热毒宁注射液抗甲型H1N1流感病毒作用机制研究

目的 研究热毒宁注射液体内抗甲型H1N1流感病毒的作用及其机制。方法 采用甲型H1N1流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠制备肺炎模型,观察热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒感染小鼠平均存活时间、存活率、肺指数、病毒载量及细胞因子的影响。结果 与模型组比较,热毒宁注射液显著提高病毒感染小鼠的存活率、延长小鼠平均存活时间（P＜0.05、0.01）;显著降低病毒感染小鼠肺指数、肺组织病毒载量（P＜0.05、0.01）;提高肺组织γ干扰素（IFN-γ）水平,降低白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结论 热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒感染小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与提高IFN-γ水平,降低IL-6、TNF-α水平有关。     

基于转录组学的化湿败毒方治疗流感病毒性肺炎作用机制

目的 明确化湿败毒方对甲型H1N1流感病毒致小鼠肺炎的治疗作用，基于转录组学探讨其作用机制。方法 采用甲型H1N1流感病毒滴鼻感染建立小鼠流感病毒性肺炎模型，连续给药5 d，考察小鼠一般状况、肺指数、病毒载量、肺组织病理形态、生存时间、生存时间延长率等指标，明确化湿败毒方对流感病毒性肺炎的治疗作用。采用转录组学技术检测模型组与正常组、化湿败毒方组与模型组小鼠肺组织的差异表达基因，筛选化湿败毒方治疗流感病毒性肺炎的潜在核心靶点；采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）验证化湿败毒方对核心靶点基因mRNA表达水平的影响。结果 与正常组比较，模型组小鼠肺指数及肺组织内病毒载量均明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，化湿败毒方高剂量组明显延长甲型流感病毒感染小鼠的生存时间（P<0.05），明显降低小鼠肺指数值（P<0.05），降低肺组织病毒载量，化湿败毒方高、中、低剂量组可明显减轻小鼠肺组织炎症、瘀血、肿胀等病变（P<0.05，P<0.01）。肺组织转录组学分析显示，化湿败毒方干预后核心基因主要富集在核转录因子-κB（NF-κB）信号通路、白细胞介素-17（IL-17）信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用等通路，TNF受体相关因子6（TRAF6）、核转录因子-κB抑制因子α（NFKBIA）、趋化因子配体（CCL）2、CCL7、CXC趋化因子配体2（CXCL2）为combined score值前5的节点基因；Real-time PCR验证显示，化湿败毒方能明显下调NF-κB信号通路关键基因TRAF6、NFKBIA及趋化因子CCL2、CCL7、CXCL2 mRNA表达（P<0.05，P<0.01）。结论 化湿败毒方对流感病毒性肺炎具有治疗作用，可能通过抑制NF-κB信号通路关键节点TRAF6、NFKBIA表达，抑制趋化因子CCL2、CCL7、CXCL2的表达，减少炎症细胞的募集，降低病毒载量，发挥抗流感病毒肺炎作用。     

金柴抗病毒胶囊对甲型流感病毒H1N1肺炎模型小鼠的保护作用与机制研究

目的:观察金柴抗病毒胶囊对H1N1肺炎模型小鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法:选取ICR小鼠50只,体质量(14±1)g,随机分为正常对照组、模型对照组、大、中、小剂量给药组(每组10只)。采用甲型H1N1流感病毒FM1株经滴鼻方式感染正常小鼠建立小鼠肺炎模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠肺组织病毒载量和IFN-γmRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠肺组织中病毒载量显著增高(P0.01);与模型对照组比较,金柴抗病毒胶囊大、中、小剂量组小鼠肺组织病毒载量均显著降低(P0.01)。各组小鼠感染H1N1毒株后,肺组织IFN-γmRNA表达显著升高。与正常对照组比较,模型对照组IFN-γmRNA表达增高明显,具有显著性差异(P0.01)。与模型对照组比较,金柴抗病毒胶囊大、中、小剂量组IFN-γmRNA水平依次明显升高,均具有显著性差异(P0.01)。结论:金柴抗病毒胶囊对H1N1肺炎模型小鼠具有一定的保护作用,其机制可能与其上调IFN-γmRNA相对表达量有关。     

三子养亲汤调控TGF-β1/Smad2/3信号通路抑制哮喘模型小鼠气道上皮间质转化的作用机制研究

目的:探讨三子养亲汤对哮喘模型小鼠气道上皮间质转化(EMT)的影响及其可能的分子机制。方法:将40只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组(每日0.75 mg/kg)和三子养亲汤低、高剂量组(每日5.4、10.8 g/kg),每组8只。除正常组外其余各组小鼠采用鸡卵白蛋白(OVA)腹腔注射及滴鼻激发方式制作哮喘模型,于造模开始后第14天始,各给药组分别灌胃给予相应药物,正常组及模型组灌胃等量无菌水,各组均连续灌胃14 d。末次激发24 h后,每组随机选6只小鼠依次放入全体容积描计箱内,以不同浓度的氯化乙酰甲基胆碱(Mch)雾化1 min后,测定激发5 min内小鼠支气管收缩参数增强呼吸间歇(Penh)。随后各组小鼠予10%水合氯醛腹腔注射麻醉,摘眼球取血,分离血清,-80℃保存备测,取每组6只小鼠血清运用酶联免疫吸附法测定免疫球蛋白E(IgE)水平。处死小鼠,取每组3只小鼠左上肺叶组织,苏木精伊红(HE)染色后观察小鼠肺组织病理。取每组6只小鼠右上肺组织,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测肺组织TGF-β1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)相对表达量及磷酸化细胞信号转导分子2/3(P-Smad2/3)蛋白相对表达量。结果:经Mch激发后,模型组小鼠Penh值明显高于正常组(P<0.01);各给药组Penh值不同程度低于模型组,其中以地塞米松组(Mch各激发剂量)和三子养亲汤高剂量组(Mch=25.000 g/L)降低最为明显(P<0.01)。模型组小鼠血清IgE水平明显高于正常组(P<0.01),三子养亲汤低剂量组、地塞米松组小鼠血清IgE水平明显低于模型组(P<0.05)。与正常组比较,模型组小鼠肺组织炎症水平增加,气道平滑肌增厚,气道上皮细胞排列紊乱伴部分上皮细胞脱落;各给药组小鼠上述病理改变均明显改善,以三子养亲汤高剂量组及地塞米松组改善更为显著。模型组小鼠肺组织N-cadherin、α-SMA蛋白表达水平显著高于正常组(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平显著低于正常组(P<0.01);三子养亲汤高剂量组、地塞米松组小鼠肺组织E-cadherin蛋白相对表达量明显高于模型组(P<0.01),三子养亲汤各剂量组小鼠肺组织N-cadherin蛋白相对表达量明显低于模型组(P<0.01),各给药组小鼠肺组织α-SMA相对表达量均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。模型组小鼠肺组织TGF-β1,P-Smad2/Smad2及P-Smad3/Smad3水平均显著高于正常组(P<0.01,P<0.05);三子养亲汤各剂量组小鼠肺组织上述蛋白相对表达量均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01);三子养亲汤低剂量组TGF-β1水平及三子养亲汤各剂量组P-Smad2/Smad2水平均明显低于地塞米松组(P<0.05,P<0.01)。结论:三子养亲汤可能通过降低TGF-β1表达,抑制Smad2/3信号通路激活,从而减少哮喘气道EMT改变,达到治疗哮喘的目的。     

银翘散对流感病毒FM1感染胸腺缺陷小鼠血清中IFN-γ、IgG含量的影响

目的:观察银翘散(YQS)对流感病毒感染胸腺缺陷小鼠细胞因子的影响。方法:以流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1)感染小鼠为模型,采用银翘散灌胃治疗。用ELISA法分别检测感染后第1、3、5、7天小鼠血清中IFN-γ、IgG的含量。结果:银翘散各给药组IFN-γ的含量明显降低,与病毒感染模型组比较差异有显著性意义(P<0.01),银翘散各治疗组与感染模型组的IgG含量,差异不是十分显著(P>0.05)。结论:银翘散可以降低血清中IFN-γ,说明银翘散可以降低炎性因子的表达,从而减少炎性损伤。IgG含量与感染模型组差异不是十分显著,有可能因为在病毒感染早期,机体只能产生低水平低亲和力的抗体。     

银翘散不同煎煮时间对甲型流感病毒感染小鼠肺组织病毒载量的影响

目的 研究银翘散的抗病毒作用及最佳煎煮时间。方法 72只BALB/c小鼠随机分为银翘散3、6、12分钟组及空白对照组、模型对照组、阳性对照组,每组12只。除空白对照组外,其他各组小鼠以15LD50甲型流感病毒鼠肺适应株FM1滴鼻感染,每只0.05 ml。银翘散3、6、12分钟组在感染当天灌胃给予相应的银翘散煎煮液(分别煎煮3、6、12分钟),每天1次,每次0.5 ml,给药7天;阳性对照组灌胃给予磷酸奥司他韦胶囊27.5 mg/(kg·d);空白对照组、模型对照组小鼠灌胃给予0.2 ml/10 g蒸馏水。比较各组小鼠第3、7天时肺指数、肺指数抑制率及脾指数,并检测小鼠肺组织中相对病毒载量。结果 与空白对照组比较,模型对照组第3天、第7天时肺指数及肺组织病毒载量均明显升高(P0.05);与模型对照组比较,第3天时阳性对照组和银翘散3、6分钟组肺指数均明显降低,第7天时阳性对照组和银翘散各组小鼠肺指数、病毒载量明显降低(P0.05)。各组小鼠第3天和第7天脾指数比较差异均无统计学意义(P0.05)。第3天和第7天,银翘散3分钟组肺指数抑制率、病毒抑制率与阳性对照组最为接近。结论 银翘散对甲型流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠具有较好的抗病毒作用,煎煮时间以3~6分钟效果最佳。     

两种煎法所得麻杏石甘汤煎剂对A型流感病毒感染小鼠的治疗作用

目的: 比较研究麻黄先煎和4味药同煎所得麻杏石甘汤煎剂对A型流感病毒感染小鼠的治疗效果。 方法: 采用鼻腔接种法建立A型流感病毒小鼠肺部感染模型,实验设正常对照组、模型对照组、麻黄先煎组、4味药同煎组、奥司他韦组,经灌胃连续给药7 d。分别于感染后治疗的第4,7天检测小鼠体重,第7天,常规检测肺质量指数;光学显微镜技术观察肺病理变化,透射电子显微镜技术观察肺组织超微结构。 结果: ①体重:感染后治疗4,7 d,与正常对照组比较,模型对照组体重显著下降(P<0.05);治疗7 d,与模型对照组比较,奥司他韦组、麻黄先煎组体重显著增加(P<0.01或P<0.05)。 ②肺指数:与正常对照组比较,模型对照组肺指数显著增加(P<0.01);与模型对照组比较,各治疗组肺指数明显降低(P<0.01或P<0.05),其中麻黄先煎组与模型对照组比较,较显著性差异(P<0.01),高于4味药同煎组与模型对照组比较的差异性(P<0.05)。 ③肺部病理变化:与正常对照组比较,模型对照组肺正常组织结构消失,肺泡内有大量炎症细胞浸润。与模型对照组比较,各治疗组肺组织病理变化得到改善,其中奥司他韦组、麻黄先煎组肺部病变程度较4味药同煎组轻。 ④肺组织超微结构:与正常对照组比较,模型对照组小鼠肺组织超微结构受到破坏,表现为核膜与质膜模糊不清,细胞器减少,线粒体嵴减少或消失,内质网出现空泡样病变,胞浆内有大量病毒颗粒,各治疗组肺组织细胞超微结构得到改善,其中奥司他韦组、麻黄先煎组小鼠肺组织超微结构较4味药同煎组完整。 结论: 麻黄先煎煎剂抗A型流感病毒作用优于4味药同煎煎剂。     

银花平感颗粒体内抗甲型H1N1流感病毒作用

为探讨银花平感颗粒(YHPG)体内抗甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)作用及其对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响,采用滴鼻感染ICR小鼠建立流感病毒肺炎模型,感染后第3天和第7天测定各组动物肺指数并观察肺组织病理变化;采用实时荧光定量RT-PCR和流式细胞技术,观察各组肺组织病毒载量以及外周血T细胞亚群(CD4⁺,CD8⁺,CD4⁺/CD8⁺)的变化。结果表明,YHPG(15,30 g·kg^-1)剂量组在感染后第3天和第7天均能显著降低流感病毒感染小鼠肺指数和肺组织病毒载量,减轻肺组织病理变化,同时还可显著提高外周血CD4⁺ T细胞水平和CD4⁺/CD8⁺比值,降低CD8⁺ T细胞水平。说明YHPG可抑制流感病毒复制、减轻流感病毒感染小鼠肺部损伤以及调节流感病毒小鼠免疫功能下降,对甲型H1N1流感病毒感染小鼠有一定的治疗作用。     

毒热平注射液对流感病毒FMl感染小鼠免疫功能的影响

目的 研究毒热平注射液对流感病毒FM1感染性肺炎小鼠肺指数、白细胞介素4(IL-4),干扰素-γ(IFN-γ)基因转录水平,CD40L蛋白表达水平的影响,探讨其抗病毒的作用机制.方法 以ICR小鼠(SPF级)作为研究对象.实验分为7组:毒热平注射液大、中、小剂量组及双黄连组、利巴韦林组、FM1感染模型组、正常组.流感病毒FM1感染小鼠造模连续7 d后摘取肺组织,计算肺指数,采用RT-PCR法测定肺组织中INF-γ mRNA、IL-4mRNA基因转录水平,采用Western blot法检测肺组织中CD40L蛋白表达水平.结果 FM1感染模型组的肺指数明显高于正常组(P<0.001),利巴韦林组,双黄连组及毒热平注射液大、中,小剂量组与FM1感染模型组比较,肺指数均明显降低(P<0.001或P<0.01),其中以毒热平中剂量组最好.毒热平注射液能降低FM1感染小鼠肺组织中IL-4 mRNA基因转录(P<0.001),且与浓度成反向关系,但毒热平注射液组的IL-4 mRNA基因转录水平明显高于利巴韦林组(P<0.001);毒热平注射液能增强FM1感染小鼠肺组织中IFN-γ mRNA基因转录(P<0.001),且与浓度呈正向相关性,毒热平注射液大、中剂量组与利巴韦林组比较无统计学意义(P>0.05).毒热平注射液能抑制FM1感染小鼠肺组织中CD40L蛋白表达(P<0.001),抑制效果与浓度呈正相关性,但毒热平注射液中、小剂量组CD40L蛋白表达水平显著高于正常组与利巴韦林组(P<0.05).结论 毒热平注射液体内能降低流感病毒FM1感染小鼠的肺指数,增强肺组织IFN-γ mRNA基因转录,抑制IL-4 mRNA基因转录,抑制流感病毒FM1感染小鼠肺组织CD40L蛋白的表达.     

热炎宁合剂在评价人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证中的应用

前期研究中,该实验室根据国家《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》中医临床分型,建立了人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型。该研究采用人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型,评价热炎宁合剂的有效性,为临床应用提供动物实验支持。将小鼠分为正常组,HCoV-229E感染组,寒湿组,寒湿+HCoV-229E感染组,热炎宁大、小剂量组,其中寒湿组、寒湿+HCoV+229E感染组、热炎宁2个剂量组给予寒湿刺激造模7 d,第5天选择HCoV+229E感染组、寒湿+HCoV+229E感染组、热炎宁2个剂量组感染HCoV-229E病毒,感染当天热炎宁给药治疗,给药3 d,第4天取血并解剖取肺组织,计算肺指数和抑制率;流式技术检测外周血液中T和B淋巴细胞百分比;RT-PCR技术检测肺组织核酸病毒载量;ELISA法检测血清中胃动素、胃泌素含量以及肺组织中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-6,IL-10含量。热炎宁合剂能显著降低人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠的肺指数(P<0.01);能显著提升模型小鼠外周血CD8^+ T淋巴细胞和CD4^+ T淋巴细胞百分比(P<0.05,P<0.01);热炎宁小剂量能有效升高总B淋巴细胞百分比(P<0.05),降低模型小鼠肺组织病毒载量(P<0.01),显著降低模型小鼠肺组织中TNF-α,IFN-γ,IL-6,IL-10含量(P<0.01),显著降低模型小鼠血清中胃动素含量(P<0.01)。热炎宁合剂能较好治疗人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证,其在改善肺部病变,增强小鼠胃肠道功能,提高小鼠自身免疫机能,降低体内细胞因子表达方面均具有明显疗效,为临床研究提供实验依据。     

基于蛋白质组学探讨雾化吸入BD-77对呼吸道病毒感染的抑制作用及机制

目的 观察雾化吸入BD-77对多种呼吸道病毒感染动物模型的治疗作用,并利用蛋白质组学手段,探究BD-77广谱抗病毒作用机制。方法 流感病毒H1N1/FM1实验选用ICR小鼠分为正常组、模型组、达菲组、75、37.5 g·L^-1均分别吸入20 min组、25 min组;人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43实验选用BALB/c小鼠正常组、模型组、磷酸氯喹组、BD-77的75、37.5、18.75、9.375 g·L^-1剂量组,每组10只,分别采用流感病毒H1N1/FM1、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染致肺炎模型,检测小鼠肺指数、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织病毒载量、酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肺组织中相关炎性因子,并对OC43感染小鼠肺组织进行蛋白质组学分析。结果 与正常组比较,各感染组小鼠肺指数显著升高（P<0.01）、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43小鼠肺组织内能检测到病毒核酸,且人冠状病毒229E感染小鼠肺组织中白细胞介素-6（IL-6）、IL-10、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量均显著升高（P<0.01）;BD-77能够明显降低流感病毒H1N1/FM1、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染小鼠的肺指数（P<0.05,P<0.01）;显著降低人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染小鼠的肺内病毒载量（P<0.01）;显著降低人冠状病毒229E感染小鼠肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α的含量（P<0.01）。OC43感染小鼠肺组织蛋白质组学显示,BD-77调节了腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路、TNF信号通路、NOD样（NOD-like）信号通路、IL-17信号通路、叉头框蛋白O（FoxO）信号通路和转化生长因子-β（TGF-β）信号通路等。结论 雾化吸入BD-77能够有效治疗流感病毒H1N1/FM1、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染小鼠所致肺炎,并且可能是通过调节细胞代谢平衡、增强宿主免疫功能、减轻炎症反应来发挥抗病毒作用的。     

寿胎丸对小鼠自然流产模型蜕膜组织细胞因子信号转导抑制因子基因表达的影响

目的:探讨寿胎丸对小鼠自然流产模型蜕膜组织细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)中SOCS1mRNA,SOCS3mRNA表达的影响。方法:设立小鼠正常妊娠与反复自然流产模型,并将反复自然流产模型小鼠随机分为4组,分别为模型组、寿胎丸低,中,高剂量组,应用原位杂交法检测孕14d各组蜕膜组织SOCS1mRNA和SOCS3mRNA表达。结果:SOCS1mRNA和SOCS3mRNA在各组均有表达,模型组SOCS1mRNA比正常妊娠组明显升高(P<0.01),而SOCS3mRNA比正常妊娠组明显降低(P<0.01);寿胎丸低,中,高剂量组SOCS1mRNA表达明显低于模型组(P<0.01),而SOCS3mRNA明显高于模型组(P<0.01)。结论:寿胎丸可能通过降低自然流产模型小鼠蜕膜组织SOCS1mRNA表达,而升高SOCS3mRNA表达,从而调控Th向Th2分化,以达到改善妊娠预后的目的。     

姜虎汤对结缔组织病相关间质性肺病模型小鼠免疫炎性损伤的影响

[目的] 探讨姜虎汤对博来霉素（BLM）诱导结缔组织病相关间质性肺病（CTD-ILD）模型小鼠肺间质病变的影响。[方法] 采用SPF级雄性C57/BL6小鼠,经BLM（2 mg/kg）气管内滴注诱导间质性肺病模型,将造模成功的30只小鼠随机分为模型组6只、阳性药组6只、姜虎汤高、中、低剂量组各6只,另选6只未造模小鼠作为正常对照组。正常对照组和模型组予蒸馏水10 mL/（kg·d）,阳性药组予泼尼松7.5 mg/（kg·d）,姜虎汤高、中、低剂量组分别予姜虎汤26.66、13.33、6.67 g/（kg·d）剂量灌胃给药,其中姜虎汤高剂量组每日分2次灌胃给药。干预4周后处死小鼠,采集肺组织标本。以苏木精-伊红染色法（HE）观察肺组织病理改变;蛋白免疫印迹（Western Blot）技术检测肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、转化生长因子β1（TGF-β1）、核因子-κB p65（NF-κB p65）、单磷酸腺苷（AMP）活化蛋白激酶α1（AMPKα1）、磷酸化AMPKα1（pAMPKα1）蛋白表达水平。[结果] 模型组小鼠较正常对照组有明显病理改变（P<0.01）,主要表现在肺组织炎症细胞浸润、间质纤维化;阳性药组肺组织炎症病变较模型组有改善（P<0.05）;姜虎汤中、低组小鼠肺组织炎症细胞浸润较模型组有改善（P<0.05）,姜虎汤高、中、低剂量组小鼠肺组织间质纤维化较模型组有改善（P<0.05）。Western Blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠肺组织中HMGB1、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,TGF-β1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,AMPKα1、pAMPKα1蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,姜虎汤中、低剂量组小鼠肺组织中HMGB1、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,姜虎汤高剂量组小鼠肺组织TGF-β1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,阳性药组小鼠肺组织中AMPKα1蛋白表达水平明显上调（P<0.05）,姜虎汤高剂量组小鼠肺组织中pAMPKα1蛋白表达水平明显上调（P<0.05）;与阳性药组比较,姜虎汤高剂量组小鼠肺组织中TGF-β1 蛋白表达水平明显下调（P<0.05）;姜虎汤各剂量组间比较,姜虎汤高剂量组TGF-β1 蛋白表达水平与姜虎汤中剂量组差异明显（P<0.05）。[结论] 姜虎汤中、低剂量组在改善小鼠肺组织炎症病理损伤,及抑制免疫炎性因子高表达的作用更具优势;姜虎汤高剂量组在改善小鼠肺组织间质纤维化、抑制纤维化生成因子高表达及上调免疫炎性抑制因子的作用更强。其分子机制可能与激活AMPK,从而抑制HMGB1/ NF-κB/TGF-β1免疫炎性信号通路相关。     

清营解表合剂对流感病毒感染小鼠外周血Th1, Th2型细胞因子动态表达的影响

目的: 探讨清营解表合剂对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响。 方法: 以流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(A/PR/8/H1N1)感染小鼠为模型,灌服清营解表合剂16 g·kg^-1(0.8 g·mL^-1,0.4 mL/只),1次/d,连续ig给药12 d,应用流式细胞仪分析药后3,6,9,12 d特异性细胞因子γ-干扰素,肿瘤坏死因子-α,白细胞介素3,4,6,10的动态表达水平及Th1(IFN-γ)/Th2(IL-4)值。 结果: 流感病毒感染小鼠后3 d,细胞因子IFN-γ升高显著(P<0.05),6,9,12 d无显著改变,6,9 d较3 d均降低显著(P<0.05);3,6,9,12 d 细胞因子TNF-α均升高显著(P<0.01,P<0.05);3,6,9,12 d细胞因子IL-3均升高,3,6 d差异显著(P<0.05);3,6,9,12 d细胞因子IL-4,IL-6,IL-10 均显著升高(P<0.01),在早期3 d达到峰值;3,6,9,12 d外周血Th1(IFN-γ)/Th2(IL-4)明显降低(P<0.01,P<0.05),且6 d降到最低点,12 d较6 d升高显著(P<0.05)。经清营解表合剂治疗后,3 d细胞因子IFN-γ水平升高,较模型组无显著差异,6,9,12 d较模型组升高显著(P<0.01,P<0.05);3,6,9,12 d细胞因子 TNF-α水平表达较模型组均明显下降(P<0.01,P<0.05);3,6,9,12 d细胞因子IL-3 较模型组均有所下降,但差异无统计学意义;3,6,9,12 d细胞因子IL-4,IL-6,IL-10 水平较模型组均显著降低;3,6,9,12 d 外周血Th1(IFN-γ)/Th2(IL-4)均升高,差异显著(P<0.01),12 d清营解表组较3 d升高显著(P<0.01)。 结论: 清营解表合剂通过调节流感病毒感染小鼠外周血Th型细胞因子的表达水平,恢复机体的抗感染免疫平衡,提高机体免疫功能,以防治流感病毒感染。     

基于JAK1/STAT1信号通路研究流感“肺脑传变”的分子机制及麻杏石甘汤干预作用

目的 基于Janus酪氨酸蛋白激酶1/信号转导和转录激活因子1（JAK1/STAT1）信号通路研究流感“肺脑传变”的分子机制,并进一步探讨麻杏石甘汤（MXSGT）的干预作用。方法 SPF级BALB/c小鼠100只,随机分为正常组、模型组、奥司他韦组、抗病毒颗粒组和MXSGT组,每组20只。除正常组常规饲养外,其余4组以A型流感病毒（IAV）滴鼻感染构建小鼠IAV肺炎模型,造模24 h后,各药物治疗组分别予以奥司他韦（21.63 mg·kg^-1·d^-1）、抗病毒颗粒（3.9 g·kg^-1·d^-1）、MXSGT（6.05 g·kg^-1·d^-1）灌胃,正常组和模型组以等量生理盐水灌胃,每天1次,连续给药3、7 d。苏木素-伊红（HE）染色观察肺、脑组织病理变化;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺、脑组织中IAV核蛋白（NP）及JAK1、STAT1 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺、脑组织中JAK1、STAT1蛋白表达水平;免疫组化法检测肺、脑组织中磷酸化（p）-STAT1表达水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-10（IL-10）的水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠肺组织及大脑皮质出现明显病理变化;肺部IAV NP mRNA相对表达量显著增加（P<0.01）;肺组织和脑组织中JAK1、STAT1 mRNA和蛋白表达水平明显增加（P<0.05,P<0.01）;肺组织和大脑皮质中p-STAT1表达水平明显增加（P<0.05,P<0.01）;血清中IL-1β表达量明显增加（P<0.05）。与模型组比较,MXSGT组小鼠肺组织及大脑皮质病理损伤减轻;肺组织IAV NP mRNA相对表达量显著降低（P<0.01）;肺组织和脑组织中JAK1、STAT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;血清中IL-10水平显著增加（P<0.01）。结论 JAK1/STAT1信号通路异常活化可能是流感“肺脑传变”的分子机制之一,MXSGT作为有效的抗流感病毒中药复方,可通过调控该通路介导的细胞因子水平的变化缓解IAV肺部感染小鼠的脑组织病理损伤。     

降糖消渴颗粒对糖尿病小鼠肝脏内质网应激及脂质代谢的影响

[目的] 观察降糖消渴颗粒对2型糖尿病小鼠肝脏中内质网应激和脂质代谢相关指标表达的影响,研究其改善糖尿病肝脏脂质代谢紊乱的可能机制。[方法] 雄性8周龄KK-Ay小鼠,高脂饲料喂养,诱导2型糖尿病模型,以空腹血糖≥ 13.9 mmol/L作为成模标准。成模后小鼠随机分为模型组、吡格列酮组、降糖消渴颗粒高、中、低(7,3.5,1.75 g/kg)剂量组,并设正常对照组,C57BL/6J小鼠,普通饲料喂养。治疗10周后,摘取各组小鼠肝脏,剪取肝脏相同部位组织,生理盐水冲洗,10%福尔马林固定液固定待检,余下肝组织液氮保存备用。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小鼠肝脏IRE1α、XBP1、SREBP-1c、SREBP2、Insig-1、FAS的mRNA表达情况;免疫组化法检测小鼠肝脏中p-eIF2α、GRP78的蛋白表达情况。[结果] 模型组小鼠肝脏中SREBP-1c、SREBP2、IRE1α、XBP1的mRNA表达明显上调(P<0.01),Insig-1的mRNA表达明显下调(P<0.01),FAS的mRNA表达也有所增高(P<0.05)。高剂量(7 g/kg)降糖消渴颗粒可显著下调SREBP-1c的mRNA表达量(P<0.01);低、中剂量(1.75,3.5 g/kg)作用比较广泛且突出,均可减少SREBP-1c和SREBP2的mRNA表达(P<0.01)以及FAS的基因表达量(P<0.05)。除此之外,中剂量还具有下调IRE1α的mRNA表达(P<0.05),增加Insig-1的mRNA表达量(P<0.05)的作用。低、中、高剂量降糖消渴颗粒均可显著降低p-eIF2α、GRP78的蛋白表达量(P<0.01)。[结论] 2型糖尿病小鼠肝脏的脂质合成作用与内质网应激反应具有相关性。低、中(1.75,3.5 g/kg)剂量降糖消渴颗粒可在一定程度上下调实验小鼠肝脏中脂质代谢相关因子的表达,以减少肝脏脂质的过度合成,同时减轻肝脏内质网应激反应,共同起到改善糖尿病肝脏脂质代谢紊乱的作用。     

黄皮叶提取物对哮喘大鼠血清及肺组织Th1/Th2平衡的调节作用

目的:探讨黄皮叶提取物对哮喘大鼠炎症反应中Th1/Th2细胞因子平衡的调节作用。方法:将健康雄性SD大鼠48只,随机分为6组,分别为正常组、哮喘模型组、地塞米松组(1.5 mg·kg^-1·d^-1)、黄皮叶提取物低、中、高剂量组(520,1 040,2 080 mg·kg^-1·d^-1)。除正常组外,其余各组分别在第1,7天采用卵清蛋白致敏法ih致敏液,并于第15天开始,各给药组大鼠每天在灌胃给药后1 h进行雾化激发,连续1周;正常组及模型组以生理盐水灌胃代替。分别采用ELISA法测定大鼠血清中一氧化氮(NO),白三烯D₄(LTD₄),白细胞介素-4(IL-4),γ-干扰素(IFN-γ)的含量、硝酸还原法测肺组织NO含量;RT-PCT法测定肺组织中IL-4,IFN-γ mRNA表达及观察肺组织病理学改变。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中NO,IL-4,LTD₄的含量明显升高,IFN-γ的含量降低,肺组织NO含量明显升高,大鼠肺组织中IL-4 mRNA表达明显升高,IFN-γ mRNA表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,黄皮叶提取物低、中、高剂量组均能明显减少血清中NO,IL-4的含量,升高IFN-γ的含量(P<0.05,P<0.01),黄皮叶提取物高、中剂量组能减少哮喘大鼠肺组织中NO的含量,黄皮叶提取物高剂量组能明显减少哮喘大鼠血清中LTD₄的含量(P<0.05,P<0.01),黄皮叶提取物低、中、高剂量组能明显降低哮喘大鼠肺组织中IL-4 mRNA表达,增加IFN-γ mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论:黄皮叶提取物能有效的减少哮喘大鼠的炎症反应,其机制可能是通过调节Th1/Th2细胞因子的平衡,从而减轻炎症细胞浸润有关。     

体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型的效用特点

目的 研究药物—体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证动物模型的药理作用特点。方法 按体质量等级将48只Balb/c小鼠随机分为6组,分别为空白组,人冠状病毒229E感染组,寒湿组,人冠状病毒肺炎疫毒袭肺复合模型组,体外培育牛黄高、低剂量组,每组8只。采用寒湿环境诱导+人冠状病毒229E感染形成复合动物病证结合模型,在感染当天给予体外培育牛黄（0.128,0.064 g?kg^-1）,灌胃给药,连续3 d,观察小鼠一般状态,小鼠肺指数和肺指数抑制率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测小鼠肺组织病毒载量;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测小鼠血清胃动素（MTL）,胃泌素（GAS）含量,以及小鼠肺组织细胞因子白细胞介素（IL）-10,IL-6,肿瘤坏死因子（TNF）-α及γ-干扰素（IFN-γ）含量;采用流式细胞术检测小鼠血中CD4⁺ T淋巴细胞,CD8⁺ T淋巴细胞及B淋巴细胞。结果 体外培育牛黄高、低剂量组可明显改善模型小鼠的一般状态,与空白组比较,模型组小鼠肺指数显著升高（P<0.01）,小鼠肺组织核酸表达显著升高（P<0.01）,小鼠血清中MTL含量显著增高,GAS含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,肺部组织细胞免疫因子TNF-α,IL-10和IL-6均显著增高（P<0.01）,小鼠外周血淋巴细胞CD4⁺ T细胞,CD8⁺ T细胞及B细胞均显著降低（P<0.01）;与模型组比较,体外培育牛黄高、低剂量组小鼠肺指数均显著降低（P<0.01）,小鼠肺组织核酸表达显著降低（P<0.01）,MTL含量显著降低（P<0.01）,小鼠肺组织中IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ含量均显著降低（P<0.01）,体外培育牛黄高剂量组可显著升高CD4⁺ T细胞（P<0.05）,体外培育牛黄可一定程度减轻模型小鼠肺组织炎性渗出,肺间质水肿及瘀血等病理表现。结论 体外培育牛黄对人冠状病毒感染致疫毒袭肺证小鼠复合模型的药理作用有明显的改善效用,可显著改善小鼠行为及排泄物状态、降低模型小鼠肺指数、提高肺指数抑制率、降低小鼠肺组织核酸表达、减轻肺组织病理损伤、调节免疫机能和抑制炎性因子释放等作用环节发挥作用,为临床用药提供依据。     

脑还丹对快速老化小鼠SAMP/8学习记忆能力及海马APP、Pin1、HMGB1mRNA表达的影响

目的: 观察脑还丹对快速老化(SAMP/8)小鼠学习记忆能力及海马β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)、肽基脯氨酰顺反异构酶(Pin1)与高迁移率族蛋白Bl(HMGB1)mRNA表达的影响,探讨脑还丹防治阿尔茨海默病(AD)的作用机制。 方法: 选用6月龄雄性SAMP/8小鼠 共30只,随机分为脑还丹高、低剂量组和模型组,另选用6月龄SAMP/1小鼠10只为正常对照组。高、低剂量组分别给予脑还丹84, 21 g·kg^-1ig;模型组、空白组给予双蒸水10 mL·kg^-1,1次/d,连续8周。用Morris水迷宫方法测试小鼠的定位航行和空间探索能力,测试后每组取8只小鼠断头处死,无菌条件下剥出全脑,小心分离海马组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测海马组织中APP,Pin1,HMGB1 mRNA表达。 结果: 6月龄SAMP/8雄鼠的学习记忆能力明显低于同月龄SAMR/1雄鼠,表现为逃避潜伏期从第2天起显著延长,原平台象限停留时间缩短。脑还丹治疗8周后,SAMP/8小鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05)。SAMR/1小鼠和用药各组小鼠的记忆保持能力比SAMP/8小鼠强,尤其以脑还丹高剂量组更明显(P<0.05)。与正常组比较,模型组APP mRNA相对表达量上调;与模型组比较,脑还丹高、低剂量组APP mRNA表达下调(P<0.05),高剂量组APP mRNA表达明显低于低剂量组(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组Pin1 mRNA表达下调;与模型组比较,脑还丹高、低剂量组Pin1 mRNA表达上调(P<0.05),高剂量组Pin1 mRNA表达显著低于低剂量组(P<0.05);与正常组比较,模型组HMGB1 mRNA表达上调;与模型组比较,脑还丹高、低剂量组HMGB1 mRNA表达下调(P<0.05),高剂量组HMGB1 mRNA表达明显低于低剂量组(P<0.05)。 结论: 脑还丹治疗8周可改善SAMP/8小鼠的学习能力和记忆缺损。脑还丹可能通过下调SAMP/8小鼠APP,HMGB1 mRNA的表达,上调Pinl mRNA表达,从源头上阻断老年斑及神经元纤维缠结的形成,这可能是脑还丹防治AD的主要作用点之一。     

银翘散对流感病毒FM1感染胸腺缺陷小鼠血清中INF-γ、IgG含量的影响

目的:观察银翘散(YQS)对流感病毒感染胸腺缺陷小鼠细胞因子的影响.方法:以流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1)感染小鼠为模型,采用银翘散灌胃治疗.用ELISA法分别检测感染后第1、3、5、7天小鼠血清中IFN-γ、IgG的含量.结果:银翘散各给药组IFN-γ的含量明显降低,与病毒感染模型组比较差异有显著性意义(P<0.01),银翘散各治疗组与感染模型组的IgG含量,差异不是十分显著(P>0.05).结论:银翘散可以降低血清中IFN-γ,说明银翘散可以降低炎性因子的表达,从而减少炎性损伤.IgG含量与感染模型组差异不是十分显著,有可能因为在病毒感染早期,机体只能产生低水平低亲和力的抗体.