模型,研究局部放疗对与肿瘤生长、转移密切相关的基质金属蛋白酶(MMPs)、血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)表达的影响.方法 建立负载lewis肺癌细胞的C57BL/6荷瘤小鼠动物模型,随机分为放疗组和未放疗组.当肿瘤细胞接种后14 d,肿瘤体积增至190 mm3左右时,放疗组应用医用直线加速器6MV-X射线对原发肿瘤分次照射,5 Gy/次,隔日1次,共20 Gy/4次.当放疗结束后第8 d(即接种后28 d),小鼠开始出现呼吸困难时,同时处死放疗组、未放疗组小鼠.解剖小鼠取原发瘤、癌旁正常组织.免疫组化法检测原发瘤及癌旁正常组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、原发瘤中VEGF、MVD的表达.结果 肿瘤组织中MMP2、MMP9表达高于癌旁正常组织(P＜0.05);放疗组肿瘤组织中MMP2、MMP9、VEGF、MVD较未放疗组表达增强(P＜0.05),而癌旁正常组织中MMP2、MMP9无明显变化.结论 放疗增强了lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中MMP2、MMP9、VEGF、MVD 的表达,为临床联合运用放疗与MMP抑制剂以及其它抗血管生成治疗,提高肿瘤治疗疗效提供了实验依据.