基因工程杀蚊幼蓝藻的研究

基因工程杀蚊幼蓝藻的研究＊阎歌蚊虫是一些热带病的重要传播媒介。人们应用各项技术进行了杀灭和控制蚊虫的研究工作。化学杀虫剂在蚊虫控制方面起到一定的积极作用，但也带来环境污染及蚊虫抗性等问题。生物制剂如球形芽孢杆菌（Ｂ．ｓ）和苏云金杆菌（Ｂ．ｔ）的应用，...     

基因工程灭蚊幼蓝藻的现场初步观察

将转入球形芽孢杆菌毒蛋白基因表达质粒的工程藻Ａｎａｂａｅｎａｓｕｂｔｒｏｐｉｃ（ｐＤＣ２６）大量培养后，应用于山东省平阴县进行现场观察。结果表明：工程藻在９．４１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ浓度以上时，４８ｈ可杀死９９～１００％蚊幼虫；在９．１３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌ浓度时，４ｄ可杀死９９％以上蚊幼虫，连续观察２个多月，工程藻仍有明显杀蚊效果，实验组最多１４条／勺幼虫，而对照组２１０条／勺左右。观察还发现，工程藻对库蚊幼虫杀灭效果最好，其次为伊蚊，但高浓度时，对伊蚊仍有明显杀灭效果；由于按蚊幼虫密度太低，未能观察。此结果比单独使用球形芽孢杆菌杀灭蚊幼虫有明显提高，持续时间也延长，这将为蚊虫的持续控制提供一个新的有力武器。     

苏云金芽孢杆菌杀蚊蛋白基因cry11Aa的克隆与表达

目的 克隆苏云金芽孢杆菌以色列亚种的杀蚊毒素蛋白基因cry11 Aa，并使其在酵母双杂交系统受体菌Saccharomyces cerevisiae L40中获得表达。方法 应用聚合酶链反应扩增获得cry11 An基因，构建表达载体pHybLex／Zeo-cry11 Aa，转化到酵母菌Saccharomyces cerevisiae L40。结果 用CryllAa抗体和LexA抗体进行的Western blot免疫杂交表明cry11Aa基因在酵母菌L40中成功表达，生成了Cry11 Aa-LexA融合蛋白。结论 成功地克隆、表达了cry11Aa基因，为进一步利用酵母双杂交系统寻找与毒素蛋白Cry11Aa特异性结合的蚊幼中肠受体蛋白，揭示苏云金芽孢杆菌毒杀蚊虫的分子生物学机制奠定了基础。     

基因工程杀蚊幼蓝藻稳定性的实验研究

目的：探讨基因工程藻高效杀蚊幼活性，以确定其质粒表达情况。方法：抗性筛选及蚊虫毒效测试。结果：随机筛选出的基因工程单藻落无一抗性丢失，且３种基因工程藻对淡色库蚊仍具较高毒效，ＬＣ５０（２４小时）Ａ．７１２０ｐＤＣ２６为８．２６×１０３ｃｅｌｓ／ｍｌ；Ａ．ｓｕｂｔｒｏｐｉｃｐＤＣ２６为２．６２×１０４ｃｅｌｓ／ｍｌ；Ａ．ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｔｏｘ为４．２１×１０３ｃｅｌｓ／ｍｌ。结论：穿梭质粒在基因工程藻细胞内稳定遗传，并持续高效表达。     

苏云金菌杀蚊新基因和菌株的筛选

目的 测定杀蚊毒素cry4与cyt基因的分布，并检出其未知的基因。方法 从基因库中找出并比较全部cry4与cyt基因的DNA序列，根据其共有和特有的片断，设计出相应的引物。用这些引物扩增的PCR产物被变性梯度凝胶电泳分析，排除从已知的cry4与cyt基因扩增出来的PCR片断而检出未知基因的PCR片断。结果 总共测出从未报道过的cry4与cyt基因在杀蚊苏云金杆菌的分布44个。并发现8个可能的新的cry4和cyt基因。它们是cry4Ab，cry，4Ac，cry 4Bb，cyt 1Ac，cyt 2C，eyt l相关基因，苏云金杆菌亚株medellin特异性cyt l基因，亚株jegathesan特异性cyt 2基因。结论 根据该实验结果和以前的报告，将杀蚊苏云金杆菌分为3组。其中，苏云金杆菌亚株jegathesan可作为亚株israelensis的替换菌株，以避免蚊虫的耐药性。     

杀蚊幼剂对外环境水体蚊幼杀灭效果研究

目的了解不同杀蚊幼剂对蚊幼的杀灭效果,为今后防治蚊幼提供科学依据。方法选择水体,随机分为试验组和对照组,于试验前后一定间隔分别测定幼虫密度,并计算出密度指数、相关密度指数（PRI）和杀灭率。试验时分别将试验药剂施放于水体中（施药剂量：毒死蜱0．5、1ga．i／m^3;双硫磷1ga．i／m^3;马拉硫磷2ga．i／m^3）。结果2种剂量毒死蜱投药后1d对蚊幼虫杀灭率均为100％,前者持效66d,后者为69d;施药剂量为1ga．i／m^3双硫磷施药后1d仅发现1只蚊蛹,杀灭率达99．76％,2d达100％,投药后65d时仍达80．56％;2ga．i／m^3马拉硫磷施药后7d杀灭率为100％,12d时为85．59％,14d降至55．18％。结论结果表明,对幼虫杀灭效果及持效期优劣依次为：毒死蜱〉双硫磷〉马拉硫磷。建议今后水体灭蚊幼时,在条件允许的情况下,推荐使用前者.     

球形芽孢杆菌在病媒蚊虫控制中的应用

球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus,Bs)是一种在自然界中广泛分布、形成亚末端膨大孢子囊和球形芽孢的好气芽孢杆菌.Bs在生长发育过程中能产生对不同蚊幼虫具有特异性毒杀作用的二元毒素、Mtx毒素和Cry48Aa/Cry49A毒素,广泛应用于病媒蚊虫的生物控制中,被认为是一种对人、畜、禽、水生生物无毒,不污染环境的生物杀蚊幼制剂.目前,包括中国在内的多个国家已经开发出商业化Bs杀蚊制剂,并在全世界范围内广泛应用于病媒蚊虫的控制,取得了良好效果.但实验室以及野外实验表明,蚊虫在长期高选择压力下能对二元毒素产生抗性,蚊虫对Bs产生的抗性影响了其作为生物杀蚊幼制剂在蚊虫综合防治中的持效应用.现就Bs的杀蚊机制、杀蚊制剂的开发和应用、蚊虫抗性及其治理等方面加以介绍.     

苏云金杆菌(BTH-14)和球形芽孢杆菌(BS-10)混合液对营口市区库蚊蚊幼的毒力测定

目的：测定BTH-14和BS-10对蚊幼的毒力,为使用生物杀虫剂灭蚊提供科学依据.方法：采用液浸法,用苏云金杆菌（BTH-14）和球形芽孢杆菌（BS-10）混合液按不同浓度对不同龄期、不同种蚊幼进行敏感性测定.结果：蚊幼龄期越小,对生物制剂越敏感.凶小库蚊和淡色库蚊的相对敏感性大体一致.结论：相同浓度的生物制剂对龄期较小的幼虫有较强的杀灭率.     

B.s.C3—41菌株杀蚊毒素的提取纯化及某些特性的研究

本文以球形芽孢杆菌C_(3-41)、Bs_(-10)和2362菌株为材料,研究了从冻融芽孢中提取和纯化杀蚊毒素蛋白的条件,并对其毒蛋白的分子量、杀蚊活性、稳定性及氨基酸组成进行了检测,用0.05N NaOH溶解得到的毒蛋白粗制品,经SephadexG-75和DEAE-52两次柱层析,可得到纯化的毒蛋白。C_(3-41)和Bs_(-10)的毒素蛋白的分子量均为40KDa,对Ⅲ龄致倦库蚊幼虫感染24小时的LC_(50)值分别为26.99ng/ml和37.92ng/ml,该毒蛋白对热处理(50～80℃,20分钟)和0.05～0.2N NaOH处理(24小时)具有不稳定性。对胰蛋白酶具有机性,但链霉蛋白酶可使其完全丧失杀蚊活性,在pH9～10中保存48小时对其毒性没有影响。C_(3-41)和Bs_(-10)的毒蛋白由16种氨基酸组成。C_(3-41)毒蛋白的氨基酸组成与B.s.2297和B.t.i的毒素相同,但与Bs_(-10)毒素略有差异。     

球形芽孢杆菌C_(3-41)杀蚊幼制剂对两种按蚊幼虫的毒杀活性

本文报道了BacillussphaericusC_(3－41)杀蚊幼制剂对大劣按蚊和中华按蚊幼虫的毒杀活性。该制剂对Ⅲ～Ⅳ龄大劣按蚊和中华按蚊幼虫的LC_(50)分别为1.212和1.846mg／L。在27±2℃以下，用1.25、2.5、5.0和10.0mg／L浓度，对Ⅲ～Ⅳ龄大劣按蚊幼虫的LT_(50)分别为33.80、16.54、13.76和12.57h。在室内外模拟试验中，15和30mg／L剂量均能在14天内杀死大劣按蚊100％；用15、30、60和120mg／L浓度的野外模拟试验中，药后20天大劣按蚊幼虫分别下降70％、73.3％、90％和95.6％。     

苏云金杆菌CryIVD转基因工程藻不同贮存时间对淡色库蚊不同龄期幼虫的杀灭效果

目的观察苏云金杆菌CryIVD转基因贮存藻对不同龄期淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法大量培养工程藻,干燥后保存,应用不同时间的贮存藻作用于不同龄期淡色库蚊幼虫。结果干燥贮存的工程藻数年后仍有较高的杀蚊毒效,尽管杀蚊毒效较新鲜工程藻有所下降,但在105个/ml数量级不同龄期的幼虫仍有50%以上死亡。对不同龄期淡色库蚊幼虫杀灭效果比较表明,1~3年贮存藻3组比较,在106个/ml数量级浓度的蚊幼虫死亡率差异无统计学意义（F=9.32,P〉0.01）,而贮存1年组和3年组在105个/ml数量级浓度及以下,死亡率差异有统计学意义（F=101.21,P〈0.01）。结论转基因蓝藻在干燥贮存情况下仍能保持毒蛋白的稳定遗传和杀幼虫作用,为今后的现场应用提供更方便的选择。     

干燥贮存的基因工程藻杀灭淡色库蚊幼虫的实验研究

目的 :观察干燥贮存的基因工程藻对淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法 :干燥、贮存和毒性测试。结果 :3种转基因工程藻经干燥贮存后仍具有较高杀蚊毒效 ;但随着贮存时间的延长 ,其杀灭作用有所下降。 3种转基因工程藻之间杀蚊幼效果无明显差异。结论 :蓝藻质粒在干燥贮存的工程藻内仍能稳定遗传 ,因而利于现场推广应用     

转基因蓝藻对不同龄期淡色库蚊幼虫杀灭作用的实验研究

目的：观察３种基因工程杀蚊幼蓝藻对不同龄期淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法：利用不同浓度基因工程藻，分别作用于不同龄期淡色库蚊幼虫，计算死亡率。结果：３种基因工程藻对不同龄期淡色库蚊幼虫杀灭作用相似；在藻细胞浓度低于１０４ｃｅｌｓ／ｍｌ时，杀灭作用由强到弱依次为Ⅰ龄、Ⅱ龄、Ⅲ龄末Ⅳ龄初幼虫；而当藻细胞浓度高于１０５ｃｅｌｓ／ｍｌ时，对该蚊不同龄期幼虫的杀灭作用均高效。结论：应用基因工程藻现场控制蚊幼虫宜尽早喷施，可提高杀灭效果。     

转基因蓝藻地不同龄期淡色库蚊幼虫杀灭作用的实验研究

目的：观察３各基因工程杀蚊幼蓝藻对不同龄期淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法：利用不同基因工程藻，分别作用于不同龄期淡色库蚊幼虫，计算死亡率，结果：３种基因工程藻对不同龄期淡以库蚊幼虫杀灭作用相似；在藻细胞浓度低于１０＾４ｃｅｌｌｓ／ｍｌ时，杀灭作用由强到弱依次为Ｉ龄、Ⅱ龄、Ⅲ龄末Ⅳ龄初幼虫；而当藻细胞浓度高于１０＾５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ时，对该蚊不同龄期幼虫的杀灭作用均高效。结论：应用基因工程藻现场控制蚊     

基于WGS的学生与环境MRSA菌株间毒素基因的相互关联分析

目的 探究学生鼻腔和学校环境耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA)的毒素基因情况及遗传相似性。方法 利用全基因组测序技术,比较广州市8所小学学生和环境中MRSA的毒素基因情况。采用χ²检验或Fisher确切概率法分析毒素基因种类和数目的差异,构建系统进化树和聚类分析比较学生与环境的毒素基因谱。结果 检出的135株MRSA中,学生与环境均携带以溶血毒素(hlgA、hlgB、hlgC)(96.88%～100.00%)和胞外酶基因(aur)(98.06%～100.00%)为主的毒素基因。在种类上,34种毒素基因除部分肠毒素基因(sec3、seg、sei、sem、sen、seo、seu)外,其余均无统计学差异(P>0.05);在携带基因数目上,除携带12种毒素基因在二者之间有差异(χ²=12.35,P<0.001),其余均无差异(P>0.05)。此外,hlgA-hlgB-hlgC-aur-scn-sak和seg-sei-sem-sen-seo-s...     

仔猪腹泻基因工程疫苗在环境中稳定性的初步研究

观察不同辐射强度的自然光照射下，对不锈钢表面上的仔猪腹泻基因工程疫苗（ＭＭ３）和大肠杆菌野生株（８０９９）存活的影响．结果表明，在日光总辐射条件下．暴在１０ｍｉｎ，累积辐射０．４７６ＭＪ／ｍ２．ＭＭ３同８０９９的存活率比值为１１３．９；散射条件下．暴露８０ｍｉｎ，累积散射０．８９７ＭＪ／ｍ２，ＭＭ３同８０９９的存活率比值为１：１１．２；黑暗条件下，暴露８０ｍｉｎ，ＭＭ３同８０９９的存活率比值为１：８．０。ｔ检验．无论日光总辐射、散射还是黑暗环境，差别都高度显著（Ｐ＜０．０１）．用含有氯霉素的ＬＢ培养基测定日光总辐射对ＭＭ３质粒稳定性的影响，未发现有质粒丢失．