淡色库蚊对残杀威抗性与酯酶和乙酰胆碱酯酶的关系研究

目的研究淡色库蚊对残杀威抗性与酯酶和乙酰胆碱酯酶的关系。方法WHO浸渍法检测蚊虫抗性指数;分光光度法检测羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性。结果使用残杀威对淡色库蚊野外品系进行筛选,筛选8代后抗性指数由原来的4.77倍上升至12.07倍。对敏感品系和抗性品系分别进行羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性测定,二者的羧酸酯酶活性差异无统计学意义(P>0.05),而二者的乙酰胆碱酯酶活性在高浓度残杀威抑制浓度(100×10-6、10×10-6、1×10-6)下,抑制率敏感品系分别为(93.92±0.65)%、(91.69±0.54)%和(87.03±1.14)%,抗性品系分别为(89.81±0.92)%、(87.41±1.66)%和(83.84±0.36)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论羧酸酯酶在对残杀威的抗性形成中作用较小,而乙酰胆碱酯酶的敏感性降低与抗性品系的抗性形成有关。     

酯酶显色法快速检测尖音库蚊对有机磷的抗性

目的开发能够快速检测野生尖音库蚊种群对有机磷杀虫剂的抗性水平及靶标抗性的试剂盒。方法根据蚊虫抗药性的生化和分子机制,通过建立不同抗性水平的品系,将经典的羧酸酯酶显色与抗性水平对应起来;根据G119S突变导致的不敏感乙酰胆碱酯酶1对不同浓度残杀威抑制的反应,建立靶标抗性与显色反应的关系。结果制备了反映不同有机磷抗性倍数的羧酸酯酶滤纸显色卡,可以快速、简便的检测野生尖音库蚊种群的有机磷抗性水平;建立了用肉眼就可辨别的乙酰胆碱酯酶显色反应体系,快速检测种群中是否存在靶标抗性及其基因型。结论为我国蚊虫抗性检测和预警工作提供了方便、简洁而有效的工具。     

蚊虫抗药性分子机制研究进展

蚊虫是重要的医学昆虫,可以通过叮咬传播疾病(例如疟疾、丝虫病、登革热等),其行为与人类生活息息相关.由于长久以来大量、广泛地使用杀虫剂,使蚊虫抗性日益严重.蚊虫的抗性机制主要有靶标抗性(包括神经轴突钠离子通道、乙酰胆碱酯酶和γ-氨基丁酸受体氯离子通道的突变)和代谢抗性(包括非特异性羧酸酯酶、细胞色素P450和谷胱甘肽-S-转移酶的活性增加)两方面.现对这些机制的研究进展进行综述,试图全面了解大量、广泛使用杀虫剂之后蚊虫抗性产生的分子机制.     

蚊虫羧酸酯酶活力与有机磷杀虫剂抗性关系的初步研究

本文报道了作者测定的桂林致泛库蚊及白纹伊蚊对敌百虫的敏感度以及这二种蚊虫成虫和幼虫的羧酸酯酶活力。发现其抗性与羧酸酯酶活力有平行关系。致泛库蚊的抗性系数是1983年的3倍,是其敏感品系(S 品系)的39倍,其成虫及幼虫的酶活力 O.D 值/每虫大于0.7的百分率分别为56.9%及46.3%;白纹伊蚁对敌百虫的 LC_(50)值虽比致泛库蚁小,但仍为 S 品系的3倍,其成虫及幼虫的酶活力 O.D 值/每虫大于0.7的百分率分别为15.4%及13.8%,大于0.3的百分率分别为20.0%及50.0%.以酯酶活力强弱推测抗性大小时,应作具体分析。酯酶活力的测定在媒介抗性测定中较生物测定简便、快速。     

淡色库蚊酯酶A2探针应用于现场抗性检测的研究

目的制备淡色库蚊酯酶A2探针,应用于现场蚊虫抗性检测。方法设计酯酶A2上下游引物,5′端地高辛标记,PCR法制备DNA探针并对扩增片段测序、分子杂交检测各现场蚊虫抗性。结果单蚊基因组DNA稀释至1/20时,抗性与敏感品系杂交点的阳性率有差别。应用酯酶A2探针检测各现场蚊虫,唐口种群的杂交阳性率为33%,微山种群的杂交阳性率为38%,滕州种群的杂交阳性率为56%。结论应用酯酶A2探针能够检测现场蚊虫抗性水平。该方法灵敏、可靠,为蚊虫有机磷杀虫剂抗性分子生物学检测提供了选择。     

不同地理种群尖音库蚊复组杀虫药剂抗性及抗性酯酶

目的研究海南省三亚及海口市,广西壮族自治区南宁市、环江县,辽宁省葫芦岛市的尖音库蚊复组蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性水平及与抗性有关的酯酶.方法生物测定和淀粉电泳技术.结果三亚市尖音库蚊复组蚊虫种群对DDVP、对硫磷、毒死蜱、邻仲丁基苯基甲基氨基甲酸酯和残杀威的抗性分别是敏感品系S-LAB的20.5、10.0、4.7、1.7、3.9倍;海口市尖音库蚊复组蚊虫种群对以上5种杀虫药剂的抗性分别是敏感品系S-LAB的8.3、6.6、2.5、1.7、3.7倍,略低于三亚市蚊虫种群对5种杀虫药剂的抗性水平;广西壮族自治区的2个种群的抗性非常低或未产生抗性;葫芦岛种群已产生中、低抗性;淀粉凝胶电泳显示海南省以抗性酯酶A2-B2为主,葫芦岛市以B1为主,广西壮族自治区的2个种群酯酶基因呈现多态现象.结论5个地区蚊虫对所测杀虫剂均产生中、低抗性,对有机磷的抗性大于氨基甲酸酯类,高活性酯酶是主要的抗性机制.     

美洲大蠊消化道组织酯酶同工酶的研究(摘要)

酯酶在昆虫对有机磷抗性中的重要作用,是近十几年来昆虫毒理和昆虫生化学界共同关注的一个新课题。Sudderuddin、Motoyama等证实了许多抗有机磷杀虫剂的昆虫的抗性与酯酶活力的增加有关,尤以羧酸酯酶的量或质的变化更为重要。姜家良等也报道了羧酸酯酶的活力与淡色库蚊对敌百虫的抗性程度有     

白纹伊蚊不同种群羧酸酯酶生化性质差异研究

目的比较白纹伊蚊抗溴氰菊酯品系和敏感品系羧酸酯酶(CarE)生化性质的差异,初步探讨其生化抗性机制。方法参照van Aspern(1962)的方法测定活性。结果敏感品系CarE与抗性品系CarE对α-NA的亲和力基本相似,前者对β-NA的亲和力大于后者。2个品系CarE对2种底物的水解趋势一致,抗性品系对2种底物的水解活性均高于敏感品系。结论羧酸酯酶与白纹伊蚊溴氰菊酯抗性有密切关系。     

不同品系蚊虫乙酰胆碱酯酶的活性及其对抑制剂敏感性的研究

目的：本研究根据乙酰硫代胆碱-二硫双硝基苯甲酸法的原理，检测不同品系单个蚊虫的乙酰胆碱酯酶(AchE)的活性，并且应用残杀威杀虫剂作为抑制剂对各品系蚊虫的敏感性进行探讨；方法：采用微板法；结果：敏感品系和抗性品系蚊虫的AchE活性有较大差别，敏感品系蚊虫的AchE可被一定量的杀虫剂抑制。而抗性品系的AchE则不被抑制；结论：测定单个蚊虫AchE的活性及其对抑制剂的敏感性，能够区分敏感蚊虫和抗性蚊虫，对于抗性蚊虫个体的生物化学检测具有重要意义。     

杭州淡色库蚊抗性及酯酶活性测试

目的：用淀粉电泳酯酶谱区别酯酶，检测淡色库蚊成蚊个体酯酶，并结合对幼虫的生物测试结果，探讨抗性生化机制及防制对策。方法：幼虫的生物测试采用浸渍法，成虫的非特异性酯酶测试采用淀粉电泳法。结果：淡色库蚊对氯氰菊酯抗性最高，是敏感品系的12.30倍。其后顺次为敌敌畏、高效氯氰、溴氰菊酯、残杀威，仲丁威，抗性倍数分别为5.61、5.09、4.65、4.43、3.98，胺菊酯，二氯苯醚菊酯，EBT、三氯杀虫酯抗性不明显。淀粉电泳结果蚊虫个体中存在过量产生的非特异性酯酶Estβ1^1和Estα2/β2，且蚊虫的酯酶谱较为复杂，结论：淡色库蚊对氯氰菊酯产生了中等抗性，其次对敌敌辅同效氯氰，溴氰菊酯产生低抗性，宜换用药物，酯酶染色结果，存在引起有机磷抗性增高活性酯酶，酯酶谱且呈多态分布，与生物测试结果相一致，所以应减少敌敌畏的使用，注意轮换用药。     

微量滴定板法测定蚊虫非特异性酯酶检测抗药性的研究

目的：探讨简捷灵敏的蚊虫抗药性早期测报技术。方法；以β－乙酸酯为底物，坚固蓝B盐为显色剂，用微量滴定板法测定实验室和现场单个淡色库蚊非特异性酯酶尖力。结果：实验室5个品系淡色库蚊以抗DDVP品系非特异性酯酶活力水平最高，其次为抗残杀威品系和抗DDVP降解品系，抗氯氰菊酯品系较低，与敏感品系相近；3个现场淡色库蚊种群对DDVP抗性为4．15－9．36倍，对残杀威抗性为1．02－3．18倍，其非特异性酯酶活力水平均较高。结论：微量滴定板法测定非线性特异性酯酶能够检测蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性水平。方法简单快速，结果客观准确，可重复性强，可测出抗性频率，早期发现抗性的存在；可测知抗性机制，便于制订克服抗药性的对策。     

全自动酶标仪测定淡色库蚊抗药性应用研究

[目的]根据蚊虫抗性产生的生化机制，利用生化检测法讨论蚊虫体内酯酶与抗性的关系，测定非特异性酯酶(Non-specific esterase,NSE)活性以判断其抗药性，探讨检测蚊虫抗药性敏感快速的检测方法。(方法]分别以α-乙酸萘酯和β-乙酸萘酯为底物，固蓝B盐为显色剂，用酶标板测定蚊虫NSE的活性，在酶标仪上读取OD值，同时用生物测试法检测LC50作为对照。[结果]现场品系淡色库蚊NSE活力均高于敏感品系，与生物测试结果相一致。[结论]使用全自动酶标仪可以快速测定淡色库蚊体内NSE活性，简单易行，可以作为一种淡色库蚊抗药性检测方法。以便推广应用。     

致倦库蚊酯酶活力滤纸法测定技术

探讨致倦库蚊酯酶活力，以确定其对敌百虫的抗性。方法：采用酯酶滤纸测定法。结果：实验室驯化的致倦库蚊酯酶活力明显低于野外采集的致倦库蚊；酯酶活力与光电比色法酯酶活力结果相吻合；对敌百虫抗性与酯酶活力高低同幼虫浸渍法的半数致死浓度（LC50）相吻合。结论：该方法操作简单，快速易行，是现场蚊虫酯酶活性调查极为实用的方法。     

复合PCR-RFLP技术用于尖音库蚊复组抗性相关酯酶基因分子分型

目的应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测法,建立尖音库蚊抗性酯酶等位基因分型方法。方法根据尖音库蚊抗性酯酶基因保守区序列设计引物;提取单个蚊虫基因组DNA,采用PCR-RFLP分析的方法,对抗性酯酶等位基因分型。结果酯酶基因扩增片段长度为860 bp,经限制性内切酶酶切后,尖音库蚊抗性Est-β11纯合型有5条带(70、89、147、198和347 bp);Est-β2纯合型出现4条带(60、147、207和437 bp);Est-β11/Est-β2杂合型出现5条带;Est-βN纯合型出现3条带(147、207和506 bp)。结论PCR-RFLP方法能快速、有效地检测尖音库蚊抗性酯酶等位基因类型。     

深圳市坪山新区白纹伊蚊对氯菊酯的抗性及羧酸酯酶活性研究

目的 了解深圳市坪山新区白纹伊蚊野外种群对氯菊酯抗性及羧酸酯酶活性水平,为科学合理使用杀虫剂提供数据支持。 方法 采用幼虫浸渍法对白纹伊蚊进行氯菊酯抗药性测定,同时采用酶联免疫分析法对野外及敏感品系白纹伊蚊进行羧酸酯酶活性测试,分析比较野外品系和敏感品系羧酸酯酶活性的差异。 结果 坪山新区白纹伊蚊对氯菊酯的抗药性为4.17,属低抗性;野外品系与敏感品系白纹伊蚊羧酸酯酶活性浓度分别为(1 019.768±150.189)U/ml、(768.587±84.876)U/ml ,野外品系酶活性明显高于敏感品系,差异有统计学意义(t=3.256, P=0.012)。 结论 深圳市坪山新区白纹伊蚊对氯菊酯的低抗性可能与羧酸酯酶酶活性水平高有关。     

家蝇对DDVP抗性的生物化学标记的探索

目的：探讨家蝇对DDVP抗性与乙酰胆碱酯酶敏感度和羧酸酶活性的关系,并探索家蝇对DDVP抗性生物化学标记,应用于家蝇抗药性的早期检测。方法：用乙酰胆碱酯酶对DDVP的敏感度作为家蝇抗性和生物化学标记检测了北京4个城区家蝇种群中具有不敏感乙酰胆碱酯酶个体的频率及其季节变化。结果：丰台区家蝇种群中到10月份具有不敏感乙酰胆碱酯酶个体的频率明显高于其它3个城区;海淀区具有不敏感乙酰胆碱酯酶的个体频率最低,一年中的变化也明显低于丰台区。西城区家蝇种群与海淀区比较接近,而朝阳区的种群则更接近于丰台区种群。结论：用药剂对CarE的抑制能力和AchE的敏感度作为家蝇对DDVP抗性的生物化学标记监测家蝇抗药性的变化是可行的。     

杭州市淡色库蚊对杀虫剂的抗性及抗性基因研究

目的了解杭州市淡色库蚊对杀虫剂的抗性及抗性基因,为蚊虫防制提供依据。方法浸液法和PCR技术。结果杭州市淡色库蚊对溴氰菊酯的抗性倍数为9．10倍,敌敌畏为4．52倍,三氯杀虫酯为2．77倍,残杀威为2．04倍,高效氯氰菊酯、丙烯菊酯未形成抗性;经PCR扩增,检测到11个与抗性相关的基因,其中P450类1个,钠离子通道基因2个,酯酶基因2个,乙酰胆碱酯酶受体基因1个,超氧化物歧化酶基因1个,其他相关基因4个。结论杭州市淡色库蚊对溴氰菊酯和敌敌畏产生了抗性;PCR检测,存在11个抗性相关基因。     

家蝇对高效氯氰菊酯抗药性机制的探索

目的研究揭示家蝇对高效氯氰菊酯抗药性机制。方法生物测定、遗传学、生物化学以及分子生物学方法。结果经过25代选育，选育品系家蝇对高效氯氰菊酯抗性高达4419．07倍；抗性遗传为隐性遗传；抗性家蝇羧酸酯酶比活力是敏感家蝇的2．436倍；抗性品系的钠离子通道基因发现了2个氨基酸的改变。结论家蝇对高效氯氰菊酯抗性可能与钠离子通道基因的突变有关。     

羧酸酯酶与北京市不同城区德国小蠊对有机磷杀虫剂抗性的关系

目的研究羧酸酯酶在不同品系德国小蠊中的活性以及其在有机磷杀虫剂抗性形成中的作用。方法以对有机磷杀虫剂敏感品系（SS）及采自北京市宣武区（XW）、昌平区（CP）、顺义区（SY）和石景山区（SJS）的德国小蠊野外品系为试虫材料，利用生物测定、生化分析及增效剂试验等方法研究羧酸酯酶与德国小蠊对有机磷杀虫剂抗性的关系。结果增效剂TPP对马拉硫磷、敌敌畏的增效比在敏感品系中分别为1．86和1．51倍，TPP对马拉硫磷的增效比在XW、CP、SY和SJS品系中分别为5．79、20．08、15．26和4．74倍；TPP对敌敌畏的增效比在XW、CP、SY和SJS品系中分别为2．00、1．67、2．16和4．81倍。德国小蠊野外品系与敏感品系羧酸酯酶的米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax）之间差异有统计学意义，敏感品系羧酸酯酶的Km、Vmax分别为0．1580mmol／L和58．4225μmol／（mg pro·min）；野外品系（XW、CP、SY和SJS）羧酸酯酶的Km、Vmax分别为0．1279、0．1071、0．1080、0．1095mmol／L和307．2550、338．5755、340．3300、212．4570μmol／（mg pro·min），2个品系的羧酸酯酶对马拉硫磷和敌敌畏的抑制作用也不同，2种有机磷药剂对敏感品系的抑制中量150分别为17．64mmol／L和0．91μmol／L，对野外品系（XW、CP、SY和SJS）的150分别为80．48、35．49、83．24、82．29mmol／L和15．35、7．89、11．52、8．60μmol／L。结论羧酸酯酶解毒代谢活性的增加是德国小蠊对有机磷杀虫剂产生抗性的机制之一。     

滤纸法测定谈色库蚊非特异性酯酶和乙酰胆碱酯酶活性的实验研究

目的：测定淡色库蚊敏感品系的非特异性酯酶（NSE）和乙酰碱酯酶（AchE）活性状况,区分单个蚊虫的抗性情况。方法：滤纸法。结果：敏感品系个体的NSE和AchE在滤纸上显色较浅或不显色,抗性品系个体则显色较深。采用不同浓度杀虫剂对蚊虫AchE活性进行抑制试验,敏感品系个体的AchE随杀虫剂浓度的增加而被抑制（不显色）,抗性品系个体则不被抑制（显色明显）。结论：两品系间AchE的含量和活性有所不同,滤纸法可快速地测定淡色库蚊内的NSE和AchE活性,简单易行,可作为一种淡色库蚊抗药性测定方法,便于在现场中推广应用。