兔视网膜脱离后出现神经感觉层细胞凋亡

目的:研究实验性视网膜脱离(retinal detachment,RD)及脱离复位后神经感觉层细胞凋亡情况,探讨RD后视功能损害的机制为临床治疗提供理论基础。方法:健康成年无眼部疾病青紫兰兔40只,采用计算机随机数字表法分为RD后1,3h;1,3,7,14,28d组及正常对照组,共8组,每组5只,选取右眼为致伤眼,视网膜下注射透明质酸钠建立RD模型;分别于建立模型后按时获取兔眼标本,以TUNEL法观察视网膜神经感觉层细胞的凋亡情况。结果:视网膜脱离复位后存在着神经感觉层细胞凋亡现象,正常对照组、14d和28d组几乎不见凋亡细胞,脱离后1,3h;3,7d组在视网膜各细胞层均出现较多的、具有凋亡形态学与生化改变特征的凋亡细胞,其中在3d组视网膜感觉层细胞凋亡细胞数量达到高峰。视网膜神经感觉层凋亡细胞数目在1,3h;3,7d组之间两两比较均有显著性差异(P<0.01);1,3h;3,7d组与正常对照组、1h;1,28d组之间两两比较均有显著性差异(P<0.01);正常对照组、1h;14,28d组之间两两比较无显著性差异。结论:RD复位后,神经感觉层细胞发生凋亡。     

视网膜挫伤后神经感觉层细胞凋亡的实验研究

目的 了解实验性视网膜挫伤后神经感觉层细胞凋亡情况,并进一步探讨凋亡的发生机制,为临床治疗提供理论基础.方法 40只健康成年无眼疾青紫兰兔,随机数字表法分为挫伤后1 h、3 h、1 d、3 d、7 d、14 d、1个月及正常对照组8组,每组5只,选取右眼为致伤眼,以改良Allen重击法制备兔单眼挫伤性视网膜病变模型;分别于挫伤后1 h、3h、1 d、3 d、7 d、14 d、1个月获取兔眼标本,以电镜及TUNEL法观察视网膜神经感觉层细胞的凋亡情况.结果 视网膜挫伤后存在着神经感觉层细胞凋亡现象,正常对照组、14 d和1个月组几乎不见凋亡细胞,挫伤后3 h、1 d、3 d在视网膜各细胞层均出现较多的、具有凋亡形态学与生化改变特征的凋亡细胞,其中在3 d组视网膜感觉层凋亡细胞数量达到高峰.视网膜神经感觉层细胞数目在3 h、1 d、3 d组及7 d组之间两两比较均有显著统计学意义(P＜0.01);3 h、1 d、3 d组及7 d组与正常对照组、1 h、14 d、1个月组之间两两比较均有显著统计学意义(P＜0.01);正常对照组、1 h、14 d、1个月组之间两两比较无显著性意义(P＞0.05).结论 视网膜挫伤后,神经感觉层细胞凋亡的发生是视网膜功能恢复不良的重要原因.     

视网膜挫伤兔模型的病理学观察

目的:建立视网膜挫伤的动物模型,观察视网膜损伤后的形态特点。方法:选取40只健康成年无眼疾青紫蓝兔,随机分为挫伤后1,3h;1,3,7,14,30d及正常对照共8组,每组5只,选取右眼为致伤眼,以改良Allen重击法制备兔单眼挫伤性视网膜病变模型,挫伤后获取兔眼标本,以光镜及电镜观察视网膜神经感觉层的病理变化,目镜测微尺(0.01mm)对视网膜神经纤维层(nerve fiber layer,NFL)厚度、内核层(inner nucler layer,INL)厚度进行测量,并对视网膜神经节细胞(ganglion cell,GC)计数。结果:挫伤后1,3h组和1d组NFL明显增厚(P<0.05),而7d组和14d组NFL明显变薄(P<0.05),3d组和30d组NFL厚度与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05);各挫伤组GC计数明显少于正常对照组(P<0.05)。电镜显示挫伤后3h组;1,3d组视网膜神经感觉层均出现较多的,具有凋亡形态学与生化改变特征的凋亡细胞,其中在3d组视网膜神经感觉层凋亡细胞数量达到高峰,7d组显著下降。结论:视网膜水肿和神经感觉层细胞凋亡是挫伤性视网膜病变的一个重要机制。     

实验性视网膜脱离时外源性bFGF对视网膜细胞凋亡的干预作用

目的 研究实验性视网膜脱离(RD)后家兔视网膜细胞凋亡情况,探讨RD后视功能损伤机制,观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对细胞凋亡的干预作用.方法 从42只青紫兰兔中随机选取40只兔,将每只兔的左、右眼分为实验对照组和治疗组.视网膜下注射玻璃酸钠(爱维)建立RD动物模型后,取右眼在玻璃体腔内注射10IU/20μl bFGF溶液,作为治疗组;左眼注射平衡盐溶液(BSS)20μl作为实验对照组.剩余2只家兔设为正常对照组,不作任何处理,在实验观察结束时取眼球.三组均采用HE染色、原位末端标记法(TUNEL)和透射电子显微镜观察视网膜细胞凋亡情况,并进行细胞计数和统计学检验.结果 RD早期就有细胞凋亡的发生.视网膜各层细胞均可见凋亡细胞,内核层、节细胞层分布最多.凋亡细胞数随脱离时间延长而变化(P<0.01).bFGF组的凋亡细胞数比BSS组少(P<0.01).电镜下可见除正常对照组基本无凋亡细胞外,其余两组均观察到凋亡细胞,.bFGF组中典型凋亡细胞明显少于实验对照组.结论 实验性RD时视网膜组织细胞中存在异常凋亡,可能是RD后视功能损伤机制之一.玻璃体腔内给予bFGF可以抑制视网膜细胞凋亡,为临床治疗视网膜脱离提供参考.     

实验性兔视网膜挫伤后不同时段的视网膜厚度研究

目的探讨实验性兔视网膜挫伤后不同时段视网膜厚度的变化。方法40只健康成年无眼疾青紫兰兔，随机数字表法分为挫伤后1、3h组，1、3、7、14d组，1个月组及正常对照组共8组，每组5只，选取右眼为致伤眼，以改良Allen’s重击法，致伤能量约为2．87J（E=mgh），制备兔眼挫伤性视网膜病变模型，分别于挫伤后1、3h，1、3、7、14d，1个月处死兔子，摘除眼球并取材，通过光镜观察视网膜的情况，目镜测微尺（0．010mm）对视网膜神经纤维层（NFL）厚度、内核层（INL）厚度进行测量，并对视网膜神经节细胞（GC）计数。结果挫伤后1、3h组和1d组NFL明显增厚（P〈0．05），而7d组和14d组NFL明显变薄（P〈0．05），3d组和1月组NFL厚度与正常对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）；挫伤后1、3h组、1d组INL明显增厚（P〈0．05），而7、14d组明显变薄（P〈0．05），3d组和1个月组INL厚度与正常对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）；各挫伤组GC计数明显少于正常对照组（P〈0．05）。结论视网膜厚度的改变是挫伤性视网膜病变的一个重要病理现象。     

实验性视网膜脱离时神经生长因子对视网膜细胞凋亡的干预作用

目的 研究神经生长因子（NGF）在实验性视网膜脱离（RD）时对视网膜细胞凋亡的干预作用。 方法 27只大鼠左、右眼分别被分为实验对照组和NGF组。视网膜下注射透明质酸钠建立RD动模型后，取右眼在玻璃体腔内注射1μg/μl NGF，共5μl，作为NGF组；左眼注射磷酸盐缓冲液（PBS）5μl，作为实验对照组。注射方法为每4天注射1次，直至观察期结束。两组在建立模型后1.5、3、6、12h、1 、2、4、8、16、32d分别取眼球。另设立正常对照组2只大鼠，不作任何处理，在实验观察结束时取眼球。采用原位末端标记法(TUNEL)和透射电子显微镜观察视网膜细胞凋亡情况,并进行细胞计数和统计学检验。 结果 RD早期就有细胞凋亡的发生。视网膜各层细胞均可见凋亡细胞，内、外核层分布最多。凋亡细胞数随脱离时间延长而增加（P<0.01）。NGF组的凋亡细胞数比实验对照组少（P<0.01）。 结论 实验性RD中，玻璃体腔内给予外源性NGF能抑制视网膜细胞凋亡的发生。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 333-335)     

高原环境下兔眼球挫伤后视网膜脑红蛋白的表达调控研究

目的研究高原环境下兔眼球挫伤后视网膜脑红蛋白（NGB）的表达水平调控,探讨高原环境下眼球挫伤的损伤修复机制及救治。方法在高原环境用重击法造成2月龄健康北京青紫蓝兔眼球挫伤,随机分为吸氧组和非吸氧组,吸氧组动物模型在自制氧箱中以35％氧浓度每天持续给氧10h,于伤后12h、1d．3d,7d、14d分别摘取眼球,40g/L多聚甲醛固定．石蜡包埋切片,免疫组化检测NGB,比较吸氧组和非吸氧组NGB表达水平的不同。结果高原环境下兔眼球钝挫伤后吸氧组较非吸氧组NGB表达低,在3d和7d时差异有统计学意义（P〈0．05）。结论高原环境下兔眼球挫伤后通过吸氧可调控视网膜NGB的表达水平,伤后1d内视网膜处于应激期,吸氧等措施可减轻应激损伤,1～14d吸氧可大大促进视网膜损伤修复。     

挫伤性视网膜病变大鼠P53基因表达与光感受器细胞凋亡的关系

目的 观察鼠眼挫伤性视网膜病变后不同时间点视网膜感光细胞的改变及凋亡相关基因p53的表达.方法 自由落体法制作视网膜挫伤模型.49只SD大鼠随机分为正常对照组和视网膜挫伤组,后者又按照挫伤后时间的不同分为1 h、4 h、1 d、3 d、7 d、14 d组,每只大鼠左眼为实验眼,右眼为实验对照眼.行HE染色观察大鼠视网膜组织的病变情况;TUNEL法检测感光细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测视网膜组织中p53的表达.结果 TUNEL染色显示正常对照组及实验对照组大鼠视网膜组织未见凋亡阳性细胞.视网膜挫伤后3 d视网膜内可见较多阳性表达的细胞,分布在外核层.挫伤后1h、4 h、1 d、7 d、14 d,大鼠视网膜组织均未见到凋亡细胞.p53在挫伤后4 h即有表达,分布在外核层,随时间延长表达逐渐增加,至挫伤后3 d达高峰,至挫伤后7 d、14 d未见阳性表达.挫伤后4 h、1 d和3 d,视网膜p53阳性细胞光密度值(OD值)差异比较有显著性意义(P＜0.01).正常对照组及实验对照组大鼠视网膜组织未见p53阳性表达.结论 大量感光细胞的凋亡是挫伤性视网膜病变的重要机制之一,p53基因的表达可能介导了光感受器细胞凋亡的过程.     

中药黄斑颗粒灌胃对大鼠视网膜光损伤细胞凋亡的影响

目的:观察中药复方黄斑颗粒对大鼠视网膜光损伤细胞凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠21只分为给药组、对照组和正常组,光损伤前10d用中药复方黄斑颗粒灌胃,对照组用等体积蒸馏水灌胃,正常对照组正常饲养。光损伤白色荧光灯平均光照强度2800Lux,暗适应24h后,散瞳光照5h后置暗环境饲养,光损伤后继续给药给水,3d后取眼球做石蜡包埋切片,用TUNEL方法进行染色,同时留取眼球进行电镜观察超微形态改变。结果:正常组视网膜结构规整,几乎无TUNEL染色阳性细胞,对照组外核层有大量黄色阳性细胞,结构紊乱,给药组散在少量阳性细胞;电镜下观察可见对照组色素上皮细胞微绒毛消失,光感受器外段排列紊乱,外核层有较多的固缩凋亡细胞核,而给药组则散在少量凋亡细胞。结论:中药黄斑颗粒可能通过对抗细胞凋亡而对大鼠视网膜光损伤起到保护作用。     

N-乙酰半胱胺酸对大鼠挫伤性视网膜病变的保护作用

目的:研究凋亡相关基因Bcl-2/Bax在大鼠挫伤性视网膜病变中的表达,以及N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)对其表达的影响。方法:自由落体法制作视网膜挫伤模型。将SD大鼠随机分为正常组6只、模型组24只及治疗组24只。每组按挫伤后不同时间段分为1,3,7,14d,每个观察时段6只大鼠。HE染色光镜观察视网膜组织学变化,应用SABC免疫组织化学法检测大鼠视网膜挫伤后视网膜组织Bcl-2/Bax蛋白表达的变化。结果:挫伤性视网膜病变的损害主要集中在神经纤维层。挫伤后视网膜组织水肿,细胞紊乱,胞浆空泡样变,视网膜组织变薄,细胞丢失。NAC治疗组视网膜水肿程度有所改善,细胞紊乱,胞浆空泡样变,细胞丢失有所恢复。正常组及NAC治疗组视网膜组织Bax均未见表达,Bcl-2低表达。视网膜挫伤后1d时Bax表达开始增多,3d强阳性表达,7d表达有所减少,14d时表达进一步减少。Bcl-2低表达,未见明显变化。NAC治疗组各观察指标变化趋势基本与视网膜挫伤组相似,但表达明显减弱,两组相比较,于挫伤后1,3d和7d时差异有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2在各时段的表达均较模型组有所增强,两组相比较,于挫伤后1,3d和7d时差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在大鼠挫伤性视网膜病变中,NAC能够改善视网膜组织病理学损害并通过调节Bcl-2/Bax蛋白表达而抑制细胞凋亡,对视网膜挫伤具有保护作用。     

结膜下注射庆大霉素对家兔视网膜的影响

目的:观察结膜下注射庆大霉素对家兔视网膜的影响。方法:选择健康家兔10只,体质量2.0～2.5kg,双眼无病变。分为4组,实验组3组每组3只6眼,对照组1只2眼,对照组每天双眼结膜下注射生理盐水,实验组3组分别每天双眼结膜下注射庆大霉素5000U,10000U和20000U,实验组和对照组每天穿刺抽取房水及玻璃体,用全自动血药浓度监测分析仪测量其浓度;第3d取视网膜制作光镜标本,观察视网膜细胞组织形态改变;使用TUNEL组织凋亡检测试剂盒进行凋亡检测。结果:结膜下注射庆大霉素的3组家兔中,前房及玻璃体内庆大霉素药物浓度随注射天数增加;前房及玻璃体腔内药物浓度与结膜下注射之庆大霉素剂量正相关,玻璃体内药物浓度远低于前房内药物浓度(P<0.05);在光学显微镜下对比对照组,实验组家兔视网膜出现视锥、视杆细胞层变薄,溶解,节细胞层空泡形成甚至溶解,内外颗粒层细胞数变少等现象,且随着给药剂量增加,病理改变越明显;免疫组织化学显示:实验组内颗粒层凋亡细胞计数较对照组明显增加,且给药浓度越高,凋亡细胞计数越多。结论:研究显示,结膜下注射氨基糖甙类抗生素可引起视网膜病理改变及细胞凋亡增加,且其视网膜毒性与给药剂量正相关。     

小鼠实验性视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡

目的 研究小鼠实验性视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡情况。 方法 将成年C57Bl/6J小鼠36只分为2组：实验组小鼠18只左眼视网膜下注射1.4%透明质酸钠造成视网膜脱离，对照组小鼠18只左眼仅作巩膜穿刺。分别于手术后1、3、7和28 d摘除眼球，视网膜切片进行组织化学、免疫荧光染色，共聚焦显微镜检查。抗视锥和抗视杆细胞的抗体分别标记视锥和视杆细胞，dUTP缺口末段标记法(TUNEL)标记凋亡细胞。通过计数存活和凋亡的视锥和视杆细胞来定量光感受器细胞的凋亡和细胞丢失。 结果 凋亡细胞只存在于脱离部分视网膜的外核层，凋亡细胞在视网膜脱离后1 d即可检测得到，3 d时达到高峰，7 d后陡然减少。视网膜脱离后视杆和视锥细胞的死亡呈现同样的时程。 结论 凋亡是视网膜脱离后光感受器细胞死亡的主要病理改变。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 124-127)     

CTGFsiRNA改善STZ诱导糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡

目的:探讨CTGF对糖尿病大鼠视网膜内细胞凋亡的影响。方法:将60大鼠分为对照组,糖尿病4,8,12,16wk组和干预组。糖尿病大鼠应用STZ腹腔注射诱导成模。干预组大鼠于糖尿病成模后16wk玻璃体腔注射CTGFsiRNA来造成CTGF基因的沉默。取各组视网膜组织,应用RT-PCR检测视网膜内的CTGF基因表达,Tunnel法检测视网膜凋亡细胞的情况。结果:糖尿病组视网膜内CTGF表达和凋亡细胞数较正常组明显增加。凋亡发生在建模后4wk,并随着时间的延长而加重,在24wk时,凋亡细胞数为25.8个/mm2。CTGF表达于8wk时出现升高,到16wk时升高更明显。CTGFsiRNA处理后凋亡细胞数明显降低。视网膜内CTGF和细胞凋亡之间具有明显的相关性。结论:CTGF参与了糖尿病视网膜早期病变的细胞凋亡机制,CTGFsiRNA有利于改善糖尿病早期视网膜由于凋亡所致的细胞丢失。     

腺病毒载体介导的色素上皮衍生因子对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察重组腺病毒介导的色素上皮衍生因子(Ad-PEDF)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:选用健康大鼠96只,随机分为正常组、缺血再灌注组、缺血再灌注+Ad-CMV组,缺血再灌注+Ad-PEDF组,以前房加压的方法制备大鼠视网膜缺血再灌注模型,缺血再灌注+Ad-CMV组,缺血再灌注+Ad-PEDF组分别玻璃体腔注射Ad-CMV或Ad-PEDF1μL(滴度3.8×109/PFU),每组按照时间点12,24,72,168h,为4亚组,光学显微镜观察视网膜组织切片情况,并测量视网膜内层厚度及神经节细胞层神经节细胞数量。以TUNEL方法观察大鼠视网膜神经节细胞凋亡情况。结果:Ad-PEDF组视网膜内层厚度均超过缺血组及缺血+Ad-CMV组,Ad-PEDF组神经节细胞数目多于缺血组及Ad-CMV组,Ad-PEDF组视网膜神经节细胞凋亡细胞少于缺血组及Ad-CMV组,凋亡程度减轻,上述差异均具有显著性(P<0.05)。结论:腺病毒介导的色素上皮衍生因子玻璃体腔注射能够恢复大鼠视网膜缺血再灌注损伤所致的视网膜内层厚度降低,神经节细胞密度减少,具有保护作用。     

中药刺蒺藜对兔视网膜神经细胞的作用

目的:观察中药刺蒺藜对高眼压兔视网膜神经节细胞(RGCs)的作用。方法:将16只健康新西兰兔随机分为正常组(A组)、高眼压组(B组)和高眼压治疗组(C组),以20g/L甲基纤维素前房注射建立B,C组兔慢性高眼压模型,C组予以每日静脉注射刺蒺藜针剂5mg/kg,连续用药30d后摘取眼球进行RGCs观察及视网膜神经纤维层(RNFL)厚度测量。结果:造模后各组眼压均有升高,HE染色切片中C组RGCs变性程度及RNFL受损程度明显低于B组(P<0.01)。结论:中药刺蒺藜能在一定程度上保护高眼压状态下的视网膜神经节细胞。     

Effects ofminocycline on expression of bcl-2,bax in early retinal neuropathy of diabetes in rats

·AIM:To study the effect of theminocycline (MNC) on expression of bcl-2,bax in retinal nerve cells of rat with diabetes.·METHODS:Male SD rats were randomly divided into negative control group,model control group and MNC treated group.Diabetes model was established by intraperitoneal injection of 60mg/kg streptozotocin (STZ).The protein expressions of bcl-2 and bax in retina were detected by immunohistochemistry method.·RESULTS:Compared with the negative control group,bax immunoreactive neurons in retina were increased significantly (P<0.01) in model control group.However,bax immun-oreactive neurons in retina in MNC treated group were significantly decreased (P<0.01).Compared with the model control group,bcl-2 immunoreactive neurons in retina were increased significantly(P<0.01) in MNC treated group.·CONCLUSION:MNC can obviously decreased expression of bax and increased expression of bcl-2 in retina with DR.It is one of path of inhibiting impairment on retinal nerve cells with DR.·     

藏红花素对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　观察大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury，RIRI）时藏红花素对视网膜细胞凋亡数目、凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响，探讨缺血再灌注时藏红花素对视网膜的保护作用机制。方法　选取体质量200~250 g的健康雄性SD大鼠24只，随机分为4组:对照组、模型组、藏红花素低剂量组和藏红花素高剂量组，每组6只。藏红花素低剂量组、高剂量组分别于造模前3 d、30 min定时腹腔注射5 g·L^-1藏红花素5 mg·kg^-1、50 mg·kg^-1。造模成功后24 h处死大鼠并摘取眼球。使用电镜观察各组大鼠视网膜细胞结构，TUNEL染色检测视网膜凋亡细胞数量，免疫组织化学染色法观察凋亡相关蛋白Caspase-3在视网膜中的表达。结果　视网膜TUNEL染色发现，对照组视网膜组织中几乎未发现凋亡细胞的阳性表达，模型组视网膜神经节细胞层和内核层中发现大量棕黄色着色的细胞，其凋亡细胞数为（27.40±0.96）个，藏红花素低剂量组可见神经节细胞层、内核层凋亡细胞数较模型组减少，凋亡细胞数为（8.40±0.41）个，与模型组相比差异有统计学意义（P<0.01）；藏红花素高剂量组凋亡细胞数较模型组和低剂量组明显减少，凋亡细胞数为（4.30±0.47）个，和藏红花素低剂量组相比差异有统计学意义（P<0.01）。对照组大鼠视网膜组织Caspase-3染色阴性，模型组视网膜神经节细胞层可见棕黄色颗粒位于细胞浆内，藏红花素低剂量组Caspase-3蛋白表达量与模型组类似，藏红花素高剂量组Caspase-3蛋白表达量与对照组类似。结论　藏红花素能通过降低Caspase-3蛋白含量及凋亡细胞数，从而有效保护视网膜免受RIRI。