血性标本细胞学检验的2种改进方法

临床检验中 ,由于采集标本时技术原因或标本本身所含大量血液成分 ,采用常规离心沉淀法 ,由于内含较多非病理细胞 ,给细胞学检查带来不便 ,甚至造成假阴性。为此 ,笔者研究了以下两种改进方法。 (1)蒸馏水溶血法 :标本离心后 ,倾去上清。加蒸馏水 5ｍｌ,混匀 ,静置 5～ 10ｍｉｎ ,10 0 0ｒ/ｍｉｎ至 15 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 5ｍｉｎ ,取沉淀涂片 ,染色。 (2 )链球菌溶血素“Ｏ”法 :标本离心后 ,倾去上清液。加含有溶血素“Ｏ”5ｍｇ的生理盐水 10ｍｌ,混匀。放置 37℃温箱 5～ 10ｍｉｎ ,以 10 0 0～ 15 0 0ｒ/ｍｉｎ离心 5ｍｉｎ。倾去上清 ,…     

乙型肝炎病毒HBeAg假阳性原因分析

目的:探讨导致HBeAg假阳性的原因.方法:用ELISA法检测42份离心与不离心标本的HBeAg.结果:不离心标本的HBeAg单独阳性率较高,离心标本无此情况.结论:假阳性与标本不离心有关.在做两对半检测时,对于单独HBeAg阳性标本需重新离心后检测,以提高检测结果的准确性.     

重楼皂苷通过p53/SLC7A11信号轴促进三阴性乳腺癌细胞铁死亡的机制研究

目的 探讨重楼皂苷对三阴性乳腺癌细胞铁死亡的影响及其机制。方法 用0、10、20、30、40、50μmol/L重楼皂苷处理三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用CCK-8法检测细胞活性。取对数生长期MDA-MB-231细胞,随机分为对照组、重楼皂苷组(30μmol/L重楼皂苷处理12 h)、抑制剂组(2μmol/L Ferrostatin-1处理12 h)与重楼皂苷+抑制剂组(2μmol/L Ferrostatin-1处理12 h后,30μmol/L重楼皂苷处理12 h),采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR和Western blotting检测二价金属离子转运体1(DMT1)、转铁蛋白受体1(TFR1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、p53、p53/溶质运载蛋白7家族成员11(SLC7A11)的表达情况。结果 CCK-8法检测结果显示,MDA-MB-231细胞存活率随重楼皂苷浓度的升高而降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。与对照组比较,重楼皂苷组细胞存活率以及CPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞凋亡率以及TFR...     

巨噬细胞过氧化物酶体与鼠伤寒沙门菌相互作用的初步分析

目的观察巨噬细胞过氧化物酶体在鼠伤寒沙门菌感染中的作用。方法将感染及未感染鼠伤寒沙门菌的鼠巨噬细胞RAW264.7以氮气压迫法裂解,逐级离心,用制备的TassC多抗磁珠纯化得到粗提液,用Western blot法鉴定TassC多抗磁珠与细胞结合物的性质;用pDs Red2-Perxi质粒转染RAW264.7细胞以标记细胞中的过氧化物酶体,用三维荧光显微镜观察感染细胞中过氧化物酶体(红色)与表达绿色荧光蛋白的鼠伤寒沙门菌突变株的相互作用。结果Western blot分析显示TassC多抗磁珠可以结合细胞内的TassC,并与细胞内的过氧化物酶体结合,也可以与感染细胞中的iNOS结合,而未感染样本中未检测到iNOS。磁珠洗脱物中未检测到溶酶体标志物LAMP1,也未检测到受染菌标志物;免疫荧光显示感染的巨噬细胞中过氧化物酶体聚集在鼠伤寒沙门菌突变株SCV周围,甚至发生重叠,随感染时间延长(1h或24h),过氧化物酶体数量增加(1.2倍或1.3倍),而胞内菌数量下降。结论TassC可能定位于过氧化物酶体而不是溶酶体;感染鼠伤寒沙门菌的巨噬细胞中iNOS可能与过氧化物酶体结合而参与杀灭微生物的作用。     

纳洛酮对缺氧心室肌细胞早期凋亡的影响

心肌缺血 再灌注与心肌细胞调亡关系密切 ,且细胞调亡是缺血 再灌注损伤的病理特征之一。临床和实验表明 ,纳洛酮在心肌缺血 再灌注损伤中对心肌有保护作用。本研究应用纳洛酮干预体外培养家兔心肌细胞缺氧 复氧过程 ,观察其对心肌细胞早期调亡的影响。作者取重量在 3 5 g～ 5 0g当天生乳兔 1 5只 ,取乳兔心尖心肌 ,培养传一代后分成 2组 :正常组、单纯缺氧 复氧组 (缺氧组 )、缺氧 复氧加纳洛酮干预组 (用药组 )。AnnexinV联合PI法 :复氧 4h完毕 ,以 0 .2 5 %胰蛋白酶消化悬浮细胞 ,收集至少 1 0 6个组胞 ,3 0 0 0r min离心 5min弃上…     

用ELISA评价胶体金测试卡检测乙型肝炎病毒血清标志物两对半的性能

目的用酶联免疫吸附法（ELISA）评价胶体金测试卡检测乙肝两对半的性能。方法选用ELISA检测乙肝表面抗原（HbsAg）阴性100例,阳性者200例,用胶体金测试卡和ELISA分别检测乙肝两对半对比结果和检测用时。结果胶体金测试卡单个标本的检测时间为25min,而ELISA的为1h。100例HbsAg阴性标本除2例HbcAbELISA检测阳性而胶体金测试卡检测阴性外,其他结果均相同。200例HbsAg阳性标本中,胶体金测试卡法检测6例HbsAg阴性,符合率97．0％;9例HBeAb检测阴性,符合率92．9％;7例HbcAb检测阴性,符合率96．5％。结论胶体金测试卡与ELISA相比。不需要特殊设备,易于观察结果,快速检测单个标本,操作简便,特异性较高,能满足急诊的需要。     

镜检在尿液检查中的重要性

目前 ,许多医院使用尿 10项分析仪 ,但是自动分析不能完全取代涂片镜检 ,尤其是管型、红细胞、脓细胞、结晶等可能漏检。现将我们的实验结果报告如下。1　方法吸取混匀尿液约 10ｍｌ在日本产ＭＡ 4 2 6 0型分析仪上作尿化学 10项测定。测试完毕后 ,标本再以 2 0 0 0ｒ ｍｉｎ离心 5ｍｉｎ ,弃去上清液 ,取沉渣约 0 2ｍｌ涂片镜检。2　结果用尿 10项分析仪和显微镜检查进行对比分析尿样 2 0 0份。分析仪白细胞阳性为 88份 ,镜检白细胞阳性 (>3个 ＨＰ) 116份。分析仪隐血阴性者 6 9份 ,镜检红细胞阳性 (>3个 ＨＰ) 4份。分析仪蛋白阴性者 8…     

一步法ELISA检测HBsAg的假阴性浅析

1997年1月～6月,用ELISA一步法试剂作乙肝五项标志物检测,HBsAg阴性209例中,HBeAg阳往11例,将此11例标本用生理盐水1：5和1：10稀释后再测HBsAg,结果有10例HBsAg阳性,1例HBsAg仍然阴性.     

比较恶性与非恶性乳腺细胞系对99Tcm-MIBI和99Tcm-tetrofosmin的吸收

目的 :对人恶性和非恶性乳腺细胞系中 99Tcm -甲氧基异丁基异腈 (99Tcm - MIBI)和 99Tcm - tetrofosmin的动力学及细胞吸收进行研究和比较。方法 :将人乳腺癌细胞 MCF- 7和 SK- BR- 3、非肿瘤细胞HBL- 10 0于 37℃时移入盛有培养基 (1× 10 6 cells/ m L)的聚苯乙烯圆底管中平衡 1h以上。每管加入放射性示踪剂 (0 .74MBq)后 ,分别在 37℃或 2 2℃孵育 10、2 0、 30、 40、6 0、80、10和 12 0 min,离心 (12 0 0 r/ m in,2 1℃ ,10 m in) ,分离出细胞 ,用培养基快速淋洗后 ,弃去表面悬浮物。细胞管和培养基管分别用 γ井型计数器计数 …     

全自动微粒子酶免检测法与微粒子化学发光法的比较研究

 目的 比较雅培公司的AxSYM全自动微粒子酶免分析仪与i2000微粒子化学发光分析仪在检测患者标本HBc-Ab浓度中的应用.方法 同时用两种仪器检测154例患者标本中的HBc-Ab浓度.结果 154例标本中有86例用两种仪器检测均为阴性,66例均为阳性.有2例标本AxSyM 仪器测定为阳性,i2000微粒子化学发光分析仪测定为阴性.两种仪器测定结果 阳性符合率为100%,阴性符合率为95 % .结论 全自动微粒子酶免检测法与微粒子化学发光法在检测HBc-Ab浓度方面一致性较好.     

乙型肝炎病毒血清标志物与PreS1抗原的关系

目的：了解PreS1与HBVM和HBV DNA的关系及其临床应用价值。方法：对306例临床血清采用ELISA方法检测HBVM和PreS1,荧光定量PCR法检测HBV DNA。结果：中HBeAg阳性146例,其中前S1阳性127例阳性率88.1%,HBeAg阴性共160例,其中前s72例阳性率45%,HBeAg阴性血清160例前s多数存在于抗HBe阳性血清中,阳性率40.6%。结论：PreS1比HBeAg更能较好反映病毒存在和复制状态.HBVM、PreS1和HBV DNA联合检测,更有利于乙肝病情监测和疗效评估。     

乙型肝炎e抗原、前S1抗原、前S2抗原与乙型肝炎病毒DNA关系探讨

目的 探讨乙型肝炎e抗原(HBeAg)、前S1抗原(Pre-S1)、前S2抗原(Pre-S2)与其病毒DNA(HBVDNA)的关系。方法 收集268例乙型肝炎患者血标本,以荧光定量PCR法检测HBVDNA,时间分辨荧光免疫分析法检测HBeAg,酶联免疫吸附法检测Pre-S1、Pre-S2。结果 HBVDNA阳性组HBeAg、Pre-S1、Pre-S2阳性率分别为48.2%、76.4%、100%,HBVDNA阴性组分别为1.6%、36.3%、32.3%,两组间每指标阳性率比较,差异均有显著性(均P<0.01)。结论 HBeAg、Pre-S1、Pre-S2与HBVDNA关系密切,以HBVDNA阳性为参照标准,反映病毒复制的敏感性Pre-S2最高,其次为Pre-S1,HBeAg较低;Pre-S1、Pre-S2可作为HBVDNA的补充指标。     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测结果分析

目的探讨乙型肝炎病毒前S1抗原与乙肝5项的关系及其临床意义。方法用ELISA方法对12 050份人血清进行乙肝病毒前S1抗原和乙肝5项（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）检测。结果 HBsAg阳性（＋）血清1073份,前S1抗原阳性565例,占52.7%,在HBsAg阴性血清中未检出前S1抗原;大三阳模式HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）;模式HBsAg（＋）、HBeAg（＋）;小三阳模式HBsAg（＋）、HBeAb（＋）、HBcAb（＋）;模式HBsAg（＋）、HBeAb（＋）;模式HBsAg（＋）、HBcAb（＋）,前S1的阳性率分别为80.6%（141/175）、83.3%（10/12）、45.7%（312/682）、36.3%（4/11）、50.8%（98/193）。HBeAg阳性模式各组的前S1抗原阳性率与HBeAg阴性各组比较,均有明显升高（P〈0.01）。结论乙肝病毒前S1抗原可补充乙肝5项检测的不足,它能很好地反映HBeAg阴性患者的病毒复制情况,应当引起临床医师的重视。     

6-姜烯酚对HPV阳性及阴性宫颈癌细胞侵袭及迁移的作用及其机制

目的观察6-姜烯酚对人乳头瘤病毒(HPV)阳性及阴性人宫颈癌细胞侵袭及迁移的抑制作用,并探讨其作用机制。方法培养HPV阳性人宫颈癌细胞(HeLa)及HPV阴性人宫颈癌细胞(C33A),分别加入0、5、10、20、50 μmol/L的6-姜烯酚,并以未处理组作为对照,继续培养24 h。确定6-姜烯酚的最佳浓度为10 μmol/L。后续实验以10 μmol/L的6-姜烯酚分别处理24、48及72 h,采用MTS法检测细胞增殖情况,以10 μmol/L 6-姜烯酚用于细胞划痕实验检测6-姜烯酚对细胞迁移能力的影响,采用Transwell小室法检测6-姜烯酚对细胞侵袭能力的影响,Western blotting检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平。结果 MTS检测结果表明,HeLa及C33A细胞的活力均随6-姜烯酚浓度及作用时间的增加而逐渐降低,在各浓度及作用时间点,HeLa细胞的活力降低较C33A细胞更明显;Transwell侵袭实验结果显示,6-姜烯酚对HeLa细胞作用24 h及48 h,对...     

STI571体外对急性非淋巴细胞白血病细胞分化及c-kit表达的影响

目的 :探讨STI5 71对ANLL白血病细胞c-kitmRNA表达及细胞分化的影响。方法 :不同浓度STI5 71培养前后逆转录 -聚合酶链反应方法测定c -kitmRNA的表达 ,涂片吉姆萨染色及过氧化物酶染色观察细胞的分化情况。结果 :①培养后不同药物浓度组的粒细胞及单核细胞均有不同程度的分化 ,随着药物浓度的增加 ,原早幼粒细胞逐渐减少 ,中晚幼粒和成熟单核细胞数增加 ,有诱导向同系成熟分化作用 ,并且过氧化物酶染色阳性程度增加 ;②c -kit受体mRNA的表达培养前 2 .2± 0 .4 9,培养后 (对照、0 .1、1、10 μmol·L-1)浓度组c-kitmRNA表达的平均值分别为 2 .1± 0 .6、1.2± 0 .4、0 .8± 0 .4、0 .5± 0 .2 ,培养前与培养后各药物浓度组有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,各浓度组与对照组之间差异显著 (P <0 .0 5 ) ,且 0 .1μmol·L-1与 10 μmol·L-1两个浓度组之间差异显著 (P <0 .0 5 )。结论 :STI5 71对急性非淋巴细胞白血病原代细胞有诱导向同系成熟分化作用 ,对c -kit酪氨酸激酶有明显的抑制作用 ,且与药物浓度相关。     

表皮干细胞体外分离与培养

探索和建立表皮干细胞体外分离与培养的技术方法。通过酶消化法获得幼鼠表皮 ,并制成单表皮细胞悬液 ,以表皮干细胞培养基 ,即无钙EMEM培养基 (添加 9%FBS ,0 0 5mmol/LCaCl2 ,4ng/mlEGF ,0 5ng/ml硫酸庆大霉素及 5 0 %成纤维细胞条件培养基 )置细胞培养箱内培养。成纤维细胞条件培养基为无钙EMEM培养基(添加 9%FBS、0 0 5mmol/LCaCl2 、0 5 μg/ml硫酸庆大霉素 )培养幼鼠皮肤块 4 8h后所得培养液。将 1×10 6/ml上述培养的角质形成细胞经TGG细胞消化液 37℃下振荡消化后 ,接种至鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶内 ,37℃下静置 10～ 15min,留用快速贴壁细胞继续培养 ,所得细胞分别以能否呈克隆状生长和透射电镜观察其超微结构及β1整合素、K19免疫细胞化学染色进行鉴定。结果显示 ,鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞经继续培养 ,可见细胞呈克隆状生长。电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征 ,β1整合素、K19免疫细胞化学染色阳性。研究表明 ,表皮干细胞可在体外分离与培养 ,本实验方法为较好方法之一。     

体外诱导人脐带华通胶间充质干细胞向内皮细胞分化过程中APJ表达变化

目的研究人脐带华通胶间充质干细胞（human umbilical cord Wharton′s Jelly mesenchymal stem cells,HUW MSCs）体外诱导向内皮细胞分化过程中表面APJ受体表达的变化,探讨APJ是否可作为鉴定内皮细胞的早期细胞表面标志物。方法剖宫产取脐带后分别用酶消化和组织贴壁法培养获得脐带华通胶间充质干细胞,用酶消化法获得人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）。取2×107第2代HUW MSCs用单克隆APJ APC荧光抗体标志后行流式分选,测定HUW MSCs实验前细胞表面表达APJ的水平。实验分3组：诱导组MSCs用含血管内皮细胞生长因子5 μg/L、碱性成纤维细胞生长因子10 μg/L、表皮生长因子10 μg/L和10%胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）M199培养基培养;共同培养组MSCs先与HUVECs在Transwell 6孔培养板中,用含10%FBS的M199培养5~7 d后转入25 cm2培养瓶中继续培养,培养液为含10%FBS的M199和培养1 d内皮细胞的M199（2∶1）混合培养基;单纯培养组细胞培养基为含10% FBS的M199。培养周期为14 d。分别于第7、10、14天流式检测各组细胞APJ表达水平,同时检测内皮细胞表面APJ水平作为阳性对照。另外于第7、14天检测3个实验组、内皮细胞组、HUW MSCs组内皮细胞早期标志物CD309表达变化情况,比较各实验组之间APJ与CD309变化趋势。结果HUW MSCs流式分选出5×103APJ+ HUW MSCs,表面表达APJ基本呈阴性。诱导组、共同培养组和单纯培养组细胞形态均较HUW MSCs有显著改变,诱导组呈圆形、线性、网状,共同培养、单纯培养组细胞呈卵圆形、长梭形。另外,诱导组生长最快,增殖能力最强;单纯培养组次之;共同培养组细胞生长缓慢,增殖能力最弱。第7、10、14天,3组细胞CD309表达分别为诱导组18%、26%和88%,共培养组05%、25%和47%,单纯培养组03%、21%和27%。第7、10、14天各组APJ阳性表达率分别为诱导组05% 、09%和52%,共培养组04%、08%和30%,单纯培养组02%、06%和21%。结论HUW MSCs表面APJ表达基本呈阴性,HUW MSCs向内皮细胞诱导分化过程中APJ表达逐渐上调,与内皮细胞早期标志物CD309变化趋势基本一致,可作为早期内皮细胞鉴定的标志物。     

标本放置和离心时间对PT、APTT检测结果的影响

目的观察血凝标本的放置时间和离心时间对凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)测定结果的影响。方法对手术前送检(即采即送)合格的标本50份立即测定PT、APTT和在室温下放置2、4、8 h测定PT、APTT;抽取门诊健康体检者血液标本50份,用3 000 r/min的速度离心5、10、15 min后测定PT、APTT。结果 PT、APTT在4 h内测定的结果与即刻比较,差异均无统计学意义(P>0.05),在8 h测定与即刻比较,差异有统计学意义(P<0.05);3 000 r/min的速度离心5、10 min测得结果与离心20 min比较,差异有统计学意义(P<0.05),离心15 min时测得结果与离心20 min比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论检测PT、APTT时应掌握好标本离体后放置的时间以及标本的离心速度和时限。     

应用荧光定量聚合酶链反应检测血清、肝组织中HBV-DNA含量观察HGV感染对慢性乙型肝炎HBV复制的影响

目的　探讨庚型肝炎病毒 (HGV)感染对慢性乙型肝炎 (CH B)患者乙型肝炎病毒 (HBV)复制的影响。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、过氧化物酶与抗过氧化物酶复合物 (PAP)法免疫组织化学、荧光定量PCR(FQ PCR)技术对 5 6例CH B患者血清HGV RNA、肝组织HGV Ag、血清及肝组织中HBV DNA含量分别进行了检测 ,并将血清HGV RNA与肝组织HGV Ag的表达、HGV RNA ,HGV Ag阳性与阴性患者HBV DNA含量进行了对比研究。 结果　血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性分别为 8例 (1 4 3 % )、1 0例 (1 7 9% )。血清HGV RNA阳性与肝组织HGV Ag表达显著相关 (P <0 .0 1 ) ,但部分肝组织HGV Ag阴性患者亦有血清HGV RNA表达。血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性与阴性患者血清及肝组织中HBV DNA含量均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　HGV感染对CH B患者HBV复制无影响。肝脏是HGV的复制场所 ,但可能亦有肝外组织器官中复制。HGV至多具有微弱的致病性 ,但仍然需要进一步研究。     

乙型肝炎复制指标的相关性分析及其临床应用价值研究

 目的探讨HBeAg、HBcAg、Pres1Ag、HBcAb和HBV DNA的关系及其临床应用评价.方法Pres1Ag和HBV M检测采用酶免法,HBV DNA采用荧光探针技术定量PCR法,HBcAg采用固相放射免疫法.结果5项复制指标分别在HBV M不同模式组检出率不等同;HBcAb(+)组的HBV DNA和HBcAg阳性率显著高于HBcAb(-)的HBV M模式组(P<0.01);若以HBV DNA检测阳性为HBV复制金标准,HBcAg检测符合率(83.2%)显著高于其他指标(P<0.01),而HBcAb检测特异性和HBeAg检测灵敏度过低.结论(1)HBcAg与HBV DNA相关性最好.(2)5项指标评价HBV复制的临床意义为:HBV DNA>HBcAg>Pres1Ag>HBeAg>HBcAb.(3)HBcAb仅仅可作为HBV复制的初筛指标.