地塞米松对C6胶质瘤细胞细胞周期的影响

目的:研究地塞米松(Dex)对C6胶质瘤细胞细胞周期和增殖的影响。方法:在培养的C6胶质瘤细胞中加入不同浓度(0 mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L和10-3mol/L)的Dex,作用不同的时间(6、12和24 h)后取材,运用细胞计数和流式细胞仪检测C6胶质瘤细胞的增殖情况、细胞周期及凋亡。结果:10-3mol/L的Dex诱发了C6胶质瘤细胞的凋亡。24 h时,4个组的C6胶质瘤细胞凋亡率依次为0.37、0.52、0.39和8.24;4个组的C6胶质瘤细胞个数依次为4.37×106、4.29×106、3.57×106和3.44×106,后3组与第1组有明显的差异;4个组的C6胶质瘤细胞增殖指数依次为17.58、6.79、6.29和22.48,前3组随浓度增加而增加,第4组例外。结论:Dex对C6胶质瘤细胞的细胞周期进程有明显的抑制作用。10-4mol/L以下的浓度抑制其由G1期向S期的转换,10-3mol/L剂量的Dex可能抑制C6胶质瘤细胞由G2期向M期的转换或阻滞细胞在S期。大剂量的Dex(10-3mol/L)可引起C6胶质瘤细胞凋亡。     

褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响。方法:将HSC-T6细胞分为空白对照组、阴性对照组及药物组,用不同浓度的褐藻素培养HSC-T6细胞。采用CCK-8检测在24 h、48 h和72 h褐藻素对HSC-T6细胞活力变化的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot法分别检测Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:与空白对照组相比,CCK-8检测的结果表明,褐藻素在一定浓度范围内(15~75μmol/L)内能显著抑制HSC-T6细胞的活力(P0.01),呈剂量和时间依赖性。流式细胞术结果显示,24 h后高浓度(60μmol/L)组对HSC-T6细胞周期影响的效果显著(P0.01),G_1期比例显著下降(P0.01),G_2期和S期的比例显著升高(P0.01),48 h后低浓度(15μmol/L)和中浓度(30μmol/L)组对HSC-T6细胞周期的阻滞作用增强,呈剂量依赖性(P0.05);低、中、高浓度组早期凋亡率和总凋亡率都显著升高,呈剂量依赖性(P0.05)。蛋白印迹法实验结果表明,低、中、高浓度组Bax的蛋白表达显著上调,中、高浓度组Bcl-2的蛋白表达显著下调(P0.05)。结论:褐藻素可以通过使细胞周期阻滞于S期和G2期而抑制HSC-T6细胞生长;同时能通过下调Bcl-2和上调Bax的表达而诱导HSC-T6细胞凋亡。     

Effects of overexpression nucleophosmin (NPM1) mutations on the proliferation and apoptosis of THP-1 leukemic cells

目的 探讨核仁磷酸蛋白基因(NPM1)突变对白血病细胞增殖和凋亡的影响.方法 将携带NPM1 A型突变(NPM1 mA)的重组质粒载体pEGFPC1-NPMI mA转染白血病THP-1细胞系,构建稳定表达NPM1mA蛋白的细胞株(THP-1mA),同时设立空载体转染组(THP-1C1)和未处理组(THP-1)为对照.MTT实验观察细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期和凋亡;RT-PCR和Western blot分别检测细胞凋亡相关蛋白(BAX和BCL-2)mRNA及蛋白表达水平.结果 与对照组相比较,实验组THP-1mA细胞体外增殖能力明显增强(P＜0.05),S期细胞比例明显增高(P＜0.05),G1期细胞比例显著减低(P＜0.05);而3组细胞凋亡率无显著差异,BAX,BCL-2的mRNA和蛋白表达以及BAX/BCL-2比值亦未见明显改变.结论 NPMI突变基因能够促进白血病细胞的体外增殖能力,而对白血病细胞凋亡无显著影响.     

NPM1基因突变表达对THP-1白血病细胞增殖和凋亡的作用探讨

 摘要：目的 探讨核仁磷酸蛋白（NPM1）基因突变对白血病细胞增殖潜能和凋亡发生的影响。方法 将携带NPM1 A型突变（NPM1 mA）的重组质粒载体pEGFPC1-NPM1 mA转染白血病THP-1细胞系,构建稳定表达NPM1 A型突变蛋白的白血病细胞株(THP-1 mA),同时设立未处理组（THP-1）和空载体转染组（THP-1 C1）作为对照。通过MTT试验观察细胞体外增殖能力,流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡发生率的改变;采用RT-PCR和Western blot分别检测细胞凋亡相关蛋白（Bax和Bcl-2）mRNA及蛋白表达水平。结果 与未处理组和空载体转染组细胞相比较,携NPM1突变体的THP-1 mA细胞体外增殖能力明显增强,S期细胞比例明显增高,G1期细胞比例显著减低;而NPM1突变体转染后THP-1细胞的凋亡率没有显著变化,同时细胞凋亡相关蛋白Bax, Bcl-2的mRNA和蛋白表达以及Bax/Bcl-2比值亦未见明显改变。结论 NPM1突变基因能够促进白血病细胞的体外增殖能力,而对白血病细胞凋亡无显著影响,这为进一步阐明NPM1突变与AML的关系提供了新的科学依据。     

蟾酥胶囊含药血清诱导人肝癌细胞凋亡的检测

目的观察蟾酥胶囊含药血清对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的诱导作用。方法采用中药血清药理学方法,选择不同浓度含药血清作为实验组,分别与人肝癌BEL-7402细胞共同孵育24h、48h,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化及Ap02．7蛋白的阳性表达率;琼脂糖凝胶电泳测定DNA Ladder;均与10％无药血清组做对照。结果流式细胞仪检测可见,各实验组细胞G、S期下降,Q／M期升高,产生凋亡峰(sub-G1期),Apo2．7蛋白表达的阳性峰明显增高,细胞凋亡率与作用时间、含药血清浓度有一定的时效和量效关系;孵育48h,可见DNA Ladder出现。结论蟾酥胶囊含药血清可以诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡,提示蟾酥胶囊是一种有潜力的治疗肝癌药物。     

白藜芦醇对Hela细胞凋亡及Bcl-2和Fax基因表达的影响

目的观察白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞凋亡及Bcl-2、Fax基因表达的影响。方法实验设白藜芦醇用药组和空白对照组,应用流式细胞术检测药物作用24h后细胞凋亡和细胞周期进程情况;应用免疫组化法检测Heal细胞Bcl-2、Fax基因的表达情况。结果经不同浓度的白藜芦醇处理Heal细胞后,镜下可见到凋亡细胞,各组的凋亡率明显高于对照组(P0.01)。PCM分析发现各实验组S期细胞比例增高,G2/M期细胞比例减少,并呈剂量依赖性(P0.01);各实验组Heal细胞Bcl-2的表达均低于对照组。而Fax的表达均高于对照组(P0.01)。结论白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞有明显的抑制生长和促凋亡作用,凋亡途径可能与Fas表达上调、Bel-2表达下调有关。     

上调miRNA145对肝癌细胞的作用及其机制研究

目的:探讨微小RNA145(miRNA145)对肝癌细胞生长、凋亡及侵袭转移的影响。方法:实验将Hep G2细胞随机设置为3组:空白对照组、空质粒组及转染组,转染后real-time PCR法检测验证各组细胞miRNA145及N-钙黏蛋白(N-cadherin)mRNA的表达,并用Western blot检测miRNA145目标蛋白N-钙黏蛋白的表达,MTS增殖实验检测各组细胞的生长情况,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率,Transwell法检测各组细胞的侵袭转移能力。结果:Real-time PCR结果证实转染组细胞miRNA145表达比空质粒组和空白对照组细胞明显增多(P0.05),同时N-钙黏蛋白的表达在转染组细胞中显著减少(P0.05);经Western blot结果证实,转染组细胞中N-钙黏蛋白表达比空质粒组和空白对照组细胞明显减少(P0.05);转染组细胞活性在转染后第2天、第3天均明显下降,70.04%的细胞周期停止在G1期,转染后Hep G2细胞凋亡率明显增高,细胞的侵袭转移能力下降,差异均有统计学意义。结论:上调miRNA145表达能有效抑制肝癌细胞的细胞周期进展和侵袭转移,促进细胞凋亡。     

靶向着丝粒蛋白A的小RNA干扰对肝癌细胞株HepG2细胞生物学行为的影响

目的 研究靶向着丝粒蛋白A(CENP-A)的siRNA对肝癌细胞株HepG2细胞生物学行为的影响.方法 设计并合成三对CENP-A编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,通过定向克隆至载体pSilencerTM 2.1-U6 neo,构建siRNA真核表达质粒,经稳定转染HepG2细胞后检测肝癌细胞中CENP-A基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况;通过观察HepG2细胞生长、凋亡、细胞周期和平板克隆形成能力评价CENP-A基因干扰对细胞生物学行为的影响;通过检测bcl-2、Bax、p21waf1、mdm2、p53蛋白表达水平初步探讨CENP-A生物学作用的可能机制.结果 三对靶向CENP-A的siRNA干扰片段中有二对抑制效果明显.与未转染组及空载体组相比,转染CENP-A干扰片段的细胞生长减慢,平板克隆形成率下降.细胞周期检测显示,G1期阻滞(P＜0.01),S期细胞比例减少(P＜0.001).细胞凋亡比例增加(P=0.003),并伴随bcl-2蛋白表达明显下降(P=0.000),Bax蛋白表达明显增高(P=0.001).还可致p21waf1表达增高,mdm2表达下降,但对野生型p53表达未显示明显影响.结论 CENP-A通过参与细胞周期调控而密切相关于细胞恶性增殖和凋亡抑制,其机制可能涉及野生型p53非依赖性通路和凋亡相关基因bcl-2Bax的表达异常.     

SIRT1基因敲低增强HepG2细胞对单壁碳纳米角的敏感性

目的:探讨SIRT1基因敲低增强HepG2细胞对单壁碳纳米角(Single-Walled Carbon Nanohorns,SWNHs)的敏感性。方法:通过在HepG2细胞中建立过表达和敲低SIRT1的细胞株,流式细胞检测不同SIRT1表达水平对HepG2细胞周期的影响;采用不同浓度SWNHs对HepG2细胞进行处理,CCK-8法评估HepG2细胞对SWNHs的敏感性;采用Western blotting探索SIRT1影响HepG2细胞凋亡的机制。结果:获得低表达si-SIRT1和高表达p LV-SIRT1细胞株,发现si-SIRT1组细胞周期阻滞,并且有(14.94±1.22)%细胞出现凋亡,HepG2组和p LV-SIRT1组细胞凋亡率分别为(5.43±0.34)%和(4.49±0.34)%,si-SIRT1组与之相比,差异具有统计学意义(P0.05);SIRT1基因敲低增强HepG2细胞对SWNHs的敏感性,低表达si-SIRT1组的数据显示,低浓度SWNHs10在24 h后si-SIRT1-HepG2细胞的活性下降到(43.22±2.21)%,而最大剂量SWNHs40在48 h后si-SIRT1-HepG2细胞的活性下降到(2.02±0.13)%,与对照组(HepG2组)相比差异具有统计学意义(P0.05);通过Western-blotting验证,si-SIRT1组的P53表达增高,其相关下游凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-7也出现高表达。结论:通过敲低SIRT1后HepG2细胞周期阻滞,对SWNHs的敏感性显著增强,SWNHs有望成为一种有效的生物治疗肝癌的新方法。     

白藜芦醇诱导大鼠肝癌细胞凋亡的作用

目的:探讨白藜芦醇(Res)对大鼠肝癌细胞CBRH7919的作用.方法:采用SRB细胞活性检测法检测白藜芦醇对CBRH7919细胞活性的影响;用流式细胞仪检测CBRH7919对细胞周期分布、凋亡、线粒体膜电位的影响.结果:白藜芦醇作用于CBRH7919细胞24、48和72h后,SRB检测细胞活性有时间和浓度依赖性,CBRH7919细胞凋亡率增加,细胞周期阻断于G0～G1期,细胞线粒体膜电位降低.结论:白黎芦醇对大鼠肝癌细胞CBRH7919有明显的抑制作用,可能是通过线粒体凋亡途径诱导细胞的凋亡.     

复方紫杉醇注射液对 C57BL/6小鼠Lewis肺癌的作用研究

目的:研究复方紫杉醇注射液对C57BL/6小鼠Lewis肺癌的作用及其机制。方法:60只C57BL/6小鼠按体重随机分为5组,每组12只,移植皮下接种Lewis细胞。在接种后24小时,对照组给予生理盐水;实验组分别给予紫杉醇注射液大、小两种剂量,复方紫杉醇注射液大、小两种剂量,各组均腹腔注射,连续5天。停药后第6天脱颈处死动物,计算抑瘤率;用HE染色光镜观察细胞形态学的变化;用流式细胞仪(FCM)检测研究复方紫杉醇注射液诱导肿瘤细胞凋亡以及对肿瘤细胞周期的影响。结果:复方紫杉醇注射液大、小剂量组对荷瘤鼠Lewis肺癌有明显的抑制作用,且各剂量组均可诱导Lewis细胞凋亡,与对照组比较有显著性差异(P<0.05);而对细胞周期的影响不太明显。结论:复方紫杉醇注射液对移植于C57BL/6小鼠的Lewis肺癌具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

非聚焦超声对溶液中GLC-82肺腺癌细胞损伤的实验研究

目的:探讨不同功率及不同作用时间的非聚焦超声(none focused ultrasound,NFU)对溶液中肺癌细胞的作用,为杀灭弥漫在胸水及腹水中或浸润在组织中的癌细胞提供实验依据。方法:台盼蓝拒染法测NFU辐照GLC-82肺腺癌细胞后细胞的即刻存活率,MTT法检测其作用后24 h细胞的增殖率,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果:(1)GLC-82细胞的即刻存活率随着辐照功率和作用时间的不断增加明显下降;(2)超声辐照24 h后,随着超声辐照时间和剂量的不断增加,细胞的增殖率明显下降,时间-效应各组之间、剂量-效应各组之间细胞的增殖率差异均有显著性(P<0.05);(3)超声辐照细胞的凋亡率均高于阴性对照,但其周期即刻未发生明显变化。结论:NFU能杀伤溶液中GLC-82肺癌细胞并抑制其增殖,较低功率的超声可能以诱导细胞凋亡为主,较高功率时则可能以杀伤细胞为主。超声对细胞周期的影响为迟发性效应。     

黄芩素和U0126 体外协同抗人膀胱癌细胞的作用及机制研究

目的：探讨黄芩素和U0126体外协同抗人膀胱癌T-24细胞的作用及机制研究。方法：用黄芩素、U0126及二者联合处理T-24细胞,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡;显微镜下计数细胞数量变化;TUNEL法检测细胞凋亡指数;实时定量PCR和Western blot分别检测T-24 细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2) 、CyclinD1、GSK-3β和AKT ＲNA水平、蛋白水平,分析黄芩素与U0126对膀胱癌细胞凋亡和增殖的影响。结果：T-24细胞经不同浓度黄芩素处理后, 细胞凋亡率显著增加;T-24细胞经黄芩素处理24 h,G0/G1 期细胞比例明显增多,S 期细胞比例明显下降,细胞数减少,采用黄芩素联合U0126 处理T-24细胞24 h,S 期细胞比例显著降低;黄芩素或U0126单独处理T-24细胞引起明显细胞凋亡,二者联合处理凋亡更明显;利用两种药物单独或联合作用T-24细胞24 h,GSK-3β、ERK1/2、AKT磷酸化水平显著降低, ERK1/2、CyclinD1的 mRNA表达减少,联合处理作用更显著。结论：黄芩素和U0126 均可诱导T-24细胞凋亡,增加G0/G1 期细胞比例,降低S 期细胞比例,联合应用效果更明显。     

姜黄素诱导胃癌BGC细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探讨姜黄素促人胃癌BGC-823细胞凋亡的生物学作用及其调控机制。方法:常规体外培养对数生长期胃癌BGC-823细胞,细胞分为对照组,低、中、高姜黄素处理组四组,姜黄素浓度分别为0 mg/L,5 mg/L,10 mg/L,20mg/L。姜黄素处理24 h后,采用甲基噻唑(MTT)比色法及流式细胞仪测定细胞增殖水平及细胞凋亡率;采用免疫组化法测定细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达;采用PCR检测Caspase-3的mRNA表达水平。结果:MTT检测显示姜黄素能抑制人胃癌BGC-823细胞増殖,呈现浓度依赖性;流式细胞仪显示姜黄素能有效诱导细胞的凋亡,呈现浓度依赖性,其中20 mg/L姜黄素处理24 h后细胞凋亡率为48.3%;免疫组化试验表明姜黄素处理使人胃癌BGC-823细胞中Bax表达水平上调,同时Bcl-2蛋白表达水平下调;且细胞中Caspase-3的mRNA表达水平受姜黄素诱导而增高。结论:姜黄素对人胃癌BGC-823细胞的增殖具有明显抑制作用,呈浓度依赖性促进细胞凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达而活化Caspase-3的信号通路有关。该研究为深入探讨姜黄素诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制提供了重要依据。     

喜树碱诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制

目的 测定不同浓度的喜树碱（CPT）对宫颈癌HeLa细胞促凋亡作用的影响,并探讨其促凋亡的机制。方法 人宫颈癌细胞系HeLa细胞,加入不同浓度的CPT（100 nmol/L~10 μmol/L）,继续培养24 h。MTT方法检测细胞增殖,并通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,细胞核染色法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleave-Caspase-3、细胞色素C（Cyt-C）,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的表达。结果 MTT实验及细胞形态学结果显示,CPT对HeLa细胞的生长有明显抑制作用,并可导致细胞形态改变,且具有剂量依赖性,其IC₅₀为2.45 μmol/L;细胞凋亡检测表明,不同浓度的CPT可导致凋亡小体出现,并可使早期凋亡比例增加。Western blotting法检测结果显示,不同浓度CPT可使HeLa细胞Bcl-2蛋白表达降低,而Bax、cleaved-Caspase-3蛋白表达,胞质Cyt-C,89 kD 5-磷酸核糖-1-焦磷酸（PRPP）蛋白表达增加且呈剂量依赖性。结论 CPT可以诱导HeLa细胞凋亡,其作用机制可能为激活线粒体依赖途径,并活化作用底物PARP而实现。     

X射线诱导Raji细胞凋亡的实验研究

目的探讨X射线对人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖及凋亡的影响。方法用不同剂量X射线照射细胞,并在不同时间段用倒置显微镜观察照射后细胞的形态变化及生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期,并观察X射线对克隆形成的影响。结果 16Gy照射后48h对Raji细胞的抑制率（92.67±1.20）%最显著;8Gy照射后48h早期凋亡率（42.04±3.62）%最高;8Gy照射后24h细胞周期G2/M期细胞（57.86±3.31）%,明显大于正常对照组（14.54±2.32）%;8Gy照射后第7天无克隆形成,第14天克隆数为（5.33±2.40）,明显小于正常对照组第7天（116.67±20.28）和第14天（263.33±20.27）。结论 X射线可抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡,照射后细胞周期阻滞在G2/M期,X射线8Gy照射后不能完全抑制Raji细胞的增殖。     

诱导细胞凋亡青蒿琥酯抗食管癌作用机制研究

 [摘要] 目的 研究青蒿琥酯诱导食管癌细胞凋亡作用及探讨青蒿琥酯抗食管癌作用机制。方法 不同浓度的青蒿琥酯(Artesunate, Art)(0、10、20、40μg/ml) 作用Eca109细胞24h,流式细胞术（Flow cytometry, FCM）方法检测细胞凋亡、周期及细胞中bcl-2和bax蛋白的表达量。结果 青蒿琥酯作用Eca109细胞24h后,与对照组相比,细胞凋亡率显著增高P<0.05,且具有剂量依赖性。青蒿琥酯组与对照组相比,Eca109细胞中bcl-2蛋白表达水平及细胞增殖指数显著降低P<0.05,而bax蛋白表达量显著增高P<0.05,且具有剂量依赖性。结论 青蒿琥酯可以通过调节Eca109细胞中bcl-2、bax蛋白表达水平和细胞增殖,从而诱导Eca109细胞产生凋亡,起到抗食管癌作用。     

蛋白酶体抑制剂MG132对NK/T淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的： 探讨蛋白酶体抑制剂MG132（Z-leu-leu-leu-CHO,三肽基乙醛）对NK/T淋巴瘤细胞的增殖和细胞周期分布的影响,研究蛋白酶体抑制剂MG132治疗NK/T细胞淋巴瘤的潜在应用价值。方法: 用蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞,噻唑蓝［ 3（4,5二甲基噻唑2）2,5二苯基四氮唑溴盐,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide,MTT］法检测细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡。结果: 1 μmol/L MG132作用24 h,HANK1细胞增殖抑制率为（57.72±7.44）%,而0.1 μmol/L MG132作用24 h,增殖抑制率仅为（3.98±0.07）%;MG132剂量大,增殖抑制率高;1 μmol/L MG132作用24 h后,HANK1细胞G1和G2期细胞分别为（72.33±3.44）%和（12.86±1.29）%,对照组为（63.63±2.29）%和（7.94±1.91）%,用药组G1和G2期细胞明显高于对照组（P<0.01,P<0.05）; 早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞分别为（33.57±2.10）%和（16.66±0.47）%,而对照组仅为（7.18±0.82）%和（3.81±1.06）%,与对照组相比,凋亡率明显增高 (P<0.01,P<0.01)。结论: MG132抑制NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖,使细胞周期G1和G2期阻滞,促进细胞凋亡,并存在剂量和时间依赖关系,蛋白酶体抑制剂MG132很可能成为治疗进展期NK/T细胞淋巴瘤的药物。