E2F对细胞周期的影响

细胞增殖是一种有序的、高度调节的过程，包括细胞外生长信号、细胞大小和DNA完整性。体细胞周期可以分为分裂间期和有丝分裂期：分裂间期(包括G1、G2和S阶段)，细胞生长并合成DNA；有丝分裂期，一个单细胞分裂成两个子细胞。在适当的外界刺激下，G0期(静止期)的细胞进入到G1早期，然而在没有外界生长刺激时，G1早期的细胞又可以     

不同浓度Nocodazole对Hela细胞G2／M期同步化的调节作用

目的观察不同浓度有丝分裂阻滞剂Nocodazole对Hela细胞株G2／M期同步化的调节作用及其对纺锤体结构的影响。方法分别以3．0、1．0、0．3umoL／LNocodazole处理Hela细胞（Nocodazole3．0、1．0、0．3umoL／L处理组）18h。于Noeodazole撤除后0（处理18h）、3、6、9h时间点收集细胞,流式细胞仪检测G2／M期细胞百分比;间接免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器纺锤体α-微管蛋白（α—tubulin）排列。以不添加Nocodazole处理的Hela细胞作为对照组。结果Nocodazole处理18h,Nocodazole3．0、1．0、0．3umol／L处理组Hela细胞G2／M期细胞百分比分别为55．95％、51．09％和47．81％,均显著高于对照组的9．54％（P〈0．05）。在Nocodazole撤除后3、6、9h时间点,Nocodazole3．0umol/L和1．0umol／L处理组G2／M期细胞百分比无明显变化;而Nocodazole0．3umol／L处理组G2／M期细胞百分比下降明显（30.43％、12．91％、10．23％）,撤除后6h时间点的G2／M期细胞百分比与对照组比较差异已无统计学意义（P〉0．05）。α—tubulin荧光染色激光共聚焦显微镜观察显示,Noeodazole撤除后Nocodazole0．3umol/L处理组G2／M期细胞微管迅速再聚合形成两极纺锤体且纺锤丝结构清晰。结论Nocodazole对Hela细胞G2／M期同步化具有调节作用;药物撤离后,0．3umol／LNocodazole处理组细胞周期恢复迅速且对纺锤体结构影响最小。     

昆明山海棠碱对Jurkat淋巴瘤细胞株的细胞周期和凋亡时相的影响

目的 探讨昆明山海棠(THH)碱对Jurkat T淋巴瘤细胞的细胞毒性、细胞周期和凋亡时相特异性的影响，以了解THH碱诱导细胞凋亡的机制。方法 台盼蓝染色法检测细胞生长和细胞活力；DNA染色法、TUNEL标记结合流式细胞术检测细胞周期和凋亡时相特异性。结果 THH碱能有效抑制Jurkat细胞增殖、细胞活力下降，细胞在增殖周期中被阻滞于G1期。THH碱首先能诱导S、C2／M期细胞凋亡，同时能诱导G1期细胞凋亡。结论 提示THH碱能抑制Jurkat细胞的DNA合成，抑制细胞增增殖，并可显著诱导各期相细胞发生凋亡。     

奥曲肽对食管癌细胞株Eca9706增殖的影响

目的 研究奥曲肽对食管癌细胞株Eca9706增殖的影响。方法 将不同浓度的奥曲肽加入食管癌细胞．用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应。^3H-胸腺嘧啶核苷(^3H-TdR)掺入实验测定对DNA合成的影响,显微镜下观察细胞形态变化，流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果 奥曲肽对Eca9706细胞的生长及DNA合成均有抑制作用。显微镜下可见明显的细胞病变，细胞变圆、变小、脱落，FCM显示奥曲肽作用后，G0／G1期细胞增多，S期、G2／M期细胞减少。结论 奥曲肽能明显抑制食管癌细胞株Eca9706的DNA合成，并能形成G0／G1期阻滞，使细胞存活率下降，表明奥曲肽显著抑制Eca9706的增殖。     

不同浓度Nocodazole对Hela细胞G2/M期同步化的调节作用

目的 观察不同浓度有丝分裂阻滞剂Nocodazole对Hela细胞株G2/M期同步化的调节作用及其对纺锤体结构的影响.方法 分别以3.0、1.0、0.3μmol/L Nocodazole处理Hela细胞(Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组)18 h.于Nocodazole撤除后0(处理18 h)、3、6、9 h时间点收集细胞,流式细胞仪检测G2/M期细胞百分比;间接免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器纺锤体α-微管蛋白(α-tubulin)排列.以不添加Nocodazole处理的Hela细胞作为对照组.结果 Nocodazole处理18 h.Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组Hela细胞G2/M期细胞百分比分别为55.95%、51.09%和47.8l%,均显著高于对照组的9.54%(P<0.05).在Nocodazole撤除后3、6、9 h时问点,Nocodazole 3.0μmol/L和1.0μmol/L处理组G2/M期细胞百.分比无明显变化;而Nocodazole 0.3 μmol/L处理组G2/M期细胞百分比下降明显(30.43%、12.91%、10.23%),撤除后6 h时间点的G2/M期细胞百分比与对照组比较差异已无统计学意义(P>0.05).α-tubulin荧光染色激光共聚焦显微镜观察显示,Nocodazole撤除后Nocodazole 0.3μmol/L处理组G2/M期细胞微管迅速再聚合形成两极纺锤体且纺锤丝结构清晰.结论 Nocodazole对Hela细胞G2/M期同步化具有调节作用;药物撤离后,0.3 μmol/L Nocodazole处理组细胞周期恢复迅速且对纺锤体结构影响最小.     

多药耐药基因MDR1表达与肝癌细胞周期的关系

目的探讨多药耐药基因MDR1表迭与耐药肝癌细胞株SMMC7721细胞周期的关系。方法血清饥饿法,药物双阻断法和分裂中期阻断摇落法同步化细胞;RT—PCR检测MDR1mRNA的表达。结果3种细胞同步化方法可分别得到高度同步化的G0／G1期．S期,G2／M期细胞IMDR1在SMMC7721细胞S期有表达,而在G0／G1和G2／M期无表达。结论S期MDR1基因的表达可能在肿瘤多药耐药出现的早期发挥了重要作用。     

Mdm-2、p16在大肠癌中的研究进展

近年来,对肿瘤与细胞周期深入研究,越来越清晰地认识到肿瘤是一类细胞周期疾病和细胞周期调控机制在肿瘤的侵袭、转移的过程中起着重要作用。细胞周期中最主要的调控点在G1～S转折和G2～M转折的DNA损伤关卡：①G1～S期关卡监控DNA是否损伤;②G2～M处的关卡监控DNA是否损伤及DNA是否正确、完全的复制,其分别控制DNA复制和细胞的有丝分裂。     

细胞周期蛋白D与疾病

细胞周期是普遍存在于高等生物中的一种细胞周期性自我复制和分裂的有序过程，它可以定义为连续的分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。细胞周期的运行十分有序，沿着G1期→S期→G2期→M期的顺序进行，这种严格的顺序运转与相关调控基因在时间和空间上的有序表达是分不开的。     

S期激酶相关蛋白2与胃癌关系的研究

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率一直居恶性肿瘤的第一位。细胞周期失控与肿瘤发生密切相关。细胞周期的调控是个复杂的过程,主要有两个调控点。一个是G1/S转折点,控制细胞进入S期(G1期检测点);另一个处于G2/M转折点,控制细胞进入M期(G2期检测点)。细胞周期是在细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CKI)共同调节下进行的。泛素蛋白酶体(SCF)途径具有降解细胞周期调控因子作用,而S期激酶相关蛋白2(Skp2)是泛素连接酶复合物的底物识别序列,对细胞周期关卡起调控作用。近几年…     

PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因对人宫颈癌细胞周期的影响

目的 探讨PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因对人宫颈癌细胞周期的影响，为进一步研究E1A基因对宫颈癌放、化疗增敏提供实验依据。方法取对数生长的人宫颈癌细胞(Hela)、对照空载体细胞(Hela-vect)、转染E1A基因的人宫颈癌细胞(Hela-E1A)，使用流式细胞仪(Coulter-proftlo Ⅱ型)测定DNA含量，计算机分析细胞周期。结果Hela-E1A组与Hela及Hela-vect组比较，S期细胞比例明显下降，G2/M期细胞比例明显增多，G1期无明显变化。结论PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因能改变人宫颈癌细胞周期的分布，使该细胞周期出现S期抑制和G2/M期阻滞，为进一步研究E1A基因对宫颈癌放、化疗增敏提供了实验依据。     

低氧对体外培养的肺血管周细胞免疫表型的影响

用细胞培养、免疫细胞化学染色、图像分析及流式细胞术观察低氧和猪肺动脉缺氧内皮细胞条件培养液(HECCM)对体外培养的新生大鼠肺血管周细胞 (PC)α- SM- actin、 CD34 、 S- 10 0和 PCNA的表达及细胞周期的影响。结果发现 ,低氧和 HECCM可促进 PC表达α- SM- actin和 PCNA,而抑制 CD34 和 S- 10 0的合成 ,促进 PC由静止期 (G0 /G1 期 )进入 DNA合成期 (S期 )及有丝分裂期 (G2 M期 )。提示 ,低氧不仅能促进 PC增殖 ,而且还可促进其向平滑肌样细胞转化。故 PC是慢性低氧性肺动脉高压时无肌型细动脉肌化的重要细胞来源。     

磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚基N末端24个氨基酸对肝癌细胞增殖的抑制

目的 观察磷脂酰肌醇-3-激酶(P13K)的调节亚单位--p55PIKN端24个氨基酸抑制肝癌细胞增殖的作用.方法 以含有p55PIK-N端24个氨基酸(N24)的腺病毒载体Ad-N24一GFP及对照病毒Ad-GFP,感染肝癌HepG2细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU掺人的方法检测其对细胞DNA合成的影响,Western blot分析细胞内高表达N24多肽后相关蛋白的表达水平.结果 N24能有效阻滞HepG2细胞周期进程于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少,Ad-N24-GFP组各期细胞分布为:G0/G1期(56.3±3.0)%,S期(30.1±2.9)%,G2/M期(13.6±4.1)%.而对照组腺病毒各期细胞分布为:G0/G1期(40.6±2.1)%,S期(42.7±3.3)%,G2/M期(16.7±2.8)%;BrdU阳性细胞比例显示:Ad-N24一GFP组R2为(31.8±5.2)%,Ad-GFP组R2为(48.5±3.7)%,提示N24能有效抑制HepG2细胞的DNA合成;Western blot检测显示高表达N24对细胞内的AKT磷酸化水平没有显著影响.结论 在HepG2细胞中过表达N24能有效阻滞肝癌细胞周期进程,抑制细胞DNA合成.p55PIK为肿瘤的基因治疗提供了一个新的分子靶点.     

过量胸苷对细胞周期素表达的影响

目的 :探讨过量胸苷干扰细胞周期素细胞周期时相表达的特点 ,为进一步研究细胞周期转化以及细胞周期素与DNA合成的关系奠定基础 .方法 :应用二次过量胸苷阻断法进行新生猪肾小管上皮细胞体外同步化培养 ,采用流式细胞术进行鉴定 ;然后分别进行G1/S,S及G2 期细胞CyclinA ,B ,D1mAb免疫细胞化学染色并进行图像分析 .结果 :二次过量胸苷阻断法可获取G1/S界面细胞为 (99 5± 0 8) % ,S期细胞为(90 5± 0 7) % ,G2 期细胞为 (93 5± 2 2 ) % ,G2 /G1=2 2 0 .G1/S ,S,G2 细胞CyclinA表达特点为G2 期大于G1/S和S期 (目标灰度值 :13 6 3± 2 7,14 5 0± 1 4 ,14 7 5± 1 8,P <0 0 1) ,CyclinB表达特点为G1/S期小于S和G2 期 (目标灰度值 :15 5 6± 1 6,14 8 8± 2 2 ,13 6 6± 2 6,P <0 0 1) ,CyclinD1的表达特点为G2期大于G1/S期 (目标灰度值 :13 2 .6± 1.9,14 6.7± 1.3 ,P <0 .0 1) ,S期小于G1/S期 (目标灰度值 :15 8 8± 1 1,14 6 7± 1 3 ,P<0 0 5 ) .结论 :二次过量胸苷阻断细胞DNA合成可能与细胞周期素表达的改变相关     

磷脂酰肌醇-3-激酶p55γ-N末端24个氨基酸对体外培养HaCaT细胞增殖的影响

目的 观察磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的调节亚单位p55γ-N末端24个氨基酸抑制人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞增殖的作用.方法 构建含有PI3K-p55γ-N末端24个氨基酸的腺病毒载体AD-N24-GFP及对照病毒AD-GFP,感染HaCaT细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU/PI双掺入法检测其对细胞DNA合成的影响,CFDA-SE(细胞增殖示踪荧光探针)标记法检测细胞增殖情况.结果 AD-N24能有效阻滞HaCaT细胞周期进程于G 0/G 1期,S期和G 2/M期细胞减少,AD-N24-GFP组各期细胞分布为:G 0/G 1期(84.18±1.73)%,S期(7.60±1.47)%,G 2/M期(8.22±1.33)%,而AD-GFP组各期细胞分布为:G 0/G 1期(61.14±2.76)%,S期(24.54±1.29)%,G 2/M期(14.32±1.61)%,空白对照组各期细胞分布为:G 0/G 1期(65.78±2.11)%,S期(22.22±1.92)%,G 2/M期(12.00±1.19)%,AD-N24-GFP组与AD-GFP组及空白对照组间G 0/G 1期和S期细胞比例的差异有显著性意义(P ＜0.05);BrdU阳性细胞比例显示:AD-N24-GFP组R2为:(5.89±1.33)%,AD-GFP组R2为:(27.09±2.61)%,空白对照组R2为:(24.91±2.04)%,提示AD-N24能有效抑制HaCaT细胞的DNA合成;CFDA-SE检测显示AD-N24-GFP组增殖指数(PI)为:(33.60±2.52),AD-GFP组PI为:(52.47±4.41),空白对照组PI为:(55.29±7.61),提示AD-N24能有效抑制HaCaT细胞的增殖.结论 在HaCaT细胞中过表达N24能有效阻滞HaCaT细胞周期进程,干预其细胞DNA合成,抑制其细胞增殖.     

低剂量电离辐射对松果腺细胞周期的影响

目的 :探讨低剂量 X射线全身照射对小鼠松果腺细胞周期的影响。方法 :采用流式细胞术(FCM)检测小鼠松果腺细胞周期。结果 :低剂量电离辐射全身照射后 ,小鼠松果腺 G0 / G1期细胞百分数降低 (P<0 .0 5 ) ,S期细胞百分数升高 (P<0 .0 1) ,G2 + M期细胞百分数降低 (P<0 .0 5 )。结论 :低剂量电离辐射可促进小鼠松果腺细胞的 DNA合成及增殖。     

放射敏感性不同的鼻咽癌细胞DNA倍体及细胞周期分布

目的　研究不同放射敏感潜能的人鼻咽癌细胞亚克隆株F1、S1的DNA倍体及细胞周期分布,并探讨与放射敏感性异质性的关系。方法　采用细胞培养及裸鼠体内实验,用Feulgen染色法和图像分析方法观察F1、S1细胞及其裸鼠移植瘤的DNA倍体及细胞周期的分布情况。结果　F1、S1细胞及其裸鼠移植瘤均为异倍体细胞或肿瘤。F1细胞及裸鼠移植瘤DNA含量、5C、>5C比S1组高(P<0.01),F1细胞及裸鼠移植瘤3-4C比例低于相应S1组(P<0.01)。F1细胞及其裸鼠移植瘤G2M比例均高于相应S1组,G0G1期低于S1组(P<0.05-0.01),F1细胞的S期比例低于S1细胞(P<0.01)。结论　F1DNA含量较高、倍体分布较广而右移,较多细胞处于对放射线敏感的G2M期,S1DNA含量较低、倍体分布较窄,较多细胞处于G0G1期和S期。DNA倍体及细胞周期分布地不同可能是F1、S1存在放射敏感性差异的原因之一。     

磷酸二酯酶3A在小鼠受精卵早期发育中的表达

目的:研究磷酸二酯酶3A(PDE3A)在小鼠受精卵第1次有丝分裂中的表达.方法:采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测小鼠受精卵在第1次有丝分裂的G1、S、G2及M期,在mRNA水平PDE3A的表达.结果:在mRNA水平,PDE3A在G2、M期的表达较G1、S期明显增高.结论:小鼠受精卵中有PDE3A基因的表达;在小鼠受精卵第1次有丝分裂过程中,PDE3A在mRNA水平的表达具有阶段特异性,因而,PDE3A很可能参与对受精卵早期发育的调控.     

山豆根对Eca—109细胞株细胞周期的作用

应用流式细胞术（FCM）和Feulgen-DNA法显示分裂指数，分析不同浓度山豆根对Eca-109细胞的作用。流式细胞光度术分析结果表明，实验组细胞DNA指数（DI＝2）显著低于对照组（DI＝2．5），两者相比差异均有极其显著性意义（P＜0．01）。细胞DNA组方图G0／G1期细胞呈增高趋势，S期细胞均减少，G2M期细胞均增高，与对照组比差异均有显著性（P＜0．01，P＜0．05）。Feulgen-DNA染色显示细胞分裂指数与小剂量药物作用时间呈负相关，大剂量药物作用下分裂指数明显下降。这说明山豆根对Eca-109细胞DNA合成有显著的抑制作用。     

用7-AAD检测细胞DNA含量的流式细胞技术

目的：探索利用荧光染料7～AAD检测细胞DNA含量的流式细胞技术。方法：利用7一AAD和PI两种荧光染料标记小鼠胸腺T淋巴细胞通过流式细胞仪检测其G0／G1期、S期和G2／M期的DNA含量,比较2种方法测定结果。结果：通过流式细胞仪对细胞周期进行分析显示：用7一AAD和PI两种荧光染料标记的小鼠胸腺T淋巴细胞呈现完整的细胞周期,G0／G1期细胞含量为73．2％±1．93％、73．9％±1．79％,S期细胞含量为23．6％±1．04％、22．6％±1．50％,G2／M期细胞含量为3．2％±0．28％、3．5％±0.21％,两种标记方法测定结果基本一致。结论：本文探讨的7-AAD染色检测DNA含量法与常用的PI标记法相比较结论一致,且操作上更为简单快捷,是—种值得推广的DNA周期分析染色方法。     

过氧化氢诱导同步化HepG2细胞DNA损伤和凋亡的敏感时相研究

目的:探讨过氧化氢(H2O2)诱导HepG2细胞的DNA损伤和凋亡效应在细胞周期不同时相的敏感性.方法:利用胸腺嘧啶核苷(TdR)阻断肝癌HepG2细胞于G1期末后,去除胸苷,培养不同时间,分别得到同步化的G1期、S期和G2/M期细胞,150 μmol/L的H2O2处理12 h,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定细胞的DNA损伤;将各期细胞用200 μmol/L的H2O2处理,采用流式细胞术测定细胞凋亡.同时实验设立未同步化和正常对照组.结果:①分别获得 88.6%的G1期细胞、78.1%的S期细胞、66.8%的G2/M期细胞.② SCGE结果显示,同步化于S期和G2/M期细胞的DNA尾长明显增长,尾部DNA百分比含量和尾矩明显增加,其中S期细胞效应最为显著.③凋亡检测结果显示,同步化各组细胞的凋亡率明显高于未同步化组,以S期最为显著.结论:H2O2诱导HepG2细胞DNA损伤和细胞凋亡在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导S期细胞的DNA损伤和凋亡.