杜仲提取物中五个成分血浆蛋白结合率的测定

目的测定杜仲药材中5个成分的血浆蛋白结合率。方法采用平衡透析法测定血浆蛋白结合率,生物样本用甲醇沉淀蛋白进行处理,以葛根素为内标,利用超高效液相色谱-串联质谱仪测定血浆和缓冲溶液中的5个成分浓度。结果在所研究浓度范围内,京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷的平均蛋白结合率分别为(25.77±2.68)%、(57.54±3.79)%、(53.91±3.00)%、(24.15±4.92)%、(49.78±3.61)%。结论京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷的蛋白结合率较低,原儿茶酸、绿原酸和松脂醇单葡萄糖苷则与大鼠血浆蛋白有中等强度的结合。     

杜仲盐炙前后主要活性成分在肾纤维化大鼠体内的药代动力学研究

建立杜仲生、盐炙品提取物中6种主要活性成分(桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷酸、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷和松脂醇单葡萄糖苷)在腺嘌呤致肾纤维化模型大鼠血浆中的定量分析方法,并对比研究其体内药代动力学行为。应用UHPLC-Qq Q-MS/MS技术,采用负离子模式进行扫描,以MRM配对离子方式进行定量,同时对其专属性、线性范围、准确度、精密度、稳定性、提取回收率及基质效应进行考察,方法学考察结果均符合生物样本的分析要求。成功建立了一种可同时测定杜仲生、盐炙品提取物中6种活性成分在大鼠血浆中快速、灵敏、准确的定量分析方法,并对肾纤维化大鼠单次给予杜仲生、盐炙品提取物后不同时间点各成分的血药浓度进行检测,计算各成分的药代动力学参数并构建药-时曲线。本实验获得南京中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准号:202103A008)。结果表明,与杜仲生品组相比,杜仲盐炙品组大鼠血浆中桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷和松脂醇单葡萄糖苷等化合物的t_max值均显著小于生品组(P<0.05,P<0.01);绿原酸的C_max、AUC_{0-48 ...}     

HPLC-MS/MS法同时测定杜仲饮片及其单方制剂中11种成分的含量

摘要：目的:建立HPLC-MS/MS法同时测定杜仲及其单方制剂中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、原儿茶酸、丁香树脂醇双葡萄糖苷、松脂醇二葡萄糖苷、芦丁、无梗五加苷B、松脂醇葡萄糖苷、京尼平苷、槲皮素、咖啡酸和绿原酸11种成分的方法。方法:采用安捷伦SB C18色谱柱（2.1 mm×50 mm, 1.8μm）,流动相为0.1%甲酸水-含0.1%甲酸的乙腈,梯度洗脱,流速为0.3 ml·min-1,进样量为2μl,柱温为35℃,质谱采用ESI源,雾化器压力为40 psi,在多反应监测负离子模式下进行检测。结果:桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、原儿茶酸、丁香树脂醇双葡萄糖苷、松脂醇二葡萄糖苷、芦丁、无梗五加苷B、松脂醇葡萄糖苷、京尼平苷、槲皮素、咖啡酸、绿原酸在16.20～10 120 ng·ml-1、3.30～10 220 ng·ml-1、3.20～1 000 ng·ml-1、3.20～1 008 ng·ml-1、3.20～10 140 ng·ml-1、3.20～1 000 ng·ml-1、2.80～885 ng·ml-1、3.30～1 018 ng·ml-1、3.20～2 004 ng·ml-1、3.30～1 045 ng·ml-1、2.60～798 ng·ml-1的范围内线性关系良好（r≥0.998 9）,平均加样回收率为91.3%～104.3%,RSD为0.5%～6.5%（n=6）。结论:本研究建立的方法专属性好,稳定可靠,可为杜仲及其单方制剂的质量控制提供依据。     

蒙药塔布森-2中9种苯丙素类成分在Caco-2细胞中的吸收特性研究

目的 研究蒙药塔布森-2(Tabson-2 decoction,TBD)中苯丙素类成分在Caco-2细胞中的吸收特性,初步阐明TBD的口服吸收机制。方法 采用Caco-2细胞单层细胞模型,通过UPLC-MS/MS分析TBD在Caco-2细胞中的摄取成分,并建立UPLC-MS/MS分析方法测定TBD中吸收最好的9种苯丙素类成分原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸C、咖啡酸、二氢咖啡酸、3-羟基肉桂酸在Caco-2细胞中的含量,分别考察时间、浓度和P糖蛋白抑制剂对各成分的吸收影响。结果 研究发现咖啡酸、二氢咖啡酸的总摄取量在0~180 min为上升趋势,未呈现饱和;3-羟基肉桂酸在90 min左右吸收恒定趋于饱和;隐绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸C、新绿原酸、绿原酸、原儿茶酸的摄取量约从90 min开始,随时间的增加先下降后上升。与苯丙素类成分相比,加入P-糖蛋白抑制剂维拉帕米及环孢菌素A后对二氢咖啡酸的吸收产生了影响,说明二氢咖啡酸是P-糖蛋白底物。结论 TBD主要苯丙素类成分进入Caco-2细胞以被动扩散为主,主动转运为辅,且除二氢咖啡酸外其他8个成分的吸收过程不受P-糖蛋白的外排作用影响。     

灯盏细辛提取物中3种活性成分在Caco-2细胞模型吸收机制的研究

目的研究灯盏细辛提取物(erigeron breviscapus extract,Ebe)中3种活性成分灯盏甲素、咖啡酸和绿原酸的吸收机制。方法建立人结肠腺癌细胞系(the human colon carcinoma cell line,Caco-2细胞)模型;利用该模型研究Ebe的细胞摄取规律,通过UPLC-MS/MS法测定Caco-2细胞中灯盏甲素、咖啡酸和绿原酸的浓度,研究pH、时间以及药物浓度对3种活性成分的转运影响;考察在P-糖蛋白抑制剂(维拉帕米、环孢素A)存在与否时3种活性成分在Caco-2细胞模型中的转运情况。结果受试物Ebe在所设置的浓度范围内(0.1~25.0 g·L~(-1))对Caco-2细胞无毒副作用。灯盏甲素和绿原酸在Caco-2细胞摄取实验中具有浓度、时间依赖性,呈正相关,渗透系数维持在一个平衡状态。咖啡酸具有浓度饱和性,且加入P-糖蛋白抑制剂后咖啡酸的细胞摄取量明显增加。结论 Ebe中灯盏甲素和绿原酸主要表现为被动转运,P-糖蛋白参与了咖啡酸的摄取过程,咖啡酸的吸收主要由载体媒介转运实现。     

β-葡萄苷酶转化松脂醇二葡萄糖苷元的制备工艺

目的:利用β-葡萄糖苷酶催化水解杜仲主要降压活性成分松脂醇二葡萄糖苷(PDG),制备其苷元(PDG-A).方法:对水解反应时间、pH及温度等条件进行优化,并采用液相质谱联用和核磁共振波谱等手段对产物进行结构解析.结果:β-葡萄糖苷酶水解PDG的最佳条件为:水解时间6h,水解pH5,水解温度50℃,三次实验的PDG-A收...     

杜仲炮制前后松脂醇二葡萄糖苷含量的比较

目的 以松脂醇二葡萄糖苷的含量为质控指标,筛选优化传统盐炙杜仲的炮制工艺,并与生杜仲进行比较.方法 用正交设计法优选炮制工艺,采用RP-HPLC法测定松脂醇二葡萄糖苷的含量,作为杜仲质量控制的考察指标进行实验比较.结果 杜仲的最佳炮制工艺:用盐量2.5%、温度135℃、时间30 min,杜仲生品中松脂醇二葡萄糖苷含量高于炮制品2倍以上.结论 随着炮制品的温度升高和时间的延长,杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量逐渐下降.     

RP—HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量

杜仲（ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＯｌｉｖ．）有降低血压，补肾安胎的功效，主要成分为杜仲胶、氯原酸、桃叶珊瑚苷等。Ｃｈａｒｌｅｓ从中国产杜仲中分离得到了松脂醇二葡萄糖苷（ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｄｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ），并确证了其为杜仲降压的有效成分［１］，同时向多个国家申请了专利。唯一明确的松脂醇二葡萄糖苷的含量测定法有正相高效液相色谱法［２］，我们在药典标准制订过程中，采用了反相高效液相法测定其含量，流动相为甲醇－水（２５∶７５），方法简便，松脂醇二葡萄糖苷能得到较好的分离。１　仪器与试药Ｓ…     

杜仲提取物中4个主要成分的大鼠在体肠吸收

考察了杜仲提取物中京尼平苷酸(1)、新绿原酸(2)、绿原酸(3)和隐绿原酸(4)在大鼠小肠的吸收动力学特性.采用大鼠在体肠循环灌流模型,建立了UPLC-MS/MS法测定1～4,考察了pH值、样品浓度、胆汁和P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对1～4在体肠吸收的影响.结果显示,1在pH 7.4条件下吸收较差,2、4在不同pH值下的吸收有显著差异,而3对pH值不敏感.2、3在中浓度样品溶液(4.0 mg/ml)的3h累积吸收率(A)显著高于高浓度样品(8.0 mg/ml),两者在高浓度下的吸收存在饱和现象.胆汁对1～4的吸收均有显著抑制作用.1～4在整个肠段均有吸收,主要吸收部位在小肠;P-gp抑制剂不影响杜仲提取物的肠吸收,提示1～4可能不是P-gp的底物.     

产地加工对杜仲京尼平苷酸含量的影响

目的：比较不同加工方法对杜仲京尼平苷酸含量的影响,为杜仲的合理化产地加工提供科学依据。方法采用高效液相色谱法测定京尼平苷酸量。结果不同加工方法对杜仲京尼平苷酸含量有影响。同一干燥方法,未发汗杜仲京尼平苷酸量高于发汗杜仲;同一性状,烘干、晒干与阴干三者间京尼平苷酸量存在显著差异,以80℃烘干含量最高;不同性状,80℃烘干京尼平苷酸量无显著差异。结论临床应用如以京尼平苷酸的生物活性为主,结合实际生产,建议杜仲采用趁鲜切宽丝,不发汗,80℃烘干的产地加工方法。