基孔肯雅病毒实验室检测方法研究进展

基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒引起的一种急性虫媒传染病,基孔肯雅病毒属甲病毒属,披膜病毒科。近年来,该病毒曾引起全球多处疫情暴发,并造成全球性的公共卫生问题。本文对基孔肯雅病毒及其实验室检测方法作一综述,以指导国内开展对该病的检测。     

广州市2010 年新发现一株基孔肯雅病毒基因特征研究

基孔肯雅热（CHIK）是由CHIK病毒（CHIKV）经伊蚊传播的一种急性传染病。2010 年广州市疾病预防控制中心监测到1 名疑似登革热发热症状的患者,血样经实验室检测显示登革病毒核酸为阴性,CHIKV核酸为阳性,继而分离获得1 株CHIKV。采用RT-PCR 扩增此毒株的全基因并测序,与GenBank 中的中国地区和全球代表株进行全基因进化分析,以了解其序列特征和可能的传播来源。     

研究发现基孔肯雅病毒抗体

基孔肯雅病毒是导致基孔肯雅热的元凶。基孔肯雅热是以发热、皮疹及关节痛为主要特征的急性传染病．主要在南亚．非洲中部和东部等地区传播．目前尚无防治的特效药或疫苗。最近．新加坡《海峡时报》报道,新加坡和法国研究人员找到一种单体复制的抗体．     

一例基孔肯雅病毒和寨卡病毒混合感染病例的发现

目的 对来自菲律宾的入境旅客（1例发热病例）进行病原体鉴定。方法 采集病例血液样本,提取核酸后进行基孔肯雅病毒和寨卡病毒荧光RT-PCR检测,进而接种Vero细胞分离培养病毒,细胞培养上清用荧光RT-PCR方法和宏基因组序列测定分析法进行病毒鉴定。结果 荧光RT-PCR检测结果显示,该病例存在基孔肯雅病毒和寨卡病毒感染,Ct值分别为20和26;血清样本接种Vero细胞72 h后可观察到明显的细胞病变效应,细胞培养上清的荧光RT-PCR检测和病毒宏基因组测序分析结果显示,Vero细胞中有基孔肯雅病毒和寨卡病毒。结论 该病例为基孔肯雅病毒和寨卡病毒混合感染病例。     

基孔肯雅热的流行现况及其研究进展

基孔肯雅病毒（chikungunyavirus,CHIKV）是1种动物源性、昆虫媒介传播的病原体．自20世纪50年代被发现以来导致了大规模的基孔肯雅热的暴发。掌握该病流行特点,防止该病在我国广泛流行是当前面临的重要任务。现就基孔肯雅热全球流行情况以及临床学、媒介生物学和基孔肯雅病毒的分子流行病学等方面的研究进展作一综述。     

基孔肯雅热的流行现况及其研究进展

基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)是1种动物源性、昆虫媒介传播的病原体,自20世纪50年代被发现以来导致了大规模的基孔肯雅热的暴发.掌握该病流行特点,防止该病在我国广泛流行是当前面临盏的重要任务.现就基孔肯雅热全球流行情况以及临床学、媒介生物学和基孔肯雅病毒的分子流行病学等方面的研究进展作一...     

基孔肯雅病毒与基孔肯雅热

基孔肯雅热是一种人兽共患病,是由基孔肯雅病毒（chikungunya virus,CHIKV）引起,以发热、皮疹、关节疼痛和轻度出血为主要特征的急性传染病。这种病毒病主要分布在非洲、南亚、东南亚热带和亚热带地区。近年来在印度洋地区造成大规模流行,并波及我国南方,疫区在不断扩大。埃及伊蚊和白纹伊蚊是主要传播媒介。通过携带病毒的伊蚊叮咬而传播。在实验室内可通过气溶胶传播,目前尚无直接人传人的报道。多数病人能完全痊愈,但有些病人关节疼痛持续较长时间。     

全球基孔肯雅热流行现状及分子流行病学研究进展

近几年,基孔肯雅热在东非海岸、印度洋岛屿、印度及东南亚地区广泛流行,导致数百万人感染发病,且流行地区不断扩大,发病数不断上升,成为该地区重要的公共卫生问题。掌握该病流行特点,防止该病传入我国并引起流行是当前面临的重要任务。现就基孔肯雅热全球流行情况以及临床学、媒介生物学和基孔肯雅病毒的分子流行病学等方面的研究进展做一综述。     

基孔肯雅病毒感染检测进展

基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)属于披膜病毒科甲病毒属的西门利克森林(Semliki forest,SF)抗原复合群。病毒直径约60 nm～70 nm,含有4个非结构蛋白(nsP1、nsP2、nsP3和nsP4)、1个衣壳蛋白C和3个包膜蛋白(E1、E2、E3,E1和E2间由1个6K连结)。病毒基因组为不分节段正链RNA,长度约为11.8 kb。分子流行病学研究显示可分为西非、亚洲、东非/中非/南非(ECSA)3个基因型。主要通过伊蚊传播,特别是埃及伊蚊和白纹伊蚊,还可经输     

基孔肯雅病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究

目的:建立基孔肯雅病毒的荧光定量PCR检测方法.方法:人工合成基孔肯雅病毒部分有代表性的序列核酸作为阳性对照模板,设计几组实时荧光PCR引物、探针及反应体系,摸索出最佳反应体系条件.结果:建立的基孔肯雅病毒的实时荧光PCR检测方法最佳反应体系为:正向引物CHIK-FP终浓度500 nM,反向引物CHIK-RP终浓度1000 nM,探针CHIK-Probe终浓度250 nM;扩增程序为:50℃10 min,95℃ 10 min,95℃10 s→62℃30 S 45次循环.结论:该方法灵敏度高、特异性强,适用于基孔肯雅病毒的快速检验.     

青海省凶小库蚊辽宁病毒的分离鉴定

目的对青海省蚊虫标本中新分离的QH07130病毒株进行系统鉴定分析。方法采用血清学和分子生物学方法对QH07130病毒进行鉴定,并对该病毒进行系统进化特征分析。结果QH07130病毒株对C6／36细胞产生明显细胞病变;间接免疫荧光试验显示,QH07130病毒株与辽宁病毒（LNV）单克隆抗体呈现阳性反应。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,QH07130病毒为12条带双链RNA病毒,与LNV的6-5-1带型一致。该病毒第10节段序列测定全长为844bp,与LNVSX0771和NE9712株核苷酸同源性分别为99．5％和98．0％;系统进化分析显示,QH07130病毒位于LNV进化分支内,并且与LNVSX0771和NE9712株的进化关系最近,确认QH07130病毒为LNV。结论青海省蚊虫中存在LNV传播,这是首次在位于青藏高原的青海省分离到该病毒。     

Genetic characterization of Chikungunya virus in the Central African Republic

Chikungunya virus (CHIKV) is an alphavirus transmitted by the bite of mosquito vectors. Over the past 10 years, the virus has gained mutations that enhance its transmissibility by the Aedes albopictus vector, resulting in massive outbreaks in the Indian Ocean, Asia and Central Africa. Recent introduction of competent A. albopictus vectors into the Central African Republic (CAR) pose a threat of a Chikungunya fever (CHIKF) epidemic in this region. We undertook this study to assess the genetic diversity and background of CHIKV strains isolated in the CAR between 1975 and 1984 and also to estimate the ability of local strains to adapt to A. albopictus. Our results suggest that, local CHIKV strains have a genetic background compatible with quick adaptation to A. albopictus, as previously observed in other Central African countries.Intense surveillance of the human and vector populations is necessary to prevent or anticipate the emergence of a massive CHIKF epidemic in the CAR.     

基孔肯雅病毒荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种快速、敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,检测基孔肯雅病毒。方法通过序列比对挑选出基孔肯雅病毒基因组中高度保守的序列,在此序列上设计引物及TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR反应体系。结果经优化的荧光定量PCR方法有较好的灵敏度和特异性,对阳性对照质粒标准品的灵敏度可达21拷贝/μl,通过检测与传播媒介相似的流行性乙型脑炎病毒、黄热病毒、登革热病毒无交叉反应。结论该方法的建立在基孔肯雅热的疾病防控方面有较好的应用前景。     

中国天津市一例缅甸输入基孔肯雅热病例的病毒基因分型

目的 对天津市1例输入基孔肯雅热病例开展病毒基因分型,确定基孔肯雅病毒（CHIKV）与全球主要流行株的关系。方法 提取临床症状疑似为CHIKV感染患者血清中RNA,采用荧光定量RT-PCR法检测CHIKV核酸。两步RT-PCR法扩增编码CHIKV包膜糖蛋白E1的基因,扩增产物经测序后开展测序分析。将测序结果与全球其他地区流行毒株一同构建系统发生树。结果 天津市输入型CHIKV基因分型属于能够感染白纹伊蚊并在其体内繁殖的东/中/南非基因型印度洋亚型（ECSA-IOL）。系统发生树分析表明,此次输入的CHIKV与2016－2017年在巴基斯坦、意大利、孟加拉国等国家流行的CHIKV毒株高度同源,序列的同源性高达99.4%,并与这些国家流行的CHIKV毒株共同组成1个基因分型簇。结论 此次输入性基孔肯雅热病例感染的毒株更容易在人群中传播,提示应加强对基孔肯雅热输入性病例的防控工作,以防止该蚊媒传染病在我国发生本地聚集性传播。     

Novel lyssaviruses isolated from bats in Russia

Two new rabies-related viruses were discovered in Russia during 2002. Viruses were isolated from bats in Eastern Siberia near Baikal Lake and in the western Caucasus Mountains. After preliminary antigenic and genetic characterization, we found that both viruses should be considered as new putative lyssavirus genotypes.     

广州市鼠及蝙蝠狂犬病毒携带情况调查

目的 了解广东省广州市鼠及蝙蝠狂犬病毒的携带情况,分析鼠、蝙蝠作为人类狂犬病潜在传染源的可能性。方法 于2013-2015年在广州市公园、医院以及农贸市场捕获褐家鼠及蝙蝠,无菌采集其脑组织样本,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞培养分离法检测狂犬病毒。结果 本次调查共捕获159只褐家鼠、66只蝙蝠(57只犬蝠、9只伏翼蝠),共获225份脑组织标本,RT-PCR和细胞培养分离法未在采集的脑组织样本中检测出狂犬病毒。结论 广州市褐家鼠、犬蝠及伏翼蝠作为狂犬病传染源的可能性较小。     

Chikungunya virus in US travelers returning from India, 2006

Chikungunya virus (CHIKV), a mosquito-borne alphavirus, is endemic in Africa and Asia. In 2005-2006, CHIKV epidemics were reported in islands in the Indian Ocean and in southern India. We present data on laboratory-confirmed CHIKV infections among travelers returning from India to the United States during 2006.     

天津市首次从淡色库蚊检测出基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒

目的调查天津市部分地区蚊虫携带流行性乙型脑炎(乙脑)病毒状况,为乙脑防治提供依据。方法 2010年7-9月,使用灯诱法,每月在天津市5个区(县)采集蚊虫2次,用RTPCR检测乙脑病毒核酸;扩增的目标片段进行序列测定;用Mega 4.0软件以邻位相连法构建进化树。结果共捕获成蚊10285只,2属3种(淡色库蚊、三带喙库蚊、中华按蚊),一组淡色库蚊样品,经分子生物学鉴定呈乙脑病毒感染阳性,命名为TJ01(HQ718463),基因分型为Ⅰ型乙脑病毒。结论天津市蚊虫中存在基因Ⅰ型乙脑病毒感染,与上海市乙脑病毒分离株进化关系较近。     

基孔肯雅病毒的纳米金实时荧光PCR方法的建立

目的建立一种检测基孔肯雅病毒纳米金实时荧光定量PCR的方法。方法以课题组建立的普通实时荧光PCR方法为基础,在PCR体系中添加不同大小粒径的纳米金进行体系优化,评价优化后的体系。结果添加纳米金的实时荧光PCR较不添加的扩增效率高;优化后的纳米金实时荧光PCR产物的Ct值与模板稀释浓度存在良好的线性关系,回归方程:y=-3.31x+41.78,R2=0.9997,PCR扩增效率为99.5%。结论纳米金能提高实时荧光PCR的反应效率。     

基孔肯雅病毒全基因组的多序列比对及遗传进化分析

目的 了解基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)毒株的时间、地区及基因型的分布情况,不同时间和地区分离毒株的相似性,核苷酸位点的变异情况以及病毒的遗传进化趋势,为基孔肯雅热的预防和控制奠定基础.方法 对美国国立生物技术信息中心(NCBI)中收录的CHIKV毒株全基因组序列共133条用DNAStar7.1软件进行核苷酸和氨基酸相似性比较及变异分析,用Mega 6.06进行遗传进化分析.结果 CHIKV组内核苷酸序列相似性在97.7％ ～ 100.0％之间,CHIKV组内氨基酸序列相似性在80.3％ ～ 100.0％之间,组内相似性较高,变异率较低;CHIKV碱基间的转换较为常见占碱基突变的81.02％;分离时间、地区相近的毒株遗传距离较近,不同谱系的东/中/南非型毒株已蔓延至欧亚各地区.结论 CHIKV毒株存在一定的变异,但具有较高的遗传稳定性.