抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注诱导小鼠皮肤移植耐受的研究

目的　探讨抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注方法在同种异基因小鼠皮肤移植耐受诱导中的作用。方法　第 0天 ,C5 7BL 6 (H 2 b,B6 )小鼠尾静脉注入 2× 10 8BALB c(H 2 d,B c)来源的骨髓细胞 ,同时腹腔注射抗TCRαβ单克隆抗体 5 0 0 μg。第 6天进行皮肤移植。在不同的时间对B6小鼠进行迟发型超敏反应测定 ,混合淋巴细胞反应分析 ,并进行MLR的IL 2逆转实验和过继转移实验 ,初步探讨耐受形成机制。结果　抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注处理的B6小鼠中供体皮肤移植物平均存活为 5 0 .4d ,显著长于其它各组 (P <0 .0 0 1)。相对于正常对照组小鼠 ,耐受B6小鼠在迟发型超敏反应和混合淋巴细胞反应中均表现出显著的低反应性 (P <0 .0 0 1)。IL 2逆转实验结果表明 ,克隆不应答 (anergy)可能参与了移植耐受的形成。体内、外过继转移实验均显示耐受B6小鼠脾细胞中存在抑制细胞活性。结论　抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注可以在组织相容性抗原完全不相同的成年小鼠间成功地诱导出皮肤移植物的长期耐受。多种耐受机制 ,包括克隆不应答、抑制细胞 ,都参与了耐受的形成。     

供体脾细胞输注诱导小鼠移植耐受及其机理的研究

目的以持续供体脾细胞输注的方法建立异基因嵌合体动物模型,并探讨移植耐受形成的机制。方法BALB/c（H-2     

抗TCRαβ单抗联合供体骨髓细胞输注诱导小鼠皮肤移植耐受的研究

探讨抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注方法对同种异基因小鼠皮肤移植耐受诱导的促进作用。第 0天 ,C5 7BL/ 6 (H 2 b,B6 )小鼠尾静脉注入 2× 10 8BALB/c (H 2 d,B/c )来源的骨髓细胞 ,同时腹腔注射抗TCRαβ单克隆抗体5 0 0 μg ;第 6天进行皮肤移植 ;在不同的时间对B6小鼠进行迟发型超敏反应 (DTH )、混合淋巴细胞反应 (MLR )等耐受状态进行检测 ,并进行MLR的IL 2逆转实验、过继转移实验和嵌合状态分析以初步探讨耐受形成机制。结果显示 ,经抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注处理的B6小鼠的供体皮肤移植物平均存活 5 0 4d ,显著长于其他各组 (P <0 0 0 1)。相对于正常对照组小鼠 ,耐受B6小鼠在DTH和MLR中均表现出显著的低反应性 (P <0 0 0 1)。IL 2逆转实验结果表明克隆无能参与了移植耐受的形成。体内、外过继转移实验均显示耐受B6小鼠脾细胞中存在抑制细胞活性。嵌合体检查结果表明在耐受B6小鼠的胸腺和脾脏中均形成了混合嵌合体 ,在皮肤移植后第 15、 30和 70天时脾脏内供体来源嵌合体水平依次为 15 86 % ,10 5 7%和 1 77% ,胸腺中依次为 8 19% ,5 72 %和 1 87% ,嵌合体水平随时间而下降。这些表明 ,抗TCRαβ单抗联合大剂量供体骨髓细胞输注可以在异基因成年小?     

慢性排斥与移植耐受

防止慢性排斥和诱导移植耐受是当今移植临床的重大难题，本文概述了两者的机制和联系，展望了这一领域的研究前景。     

慢性排斥与移植耐受

防止慢性排斥和诱导移植耐受是当今移植临床的重大难题 ,本文概述了两者的机制和联系 ,展望了这一领域的研究前景。     

小鼠皮肤移植耐受诱导及微嵌合体检测

目的　探求简便易行、安全有效、有临床应用前景的移植耐受诱导方法，研究微嵌合体的形成情况及其与移植耐受的关系。方法　雄性ＢＡＬＢ／ｃ 和雌性Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠作为皮肤移植的供体和受体，移植前对受体小鼠单独或联合应用５Ｇｙ（５００ｒａｄ ，１Ｇｙ ＝ １００ｒａｄ） 全身照射，０ ．１ ｍｌ 抗淋巴细胞血清注射，３ ×１０７ 供体骨髓细胞静脉输注，１５０ｍｇ／ｋｇ 体重环磷酰胺腹腔注射。应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ） 检测微嵌合体的形成。结果　单纯照射不能延长移植物的存活，也没有微嵌合体形成，而其它各实验组的皮肤移植物存活时间均较对照组明显延长，混合淋巴细胞反应和迟发型超敏反应也表现为供者特异性的降低，多种组织的微嵌合体检查均呈阳性。结论　采用比较温和的非照射的预处理方法，也可获得一定程度的免疫耐受，达到延长移植物存活的目的；移植前输注供体骨髓细胞能够促进微嵌合体的形成及移植物的存活。     

抗TCRαβ单抗促进异基因皮肤移植耐受的研究

目的 探索抗ＴＣＲαβ单抗诱导异基因成年小鼠皮肤移植耐受的作用。方法 经５７ＢＬ／６（Ｈ－２ｂ,Ｂ６）小鼠尾静脉注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠（Ｈ－２＾ｄ）脾细胞,２ｄ后腹腔注射环磷胺（ＣＰ）,随后两次尾静脉注射抗小鼠－ＴＣＲαβ的单克隆抗体,然后进行皮肤移植,观察皮肤存活期并对耐受小鼠的ＭＬＲ,ＤＴＨ等耐受状态进行了检查。结果 耐受Ｂ６小鼠获得了供体特异性皮肤移植耐受,供体皮肤移植存活时间延长,ＭＬＲ和Ｄ     

供体骨髓细胞促进大鼠心脏移植耐受及机制的研究

经门静脉给予受体LEW大鼠3×10~8个DA大鼠供体脾细胞,2d后腹腔注射80mg/kg的环磷酰胺,第4天由舌静脉输注1×10~8骨髓细胞。2周后实施心脏移植手术。观察、记录移植物的存活时间,通过过继性转移实验,MLR、CTL活性测定及嵌合体分析,探讨耐受机制。结果表明,异基因心脏移植物的存活时间进一步延长;该耐受状态可被过继性转移;MLR、CTL活性表明,受体大鼠的免疫应答被特异性抑制;嵌合体水平提高。结论:异基因骨髓细胞输注可加深由脾细胞和环磷酰胺诱导的大鼠心脏移植耐受,该耐受与嵌合体水平、抑制细胞的存在有关。输注骨髓细胞对于改善、维持耐受状态,延长大鼠心脏移植物存活时间是一有效的方法。     

髓腔内骨髓移植诱导异基因小鼠皮肤移植耐受的研究

探讨髓腔内骨髓移植(IBM-BMT)对异基因小鼠皮肤移植耐受的诱导效果。受鼠为雌性C57BL/6(H-2b,B6)小鼠,于第0天接受60Coγ射线全身照射(TBI),4 h内输注雄性BALB/c(H-2d)小鼠来源的骨髓细胞(BMC),2 d后腹腔注射环磷酰胺(CTX)。通过皮肤移植、混合淋巴细胞反应(MLR)检测耐受状态,并通过骨髓染色体分析了解BMC的植入程度。结果显示,接受IBM-BMT的B6小鼠对BALB/c小鼠的皮肤移植物平均存活时间(MST)超过300 d,显著长于其余两组(P<0.001);MLR结果证明,实验组B6小鼠获得供体特异性耐受,在耐受小鼠骨髓中可检测到一定比例的Y染色体存在。以上表明髓腔内骨髓移植可以保证异基因骨髓细胞的植入并形成混合嵌合状态,从而有效地诱导免疫耐受。     

细胞凋亡与异体移植

细胞凋亡在器官移植领域越来越受到广泛的重视 ,而且在不同器官的同种异体移植过程中均发现有细胞凋亡发生。本文综述了近年来有关细胞凋亡与移植排斥反应、免疫损伤以及免疫耐受的关系等方面的研究进展     

亲属间异体皮肤移植的免疫耐受机制

临床研究表明,大面积深度烧伤患者中,感染是主要的致死原因,烧伤早期创面切痂、皮肤移植覆盖可以显著降低感染的发生率。鉴于大面积深度烧伤患者自体皮源的相对不足,在临床治疗过程中,亲属间异体皮肤移植受到临床医师的重视,其应用也在进一步扩大。但是亲属间异体皮肤移植依然需要解决免疫耐受问题,才能使移植效果达到理想状态。现阶段已知的免疫耐受可能与异体真皮胶原、自体表皮细胞、未成熟树突状细胞、角质形成细胞等有关。本研究可用于指导临床应用,在自体皮源缺少的情况下,应用亲属间异体皮肤移植,覆盖创面,缩短病程、减少住院费用等。     

腺病毒载体介导的CTLA4-FasL基因转移联合应用供者脾细胞输注促进异基因小鼠皮肤移植耐受

目的:探讨腺病毒介导CTLA4 -FasL基因转移联合应用供者脾细胞输注延长小鼠皮肤移植物存活的作用及其机制。方法:在移植的第0天,C5 7BL 6 (H 2 b,B6 )小鼠经尾静脉注射BALB c(H 2 d)小鼠脾细胞和5×10 9空斑形成单位 毫升(pfu ml)CTLA4 - FasL重组腺病毒(AdCTLA4 - FasL) ,同一天进行皮肤移植,每天观察移植物存活情况。耐受小鼠尾静脉取血,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定CTLA4 FasL融合蛋白的体内表达;于第2 0天对受体小鼠进行迟发型超敏反应、单向混和淋巴细胞反应(MLR)、IL- 2逆转试验、过继转移实验和嵌合体检测等耐受状态的检测,以探讨耐受机制。结果:经尾静脉输注供体脾细胞及AdCTLA4 - FasL的B6小鼠,皮肤移植物的平均存活时间达(42 8±2 6 )天(n =6 ) ,而对照的未处理组,绿色荧光蛋白(EGFP)腺病毒处理组,重组腺病毒AdCTLA4Ig组和AdCTLA4 FasL处理组的平均存活时间为(10 .1±0 . 4 1)天(n =6 )、(10-.5±1.4 )天(n =6 )、(12 . 8±1. 1)天(n =6 )、(2 0 .0±2 .5 )天(n =6 ) ,差异具有显著意义(P <0 .-0 1) ;皮肤移植物长期存活的受体小鼠对供体抗原的低应答可以通过脾细胞被过继转移;DTH反应受到抑制、MLR活性特异性降低,且可以被外源性IL 2部分逆转。结论:供体脾细胞输注和腺病毒介导CTLA4 - F     

腺病毒载体介导的CTLA4-Ig基因转移促进异基因小鼠皮肤移植耐受

目的　探讨CTLA4 Ig重组腺病毒 (AdCTLA4 Ig)促进“脾细胞 (spleencells ,SP) 环磷酰胺 (cyclophosphamide ,CP)”系统诱导移植耐受的作用及其机制。方法　BALB c(H 2 d)小鼠经尾静脉注射C57BL 6(H 2 b,B6)小鼠脾细胞和AdCTLA4 Ig颗粒 ,48h后腹腔注射环磷酰胺 ,并同天进行皮肤移植 ,于耐受 2 5d时对受体小鼠进行混合淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR)、迟发型超敏反应 (delayedtypehypersensitivity ,DTH)等耐受状态的检查。结果　B6小鼠的皮肤移植物在耐受的BALB c小鼠中存活期特异延长。MLR和DTH检验证明BALB c小鼠对B6小鼠的脾细胞产生特异性耐受 ,对无关第三者ICR小鼠的脾细胞仍表现出强烈免疫应答。结论　AdCTLA4 Ig颗粒可以明显促进“细胞 环磷酰胺”诱导的异基因皮肤移植耐受 ;克隆排除和克隆无能是耐受诱导的主要因素     

Separating antiviral and GVHD activities of donor T cells prior to bone marrow transplantation

Approaches to speed immune reconstitution following bone marrow transplantation (BMT) or peripheral-blood hematopoietic stem-cell transplantation (HSCT) could markedly reduce morbidity and mortality, particularly following partially major histocompatibility complex (MHC)-matched related donor (PMRD) transplants. However, it is critical to simultaneously eliminate the subpopulation of donor T cells that are alloreactive with the recipient and may produce graft-vs-host disease (GVHD). In this article, we discuss a number of promising cellular engineering approaches that could be applied to this problem, including the use of veto cells, regulatory T-cell subsets, and psoralen-treated donor lymphocytes. Emphasis is placed on whether these approaches can simultaneously transfer broad-spectrum immunity to the recipient without producing GVHD.     

Immunohistological skin alterations in allogeneic bone marrow transplantation

Summary Skin biopsies of 26 patients with leukemia and seven patients with aplastic anemia were investigated before and at different stages after allogeneic bone marrow transplantation (BMT) to establish the immunological criteria which distinguish skin alterations during normal reconstitution from dermal lesions mediated by graft-versushost disease (GvHD). Of the 33 patients studied 27 presented with clinically diagnosed acute and/or chronic GvHD, one patient died of bone marrow rejection. Immunohistological analysis of the respective skin biopsies with selected monoclonal antibodies against human leukocyte antigens (HLA) and differentiation antigens of the lympho-hematopoietic cells revealed low dermal mononuclear cell counts with phenotypically normal constituents in five cases with uncomplicated reconstitution post-grafting. In contrast, increased dermal cellular infiltrates predominantly consisting of Lyt 3⁺, OKT 8⁺ T-lymphocytes, as well as of a large number of Ia-like (immune response associated = HLA-D) determinant⁺ monocytes/macrophages were observed in all patients with active acute/chronic GvH reactivity. As sign of activation simultaneous expression of HLA-D region products was also found on a subset of the invading OKT 8⁺ T-lymphocytes. Progression of GvHD was associated with additional surface staining of keratinocytes for Ia-like determinants. Loss of Ia-like determinant⁺, OKT 6⁺ dentritic epithelial cells in all leukemic patients, as well as in patients with aplastic anemia with or without GvHD suggested damage of Langerhans cells due to the previous radiotherapy and/or specific immunological destruction. In patients with fatal outcome of GvHD prolonged reduction of these dentritic epithelial cells seemed to be indicative of impaired immune reconstitution or bone marrow dysfunction. Thus immunopathological features of skin GvHR may enable early recognition and prognostic evaluation of this disease possibly allowing more effective therapy.Abbreviations GvHD graft-versus-host disease - GvHR graft-versus-host reactivity - SAA severe aplastic anemia - TBI total body irradiation - BMT bone marrow transplantation - HLA human leukocyte antigens - Ia-like antigens Immune-response-associated antigens - PBS phosphate buffered saline - FITC fluorescein isothiocyanate - TRITC tetramethylrhodamine isothiocyanate Supported by DFG Sonderforschungsbereich 120, Projekt A 2 and B 1Dedicated to Prof. Dr. Dr. h.c. H.E. Bock on the occasion of his 80^th birthday     

转染IL-6基因骨髓基质细胞系对骨髓移植后免疫功能重建的促进作用

目的　探讨转染IL 6基因的骨髓基质细胞系对同基因骨髓移植 (BMT)后小鼠免疫功能重建的促进作用。方法　将IL 6cDNA片段连接到pcDNA3真核表达载体上。用脂质体将pcD NA3IL 6转入骨髓基质细胞系QXMSC1,ELISA法测定转染IL 6基因骨髓基质细胞QXMSC1IL 6培养上清中IL 6的含量 ,有限稀释挑选多个细胞克隆 ,选择表达量最高的转基因细胞系QXMSC1IL 6用于动物实验。BABL c小鼠经γ射线致死量照射后 ,输入同基因骨髓细胞 (10 7 只 )同时输入骨髓基质细胞QXMSC1IL 6 (5× 10 5 只 )。在骨髓移植后 30d、6 0d检测BMT小鼠淋巴细胞对LPS ,ConA增殖反应 ,T辅助细胞前体 (helpTlymphocyteprecursor,HTLp) ,杀伤性T细胞前体 (cytotoxicTlymphocyteprecursor,CTLp) ,迟发型超敏反应 (delayed typehypersensitivity ,DTH)及空斑形成细胞数 (plaqueformingcell,PFC) ,反映骨髓移植后小鼠免疫功能。结果　成功构建pcDNA3IL 6重组体。该细胞体外培养 2 4h分泌IL 6的含量为 11.15 (± 2 .4 1) μg 10 6 。QXMSC1IL 6细胞系能明显增强BMT后淋巴细胞对LPS、ConA反应性 ,小鼠对异基因小鼠脾细胞DTH反应增强 ,脾脏中HTLp ,CTLp及PFC数明显增加。转入外源IL 6cDNA基因的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 6在体内能明显促进BMT后小鼠T、B淋巴     

转IL—2基因的骨髓基质细胞对骨髓移植后免疫功能重建的促进作用

目的探讨了用逆转录病毒载体转入小鼠IL-2基因的基质细胞系QXMSC1对异基因骨髓移植后免疫功能重建的促进作用.方法将小鼠IL-2cDNA片段连接到逆转录病毒载体PLXSN上,构建重组逆转录病毒载体PL2SN(含小鼠IL-2cDNA).用磷酸钙共沉淀法将PL2SN转入单嗜性包装细胞系CRE,获得G418抵抗细胞株后,以上清感染双嗜性包装细胞系CRIP,G418筛选后获得高滴度的包装细胞系CRIPIL-2.感染NIH3T3细胞测定CRIPIL-2培养上清病毒滴度为3.4×105cfu/ml.感染骨髓基质细胞系QXMSC1(H-2d),G418筛选,有限稀释法得10个单克隆细胞株,选择表达IL-2最高的细胞株为实验用细胞QXMSC1IL-2,用于以后的实验.供体小鼠BALB/c(H-2d)骨髓以抗T细胞单抗anti-Thy1.2加补体去除骨髓中T细胞,受体小鼠C57BL/6(H-2b)经γ射线致死剂量照射后,输入供体骨髓1×107/只,同时输入基质细胞QXMSC1IL-25×105/只.在第30天、60天检测BMT小鼠脾细胞对LPS、ConA的反应,脾细胞产生IL-2的能力,BMT小鼠产生抗体生成细胞(PFC)的能力及产生DTH的能力.流式细胞仪检测了QXMSC1IL-2对BMT小鼠T细胞亚群的影响.结果电泳及酶切鉴定证实构建的PL2SN质粒.QXMSC1IL-2细胞系IL-2的分泌量为857U(1×106*24h).异基因骨髓移植,共输入QXMSC1IL-2能明显增加BMT小鼠脾细胞对LPS、ConA的反应.脾细胞产生IL-2的能力增强.PFC数目增加,DTH反应增强.T细胞亚群中CD4+/CD8+的比例有所恢复.结论转入IL-2的骨髓基质细胞系可促进骨髓移植后免疫功能重建.     

Co-infusion of donor bone marrow with host mesenchymal stem cells treats GVHD and promotes vascularized skin allograft survival in rats

We investigated the effect of autologous mesenchymal stem cells (MSC) on multiple unmodified donor bone marrow (BM) infusions and vascularized skin graft outcome. BM-derived rat MSC were examined for phenotype and function. MSC/MSC-conditioned-medium suppressed IFN-γ production by T cells and modified DC function. Infusions of MSC with one-time BM improved vascularized skin graft survival, while with one–two-times BM reversed graft versus host disease (GVHD). Mixed chimerism was enhanced in recipients given two–four-times BM with MSC infusions. Interestingly, four-times BM infusions with MSC delayed GVHD onset, reduced host tissue damage and enhanced vascularized skin allograft survival compared to four-times BM alone. These data demonstrate that, the co-infusion of MSC with unmodified BM limit the toxicity of allogeneic BM transplantation, enhance mixed chimerism and improve vascularized skin graft survival. These findings provide insights for the development of autologous MSC-based BM transplantation and prevention of graft rejection or treatment of autoimmunity.     

可调控表达IL-2基因骨髓基质细胞促进异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建

目的　探讨可调控表达IL 2基因的骨髓基质细胞系对异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建的促进作用。方法　构建四环素诱导的表达小鼠IL 2基因的逆转录病毒载体 ,转染包装细胞PT6 7,感染骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建可诱导表达IL 2基因的工程化骨髓基质细胞系QXM SC1tet on IL 2。受体小鼠C5 7BL 6 (H 2 b)经γ射线致死剂量照射后 ,输入供体BALB c(H 2 d)骨髓细胞1× 10 7 只 (去除T细胞 ) ,同时输注骨髓基质细胞QXMSC1tet on IL 2 5× 10 5 只。灌服多西环素 (Dox)诱导IL 2表达。于骨髓移植 (BMT)后 30d、6 0d检测小鼠脾细胞对ConA的反应强度 ,空斑形成细胞(PFC)数和迟发型超敏反应 (DTH) ,脾细胞中T辅助细胞前体频数 (HTLp)及移植后小鼠脾脏T细胞亚群CD4 + CD8+ 的比值 ,评价BMT后免疫功能的恢复情况。结果　成功建立四环素诱导IL 2基因表达的基因工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet on IL 2。异基因BMT、联合输注QXMSC1tet on IL 2能显著提高BMT小鼠脾细胞对ConA的反应 ,增加脾脏淋巴细胞HTLp及PFC数目 ,并使DTH反应增强 ,改善小鼠脾脏T细胞亚群CD4 + CD8+ 的比值。结论　共输注可调控表达IL 2基因的骨髓基质细胞可促进异基因移植小鼠免疫功能重建。     

雌激素处理DCs在诱导小鼠同种皮肤移植免疫耐受中的作用

目的：研究雌二醇（17β-estradiol, E₂）处理的供体骨髓来源树突细胞（dendritic cells, DCs）在诱导小鼠同种异基因皮肤移植免疫耐受中的作用。方法：体外培养小鼠骨髓来源DCs，然后用E₂处理。受体小鼠在皮肤移植前经尾静脉分别输注经E₂处理的供体小鼠DCs、供体小鼠成熟DCs以及不成熟DCs，输注PBS为对照组。1周后对受体小鼠进行同种异基因皮肤移植，手术后观察皮肤存活情况，应用流式细胞术检测手术前后受体小鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞百分率的变化。结果：在同种异基因皮肤移植中，受体小鼠尾静脉输注经E2处理的DCs组与对照组和不成熟DCs组比较，移植皮肤存活时间显著延长，较不成熟DCs组存活时间平均延长10.6 d（P<0.01）；与对照组和不成熟DCs组比较，E₂处理组外周血中CD4+CD25+ 调节性T细胞百分率明显升高（P<0.01）。结论：在同种异基因小鼠皮肤移植模型中，E₂处理的供体小鼠DCs可以延长移植皮肤存活时间。