用双部位酶联免疫吸附试验鉴定感染疟原虫的蚊媒

鉴于应用免疫放射试验(IRMA)检测蚊体内子孢子要有较复杂的条件设备,本文报导试用双部位酶联免疫吸附试验(ELISA)微量法进行检测子孢子的研究。抗原为子孢子阳性蚊,以大劣按蚊叮咬感染诺氏疟原虫(H株)的恒河猴或弗氏按蚊叮咬感染伯氏疟原虫(ANKA株)的仓鼠后14～16天将蚊杀死而得,置室温干燥器内保存8周后使用。抗血清为对诺氏疟原虫子孢子特异的单克隆抗体(2G3),先以DEAE-Se-     

以单克隆抗体鉴定三日疟环子孢子蛋白质及检测巴氏疟原虫子孢子共有的抗原决定簇

本文报道以抗三日疟原虫子孢子单克隆抗体鉴定同种疟原虫的环子孢子蛋白质和研究三日疟原虫与猴巴氏疟原虫两者间的关系。以弗氏按蚊叮咬感染了三日疟的夜猴,吸血后15～21天解剖唾腺获得子孢子,经多次静脉接种免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与浆细胞瘤细胞融合得杂交瘤细胞,从接种杂交瘤小鼠腹水提纯单克隆抗体(MoAB 6BlO)。环子孢子蛋白质鉴定,以低温贮存的IFAT滴度1:≥50,000、活的三日疟子孢子直接放入于含2%SDS、10%甘油、     

以间接免疫荧光试验或免疫过氧化物酶抗体试验检测体外培养的伯氏疟原虫红外期的血清反应性

以有人胎肺细胞的盖玻片置于含10%小牛血清的NCTC-135培养基培养至细胞生长接近汇合成片时,加入按蚊唾腺的伯氏疟原虫子孢子,放5%CO_2培养箱中37℃孵育,于不同时间,取培养物用Hanks缓冲盐水(HBSS)洗涤,以冷甲醇固定,再以HBSS洗后即成培养的红外期抗原片,存4℃备用。经84拉德~(60)Co照射的伯氏疟原虫子孢子,按每次30,000个子孢子的剂量静脉免疫小鼠3次,获得与红细胞期无交叉反应的抗子孢子血清。用氯喹控制小鼠的感染,取得抗红细胞期的血清。单克隆抗体有二:其一是能与伯氏疟原虫子孢子保护性表面抗原(Pb44)反应的,腹水液纯化的IgG_1,在体内可中和子孢子感染;另一种是能与子孢子表面抗原相反应并     

大劣按蚊对约氏疟原虫敏感性的观察

以斯氏按蚊传代保种的约氏疟原虫(BY265株)接种小鼠后第3、4天感染大劣按蚊,涎腺感染率为4.88％,进腺子孢子数少于10个。约氏疟原虫经过大劣按蚊传代后,大劣按蚊的涎腺感染率明显增高。感染蚊传3、4、6和7代首次血传的疟原虫,涎腺感染率分别为31.7％(13/41)、70％(14/20)、6.9％(2/29)和30％(6/20)。以含有第6代子孢子的大劣按蚊叮咬小鼠,能使鼠获得感染,第7代疟原虫感染的大劣按蚊涎腺内子孢子数可超过2,000个。结果表明约氏疟原虫对大劣按蚊有逐渐适应的能力。     

老挝占巴塞省按蚊种类及其疟原虫子孢子感染情况调查

目的对老挝占巴塞省按蚊种类及其疟原虫子孢子感染情况进行调查,为当地疟疾防治措施的制定与评估提供参考。方法2017年7月在老挝占巴塞省巴通坡县采用诱蚊灯通宵诱蚊法和通宵人诱法进行捕蚊,对捕获的成蚊进行形态学鉴定,取部分雌性按蚊提取基因组DNA,巢式PCR检测恶性疟原虫和间日疟原虫的18S rRNA基因,计算按蚊疟原虫子孢子阳性率。结果共捕获蚊虫34 687只,分属库蚊、按蚊和伊蚊等8个属的29个种。库蚊属为当地优势属,占捕获蚊虫总数的92.6%(32 110/34 687);其次是按蚊属,占5.6%(1 947/34 687)。迷糊按蚊是按蚊属的优势种,占该属的65.5%(1 275/1 947);其后是可赫按蚊,占12.1%(235/1 947);菲律宾按蚊,占11.9%(232/1 947);中华按蚊,占5.1%(100/1 947)。巢式PCR共检测按蚊336只(可赫按蚊234只、中华按蚊100只和大劣按蚊2只), 8只按蚊间日疟原虫子孢子阳性,阳性率为2.4%(8/336)。其中,可赫按蚊子孢子阳性6只,阳性率为2.6%(6/234);中华按蚊子孢子阳性2只,阳性率为2.0%(2/100);均未检测到恶性疟原虫子孢子。巢式PCR扩增片段长120 bp,其序列与间日疟原虫序列(GenBank登录号为:KT991325、 KT991317、 MG708221、 MF540772、 LT635613、 KU569498、 AF145335、 KT991314和KX007932)的同源性为99%～100%。结论老挝占巴塞省捕获的可赫按蚊和中华按蚊存在间日疟原虫子孢子自然感染,且阳性率均较高。     

钴~(60)照射对斯氏按蚊体内伯氏疟原虫子孢子的发育与免疫原性的影响

为了确定伯氏疟原虫、斯氏按蚊与小鼠系统作疟疾子孢子免疫的实验研究的可能性,本文观察了钴(60)照射对蚊体内子孢子的发育与免疫原性的影响。实验使用伯氏疟原虫ANKA株、斯氏     

荧光定量PCR用于按蚊体内疟原虫子孢子检测的研究

目的 建立一种用于按蚊体内疟原虫子孢子定量检测和虫种鉴别的荧光定量PCR方法。方法 采用针对4种人体疟原虫18S rRNA基因属特异性保守区的1对引物, 以疟原虫18S rRNA基因重组质粒与按蚊DNA的混合物为模板, 进行反应体系和反应条件优化, 验证方法的特异性, 并通过熔解曲线分析进行虫种鉴别。应用阴性按蚊DNA稀释的间日疟原虫18S rRNA基因重组质粒为模板制作标准曲线, 并分别以质粒DNA和实验室子孢子感染阳性的按蚊DNA为模板分析建立的荧光定量PCR方法的敏感性。在反应体系中加入不同部位、 不同用量按蚊DNA, 以探讨按蚊DNA对检测效果的影响。结果 该方法对按蚊、 人血DNA均无扩增, 对4种疟原虫DNA均有特异性扩增且扩增产物的熔解温度 （Tm） 易于区分, 三日疟原虫、 恶性疟原虫、 卵形疟原虫和间日疟原虫的Tm值分别为71.0、 72.7、 73.9 ℃和75.9 ℃。标准曲线中循环阈值（Ct值） 与模板浓度具有良好的相关性 （相关系数r = -0.99）。最低可以检出含50拷贝的质粒DNA或32倍稀释的子孢子阳性按蚊DNA样本。按蚊DNA对荧光定量PCR反应具有抑制作用。荧光定量PCR的Ct值在实验内和实验间均具有良好的重现性。结论 新建立的SYBR Green I染料荧光定量PCR方法具有较高的敏感性和特异性, 可用于按蚊体内疟原虫子孢子的检测, 并可同时对4种人体疟原虫进行鉴别。     

用放射免疫法检测库态按蚊A种和B种对间日疟和恶性疟原虫的敏感性

库态按蚊为印度大部分地区及其邻国的重要传疟媒介。本文用双位点放射免疫法(IRMA)和种特异性的抗子孢子单克隆抗体(MAb)检测印度北方邦西部库态按蚊复合体中A种和B种传播疟疾的程度。在北方邦西部选择库     

ELISA检测云南按蚊环子孢子蛋白的评价

目的　采用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测疟疾媒介按蚊环子孢子蛋白(CSP),评价ELISA用于云南疟疾媒介按蚊传疟效能调查的可行性。　方法　现场捕获疟疾媒介按蚊经产蚊,每只蚊镜检3叶唾腺子孢子感染率,ELISA检测另3叶唾腺CSP;用含间日疟原虫配子体的患者血人工喂饲微小按蚊,11d后同法镜检唾腺子孢子感染率及ELISA检测唾腺CSP。在种植场捕获8种按蚊(微小按蚊、中华按蚊、多斑按蚊、迷糊按蚊、可赫按蚊、带足按蚊、菲律宾按蚊和须喙按蚊 )各龄成蚊,ELISA检测唾腺CSP。　结果　①现场捕获经产蚊1010只,镜检唾腺子孢子阳性7只,阳性率为0.69%;ELISA检测唾腺CSP阳性8只,阳性率为0.79%;其中6只蚊两项检测均为阳性,阳性率为0.59%。两法比较,差异无显著性意义(P>0.05)。②人工感染36只微小按蚊,镜检唾腺子孢子阳性27只,阳性率为75.0%;ELISA检测唾腺CSP阳性29只,阳性率为80.6%;其中有26只蚊两项检测(Pv2 10CSP)均阳性,阳性率为72.2%。两法比较,差异无显著性意义(P>0.05)。③种植场捕获8种按蚊各龄成蚊4675只,ELISA检测唾腺CSP阳性11只,阳性率为0.24%;其中Pv210阳性9只,Pf2A10阳性2只;微小按蚊、中华按蚊和多斑按蚊ELISA检测阳性     

老挝丰沙里省岳乌县疟疾流行情况调查

目的调查老挝丰沙里省岳乌县疟疾流行情况,为当地消除疟疾措施的制定提供依据。方法选取老挝丰沙里省岳乌县Loum村,采用诱蚊灯采集蚊虫,采用巢氏PCR方法检测疟疾主要媒介按蚊感染疟原虫子孢子;采集岳乌县当地居民滤纸血,采用巢式PCR法检测疟原虫感染情况。结果共捕获按蚊9种1 735只,其中,中华按蚊占捕获按蚊总数的87.67%(1521/1735),属于当地优势按蚊蚊种,密度为31.69只/(灯·夜)。中华按蚊间日疟子孢子阳性率0.52%(7/1340),微小按蚊间日疟子孢子阳性率75%(3/4)。当地健康人群疟原虫带虫率0.23%(1/433)。结论老挝岳乌县疟疾媒介种类丰富,疟疾带虫率较高,健康人群有疟原虫感染,存在疟疾暴发或流行风险,建议当地卫生部门加强对疟疾媒介及病例的监测。     

酶联免疫吸附试验用于检测和鉴别人疟媒介内的子孢子

昆虫学家判定疟疾媒介历来以在其唾腺内发现子孢子为依据,此法操作烦琐且在现场鉴定的标本数量受到限制,更主要的是发现子孢子后仍难以根据形态鉴别疟原虫的虫种,其结果也不可靠。用酶联免疫吸附试验(ELISA)则可解决不少问题。1985年美国的纽约大学,Walter Reed陆军研究所及海军医学研究所合作,制成抗恶性疟原虫和间日疟原虫(子孢子)的环子孢子蛋白质的单克隆抗体(IgG)。其中的2A10与NMR1-3分别在抗恶性疟和间日疟子孢子时显示有较高的敏感性与特异性。目前用此法已能检测带有     

云南省边境地区景洪市疟疾媒介调查

目的了解云南省边境地区景洪市疟疾重要传播媒介的按蚊种类、生态习性及其疟原虫子孢子感染情况。方法于2015年在景洪市选取1个历史上疟疾流行高发村曼辉龙村为调查点,6-10月每月捕蚊3 d。在调查点东、西、南、北、中5个方位各选择1户人房和畜房,采用灯诱法通宵捕捉按蚊,调查按蚊种群密度;多重PCR检测按蚊胃血,观察其嗜血习性。选择村内和村外各1处采用帐诱法捕捉按蚊,观察按蚊夜间活动规律;采用巢式PCR检测按蚊疟原虫子孢子感染情况。结果共捕获1 286只按蚊,属13种,其中中华按蚊936只(占72.8%),微小按蚊188只(占14.6%),为当地按蚊优势蚊种。按蚊的捕获来源地主要为畜房,占85.6%(1 101只)。125份中华按蚊胃血多重PCR检测结果显示,人血指数为0,猪血指数为100。中华按蚊村内叮人率为0.6只/(人·h),村外的叮人率为0.2只/(人·h),夜间活动高峰期为20∶00-22∶00。101只微小按蚊、 517只中华按蚊和40只多斑按蚊巢式PCR检测,均未发现疟原虫子孢子感染。结论景洪市按蚊媒介种群以中华按蚊为主,其次为微小按蚊。中华按蚊以嗜家畜血为主。捕获的按蚊中未检测到疟原虫子孢子感染。     

感染恶性疟原虫或间日疟原虫蚊体内子孢子和环子孢子抗原的定量测定

准确地估计蚊虫体内疟原虫子孢子的数量对于疟疾的监测、预防和媒介控制都是非常必要的。目前使用的蚊虫体内子孢子数量测定法是定量环子孢子(CS)ELISA试验。该法快速、准确,具有种特异性。但近年来的实践证明,该法需要改进。为使目前用于恶性和间日疟原虫子孢子定量检测的CS ELISA法试剂标准化,以及进一步确定蚊虫体内CS抗原量与子孢子数之间的相关性,开展了双抗体夹心法ELISA定量测定恶性疟原虫(Pf)、间日疟原虫(Pv210)和Pv247CS抗原和子孢子的研究。抗Pf、Pv210和Pv247CS抗原的单克隆抗体(MAb)来自WHO疟疾子孢子参考实验…     

抗疟药对体外猴疟原虫和诺氏疟原虫红外期的作用

疟原虫进入肝实质内是其生活史中一个不可缺少的阶段。鉴于间日疟和卵形疟可于初次感染后数月复发,因此,研究抗疟药对肝期疟原虫的作用有重要意义。子孢子由吸血感染猴疟原虫或诺氏疟原虫的恒河猴的蚊内取得。猴疟原虫巴氏亚种和猴疟原虫柬埔寨株的子孢子源于斯氏和德氏按蚊。诺氏疟原虫H株的子孢子从德氏按蚊内分离。按蚊血餐12～22天后,无菌解剖     

双抗体酶联免疫吸附试验鉴定感染恶性疟原虫的蚊虫

本文介绍应用双抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)微量法检测感染恶性疟原虫的蚊虫子孢子。试验所用具有种特异性的单克隆抗体(1G3.4)系以南美的恶性疟原虫子孢子提纯后免疫BALB/C小鼠,取得脾细胞,与骨髓瘤细胞融合得杂交瘤细胞,自接种小鼠的腹水分离获得。并按同法制备一非种特异性的单克隆抗体(2F1.1)与辣根过氧化物酶结合     

埃塞俄比亚西部甘贝拉恶性疟疾的寄生虫学和昆虫学观察的综合评价

1967～1969年在甘贝拉镇进行疟疾传播动力学的昆虫学研究,调查了媒介种群数量、季节分布、叮人习性、子孢子率和当地优势种生态。证实阿拉伯按蚊、致死按蚊和尼利按蚊是传疟媒介。居民疟原虫调查表明,1967～1969年子孢子攻击高峰后3个月,儿童(15岁以下)和成人(15岁以上)恶性疟原虫感染率分别为58％和35％,三日疟为16％和7％,卵形疟和间日疟很少见。恶性疟感染率以3～9岁儿童最高,15岁以上则明显降低。     

伯氏疟原虫两个主要抗原在斯氏按蚊内表达的动态

伯氏疟原虫动合子表面抗原(Pbs21)是在雌配子内合成。配子生殖开始后10h在未成熟的动合子表面达到高峰。该抗原能与单克隆抗体MAb13.1发生特异反应。环子孢子蛋白(CSP)则是子孢子的主要蛋白由成熟子孢子合成。存在于所有的疟原虫属原虫中。该蛋白能特异地与单克隆抗体MAb8.1反应。目前对疟原虫蚊内期抗原的生化特性、结     

发作期与间歇期间日疟原虫在不同按蚊体内发育差异的研究

目的  比较临床发作期与间歇期间日疟原虫在中华按蚊和嗜人按蚊体内发育的差异。方法在我国间日疟流行区分别采集临床发作期与间歇期间日疟病例的血样，采用体外人工膜饲感染系统在实验室同时体外人工感染中华按蚊和嗜人按蚊，在感染后7～9 d和14 d分别解剖蚊胃和唾液腺，并检测蚊体内的卵囊和子孢子数。结果临床发作期间日疟原虫感染中华按蚊的卵囊阳性率和阳性蚊比率、子孢子阳性蚊比率和感染度均低于间歇期间日疟原虫感染，临床发作期间日疟原虫感染嗜人按蚊的子孢子阳性率、阳性蚊比率和卵囊阳性蚊比率均低于间歇期间日疟原虫感染，而子孢子感染度则高于间歇期疟原虫感染。结论临床发作期与间歇期间日疟原虫体外人工感染中华按蚊、嗜人按蚊卵囊和子孢子有差异     

抗人间日疟原虫子孢子单克隆抗体的研制及初步鉴定

为了准确快速地检查子孢子,提高媒介按蚊的检测水平,我们开展了抗人间日疟原虫(P.V)子孢子单克隆抗体(McAb)的研制,经过克隆培养筛选,获得了8株抗人P.V子孢子McAb的杂交瘤细胞株,并制备了抗体效价高、特异性强的McAb。材料和方法一、抗原制备抗原为人P. V子孢子。采集P.V病人血,膜饲中华按蚊,于第15d处死蚊子,用玻璃棉套管离心法收集子孢子,用白细胞计数板计数,-20℃保存备用。二、动物免疫和免疫脾细胞的制备用收集的子孢子,免疫10周龄的BALB/c小鼠三次,每次用子孢子10～12万条,每次间隔10～14d,于融合前3d加强     

疟原虫在人体内的发育增殖

疟原虫在人体内发育增殖分为2个时期,即寄生于肝细胞内的红细胞外期和寄生于红细胞内的红细胞内期。红细胞外期(exoeryghrocytic stage)当受染的雌性按蚊吮吸人血时,疟原虫子孢子随蚊唾液进入人体血液循环,约半小时全部侵入肝细胞,速发型子孢子即进行裂体增殖,迟发型子孢子则进入休眠状态,在肝细胞内裂体增殖的疟原虫,经过5～40 d发育成熟,胀破肝细胞逸出成千上万的裂殖子(merozoite)进入血流,进入血流的裂殖