山茱萸环烯醚萜苷类成分对AGEs诱导HUVEC损伤的保护作用

目的探讨山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷对糖基化终末产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法体外培养HUVEC,用马钱苷、莫诺苷(终浓度分别为100、10、1μmol·L-1)预孵1 h后,再加入AGEs(200 mg·L-1)刺激,并设氨基胍为阳性对照,孵育24 h后,采用MTT法检测马钱苷、莫诺苷对HUVEC增殖率的影响;采用试剂盒检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、内皮素(ET-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1);采用Western blot法检测HUVEC中糖基化终末产物受体(RAGE)、核转录因子(NF-κB)的蛋白表达。结果山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷能抑制AGEs导致的HUVEC损伤,与空白对照组比较,模型组细胞RAGE、NF-κB蛋白表达上调(P<0.01),ET-1、MCP-1、VCAM-1分泌增加(P<0.01),NO水平降低(P<0.01)。马钱苷、莫诺苷给药组能不同程度地下调RAGE、NF-κB蛋白表达,减少ET-1、MCP-1、VCAM-1分泌,升高NO水平,与模型组比较差异具有显著性(P<0.05~0.01)。结论山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷对AGEs导致的HUVEC损伤具有明显的保护作用,其作用机制为下调RAGE蛋白表达,抑制RAGE受体相关NF-κB信号通路发挥抗炎作用,从而改善内皮细胞功能。     

马钱苷对糖基化终末产物诱导足细胞损伤的保护作用

目的探讨山茱萸环烯醚萜苷特征性成分马钱苷对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾脏足细胞损伤的保护作用及其机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分为空白对照组、模型组(AGEs组)、马钱苷组,并设氨基胍组作为阳性对照。MTT法检测马钱苷对足细胞存活率的影响;Hoechst33342/PI双染观察足细胞凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测足细胞AGEs受体(RAGE)、足细胞损伤标志蛋白desmin以及凋亡相关蛋白bax、bcl-2、cleaved caspase-3的表达。结果马钱苷能够抑制AGEs导致的足细胞损伤,下调足细胞Desmin、RAGE蛋白的表达,明显降低AGEs诱导的足细胞凋亡率,降低足细胞Bax/Bcl-2的比值和促凋亡蛋白cleaved caspase-3的表达。结论马钱苷能够改善AGEs诱导的肾小球足细胞损伤,其作用机制与降低RAGE蛋白表达,抑制凋亡通路有关。     

知柏地黄丸含量测定方法改进研究

目的 改进《中国药典》2015年版知柏地黄丸、知柏地黄丸(浓缩丸)中山茱萸和牡丹皮含量测定的方法.简化样品前处理方法,建立同一色谱条件同时测定马钱苷、莫诺苷、丹皮酚含量的方法,提高检测效率.方法 比较样品经过超声、回流提取,经过中性氧化铝柱净化前后马钱苷、莫诺苷、丹皮酚的含量和色谱峰的变化,简化样品前处理方法;以乙腈-...     

HPLC法同时测定不同产地及不同采收时间山茱萸中3个环烯醚萜苷的含量

目的:采用高效液相色谱法测定不同产地及不同采收期山茱萸中的莫诺苷、马钱苷及獐牙菜苷3个环烯醚萜苷类的含量。方法:采用Welchrom-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温35℃,以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长240 nm。结果:莫诺苷、马钱苷和獐牙菜苷的进样量分别在12.0～600.0,8.64～432.0,3.72～186.0μg.mL-1范围内,与色谱峰面积呈良好线性关系(r=0.9997,n=6);平均回收率(n=6)分别为96.3%,103.4%,98.8%。不同产地的山茱萸中,莫诺苷以西北大学果园采收的含量最高,马钱苷以陕西省丹凤县产的含量最高,獐牙菜苷以西北大学果园采收的含量最高;不同采集时间的西北大学果园山茱萸中莫诺苷、马钱苷和獐牙菜苷的含量范围分别为15.21～50.50,2.72～8.21,0.30～1.43 mg.g-1。结论:本方法操作简单、快速,重复性好,可同时测定山茱萸中莫诺苷、马钱苷和獐牙菜苷的含量。     

山茱萸中马钱苷在大鼠体内的药物动力学研究

目的:建立测定大鼠血浆中马钱苷浓度的方法,研究并比较了口服马钱苷单体和山茱萸提取液后马钱苷在大鼠体内的药物动力学过程,考察了马钱苷单体口服后的绝对生物利用度。方法:利用 HPLC 法,色谱柱为反相 C_(18)柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(32∶68),流速为1 mL·min~(-1),检测波长236 nm。结果:线性范围15.25～7625 ng·mL~(-1),日内与日间 RSD<15%,回收率93.5%～109.3%。灌胃给药后马钱苷单体消除 t_(1/2)为93.6 min,绝对生物利用度为13.2%;山茱萸提取液中马钱苷消除 t_(1/2)为99.4 min,相对马钱苷单体口服给药的生物利用度为19.4%。结论:马钱苷单体口服生物利用度较低。本文方法灵敏度高,操作方便,适合于马钱苷的药动学研究。     

HPLC法测定山茱萸生品中5-羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱苷含量

目的采用高效液相二极管阵列检测法(HPLC-DAD)同时测定山茱萸生品中3个成分的含量:5-羟甲基糠醛(5-HMF)、莫诺苷和马钱苷。方法采用Venusil ABS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇和水为流动相,梯度洗脱,流速1 ml.min-1,柱温30℃,检测波长284、240、238 nm。结果 5-HMF、莫诺苷和马钱苷的峰面积与浓度的线性关系均良好(r≥0.999 6);加样回收率分别为100%、100.62%、100.53%。结论该方法快速、准确、重现性好,可用于同时测定山茱萸生品中5-羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱苷的含量。     

三七三醇皂苷对糖尿病大鼠学习记忆能力及星形胶质细胞活性的影响

目的 探讨三七三醇皂苷(PTS)对糖尿病大鼠学习记忆的改善作用,并从星形胶质细胞角度揭示其机制。方法 24只SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组及PTS治疗组,每组8只。于SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型,对照组为正常SD大鼠,PTS治疗组为糖尿病大鼠给予PTS治疗。检测大鼠血糖和体质量,3个月后,水迷宫实验观察各组大鼠的学习记忆功能,免疫组化染色检测脑海马区星形胶质细胞形态,Western blot法检测神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达。结果 糖尿病组较对照组学习记忆能力减退,脑海马区星形胶质细胞胞体萎缩、突起变细,脑海马区GFAP及GDNF表达明显减少(均P<0.05)。PTS组较糖尿病组学习记忆能力改善,脑海马区星形胶质细胞形态改善、GFAP及GDNF表达明显恢复(均P<0.05)。结论 PTS能恢复糖尿病大鼠脑海马区星形胶质细胞活性,恢复GDNF表达,提高糖尿病大鼠学习记忆功能。     

中药山茱萸炮制前后特征化学成分的分析

目的:确定可用于分析和鉴别炮制前山萸肉和炮制后酒萸肉的特征成分。建立HPLC法同时测定山茱萸样品中没食子酸、5-羟甲基糠醛(5-HMF)、莫诺苷、当药苷、马钱苷和山茱萸新苷的含量。方法:采用Phenomenex Gemini C18110(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.3%磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱(0~20 min,7%A;20~50 min,7%A→20%A;50~65 min,20%A),流速1 m L·min-1,检测波长240 nm,柱温35℃。将15份山萸肉和10份酒萸肉样品中6种化学成分含量测定数据采用SPSS 10.0软件进行组间t检验统计处理。将酒萸肉中含量较高的4种成分进行雷达图分析。结果:方法学验证结果显示,没食子酸、5-HMF、莫诺苷、当药苷、马钱苷和山茱萸新苷进样量分别在8.174~653.92μg(r=0.999 5),48.12~3 849.6μg(r=0.999 5),44.92~3 593.6μg(r=1.000 0),9.088~727.042μg(r=1.000 0),41.36~3 308.8μg(r=1.000 0)和8.608~688.64μg(r=0.999 9)范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=9)均在97.26~103.1%之间,RSD均小于2.8%。样品测定分析结果显示,山萸肉和酒萸肉样品中,除当药苷含量无显著差异外,其余5种成分没食子酸、5-HMF、莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷含量均有显著差异。炮制品酒萸肉中没食子酸、5-HMF含量高于生品山萸肉,但莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷含量低于山萸肉。雷达图分析结果,马钱苷和没食子酸含量呈相对稳定分布,莫诺苷和5-HMF呈现相反的变化趋势,莫诺苷含量越低,则5-HMF含量越高。结论:建立的方法符合方法学验证要求。5-HMF和莫诺苷差异显著,可用于鉴别山萸肉和酒萸肉。     

马钱苷元对人胰腺癌细胞BXPC3的抗肿瘤作用及机制研究

目的 研究山茱萸提取物马钱苷元（Loganetin）对人胰腺癌细胞株BXPC3的体外抗肿瘤作用,并探讨其可能的抗肿瘤机制。方法 本研究共设置两组实验,即对照组和马钱苷元组。采用CCK8（Cell Counting Kit-8）实验检测细胞存活率的改变,流式细胞仪检测马钱苷元对细胞周期的影响。同时利用划痕实验及基质胶Transwell小室实验分别检测马钱苷元对人胰腺癌细胞株BXPC3迁移和侵袭的影响。最后通过Western blot检测AKT-mTOR信号通路相关蛋白AKT、mTOR和S6磷酸化水平的改变。结果 与对照组相比,马钱苷元对人胰腺癌细胞株BXPC3的增殖具有抑制作用,且呈明显的时间和浓度依赖性,100μM马钱苷元作用于BXPC3细胞24、48h的抑制率分别为（21.49±0.01）%、（29.25±0.03）%;马钱苷元能够使细胞周期阻滞于S期并抑制细胞株BXPC3的迁移（p=0.0002）和侵袭(p＜0.0001),下调AKT、mTOR和S6的磷酸化水平。结论 马钱苷元可能通过抑制AKT-mTOR信号通路发挥其抗肿瘤活性。     

山茱萸醇提液对D-半乳糖致衰大鼠非酶糖化及AR活性的影响

目的：研究山茱萸醇提液对D-半乳糖致衰大鼠体内非酶糖化和醛糖还原酶活性(AR)的影响。方法：本实验以D-半乳糖致衰大鼠为研究对象,分别以大、小剂量的山茱萸醇提液灌胃6周,测定了青年大鼠、致衰大鼠糖化血清蛋白(GSP)、糖化血红蛋白(GHb)、胸主动脉糖基化终末产物(AGE)含量、AR的变化,同时观察不同剂量山茱萸醇提液对致衰大鼠上述指标的影响,结果：致衰大鼠GSP、GHb、AGE含量随龄增加;醛糖还原酶活性增高。山茱萸醇提液可降低GSP、GHb、AEG含量,对醛糖还原酶活性无明显影响。结论：山茱萸醇提液可抑制体内蛋白质非酶糖化,具有一定抗衰老作用。