76株空肠弯曲菌血清学分型和药物敏感试验

空肠弯曲菌是引起人类急性腹泻，尤其是小儿腹泻的重要病原菌．近年来，作者[1]在调查本地区急性腹泻患者空肠弯曲菌感染情况的同时，对所分离的菌株进行血清学分型，借以对流行病学追溯空肠弯曲菌传染源和传播途径作一探讨，部分菌株还做了药物敏感试验．材料和方法一、菌株来源从济南地区急性腹泻病人及动物粪便分离菌株，其中人源31株，动物45株（鸡36株，猪7株，狗1株和猫1株）．全部菌株采取肛拭和新鲜粪便按王焕妞[2]方法鉴定．二、血清学分型被检菌经血平板分离纯化菌落传2～3代．挑取菌落，经鉴定具有触酶、氧化酶、醋酸铅纸条硫化…     

空肠弯曲菌脂寡糖核心区合成相关基因簇遗传多样性研究

目的分析我国空肠弯曲菌脂寡糖(LOS)核心区合成相关基因簇的序列特征,获得LOS核心区合成相关基因簇的特异DNA序列特征。方法选择132株空肠弯曲菌的全基因组序列,采用OrthoMCL软件,进行LOS核心区合成相关基因簇DNA的同源性分析并以特异型别基因簇的特异序列为靶位点,建立PCR方法,根据特异引物序列以及扩增产物大小,识别菌株LOS核心区合成相关基因簇的主要型别。结果在132株菌中,105株菌的LOS核心区合成相关基因簇的DNA序列属于14个已确定的LOS型别,27株菌为新型LOS,根据DNA的同源性可分为10个新型别,分别命名为CDC1~10。LOS合成相关基因序列中存在大量的多聚A/T、多聚G/C结构以及碱基的插入、缺失等突变,部分突变有可能导致LOS相关合成酶及转移酶的氨基酸序列发生改变,影响其抗原性。针对A、B、C、CDC8型LOS的特异DNA序列建立的PCR鉴定方法可在50株测序菌株的基因组中得到验证。结论10种LOS新型别的发现有利于更准确地鉴定空肠弯曲菌,解释LOS的抗原多样性特征。空肠弯曲菌的LOS核心区合成相关基因簇序列多样丰富,存在大量多聚结构和DNA序列的突变,是潜在的导致LOS抗原多样性的原因。主要LOS分型的PCR法可用于快速筛查5种特异LOS型,但仍需要更多菌株的验证。     

深圳市南山区腹泻患者弯曲菌感染及病原学特征分析

目的获得本地区秋季腹泻患者弯曲菌的感染现状及病原学特征。方法收集深圳市南山区2018年9 — 11月腹泻患者的粪便标本,采用双孔滤膜法分离培养弯曲菌并应用荧光聚合酶链式反应（PCR）方法进行菌种鉴定。 应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）和多位点序列分型（MLST）对分离菌株进行分子分型,应用琼脂稀释法获得菌株对11种抗生素的最小抑菌浓度（MIC）。 根据菌株的序列分型（ST）结果,结合既往菌株分型数据进行本地区菌株的遗传聚类分析。结果共采集腹泻患者粪便标本150份,其中男性患者74例,女性患者76例,年龄在1～86岁之间。 150份粪便标本中共分离到弯曲菌18株,检出率为12.00%（18/150）。 菌种鉴定发现,空肠弯曲菌占77.78%（14/18）,结肠弯曲菌占22.22%（4/18）。 14株空肠弯曲菌可分为11种PFGE带型,8个ST型别,以ST9763最多（35.71%,5/14）,是本研究新发现ST型别。 14株空肠弯曲菌对四环素全部耐药,对红霉素、阿奇霉素、泰利霉素、庆大霉素、链霉素及克林霉素100.00%敏感。 ST型别最小生成树聚类分析结果表明,不同宿主来源菌株没有显著聚集性,腹泻患者分离菌株分布在不同来源的组群中。结论采用双孔滤膜法提高了腹泻患者中弯曲菌的检出率。本地区弯曲菌的感染仍以空肠弯曲菌为主, 分离菌株对四环素类、喹诺酮类抗生素呈现较高的耐药特征,分离的空肠弯曲菌ST呈弥散分布特点。     

空肠弯曲菌耐药现状

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,C.jejuni)是革兰阴性的,微需氧弯曲菌,是目前世界上发达国家和发展中国家普遍存在的主要食源性病原菌,也是旅行者腹泻的主要致病菌[1]。空肠弯曲菌的感染导致空肠弯曲菌病,其主要症状为腹泻性肠炎,此外研究证明空肠弯曲菌的感染与格林巴-利综合征(Guillain-Barre Syndrome,GBS)密切相关,是空肠弯曲菌感染造成主要疾病负担之一[2]。在自然界中,空肠弯曲菌广     

复发性尿路感染患者致病性大肠埃希菌分子分型、毒力基因及药物敏感性分析

目的 分析复发性尿路感染（rUTI）患者致病性大肠埃希菌分子分型、毒力基因和耐药性。方法收集分离自上海市第六人民医院60例rUTI患者的大肠埃希菌菌株,采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）、多位点序列分型（MLST）和种系发育分型方法进行克隆分型,采用聚合酶链反应（PCR）和测序法分析其常见毒力基因（feoB、chuA、iutA、iroN、ireA、fimH、foc、sfa、aer和cnf）,并分析大肠埃希菌对13种常用抗菌药物的耐药性。结果 根据PFGE结果,将60例rUTI患者分为复发组和再感染组,纳入分离自复发组的30株和再感染组的60株大肠埃希菌。纳入菌株的主要MLST型别为ST131型和ST405型,主要种系发育分型为B2型和D型。在10种毒力基因中,feoB所占比例最高（98.8%）,其次是fimH(93.3%)。复发组iutA携带率高于再感染组（P=0.020）。2个组临床分离菌株抗菌药物耐药性模式无明显差异（P>0.05）。结论 ST131和ST405是上海市第六人民医院rUTI患者致病性大肠埃希菌的主要MLST型别,常见毒力基因为feoB和fimH,iutA在复发患者...     

浙江省134株甲型副伤寒沙门菌的分子分型研究

目的应用分子分型分析浙江省甲型副伤寒沙门菌的遗传相关性,分析流行规律,制定有效的防治措施。方法运用PFGE方法对浙江省134株甲型副伤寒进行分子流行病学研究。结果134株受检菌株分为11个型,其中1型占47.8%,2型占36.6%,3型占0.7%,4型占4.5%,5型占0.7%,6型占0.7%,7型占0.7%,8型占1.5%,9型占0.7%,10型占1.5%,11型占4.5%。结论1、2型菌株占全部134株的84.3%。可见,受检的134株菌同源性较高。其中8种菌型为少见菌型,可能与浙江省甲型副伤寒高度散发有关。     

产KPC-2肺炎克雷伯菌的基因分型、毒力基因和血清型特征研究

目的分析我院产KPC-2肺炎克雷伯菌基因分型、毒力基因和血清型特点。方法收集碳青霉烯类不敏感肺炎克雷伯菌菌株75株(采用改良Hodge试验和DNA测序以确定其表型和基因型)和同期分离的敏感株97株,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株间的同源性,PCR检测9种毒力基因all S、rmp A、mrk D、kfu BC、cf29a、fim H、uge、wab G、ure A和K1、K2、K5、K54、K57、K206种血清型。比较产KPC-2和非产KPC-2肺炎克雷伯菌的毒力基因和血清型差异。结果 75株碳青霉烯类不敏感肺炎克雷伯菌菌株中,有61株细菌经改良Hodge试验初筛为产碳青霉烯酶菌株,PCR扩增及DNA测序确定其为产KPC-2酶。PFGE结果显示,依据相似度80%的折点,产KPC-2酶组的61株细菌来源于30个克隆菌株,不产KPC-2酶组的111株肺炎克雷伯菌来源于96个克隆菌株。all S基因在不产KPC-2组中的阳性率(21.9%)高于在产KPC-2组的阳性率(3.3%),差异有统计学意义(P0.05)。血清型K1、K2和K54在产KPC-2组与不产KPC-2组间的分布差异无统计学意义(P0.05),其他3种血清型未检测到。结论产KPC-2肺炎克雷伯菌临床分离株携带的尿素酶基因all S减少,且大多不属于高致病性血清型,但作为高度耐药菌,应加强监控。     

实时荧光聚合酶链反应检测空肠弯曲菌

目的 探索一种快速、敏感、特异的空肠弯曲菌检验方法.方法 根据GenBank公布的空肠弯曲菌基因序列,在其保守区域设计特异性引物与探针以建立基于TaqMan探针的实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法,并对方法的特异性、敏感性和重复性进行研究.结果 该方法对空肠弯曲菌可产生特异扩增信号,对其他非空肠弯曲菌菌属无响应,其检测敏感性可达10cfu/mL.反应体系具有很高的稳定性.结论实时荧光PCR可快速、特异、灵敏地检测空肠弯曲菌,具有较强的实际应用价值.     

McAb—Dot—ELISA对空肠弯曲菌快速鉴定的研究

应用本室研制的抗空肠弯曲菌共同抗原的单克隆抗体。以Dot-ELISA 对空肠弯曲菌进行快速鉴定.通过对实验条件的优选,确定了Dot-ELISA 的工作程序.对两种参考菌株(Pcnner.Loir)、人及10种动物来源的476株空肠弯曲菌进行了鉴定,结果均为阳性反应。可在3h 内报告结果.与11种其它细菌的试验结果表明,除与幽门弯曲茵发生弱阳性反应外,与另外其它10种细菌均为阴性反应.为空肠弯曲菌的鉴定提供了一种特异、快速的方法.     

深圳地区人群B群链球菌血清学分布和毒力基因及耐药性分析

目的 了解深圳地区B群链球菌(GBS)血清型分布、毒力基因和耐药性。方法 来自深圳4家医院515例B群链球菌(Group B Streptococcus,GBS)分离株(其中108例侵袭性,112例非侵袭性和295例定植株)。所有GBS分离株采用常规血清方法和分子方法进行血清型分型; PCR方法检测GBS分离株的scpB,lmb,hylB,cylE,bac,bca和rib毒力基因; 纸片扩散法检测GBS对青霉素、红霉素和四环素的敏感度; 青霉素的最低抑菌浓度(MICs)用E实验检测。结果 分子分型(8个血清型Ⅰa,Ⅰb,Ⅱ～Ⅵ,Ⅸ)与血清分型相符。结合分子分型与血清学分型,血清型Ⅲ是最常见的荚膜型(56.5%),然后依次为Ⅰb(17.5%),Ⅰa(12.6%),V(7.4%),Ⅱ(2.7%),Ⅵ(1.4%),Ⅳ(1.0%)和Ⅸ(1.0%)。在不同的人群中Ⅲ型为主要血清型。除Ⅲ型外,在侵袭性和非侵袭性感染人群中,血清型Ⅰa也较为常见(11.1%和29.5%),Ⅰb在定植人群中较为常见(19.3%)。PCR检测毒力基因表明在几乎所有分离株中含cylE,lmb,scpB和hylB基因,在515例分离株中发现rib,bca和bac基因分别为29.1%,14.6%和9.7%。此外,一些毒力基因显著与特定的血清型相关,如rib与血清型Ⅲ,Ⅰa和Ⅰb主要相关; bca和bac与血清型Ⅲ和Ⅰb主要相关。药敏结果显示,GBS对β-内酰胺酶100%敏感,对红霉素、克林霉素和四环素的耐药性分别为67.0%,61.9%和86.0%。结论 GBS血清型分布、毒力基因和耐药性的相关性为临床治疗、流行病学研究和疫苗设计方面提供重要依据。     

Virulence Genes in Expanded-Spectrum-Cephalosporin-Resistant and -Susceptible Escherichia coli Isolates from Treated and Untreated Chickens

This study investigated antimicrobial resistance, screened for the presence of virulence genes involved in intestinal infections, and determined phylogenetic groups of Escherichia coli isolates from untreated poultry and poultry treated with ceftiofur, an expanded-spectrum cephalosporin. Results show that none of the 76 isolates appeared to be Shiga toxin-producing E. coli or enteropathogenic E. coli. All isolates were negative for the major virulence factors/toxins tested (ehxA, cdt, heat-stable enterotoxin [ST], and heat-labile enterotoxin [LT]). The few virulence genes harbored in isolates generally did not correlate with isolate antimicrobial resistance or treatment status. However, some of the virulence genes were significantly associated with certain phylogenetic groups.     

Highly Drug-Resistant Salmonella enterica Serovar Indiana Clinical Isolates Recovered from Broilers and Poultry Workers with Diarrhea in China

Highly drug-resistant Salmonella enterica serovar Indiana became the most common serovar in broilers with diarrhea in China over the course of this study (15% in 2010 to 70% in 2014). While most S. Indiana isolates (87%, 384/440) were resistant to 13 to 16 of the 16 antibiotics tested, 89% of non-S. Indiana isolates (528/595) were resistant to 0 to 6 antibiotics. Class 1 integrons and IncHI2-type plasmids were detected in all S. Indiana isolates, but only in 39% and 1% of non-S. Indiana isolates.     

Virulence Genes Detection and Antimicrobial Susceptibility of Staphylococcus pseudintermedius Isolates from Canine Skin Infection in Chennai,India

Proceedings of the National Academy of Sciences, India Section B: Biological Sciences - Staphylococcus pseudintermedius (SP) is the major pathogen incriminated in the skin infections of dog....     

Molecular Characteristics of Salmonella Genomic Island 1 in Proteus mirabilis Isolates from Poultry Farms in China

Six out of the 64 studied Proteus mirabilis isolates from 11 poultry farms in China contained Salmonella genomic island 1 (SGI1). PCR mapping showed that the complete nucleotide sequences of SGI1s ranged from 33.2 to 42.5 kb. Three novel variants, SGI1-W, SGI1-X, and SGI1-Y, have been characterized. Resistance genes lnuF, dfrA25, and qnrB2 were identified in SGI1 for the first time.     

Molecular Characterization of Multidrug-Resistant Isolates of Mycobacterium tuberculosis from Patients in North India

The World Health Organization has identified India as a major hot-spot region for Mycobacterium tuberculosis infection. We have characterized the sequences of the loci associated with multidrug resistance in 126 clinical isolates of M. tuberculosis from India to identify the respective mutations. The loci selected were rpoB (rifampin), katG and the ribosomal binding site of inhA (isoniazid), gyrA and gyrB (ofloxacin), and rpsL and rrs (streptomycin). We found known as well as novel mutations at these loci. Few of the mutations at the rpoB locus could be correlated with the drug resistance levels exhibited by the M. tuberculosis isolates and occurred with frequencies different from those reported earlier. Missense mutations at codons 526 to 531 seemed to be crucial in conferring a high degree of resistance to rifampin. We identified a common Arg463Leu substitution in the katG locus and certain novel insertions and deletions. Mutations were also mapped in the ribosomal binding site of the inhA gene. A Ser95Thr substitution in the gyrA locus was the most common mutation observed in ofloxacin-resistant isolates. A few isolates showed other mutations in this locus. Seven streptomycin-resistant isolates had a silent mutation at the lysine residue at position 121. While certain mutations are widely present, pointing to the magnitude of the polymorphisms at these loci, others are not common, suggesting diversity in the multidrug-resistant M. tuberculosis strains prevalent in this region. Our results additionally have implications for the development of methods for multidrug resistance detection and are also relevant in the shaping of future clinical treatment regimens and drug design strategies.     

检测胎儿弯曲菌三种亚种的多重PCR方法建立及初步应用

目的 建立一种检测胎儿弯曲菌胎儿亚种、性病亚种和龟亚种的多重PCR检测方法。方法 使用针对胎儿弯曲菌、性病亚种和龟亚种的特异性引物,优化反应体系及反应条件,使用38株菌株（18株胎儿弯曲菌和20株非胎儿弯曲菌）验证其特异性,并将该方法应用于53份爬行动物粪便筛查。结果 针对3种亚种均可扩增相应的片段,胎儿亚种只有1条359 bp大小的条带、性病亚种有2条分别为359 bp和156 bp大小的条带,龟亚种有2条分别为359 bp和266 bp大小的条带。优化后的最佳扩增条件：退火温度58℃,引物MG3f和Cf359r浓度为0.1μmol/L,ISC2mf和ISC2mr、CoA266f和CoA266r的浓度0.2μmol/L。对胎儿亚种、性病亚种和龟亚种的检出限分别为0.40 ng/μL、0.39 ng/μL和0.47 ng/μL。使用18株胎儿弯曲菌和20株非胎儿弯曲菌其特异性为100%。对53份爬行动物粪便进行筛查中有1份龟亚种阳性并分离出了相应的菌株。结论 本研究建立的多重PCR方法能利用1个反应体系同时鉴别3种亚种,从而为菌株快速鉴定、流行病学调查和溯源研究提供技术支持。     

深圳地区儿童腹泻A组轮状病毒检测和基因型分析

目的：了解深圳地区5岁以下腹泻患儿 A组轮状病毒的感染状况及其基因型特点。方法收集深圳市福田人民医院2007年8月～2009年2月腹泻患儿粪便标本413份,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测 A组轮状病毒基因,阳性者再采用巢式 RT-PCR 分别针对病毒 VP7,VP4基因保守区进行 G／P型别检测。结果413份粪便标本 A组轮状病毒阳性率为52.5％（217／413）,轮状病毒腹泻在深圳的主要流行季节是10～次年1月份,2岁以内的患儿占全部患儿总数的91.2％（198／217）。对217份轮状病毒阳性样本进行G／P分型,流行的轮状病毒G型分型依次为G3（52.1％）,G1（31.3％）,混合 G型感染（6.0％）,G2（1.8％）及 G9（1.4％）;P型分型依次为 P[8]（85.7％）,P[4]（6.0％）及混合 P型感染（1.4％）;G型和P型的组合以 G3P[8]（47.5％）最为常见,其次为 G1P[8]（30.4％）。结论 A组轮状病毒是深圳地区婴幼儿腹泻的主要原因,G3P[8]和 G1P[8]是2007年～2009年深圳地区的主要轮状病毒流行株,此外混合型并不少见。