矢车菊素-3-葡萄糖苷诱导Hela细胞凋亡及其机制的研究

目的研究花色素苷与矢车菊素-3-葡萄糖苷对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖作用并从细胞学和分子生物学水平探讨其作用机制。方法从黑米中提取出花色素苷,再分离出矢车菊素-3-葡萄糖苷单体;用不同浓度的花色素苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷分别处理Hela细胞后,CCK-8法测细胞生长抑制率;Hoechst 33258染色,激光共聚焦镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测凋亡率;SABC染色检测Bax/Bcl-2的蛋白表达。结果25~400 mg/L花色素苷和12.5~200μmol/L矢车菊素可抑制Hela细胞生长,抑制率呈时间剂量依赖性;激光共聚焦镜下可见到明显的凋亡细胞;流式细胞仪检测药物处理后出现明显凋亡率;药物可使Bax表达上调,Bcl-2表达下降。结论花色素苷与矢车菊素-3-葡萄糖苷都可抑制Hela细胞生长,诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用的机制与凋亡相关基因促凋亡基因Bax表达上调,抗凋亡基因Bcl-2表达下调有关。     

复方木鸡冲剂对多种肿瘤细胞体外生长抑制作用的观察

目的研究复方木鸡冲剂在体外对不同组织来源肿瘤细胞的生长抑制作用。方法应用MTT法观察复方木鸡冲剂对多种肿瘤细胞的生长抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态的变化，流式细胞术分析细胞凋亡。结果复方木鸡冲剂对不同组织来源的多种肿瘤细胞有明显的生长抑制作用，并能使HL-60和HepG2细胞的凋亡率增加。结论复方木鸡冲剂在体外对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用，初步认为是通过诱导细胞凋亡实现的。     

科罗索酸上调Bax表达诱导宫颈癌细胞凋亡

目的探讨科罗索酸对宫颈癌细胞Hela的凋亡诱导作用。方法不同浓度(10～50μmol·L~(-1))科罗索酸处理宫颈癌Hela细胞,MTT法检测细胞活性,SPSS12.0统计软件包计算半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞术检测细胞凋亡,荧光检测法检测凋亡酶caspase-3活性,western blot检测细胞蛋白Bax、Bcl-2表达。结果科罗索酸抑制宫颈癌Hela细胞活性随药物浓度及时间的增加而增高,24、48及72 h的IC_(50)分别为45、34、28μmol·L~(-1)。科罗索酸诱导Hela细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01),凋亡酶活性也明显高于对照组(P<0.01),科罗索酸可上调Bax而不影响Bcl-2的表达。结论科罗索酸可抑制宫颈癌Hela细胞活性,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调Bax蛋白表达有关。     

康莱特联合阿霉素的体外抗肿瘤活性

目的探讨康莱特与阿霉素联合应用的体外抗肿瘤活性及其相关机制。方法将康莱特与阿霉素单独及联合应用于骨肉瘤细胞,采用MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,倒置相差显微镜、荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变。结果康莱特质量浓度达到1 g.L-1时,细胞抑制率不再明显改变,但如与1 mg.L-1阿霉素合用将使细胞抑制率进一步提升(P<0.01)。细胞形态观察及凋亡率测定也显示,康莱特与阿霉素联用可诱导更多骨肉瘤细胞凋亡。结论康莱特与阿霉素合用可高效杀伤肿瘤细胞。     

依地福新对Hela细胞生长的抑制作用及其机制研究

目的:观察依地福新对人宫颈癌Hela细胞的体外生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:细胞中分别加入不同浓度的依地福新(0.5、1.0、5.0、10.0μmol.L-1)处理96h,并设立未加依地福新的对照组。应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;染色法检测细胞凋亡率。结果:与对照组比较,不同浓度依地福新处理Hela细胞24～96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度及时间依赖性;1.0、5.0、10.0μmol.L-1浓度依地福新处理72h后,Hela细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:依地福新对Hela细胞具有生长抑制作用,其机制可能与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

两种新型卟啉化合物光动力体外抑癌作用的研究

目的:考察2种新型金属卟啉化合物(药物-A:四水合氯化-氯-二-2,2’-联吡啶(-5-吡啶基-10,15,20-三苯基卟啉)合钌(Ⅱ)(Ru(bpy)2TMPP)C12);药物-B:四水合氯化-氯-二-菲咯啉(-5-吡啶基-10,15,20-三苯基卟啉)合钌(Ⅱ)(Ru(phen)2TMPP)C12)),对人宫颈癌Hela细胞株的体外抗癌活性。方法:采用MTT法测定药物对Hela细胞增殖的影响;邻二氮菲-Fe2+氧化法测定药物对细胞清除羟自由基能力的影响;Giemsa染色法观察细胞形态学的改变。结果:药物-A、B抑制Hela细胞的最适宜条件为1×10-5mol/L培养48h并光照2h。随药物浓度升高肿瘤细胞的羟自由基清除能力相应下降,给光比避光作用更明显;Giemsa染色后光学显微镜下观察到给药后的细胞形态数目发生不同程度的变化,在最高浓度处可观察到大量细胞脱壁和细胞碎片浮起,凋亡细胞数量明显增多。结论:2种药物对Hela细胞均有杀伤作用,作用的强弱与给药的浓度和光照时间有关。     

骆驼蓬全草提取物的抗肿瘤作用

目的研究骆驼蓬全草的不同体积分数的乙醇的提取物Ⅰ(alcohol extractⅠ,AEⅠ)、Ⅱ(alco-hol extractⅡ,AEⅡ)和水提取物(water extract,WE)对人宫颈癌细胞Hela和人肺癌A549细胞的抑制作用。方法用体外细胞培养和MTT法检测骆驼蓬全草的不同体积分数的乙醇的提取物Ⅰ、Ⅱ和水提取物对Hela和A549细胞增殖的抑制作用。结果与结论AEⅠ、AEⅡ和WE对Hela细胞的半数抑制质量浓度分别为187.31、195.32、118.50 mg.L-1。AEⅠ、AEⅡ和WE对A549细胞的半数抑制浓度分别为243.76、225.65、123.99 mg.L-1。AEⅠ、AEⅡ和WE对Hela细胞和A549细胞均有抑制作用,其抑制作用的强度与药物质量浓度成正比,同质量浓度下WS的抑制作用最强。     

黄芪总苷的抑瘤作用及其作用机制

目的　探讨黄芪总苷的抗肿瘤作用及其作用机制。方法　采用小鼠肝癌 (HepA)和肉瘤 (S1 80 )两种小鼠移植瘤的动物模型 ,以瘤重抑制率作指标。体外采用人宫颈癌细胞株HeLa细胞 ,用MTT法测肿瘤细胞的生长 ,流式细胞术及TUNEL法检测细胞周期及细胞凋亡。结果　黄芪总苷显著抑制小鼠肝癌 (HepA)和肉瘤 (S1 80 )的生长 ;体外可显著抑制HeLa细胞的生长 ,使细胞周期阻滞于G0 /G1 期 ,并诱导其凋亡。结论　黄芪总苷对小鼠肝癌 (HepA)与肉瘤(S1 80 )具有抑瘤作用。对HeLa细胞的生长有直接抑制作用。其抗肿瘤作用可能与细胞周期阻滞于G0 /G1 期和诱导细胞凋亡有关     

中国圆田螺多糖对Hela细胞体外抑制作用的实验研究

目的初步研究中国圆田螺多糖对体外培养的人子宫颈癌细胞（Hela细胞）的抑制作用。方法采用水提法提取中国圆睚螺粗多糖。使用MTT法检测该多糖在不同浓度下对Hela细胞生长的抑制作用，用显微镜观察Hela细胞的形态变化。结果中国圆田螺多糖对Hela细胞有较显著的抑制作用，12．5ng／L时，细胞抑制率为7．37％，浓度为800ng／L时，细胞抑制率达64．83％。结论中国圆田螺粗多糖在体外可抑制Hela细胞增殖。     

D-24851衍生物YB-N12诱导Hela细胞凋亡及其机制

目的:研究D-24851衍生物YB-N12能否诱导宫颈癌细胞株(Hela细胞)发生凋亡及其作用机制。方法:对数生长细胞培养于24孔培养板内24h,给药组加入不同浓度的YB-N12,对照组加入与给药组等体积的DMSO的培养液,培养24h后检测细胞凋亡数。采用MTT、荧光显微镜检测凋亡细胞、DNA ladder方法进行凋亡检测,用RT-PCR方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化。结果:D-24851衍生物YB-N12在体外试验中对Hela细胞的杀伤力强,荧光显微镜观察到了凋亡小体,DNA ladder法检测到凋亡时DNA降解形成的梯带。在凋亡过程中,凋亡相关基因p53表达明显增加(P<0.05),而bcl-2表达下降(P<0.05)。结论:D-24851衍生物YB-N12能诱导Hela细胞发生凋亡,其机制可能与p53基因表达上调及bcl-2基因表达下调有关。     

rhIFN-a、rhIL-2与rhTNF-a体外协同抑制宫颈癌细胞的敏感性实验

目的:本研究旨在探讨干扰素-a(IFN-a)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF-a)单一、协同以及与化疗药物DDP的联合作用杀伤宫颈癌H e la细胞株的影响。方法:应用四M TT比色法检测与化疗药物DDP单独或联合应用组及药物作用的12h与24h的光密度值(OD),计算杀伤率。台盼蓝拒染计算杀伤率对照。结果:单独应用三种细胞因子时,IFN-a、TNF-a对宫颈癌H e la有细胞毒作用。IFN-a、IL-2、TNF-a联合作用具有协同作用,均与单一应用具有显著性差异(P<0.01)。细胞因子均可以增强顺铂(DDP)的抑瘤作用并与其作用的先后及时间具有依赖关系。结论:M TT比色法为临床肿瘤化疗的药物敏感性检测提供了简便、快速的方法。不同类型的肿瘤有着不同的药敏谱。干扰素-a(IFN-a)、肿瘤坏死因子(TNF-a)、白细胞介素-2(IL-2)与DDP联合具有协同作用,为宫颈癌病人化疗提供了理想的参考方案。     

miR-101下调c-met的表达提高宫颈癌干细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的 探讨miR-101与宫颈癌干细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的关系并研究其机制。方法 流式细胞术分选Hela细胞系的肿瘤干细胞。荧光定量PCR检测Hela肿瘤干细胞中miR-101的表达水平。MTT法检测Hela肿瘤干细胞在5-氟尿嘧啶和miR-101处理下的细胞活力。Western blot试验检测5-氟尿嘧啶和miR-101对Hela肿瘤干细胞c-met表达水平,PI3K、AKT磷酸化水平及caspases 活化水平的影响。流式细胞术检测Hela肿瘤干细胞在5-氟尿嘧啶和miR-101处理下的凋亡率。结果 Hela干细胞中miR-101的表达水平相较Hela非干细胞细胞显著下降。Hela干细胞转染miR-101后,其对5-氟尿嘧啶的敏感性显著上升。Western blot试验显示miR-101能显著降低Hela肿瘤干细胞的c-met蛋白表达水平,表明c-met是miR-101的靶点。western blot流式细胞实验结果表明在Hela肿瘤干细胞中,miR-101通过下调c-met的表达抑制PI3K和AKT的磷酸化,从而提高Hela肿瘤干细胞对5-氟尿嘧啶依赖的凋亡信号的敏感性,促进caspase-9和caspase-3的活化。结论 miR-101通过下调c-met的表达提高宫颈癌干细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性。     

双黄连抑制甲1型流感病毒诱导细胞凋亡的机制研究

目的:研究双黄连抑制甲1型流感病毒诱导细胞凋亡的机制。方法:将宫颈癌(Hela)细胞分成4组:病毒对照组、实验组、细胞对照组、药物对照组,采用流式细胞术计算细胞凋亡的百分率。结果:实验组细胞凋亡的百分率与病毒对照组比较有非常显著性差异(P<0.01)。结论:双黄连可抑制甲1型流感病毒诱导Hela细胞凋亡。     

线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分诱导KG1a细胞凋亡中的作用

目的研究线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分(naja naja actra venom component,NNAVC)诱导KG1a细胞凋亡过程中的作用。方法以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象,采用Annexin V-FITC/PI荧光染色法进行凋亡细胞的形态学观察,流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的活性,ELISA法检测胞质内细胞色素C的表达水平,流式细胞仪分析TRAIL死亡受体(DR4、DR5)和诱骗受体(DcR1、DcR2)的改变。结果 NNAVC作用后,荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞,细胞凋亡率随药物作用浓度的增加而升高;Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3蛋白被激活,胞质内细胞色素C的表达明显增加;流式细胞仪检测结果显示,NNAVC具有降低死亡受体DR4和诱骗受体DcR1的表达率,而提高DR5和DcR2的表达水平的作用。结论线粒体凋亡通路和死亡受体通路均参与NNAVC诱导KG1a细胞凋亡的过程,这可能是NNAVC发挥抗白血病作用的机制之一。     

Effect of delta-elemene on Hela cell lines by apoptosis induction

This study was designed to investigate the apoptosis-inducing activity of delta-elemene on Hela cells in vitro. MTT assay and Hoechst 33258/PI fluorescence microscopy were used for this investigation. Apoptosis was further confirmed and quantified by DNA fragmentation ELISA, Annexin V (AnV) binding of externalized phosphatidylserine and the mitochondrial probe JC-1 using flow cytometry. Generation of reactive oxygen species (ROS) was detected using CM-H2DCFDA. Western blots analysis was performed using antibodies against the pro-caspase-3, or PRAP (Poly (ADP-ribose) polymerase).The results showed that delta-elemene exhibited a marked antiproliferative effect on Hela cells in dose- and time-dependent manners, and had little inhibition to normal human liver cell line WRL-68. It was demonstrated that delta-elemene was capable of inducing DNA fragmentation in a dose- and time-dependent manner. AnV positivity and the disturbance of the polarized mitochondrial transmembrane potential (Deltapsim) suggested that delta-elemene induced apoptotic death of Hela cells. Western blot analysis demonstrated that delta-elemene activated the caspase-signaling pathway, leading to the proteolysis conversion of pro-caspase-3 to activate caspase-3, and the subsequent cleavage of the caspase substrate PARP. Further, it was noted that the apoptotic effect of delta-elemene could be attenuated by L-Glutathione (GSH) or z-DEVD-fmk. It suggested that the increase in ROS generation might be involved in the mechanism of delta-elemene induced cell apoptosis.     

4(3H)-喹唑啉酮衍生物的合成及体外抗肿瘤活性

将6-溴甲基-2-甲基-4(3H)-喹唑啉酮在无水磷酸钾存在下与二硫化碳以及不同的胺反应，合成了一系列具有二硫代氨基甲酸酯侧链的4(3H)-喹唑啉酮衍生物，其结构经ESI-MS，¹H NMR，元素分析或HRMS所证实。采用MTT法测定了目标化合物8a~8q对人慢性髓性白血病K562细胞和人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性，结果表明化合物8q对K562和Hela细胞的体外生长具有显著的抑制作用，IC₅₀值分别为0.5和12.0 μmol·L^-1，因而可作为抗肿瘤药物研究的先导化合物。     

苯丁酸钠对SHG-44 胶质细胞瘤株的抗肿瘤作用机制研究

目的观察苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用的机制是否涉及调节ASIC2的表达。方法体外培养人脑胶质细胞瘤株SHG-44,平皿克隆形成法测定细胞描定依赖性生长能力,PI染色流式细胞术（Flow cytometry,FCM）分析细胞周期和凋亡率,Hoechst33258染色荧光显微镜观察凋亡细胞的形态,Western Bloting分析药物对ASIC2蛋白表达的影响。结果平皿集落形成法检测显示苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用,且呈浓度依赖性。PI染色FCM结果表明苯丁酸钠以时间和浓度依赖方式对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用。Hoechst33258染色荧光显微镜观察可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染,与对照组相比,苯丁酸钠处理后凋亡细胞比例增加,且呈时间和浓度依赖性。Western Bloting检测显示苯丁酸钠诱导细胞凋亡的机制涉及上调ASIC2表达。结论苯丁酸钠在体外对人脑胶质细胞瘤株SHG-44具有抑制增值的作用,初步推断苯丁酸钠诱发人脑胶质细胞凋亡与其上调ASIC2表达有关。     

TNFα and Fas/FasL pathways are involved in 9-Methoxycamptothecin-induced apoptosis in cancer cells with oxidative stress and G2/M cell cycle arrest

9-Methoxycamptothecin (MCPT) has been recently reported to have a strong anticancer activity. However, its detailed mechanism of action in human cancer cells has not been well clarified. The results showed that MCPT induced cytotoxicity in seven human cancer cell lines in a dose dependent manner after 72 h, with A2780 and Hela cell lines more sensitive, so the two cell lines were chosen to do further studies. MCPT induced strong G₂/M arrest in both A2780 cells and Hela cells after 24 h, following by substantial sub-G1 arrest (indicating apoptosis). The apoptosis was verified by staining with Annexin V-FITC and propidium iodide. ROS generation increased significantly in MCPT-induced apoptosis. Meanwhile, the apoptosis appeared to be dependent on caspase-3, -8 and -9 in A2780 cells, and caspase-3 in Hela cells. In addition, MCPT induced up-regulation expression of most of seventeen genes in both cell lines. Western blot verified that changes of TNFα, Fas, P53 and P27 protein level were consistent with their gene expression changes. Taken together, MCPT plays an important role in tumor growth suppression by inducing apoptosis in both cell lines via extrinsic and intrinsic apoptotic pathways, and has the potential to be developed into an antitumor agent.     

二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞凋亡及机制

目的　探讨二烯丙基二硫 (DADS)诱导人白血病HL 6 0细胞凋亡的生物学效应及抗肿瘤机制。方法　通过MTT还原法检测DADS对该细胞系生长的影响 ;用电镜、荧光显微镜、流式细胞仪和细胞凋亡原位检测 (TUNEL)研究DADS诱导的细胞凋亡。SP免疫组化法检测细胞内Bcl 2、Bax蛋白的表达。结果　DADS能抑制HL 6 0细胞的生长 ,DADS处理HL 6 0细胞后 ,电镜下细胞呈凋亡特征性改变 :体积变小 ,核浓缩 ,凋亡小体形成 ,流式细胞仪示不同浓度DADS作用于HL 6 0细胞 ,亚G1期细胞明显增多 ,TUNEL测凋亡指数增加。SP免疫组化结果表明 10mg·L-1DADS处理细胞 2 4h后 ,Bax蛋白表达升高 ,Bcl 2蛋白表达下降。结论　DADS有诱导人白血病HL 6 0细胞凋亡的作用 ,其机制与Bcl 2 /Bax比例下降有关。     

反应停的抗新生血管形成及抗肿瘤作用研究

目的　研究反应停的抗新生血管形成及抗肿瘤作用。方法　在HUVECs中MTT法检测细胞活性,电镜观察细胞死亡类型,流式细胞仪定量细胞凋亡率;用鸡胚尿囊膜模型观察新生血管形成;肉瘤S180小鼠体内模型观察反应停的抗肿瘤作用,并通过免疫组化观察反应停对肿瘤组织微血管数的影响。结果　反应停对HUVECs有直接抑制作用,IC50为(22 .91±1. 74) μmol·L-1;经反应停作用48h后的HU VECs,随剂量增加,电镜下可见核不规则,染色体浓集,空泡状内质网及凋亡小体等不同时期细胞凋亡现象;流式细胞检测显示反应停可依剂量诱导HUVECs凋亡或坏死;鸡胚尿囊膜新生血管形成模型中,反应停抑制新生血管形成的阳性率随剂量而增加;小鼠S180肿瘤移植模型中,反应停单独使用,虽可明显减少肿瘤血管密度, 无抑制肿瘤生长作用;与环磷酰胺联合使用,可减少环磷酰胺用量,与环磷酰胺有协同抗肿瘤作用。结论　反应停有抗新生血管形成作用,单独应用对小鼠S180肿瘤无抑制作用,但与环磷酰胺有协同作用。